Istraživanje in vitro probave i antioksidativnog djelovanja praha Lycium Ruthenicum i Cistanche Deserticola

Sažetak:

 

Cilj: Učinak praha Lycium ruthenicum idesertliving cistanche herbliofilizirani prah nafunkcionalne kemijske komponenteiantioksidativno djelovanjepodsimulirana gastrointestinalna probavaproučavani su in vitro. 【Metoda】: Odredili smo sadržaj polifenola, polisaharida, antocijanina i feniletanoidnih glikozida u ovim prašcima nakon simulirane gastrointestinalne probave i izmjerili njihove učinke uklanjanja slobodnih radikala DPPH i ABTS in vitro. 【Rezultat】: Grupa sa simuliranom želučanom probavom imala je veći sadržaj aktivnih tvari u usporedbi sa grupom sa simuliranom crijevnom probavom. Stope uklanjanja polifenola, antocijana i feniletanoidnih glikozida s DPPH i ABTS bile su vrlo linearne (p<0.05). 【Conclusion】:Gastric digestion improved the solubility of polyphenols, polysaccharides, anthocyanins, and phenylethanoid glycosides in Black fruit wolfberry powder and desertliving cistanche herb powder, thereby enhancing their scavenging rate of DPPH and ABTS free radicals. Intestinal digestion increased the solubility of polyphenols and phenylethanoid glycosides, decreased the content of polysaccharides and anthocyanins, and promoted the scavenging rate of ABTS free radicals. However, DPPH free radicals showed no promoting effect. These findings provide a novel direction for the development of new functional foods using Black fruit wolfberry and desertliving cistanche herb.

Ključne riječi:Lycium ruthenicum;Cistanche deserticola Ma; Gastrointestinalna probava; Antioksidacija

 

PRODAJEM EKSTRAKT CISTANCHE VISOKOG KVALITETA

Kontaktirajte nas za više detalja

 

 

Zaustavljanje starenja i očuvanje zdravlja: Studija o antioksidativnim svojstvima Lycium ruthenicum i Cistanche deserticola

Zaustavljanje starenja i očuvanje zdravlja postali su žarišta pozornosti u različitim sektorima društva. Trenutno je široko rasprostranjeno mišljenje da je mehanizam staničnog starenja usko povezan s oštećenjem slobodnih radikala. Slobodni radikali u ljudskom tijelu glavni su uzrok starenja i patoloških promjena; prekomjerno nakupljanje može ozbiljno ugroziti ljudsko zdravlje. Stoga prevencija starenja prvenstveno počinje eliminacijom viška slobodnih radikala u tijelu. Što se tiče sastava zdravstvenih proizvoda protiv starenja, osim nekih vitaminskih i mineralnih dodataka, većina je prvenstveno formulirana korištenjem tradicionalnih kineskih medicinskih materijala [1].

Lycium ruthenicum, grm koji pripada roduLicijiz obitelji Solanaceae, poznat je po svojim plodovima koji se trenutno smatraju jednim od najboljih prirodnih izvora antocijana. Stoga je hvaljen kao "kralj antocijana" i važan je prirodni izvor antioksidansa [2,3]. Osim toga, bogat je polisaharidima, flavonoidima, fenolnim kiselinama i raznim elementima u tragovima [4-6].

Cistanche deserticola, biljka iz rodaCistancheiz obitelji Orobanchaceae, često je korišten tonik u tradicionalnoj kineskoj medicini za obnavljanje esencije bubrega [7]. Sadrži široku paletu bioaktivnih spojeva, poput feniletanoidnih glikozida, ehinakozida, akteozida i polisaharida [1].

KombinacijaLycium ruthenicumiCistanche deserticolavjeruje se da usklađuje yin i yang unutar bubrega, potiskuje slobodne radikale u krvi, povećava otpornost, odgađa starenje, sprječava arteriosklerozu i jača imunitet [8]. Oba su lokalni proizvodi s dvostrukom namjenom (ljekoviti i jestivi) iz koridora Hexi u provinciji Gansu u Kini.

