Studija o antioksidativnom djelovanju feniletanoidnih glikozida iz Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li et al (Središnji laboratorij Changchun Normal University, Changchun, Jilin 130032)

Sažetak[ Cilj ] Istraživanje je imalo za cilj sustavno proučavanje antioksidativnog djelovanja feniletanoidnih glikozida izCistanchedeserticola. [Metoda] Dva modelna sustava, test slobodnih radikala 2,2-difenil-l-pikrilhidrazil (DPPH ') i test fotokemiluminiscencije (PCL), korišteni su za mjerenje antioksidativne aktivnosti ekstrakta C. deserticola, akteozid, izoakteozid i ehinakozid. [Rezultat] Rezultati su pokazali da je ukupni sadržaj fenola (TPC) u ehinakozidu, akteozidu, izoakteozidu i 80-postotnom etanolnom ekstraktu C. deserticola bio 753,95, 659,94, 356,14 i 14,73 mg galne kiseline/g uzorka. Ekstrakt C. deserticola pokazao je snažno antioksidativno djelovanje u PCL eksperimentu, a zatim ehinakozid, akteozid i izoakteozid. Međutim, ehinakozid je pokazao snažno antioksidativno djelovanje u DPPH eksperimentu, a zatim akteozid, izoakteozid i ekstrakt C. deserticola.

[ Zaključak ]Ovo bi istraživanje moglo pružiti reference za proučavanje farmakologije i biološke aktivnosti feniletanoidnih glikozida iz C. deserticola.

Ključne riječi Cistanche deserticola; Acteoside ; Isoacteoside ; Echinacoside ; Antioksidativno djelovanje; DPPH ; PCL

Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma.) je biljka izCistancherod (Oro-banehaeeeae) odCistancherod (Cistanche). Osušena mesnata stabljika Cistanche s ljuskastim listovima. Velik broj studija je utvrdio da su glavni aktivni sastojci biljke Cistanche glikozidni spojevi fenetilnog alkohola. . Feniletanolni glikozidni spoj pripada vrsti polifenolnog spoja koji je široko rasprostranjen u mnogim vrstama biljaka. Studije farmakoloških ispitivanja pokazale su da ovi spojevi imaju širok raspon farmakoloških i bioloških aktivnosti, kao što su anti-hepatotoksin, protuupalno, analgetsko i antioksidativno djelovanje. Među njima, najupečatljivija stvar je da fenoksietanol glikozidni spoj ima vrlo dobro antioksidativno djelovanje. Autor je uglavnom proveo sustavnu analizu antioksidativnog djelovanja glikozidnih spojeva fenetilnog alkohola uCistanche, korištenjem dvije metode evaluacije antioksidansa in vitro, naime Photoehemilumineseence (PCL) i 2,2-diphenyl-1-pieryl-hydroxyl (DPPH') Dva različita sustava korištena su za mjerenje antioksidativne aktivnosti 80 postotni etanolni ekstraktCistanche, ergosterozid, izoergozid, iehinakozid.

1 Materijal i metode

1.1 Uzorci i reagensi

Cistanche (Cistanche deserticola)ljekoviti materijali kupljeni su od Beijing Tongrentang Pharmacy.Ergosterozid, izoergosid,ehinakozid, Folin. Ciocalteu reagens, galna kiselina, 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH.) itd. kupljeni su od SigmaChemicalCo. Tvrtka (St. Louis, Mo). Otapalo korišteno za PCL analizu osigurao je Analytik Jena AG (Berlin, Njemačka). Svi ostali reagensi su analitički reagensi (proizvedeni od strane Beijing Chemical Plant). Voda je ultračista voda (18,2 nPa).

1.2 Ekstrakcija uzorka

Izvažite točno 2,0005 gCistancheuzorak praha, upotrijebite 50rnl 80 postotnog etanola za ultrazvučnu ekstrakciju na sobnoj temperaturi 0,5 h, ekstrahirajte dva puta, filtrirajte otopinu uzorka, rotacijski isparite do suhog (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche deserticola.

