Studija o odvajanju i imunokompetenciji vodenog ekstrakta polisaharida iz Cistanche Tubulosa

za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1,LI Yang1,YAO Jun1,YUAN Jie2

（1. Farmaceutski fakultet, Medicinsko sveučilište Xinjiang, Urumqi 830011, Kina;2. Kolaž Houbo, Medicinsko sveučilište Xinjiang, Xinjiang Klamayi 834000, Kina）

CILJ SAŽETKA:Za izolaciju vodenog ekstraktapolisaharidi iz Cistanche tubulosa,i istražiti njihovu imunokompetentnost in vitro. METODE: AB{{{{30}}}} makroporozna adsorpcijska smola korištena je za obezbojenje polisaharida C. tubulosa. Proces dekolorizacije optimiziran je ortogonalnim testom sa stopom zadržavanja i stopom dekolorizacije polisaharida kao sveobuhvatnom ocjenom, te korištenjem brzine adsorpcije, vremena dekolorizacije i koncentracije uzorka kao faktora. Provedeni su verifikacijski testovi. DEAE-650M kolona za ionsku izmjenu korištena je za odvajanje vodenog ekstrakta obezbojenog polisaharida C. tubulosa. CCK-8 test korišten je za otkrivanje učinaka različitih koncentracija polisaharida（6.25-100 ug/mL）prije i poslije izolacije na stopu proliferacije mišjeg makrofaga RAW264.7. Griessova metoda i ELISA test usvojeni su za otkrivanje učinaka niske, srednje i visoke koncentracije polisaharida（12,5,25,50 ug/mL） na otpuštanje NO,IL-6 i TNF- u stanicama RAW264.7 izazvanim LPS-om. REZULTATI: U optimalnom procesu dekolorizacije AB-8 makroporozne adsorpcijske smole, brzina protoka adsorpcije bila je 1,2 BV/h, vrijeme dekolorizacije bilo je 9 h, a koncentracija uzorka bila je 25 mg/mL. Sveobuhvatni rezultati 3 puta verifikacijskih testova bili su 63,43% , 63,29% i 63,34% , respektivno, s prosjekom od 63,35% （RSD＝0.11％ ,n＝3）. Jedan neutralni polisaharid (CTZ) i 5 kiselih polisaharida (CT1, CT2, CT3, CT4, CT5) izolirani su iz polisaharida C. cistanche, sadržaj je bio 299.2,168.0,123.2,121.6,54.4, 11,2 mg/g. U usporedbi s kontrolnom skupinom, 6.25-100 ug/mL CTZ （osim 6,25 μ g/mL）, CT2, CT4, CT5 i 6,25 μ g/mL CTC （polisaharid prije odvajanja） može značajno povećati stopu proliferacije stanica RAW264.7（P＜{{80}}.05）, dok bi 6.25-100 ug/mL CT1,CT3 i 50 ug/mL CTC moglo smanjiti stopu proliferacije RAW264. 7 ćelija（P<0,05）. u="" usporedbi="" s="" lps="" skupinom,="" otpuštanje="" no="" je="" značajno="" smanjeno="" u="" skupinama="" niske,="" srednje="" i="" visoke="" koncentracije="" ctc,="" ct2,="" ct3="" i="" ct5,="" ctz="" skupine="" niske="" koncentracije=""><0,05), dok="" je="" značajno="" povećano="" u="" skupinama="" visoke="" koncentracije="" ct1="" i="" ct4=""><0,05）. oslobađanje="" il-6="" (osim="" za="" skupinu="" visoke="" koncentracije="" ct1="" i="" skupine="" niske="" koncentracije="" ct5)="" i="" tnf-a="" (osim="" skupine="" srednje="" koncentracije="" ct1)="" značajno="" je="" smanjeno="" u="" skupinama="" niske,="" srednje="" i="" visoke="" koncentracije="" (p=""><0,05 ）.="" zaključci:="" optimizirana="" tehnologija="" dekolorizacije="" makroporozne="" adsorpcijske="" smole="" je="" stabilna="" i="" izvediva="" u="" studiji.="" iz="" vodenog="" ekstrakta="" polisaharida="" c.="" tubulosa="" može="" se="" izolirati="" jedan="" neutralni="" polisaharid="" i="" 5="" kiselih="" polisaharida,="" među="" kojima="" ct2="" polisaharid="" ima="" jaču="" protuupalnu="">

KLJUČNE RIJEČI:Polisaharid Cistanche tubulosa; Dekolorizacija; Odvajanje; Imunokompetencija

Cistanche tubulosaje suha, mesnata stabljika s ljuskastim listovimaCistanche tubulosa (Schenk) Wightobitelji Lidanaceae. Suvremena istraživanja su pokazala da Cistanche Tubula sadrži glikozide fenetilnog alkohola, iridoidne glikozide, lignane, polisaharide, alkaloide i druge biološki aktivne tvari, koje imaju afrodizijačka, laksativna svojstva, štite jetru i usporavaju starenje. , Pojačani imunitet protiv umora i nootropni učinci [1-4], mogu se koristiti za kliničko liječenje nedostatka bubrežnog yanga, nedostatka esencije i krvi, impotencije i neplodnosti, slabosti struka i koljena, slabosti mišića i kosti, suha crijeva i zatvor [5].