Trenutno su provedena opsežna domaća i međunarodna istraživanja koja se temelje na farmakološkim funkcijama i ekstrakciji aktivnih spojevaLycium ruthenicumiCistanche deserticola. Studije Gao Yana [9], Guo Qiaolija [10] i Ailadan·Maimaiti Aili [11] otkrile su da polisaharidi uCistanche deserticolapokazuju visoku antioksidacijsku aktivnost, a njegovi feniletanoidni glikozidi posjeduju određeni stupanj antioksidativne sposobnosti, snažnu reducirajuću moć i učinkovitu sposobnost vezanja na cilj. Istraživanje Yang Dailina [12] i Lou Shutinga [13] otkriva da polifenolni spojevi uLycium ruthenicumsu složeni i obilni, pokazujući jaka antioksidativna svojstva, s ukupnim fenolima i antocijaninima u visokoj korelaciji s antioksidativnom aktivnošću.

Antocijanini i polifenoli uLycium ruthenicum, kao i polisaharide i feniletanoidne glikozide uCistanche deserticola, za sve je potvrđeno da imaju učinke protiv starenja [14,15]. Međutim, nije bilo izvješća o kombiniranoj uporabi ova dva sastojka uin vitrosimulirana gastrointestinalna probava i eksperimenti s antioksidativnom aktivnošću.

Stoga se u ovoj studiji predlaže korištenjeLycium ruthenicumu prah i osušen smrzavanjemCistanche deserticolaprah kao glavne sirovine za probavne pokuse. Pozivajući se naKineska farmakopejaa na temelju potražnje ljudskog tijela za glavnim aktivnim komponentamaLycium ruthenicumiCistanche deserticola, usvojit će se tri različita omjera (1:2, 1:1 i 2:1). Simuliranoin vitroprovest će se eksperimenti probave i apsorpcije kako bi se izmjerile promjene u antocijanima, feniletanoidnim glikozidima, polifenolima i polisaharidima tijekom probave, kao i njihova antioksidacijska aktivnost. The study aims to evaluate the potential health benefits and provide new insights for the development of functional health products combiningLycium ruthenicumiCistanche deserticola.

1 Materijali i metode

1.1 Materijali i reagensi

Materijali:
Lycium ruthenicumplodovi su prikupljeni 2022. iz umjetnih šuma u gradu Huahai u gradu Yumen.Cistanche deserticolaubran je u svibnju 2022. iz umjetno cijepljenogHaloxylonšume u pješčanoj zemlji okruga Gaotai.

Reagensi:
Pepsin (3000 U/g), tripsin (250 U/mg), galna kiselina, Folin–Ciocalteu reagens, DPPH i ABTS kupljeni su od Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.

 

1.2 Instrumenti i oprema

DK-98-II digitalna termostatska vodena kupka (Tianjin Test Instrument Co., Ltd.)

QUINTIX-224 elektronička analitička vaga (Sartorius Scientific Instruments Co., Ltd.)

GL-12B stacionarna rashladna centrifuga velike brzine (Hunan Hesi Instrument and Equipment Co., Ltd.)

DR6000 UV-vidljivi spektrofotometar (Tvrtka Hach)

SPH-110X12 110X24 termostatska mućkalica s vodenom kupkom (Shanghai Shiping Laboratory Equipment Co., Ltd.)

 

1.3 Metode

1.3.1 Priprema uzorka

Lycium ruthenicumvoće je prirodno sušeno na zraku, a slomljeni plodovi i peteljke su uklonjeni. Uzorci su mljeveni pomoću mlina i propušteni kroz sito od 50 mesha za kasniju upotrebu. svježeCistanche deserticolabila je oprana, narezana i odmah namočena u otopinu za zaštitu boje, zatim osušena smrzavanjem, samljevena i propuštena kroz sito od 50 otvora za skladištenje.
Za pripremu miješanih prašaka:Lycium ruthenicumprah iCistanche deserticolapraha miješani su u omjerima skupina - skupina A: 1:2, skupina B: 1:1, skupina C: 2:1. Ukupna težina uzorka bila je 0,75 g. Miješani uzorak je pomiješan s deioniziranom vodom u omjeru krutine i tekućine od 1:40 i protresen na 37 stupnjeva za simuliranu gastrointestinalnu probavu. Nakon hlađenja, smjesa je centrifugirana 15 minuta na 6000 okretaja u minuti, a supernatant je sakupljen za daljnju analizu.