1.3 Određivanje ukupnog sadržaja polifenola u uzorku

Ukupni sadržaj fenola u uzorku određuje se F{{0}}lin-Ciocaheu metodom, a rezultat se izražava kao miligrami galne kiseline po gramu ekstrakta. Uzmite otopinu uzorka s određenom koncentracijom od 0.2rnI (kako bi apsorbancija pala na standardnu ​​krivulju), dodajte 1 ml Folin-Ciocaheu reagensa s koncentracijom od 0.5mol/L, i zatim dodajte 0.8ml otopine natrijevog karbonata s koncentracijom od 7,5 posto da se dobro promiješa, stavite na sobnu temperaturu na 0.5h, a zatim izmjerite apsorbanciju na 765nm (ultraljubičasto-vidljivi spektrofotometar: DU800, Beckman Couher, Inc. SAD). Upotrijebite otopinu galne kiseline (raspon masene koncentracije je 0.02-0.20me,/m1) za izradu standardne krivulje, a sva ispitivanja se ponavljaju dva puta.

1.4 Antioksidativna aktivnost in vitro analiza

1.4.1 Određivanje PCL metode.

U testu je korišten ultrabrzi automatski analizator antioksidansa i slobodnih radikala Photochem@ (Berlin, Njemačka). Princip je generiranje slobodnih radikala fotokemijskom metodom i korištenje metode kemiluminiscencije za otkrivanje slobodnih radikala. U eksperimentu je za pobuđivanje reakcijskih molekula korišten fotosenzibilizator s efektom fotokemijske pobude, tako da se pod djelovanjem ultraljubičaste lampe reakcija oksidacije dogodila 1000 puta brže od normalnih uvjeta, a slobodni radikali su se brzo generirali." Odaberite metodu PCL-ACW-Kit Izmjerite antioksidacijsku aktivnost komponenti topivih u vodi poduzoraka psiliuma. Pipetirajte 1.0ml reakcijskog pufera (uključujući koncentraciju 0.1mol/L natrijevog karbonata, pH vrijednost 10.5 i koncentraciju 0.1mmol/LNA, jedan EDTA, 1.5ml ACW- razrjeđivač (voda ), koncentracija 1 mmol/LLumino1) djeluje kao fotosenzibilizator za pobuđivanje reakcijskih molekula, tako da se slobodni radikali brzo generiraju, a ujedno i kao fotokemiluminiscentna tvar. I uzorak i standard su 10 "l. Mjerenjem različitih koncentracija (0,5, 1,0, 2,0 i 3,0 nmol/L) L. Jednadžba standardne krivulje za askorbinsku kiselinu je Y=24.640Ox plus 2.9311, R²=0.9969. Potrebno je razrijediti uzorak ili standardnu ​​otopinu u ispitivanju tako da vremenski interval kašnjenja bude unutar linearnog raspona standardne krivulje. Photochem generira standardnu ​​krivulju i automatski testira antioksidacijsku aktivnost uzorka, a antioksidacijska aktivnost uzorka je ekvivalentna L． Izračunato brojem nanomola askorbinske kiseline.