Kliknite za Cistanche herba proizvode

Vodeni ekstrakt odPolisaharid Cistanche tubulosaje smeđe-žuta. Prethodni eksperiment naše istraživačke grupe otkrio je da osimCistanche tubulosa polisaharid, vodeni ekstrakt također sadrži neciljane komponente kao što su pigmenti topljivi u vodi i proteini. To pridonosi odvajanju i pročišćavanju polisaharida. Istraživanje biološke aktivnosti izazvalo je velike poteškoće. Tradicionalni tretman dekolorizacije organskim otapalom uništit će kemijsku strukturu ciljane komponente u sirovom ekstraktu i smanjiti farmakološku aktivnost osobe i unošenje štetnih sastojaka u ljudsko tijelo [6]. Makroporozna adsorpcijska smola uobičajeni je materijal za obezbojenje polisaharida u ekstraktima kineske medicine. To je isplativ polimerni adsorpcijski materijal sa stabilnim fizičkim i kemijskim svojstvima. Može se ciljati svojom selektivnom adsorpcijom i učinkom prosijavanja pigmentnih komponenti. Za uklanjanje pigmenata u ekstraktima tradicionalne kineske medicine, osim toga, može se regenerirati kiseljenjem i ispiranjem lužinama, pa se naširoko koristi [7]. Ova studija namjerava koristiti makroporoznu adsorpcijsku smolu za obezbojavanje vodenog ekstrakta polisaharida Cistanche Tubula i koristiti ortogonalni eksperiment za optimizaciju uvjeta obezbojavanja; nakon obezbojenja ekstrakta, u skladu s različitom prirodom skupine koju nosi polisaharid, planira se koristiti.Cistanche tubulosa.

Studije su pokazale dabiljka cistančapolisaharidi imaju imunomodulatorne učinke i prirodni su imunomodulatori koji mogu aktivirati sustav komplementa i imunološke stanice kao što su T/B limfociti, makrofagi, stanice prirodne ubojice (NK), a također mogu pospješiti različito otpuštanje citokina i pospješiti proizvodnju protutijela , itd. [8-11]. Lipopolisaharid (LPS) može aktivirati upalni signalni put makrofaga, inducirati dušikov oksid (NO) i proupalne citokine kao što su interleukin 6 (IL-6) i faktor nekroze tumora-alfa (TNF-). Sinteza i oslobađanje, čime se pokreće niz upalnih reakcija u tijelu [12]. Ova studija namjerava uspostaviti model upale mišjih RAW264.7 makrofaga izazvan LPS-om, počevši od učinaka polisaharida Cistanche Tubula na proliferaciju makrofaga, sekreciju faktora upale i proizvodnju NO, te preliminarnu procjenu njegovog učinka na imunološku aktivnost tijela. Cilj mu je pružiti teoretsku osnovu za dubinsko proučavanje osnove protuupalne aktivne tvariCistanche tubulosapolisaharida i razvoja njegovih polisaharidnih resursa.

Preliminarne studije su otkrile da kada se polisaharidi u Cistanche cistanche ekstrahiraju vodom, više tvari topljivih u vodi će se otopiti zajedno, što utječe na čistoćucistanche cistanche polisaharidi. Stoga njihovo daljnje odvajanje i pročišćavanje može postaviti temelje za proučavanje baze polisaharidnog materijala i biološke aktivnosti. Metoda makroporozne adsorpcijske smole često je korištena metoda obezbojavanja [17-19]. Budući da je još uvijek nejasan sastav pigmenta uCistanche tubulosa, pa je istraživačka skupina upotrijebila statičke adsorpcijske eksperimente kako bi odabrala najprikladniju makroporoznu adsorpcijsku smolu AB-8 od makroporoznih adsorpcijskih smola različitih polariteta. Polisaharid Cistanche deserticola ima dobru sposobnost zadržavanja. Kako bi se postigao bolji učinak dekolorizacije, ovo se istraživanje temelji na prethodnim istraživanjima i korištenim ortogonalnim eksperimentima za određivanje procesa dekolorizacije (pranje. Brzina protoka desorpcije, vrijeme dekolorizacije i koncentracija mase uzorka) su optimizirani. Kao rezultat toga, optimalna metoda obezbojavanja za polisaharid Cistanche tubulosa bila je brzina protoka eluacije od 1,2 BV/h, vrijeme obezbojenja od 9 sati i koncentracija mase uzorka od 25 mg/mL. Rezultati verifikacijskog eksperimenta pokazuju da je metoda dekolorizacije izvediva.