1.3.2 In vitro simulirana probava

Metoda in vitro probave optimizirana je na temelju reference [16] i sastoji se od dvije faze:

Faza 1: želučana probava (GD), 2 sata
Uzorak od 0,75 g (Lycium ruthenicum, Cistanche deserticolaili miješani prah) stavljen je u epruvetu za centrifugu od 50 mL s odgovarajućom količinom deionizirane vode i promiješan. pH je podešen na 2,0 pomoću 1 mol/L HCl. Zatim je dodano 4 mL simuliranog želučanog soka (3 g pepsina otopljenog u 50 mL 0,01 mol/L HCl). Smjesa je inkubirana u mućkajućoj vodenoj kupelji na 37 stupnjeva i 100 okretaja u minuti radi digestije. Aktivnost enzima je zatim inaktivirana u kipućoj vodenoj kupelji 10 minuta. Smjesa je centrifugirana na 4 stupnja 15 minuta (6000 okretaja u minuti), a supernatant je sakupljen za testiranje.

Faza 2: Intestinalna probava (ID), 2 sata
pH smjese nakon želučane probave podešen je na 7,0 pomoću 1,0 mol/L NaHC03. Zatim je dodana otopina tripsina (0,3 g tripsina otopljenog u 50 mL 0,01 mol/L Na2CO3) i temeljito promiješana. Digestija je provedena mućkanjem pri 100 okretaja u minuti u vodenoj kupelji od 37 stupnjeva. Nakon probave, aktivnost enzima je inaktivirana u kipućoj vodenoj kupelji 10 minuta. Smjesa je centrifugirana na 4 stupnja 15 minuta (6000 okretaja u minuti), a supernatant je sakupljen za analizu.

 

1.3.3 Određivanje funkcionalnih komponenti

Ukupni sadržaj polifenolaodređena je Folin–Ciocalteu metodom [17].

Sadržaj polisaharidaizmjeren je metodom fenol-sumporna kiselina [18].

Sadržaj antocijanaodređena je pH diferencijalnom metodom [13].

Sadržaj feniletanoidnih glikozidamjeren je UV-vidljivom spektrofotometrijom [19].

 

1.3.4 Određivanje antioksidativne aktivnosti

1.3.4.1 DPPH aktivnost uklanjanja radikala
DPPH test je proveden u skladu s metodom opisanom u referenci [20]. Stopa uklanjanja DPPH radikala izračunata je pomoću formule (1):

Stopa uklanjanja radikala DPPH (%)= (1−A1−A2A0)×100\\lijevo(1 - \\frac{A_1 - A_2}{A_0} \\desno) \\puta 100(1−A0​A1​−A2​​)×100
(Formula 1)

Gdje:

A1A_1A1​=apsorbancija uzorka + DPPH otopina

A2A_2A2​=apsorbancija uzorka + deionizirana voda

A0A_0A0​=apsorbancija DPPH otopine + deionizirana voda

1.3.4.2 ABTS aktivnost uklanjanja radikala
ABTS test je proveden u skladu s metodom opisanom u referenci [21]. Stopa uklanjanja radikala ABTS izračunata je pomoću formule (2):

ABTS stopa hvatanja radikala (%)= (1−A1−A2A0)×100\\lijevo(1 - \\frac{A_1 - A_2}{A_0} \\desno) \\puta 100(1−A0​A1​−A2​​)×100
(Formula 2)

Gdje:

A1A_1A1​=apsorbancija uzorka + ABTS otopina

A2A_2A2​=apsorbancija uzorka + deionizirana voda

A0A_0A0​=apsorbancija ABTS otopine + deionizirana voda

 

1.4 Obrada podataka

Svi eksperimenti su provedeni u tri primjerka. Podaci su analizirani pomoćuSPSS 22.0softver, a grafikoni su izrađeni korištenjemMicrosoft Origin 2018.