1.4.2 Određivanje metode DPPH.

Difenilpikrilhidrazino radikal [DPPH ·] je stabilan dušikov centrirani radikal s maksimalnom apsorpcijom na valnoj duljini od 515 nm. Otopina [DPPH ·] metanola je ljubičasta, a njezina koncentracija ima linearan odnos s apsorbancijom." Nakon dodavanja antioksidansa u otopinu [DPPH ·] metanola, antioksidansi se mogu spojiti s [DPPH ·] slobodnim radikalima ili ih zamijeniti kako bi stvorili [DPPH ·] ] Broj slobodnih radikala se smanjuje, a boja otopine postaje svjetlija, što se očituje kontinuiranim smanjenjem apsorbancije na valnoj duljini od 515 nm do postizanja stabilnosti." U ispitivanju je umjesto metanola korišten etanol. Točno izvažite [DPPH ·] i konfigurirajte koncentraciju na 0. [DPPH ·] otopina etanola od 0.040 76mg/ml, dobiva se standardna krivulja [DPPH ·]: Y: 18.032x-0.0016 , R=0.9993. Metoda za mjerenje ostatka slobodnih radikala se odnosi na literaturu [16]. Koristeći etanol kao otapalo, pripremite različite koncentracije uzorka i standardne otopine, uzmite 0,1 ml uzorka odnosno standardne otopine i dodajte 3,9 ml [DPPH·] standardne otopine s masenom koncentracijom od 2,5 mg/L (trenutačno se koristi)), zamijenite otopinu uzorka etanolom kao slijepom probom. Protresite miješanu otopinu, upotrijebite kivetu za mjerenje njezine apsorbancije u različitim vremenima na valnoj duljini od 515 n i pretvorite je u masenu koncentraciju [DPPH·] prema standardnoj krivulji za izračunavanje ostatka [DPPH·]. Prema rezidualnoj stopi [DPPH ·] i odgovarajućoj količini dodanog uzorka, može se nacrtati krivulja za uklanjanje [DPPH -] slobodnih radikala iz uzorka. Prema krivulji odnosa između masene koncentracije [DPPH ·] i apsorbancije, apsorbancija izmjerena nakon dodatka hvatača slobodnih radikala može se pretvoriti u masenu koncentraciju [DPPH ·] za izračunavanje [DPPH ·] nakon dodatak hvatača slobodnih radikala. Formula za izračun ostatka je sljedeća: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r=0×100 posto gdje je [DPPH·] masena koncentracija DPPH · u određenom trenutku u procesu hvatanja slobodnih radikala, [DPPH·]:. Je izvorna masena koncentracija DPPH·. Prema broju dodanih antioksidansa i rezidualnoj stopi [DPPH ·], napravljena je krivulja odnosa između to dvoje, a regresijska jednadžba može se dobiti linearnom regresijskom analizom. Prema regresijskoj jednadžbi, može se izračunati doza antioksidansa kada je rezidualna stopa [DPPH ·] 50 posto. Polu inhibicija. Prema [DPPH·] krivulji hvatanja slobodnih radikala različitih koncentracija uzoraka ili standarda, izračunajte količinu EC uzorka kada se početna masena koncentracija [DPPH·] smanji na 50 posto (stacionarna stabilnost). Što je EC manji, sposobnost hvatanja slobodnih radikala je jača". Testirajte 3 puta paralelno.

cistanche

2 Rezultati i analiza

2.1 Određivanje ukupnog sadržaja polifenola u uzorku Pri određivanju ukupnog sadržaja polifenola, ukupni sadržaj polifenola uehinakozidje najveći, a to je 753,95 mg galne kiseline/g. Slijede ergosteroidni glikozidi, izoergosteroidni glikozidi i sirovi ekstraktiCistanche, koji su bili 468,3, 356,14, odnosno 14,73 mg galne kiseline/g.

2.2 Određivanje antioksidativne aktivnosti uzorka

2.2.1 Rezultati određivanja metode PCL-ACW. U PCL-ACW antioksidativnom testu, antioksidativni kapacitet od 1txgCistancheljekoviti materijal je ekvivalentan antioksidativnom kapacitetu od 15,68 nmol L-askorbinske kiseline; 1 gehinakozidje ekvivalentan antioksidativnom kapacitetu od 14,03 nmol askorbinske kiseline. Aktivnost: 1 txgergosterozidje ekvivalentan 11,44 nmolL antioksidativnog kapaciteta askorbinske kiseline; 1Ixg izomergosterozida ekvivalentan je antioksidativnoj aktivnosti 8,24 nmola askorbinske kiseline.

2.2.2 Rezultati mjerenja DPPH metodom. Iz tablice 1. vidljivo je da je raščišćen. Redoslijed sposobnosti slobodnih radikala jeergosterozid, ehinakozid, izoergosid i sirovi ekstraktCistanche, među kojima ergo strana iehinakozidimaju u osnovi isti antioksidativni kapacitet u DPPH testu. Iz ovoga se vidi. Budući da se za mjerenje uzoraka koriste različiti in vitro antioksidativni testni sustavi, mehanizam antioksidativnih učinaka je drugačiji, a rezultati mogu biti nedosljedni. To je također potvrđeno u testu. Stoga je za daljnju provjeru potrebno odabrati druge sustave antioksidativne analize.

ehinakozija

reference

[1] Yang Cuiping, Su Weiwei. Napredak istraživanja mesne juhe[J]·Chinese Medicinal Materials, 2001, 24(12): 907-909.