Čistoća i vrsta prirodnih polisaharida važni su čimbenici koji utječu na njegovu aktivnost. Stoga su relevantna istraživanja metoda izolacije i pročišćavanja polisaharida još uvijek u fokusu istraživanja prirodnih aktivnih polisaharida. Često korištene metode za odvajanje polisaharida uključuju taloženje, gel kromatografiju, kromatografiju anionske izmjene, kromatografiju na stupcu makroporozne smole i ultrafiltraciju [20]. Zbog različitog sastava monosaharida, polisaharidi imaju različita svojstva naboja. Mogu se podijeliti na neutralne polisaharide i kisele polisaharide. Neutralni polisaharidi su polimeri sastavljeni od dva ili više različitih monomera na bazi šećera koji ne sadrže organske kiseline. Kiseli polisaharidi su složeniji od neutralnih polisaharida u pogledu sastava i strukture, osim što sadrže više od dva monomera na bazi šećera. , Također sadrži mono tijelo uronske kiseline [21]. Kromatografija na koloni anionske izmjene koristi razliku u naboju polisaharida za odvajanje neutralnih polisaharida od kiselih polisaharida [22]. Iz tog razloga, ova studija je koristila DEAE-650M kolonsku kromatografsku kolonu za ionsku izmjenu za odvajanje polisaharida Cistanche Tubula, a odvojeni su ukupno 1 neutralni polisaharid i 5 kiselih polisaharida. Makrofagi su imunokompetentne stanice koje mogu regulirati imunitet gutanjem i ubijanjem patogenih mikroorganizama. Studije su pokazale da kada je ljudsko tijelo stimulirano patološkim ili mehaničkim oštećenjem, intervencija lijekom može aktivirati makrofage kako bi se poboljšao fagocitni kapacitet makrofaga induciran LPS-om, čime se inhibira proizvodnja NO i niza upalnih stanica kao što je IL{{ 9}} i izlučivanje TNF-faktora, štiteći tako domaćina od patogena [23]. U tu svrhu, ova studija testirala je učinke različitih polisaharida Cistanche tubulosa na stopu proliferacije stanica RAW264.7, kao i učinke na LPS-inducirane makrofage da otpuštaju NO, IL-6 i TNF-. Kao rezultat toga, unutar raspona masenih koncentracija od 12,5, 25 i 50 ug/mL, ne samo da je pospješio proliferaciju stanica RAW264.7, već je također značajno inhibirao proliferaciju stanica RAW264.7.

Thepolisaharid Cistanche tubulosau stanicama RAW264.7 induciranim LPS-om da otpuštaju NO, IL-6 i TNF- su CT2. Relevantne studije su pokazale da će sastav monosaharida i molekularna težina polisaharida utjecati naimunomodulatorniaktivnost. Monosaharidi kao što su galaktoza, arabinoza, manoza i glukoza u pozitivnoj su korelaciji s imunološkom aktivnošću polisaharida [24]. Polisaharidi s većom molekularnom težinom mogu sadržavati veću strukturu višestrukih vrlo ponavljajućih čvorova, mogu unakrsno povezati površinske receptore plazmatske membrane višesmjerno i posebnopojačati imunomodulacijuučinak [25]. Stoga monosaharidni sastav kiselog polisaharida CT2 u ovoj studiji može sadržavati posebne monosaharide ili višestruke monosaharide koji su pozitivno povezani s imunološkom aktivnošću, a molekularna težina može biti veća od neutralnih polisaharida i drugih kiselih polisaharida, ali potrebna su daljnja istraživanja kako bi se potvrdilo . Ukratko, optimizirani proces dekolorizacije makroporozne adsorpcijske smole u ovom istraživanju je stabilan i izvediv; Iz vodenog ekstrakta Cistanche cistanche cistanche može se izdvojiti 1 neutralni polisaharid i 5 kiselih polisaharida, među kojima je jače imunološko djelovanje kiselog polisaharida CT2. Ova studija može postaviti eksperimentalne temelje za razvoj i korištenje polisaharida Cistanche Tubula.