 

2 Rezultati i analiza

2.1 Učinci simulirane gastrointestinalne probave na aktivne komponente i antioksidacijsku aktivnostLycium ruthenicumPuder

2.1.1 Učinci gastrointestinalne probave na aktivne komponente uLycium ruthenicumPuder

Kao što je prikazano uSlika 1-a, sadržaj polifenola u skupini simulirane gastrointestinalne probaveLycium ruthenicumznačajno porasla unutar prvih 1,5 sati (p< 0,05), nakon čega slijedi pad. Sve u svemu, razine polifenola su pokazale porast tijekom faza gastrointestinalne probave.

PremaSlika 1-b, u skupini simulirane želučane probave, sadržaj polisaharidaLycium ruthenicumznačajno porasla unutar 2 sata (p< 0,05), dok je u skupini simulirane crijevne probave sadržaj polisaharida pokazao značajan trend pada (p< 0,05).

Kao što je prikazano uSlika 1-c, sadržaj antocijana u skupini simulirane želučane probave značajno se povećao unutar 1,5 sata (p< 0,05). Nasuprot tome, sadržaj antocijana u skupini sa simuliranom crijevnom probavom blago se smanjio unutar prvih 1,5 sati, ali nakon 1 sata razlika nije bila statistički značajna (p> 0,05). Alkalna sredina identificirana je kao primarni uzrok razgradnje antocijana [22].

 

2.1.2 Korelacija između aktivnih komponenti i antioksidativnog djelovanjaLycium ruthenicumPrašak nakon simulirane in vitro probave

Kao što je prikazano uSlika 2-a, DPPH stopa uklanjanja radikala u skupini simulirane želučane probaveLycium ruthenicumopćenito porasla tijekom razdoblja od 2 sata, iako je došlo do smanjenja nakon 0,5 sati nakon čega je uslijedio porast. U usporedbi sa skupinom s crijevnom probavom, pad u skupini s želučanom probavom bio je izraženiji i statistički značajniji (p< 0,05).

PremaSlika 2-b, ABTS stopa uklanjanja radikala u skupini simulirane želučane probaveLycium ruthenicumpokazala je značajan porast unutar 2 sata, dok je u simuliranoj intestinalnoj skupini stopa uklanjanja ABTS značajno smanjena (p< 0,05).

Tablica 1otkriva da u skupini simulirane želučane probave polifenoli uLycium ruthenicumimao jaku korelaciju s aktivnošću čišćenja DPPH (p< 0,05), dok antocijanini nisu pokazali značajnu korelaciju s aktivnošću DPPH u želučanim uvjetima. U usporedbi s DPPH, ABTS je pokazao jaču linearnu korelaciju s polifenolima i antocijanima (p< 0,01), vjerojatno zbog visokog sadržaja antocijana uLycium ruthenicum, koji je ključni antioksidativni spoj.

Polisaharidi su pokazali vrlo jaku pozitivnu korelaciju s DPPH (p< 0,01), ali jaka negativna korelacija s ABTS (p< 0,01). U skupini simulirane crijevne probave, i polisaharidi i antocijanini bili su u visokoj korelaciji s aktivnostima čišćenja DPPH i ABTS (p< 0,05). Značajno je da je linearna korelacija između polisaharida i antioksidativnog kapaciteta bila jača nego kod antocijanina.

Nasuprot tome, polifenoli su pokazali jaku negativnu korelaciju s DPPH i ABTS (p< 0,01), što sugerira da kako se vrijeme probave produljuje, fenolni spojevi možda neće biti u potpunosti iskorišteni i mogu biti podvrgnuti degradaciji, što dovodi do gubitka antioksidativnog potencijala [14].

 

Tablica 1

Korelacija između sadržaja polifenola, polisaharida i antocijana uLycium ruthenicumi različite antioksidativne aktivnosti

Kazalo / 指标	Skupina simuliranog želučanog soka		Skupina simulirane crijevne tekućine
	DPPH	ABTS	DPPH	ABTS
Polifenol / 多酚	0.585*	0.910**	-0.706**	-0.688**
Polisaharid / 多糖	0.841**	-0.980**	0.744**	0.770*
Antocijanin / 花色苷	0.463	0.835**	0.553*	0.610*

Bilješka:
** označava značajnu korelaciju (P< 0,05)
*** označava izuzetno značajnu korelaciju (P< 0,01)