[2]Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei Napredak istraživanja o kemijskim sastojcima biljaka Cistanche[J].Chinese Herbal Medicine, 2003,34(5):473 -476.

[3]HIROMI KOBAYASHI,HIROKO KARASAWA JOSHIO MIYASE. Studije o sastojcima Cistanchis Herba. BOK. Izolacija i strukture novih fenilpropanoidnih glikozida, cistanozida A i B[ J]. Chem. Pharm Bull, 19^,32(10):3009 -3014.

[4] LI LI, RONG TSAO, RAYMOND YANG, et al. Izolacija i pročišćavanje feniletanoidnih glikozida izCistanche deserticolabrzom protustrujnom kromatografijom[ J ]. Kemija hrane,2008,1(^:702-710.

[5] LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ, et al. Izolacija i pročišćavanje aktecida i izoakteozida iz Plantago psyllium L. visokobrzinskom protustrujnom kromatografijom [J]. Journal of Chromatography A, 2005, 1063: 161-169.

[6] RAVN H, NISHIBE S, SASAHARA M, et al. Fenolni spojevi iz Plantago Asiatica[ J]. Phytochemistry, 1990, 29: 3627-3631.

[7] TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Fenolni glikozidi iz oboljelih korijena Rehmannia gluiinosa var. purpurea [J]. Phytochemistry, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya, et al. Cistanche cistanche ukupni glikozidi in Vitro hvataju slobodne radikale i zaštitni učinci na oštećenje DNK izazvano OH [J]. Kineski farmaceutski časopis, 2001., 36(1): 29-31.

[9]XIONG Q, HASE K, TEZUKA Y, et al. Hepatoprotektivno djelovanje feniletanoida izCistanche deserticola[J ]. Planta Med, 1998,64:120.

[10]SCHAPOVAL EES, WINTER DE VARGAS MR, CHAVES CG, et al. Protuupalno i antinociceptivno djelovanje ekstrakata i izoliranih spojeva iz Stachytarpheta cayeunensis [J]. J Ethnopharmacol, 1998, 60:53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG RL, et al. Zaštita fenilpropanoidnih glikozida iz Pedicularies protiv oksidativne hemolize in vitro [J]. Planta Med, 1993,59:315—317.

[12] HE ZD, LAU KM, Xu HX, et al. Antioksidativna aktivnost feniletanoidnih glikozida iz karcinoma Brandisia [J]. Ethnopharmacology, 2000, 71:483-486.

[13]XIONG Q, KADOTA S, TANI T, et al. Antioksidativni učinci feniletanoida izCistanche deserticola[J]. Biol Pharm Bull, 1996, 19: 1580-1585.

[14] TSAO R, YANG R, XIE S, et al. Koji polifenolni spojevi doprinose ukupnom antioksidativnom djelovanju jabuke? [J]. J Agric Food Chem, 2005, 53:4989-4995.

[15] POPOV IN, LEWIN G. Hiotochemiluminescent detection of antiradical activity: U. testing of nonenzymic water-soluble antioxidants [J]. Free Rad Biol Med, 1994, 17: 267-271.

[16]BRAND-WILLIAMS W, CUVEHER ME, BERGET C. Upotreba metode slobodnih radikala za procjenu antioksidativne aktivnosti [J]. Lebensm Wiss Technol, 1995, 28: 25-30.

[17] Li Chunyang, Xu Shiying, Wang Zhang. DPPH metoda za određivanje sposobnosti proantocijanidina iz sjemenki grožđa da hvataju slobodne radikale [J]. Časopis za hranu i biotehnologiju, 2006., 25(2)" 02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V, et al. Procjena antioksidativnog djelovanja različitim in vitro metodama [J]. Free Radical Research, 2002,36(2):177-187.