Simultana stabilizacija aktinskog citoskeleta u višestrukim stanicama specifičnim za nefron štiti bubreg od različitih ozljeda Ⅱ

Farmakološka stabilizacija kortikalnog aktina putem dinamina ublažava AKI.

Gubitak četkastog ruba bubrežnih tubula zbog rastavljanja korteksa aktomiozina dominantna je značajka AKI2,29. Široko korišten lijek protiv raka koji često dovodi do AKI je cisplatin30. Glavna posljedica oštećenja bubrežnih stanica cisplatinom je povećanje razine reaktivnih kisikovih vrsta (ROS).31. Štoviše, povećane razine ROS dovode do smanjenja dinamike aktina32, što uzrokuje poremećaj mitohondrijske membrane; ovo daljepogoršava ROSproizvodnja33,34. Stoga smo ispitali je li farmakološka stimulacija dinamin'Sposobnost unakrsnog povezivanja je sufFiučinkovit za suzbijanje ozljeda izazvanih cisplatinom.

Kao što smo vidjeli prije 35, cisplatin je smanjio visinu MDCK stanica, broj mikrovila i duljinu, te je utjecao na polaritet stanica bez utjecaja na endocitozu (tablica 1, dopunska slika 7a-d). TEM analiza je pokazala da se ovi fenotipovi mogu pripisati gubitku F-aktina izazvanom cisplatinom (slika 4a). Dodavanje Bis-T- 23 prije cisplatina ukinulo je njegove učinke stabiliziranjem aktomiozinskog korteksa protiv ozljeda izazvanih cisplatinom (Slika 4a–c). Slični fenotipovi uočeni su kod svinjaproksimalni tubul bubrega(LLC-PK1) stanica (dodatna slika 8). Zajedno, ovi podaci pružaju dokaz da Bis-T-23 čuva aktomiozinski korteks od rastavljanja izazvanog cisplatinom.

U komplementarnom fiziološki relevantnom pristupu36, Bis T-23 poništio je sposobnost cisplatina da smanji transepitelni električni otpor (TER) mjereno preko živog epitelnog monosloja korištenjem transwell sustava kulture (slika 4d). Budući da TER mjeri integritet tijesnih spojeva u staničnoj kulturi, ovi podaci dalje utvrđuju povoljan učinak Bis-T-23 na integritet epitelnih stanica nakon ozljede.

KLIKNITE OVDJE DA DOBIJETE CISTANCHE ZA CKD

Budući da promijenjena dinamika aktina može dodatno poboljšati proizvodnju ROS-a, zatim smo ispitali može li stabilizacija aktinske mreže pomoću Bis-T-23 spriječiti oksidativni stres u stanicama ozlijeđenim cisplatinom. Odabrali smo procijeniti status karbonila stanične biomolekule, stabilnog biomarkera oksidativnog oštećenja uzrokovanog visokim razinama ROS-a, koristeći naš nedavno razvijeni fluorescentni senzor TFCH37 (Slika 4e). Zaista, dodavanje Bis-T-23 prije cisplatine djelomično je smanjilo povećanje karbonilacije izazvano cisplatinom (Slika 4f). Slični trendovi u vezi s karbonilacijom uočeni su nakon tretmana s Bis-T-23 i depolimerizatorom aktina LatA (dodatna slika 9a). Zajedno ovi podaci pružaju dokaz da stabilizacija aktinskih mreža može spriječiti povratnu spregu između oksidativnog stresa i statusa aktina u ozlijeđenim stanicama.

Ex vivo štakormodel bubregaje zatim upotrijebljen za vizualizaciju BisT-23-potaknutog očuvanja korteksa aktomiozina na rubu četke. Cisplatin je izazvao značajan gubitak bojenja F-aktina na četkastom rubu proksimalnih tubula (slika 4g). Sličan gubitak F-aktina na rubu četke nakon pojave ozbiljne ishemijsko-reperfuzijske ozljede nedavno je opažen uporabom intravirusnog snimanja38. Prethodno liječenje s Bis-T-23 djelomično je zaštitilo gubitak F-aktina izazvan cisplatinom na četkastom rubu bubrežnih tubula (Slika 4g), dodatno pokazujući učinak Bis-T-23 na aktomiozin korteks na apikalnoj membrani epitelnih stanica bubrega. Kao što se vidi u staničnoj kulturi, Bis-T-23 nije utjecao na endocitozu u rezovima tkiva (dopunska slika 9b), dodatno pokazujući da Bis-T-23 ne utječe na ulogu dinamina u endocitozi u bubrežnoj proksimalnih tubula.

Konačno, ispitali smo reno-zaštitni učinak Bis-T-23 u mišjem modelu AKI39 induciranog cisplatinom. BL6 miševima ubrizgan je ili Bis-T-23 ili DMSO jednom dnevno počevši 24 sata prije injekcije cisplatina. Kao što smo vidjeli ranije40, razine kreatinina u serumu (SCr) i dušika u krvi u mokraći (BUN) značajno su porasle 3 dana nakon injekcije cisplatina (Slika 4h). DMSO je pokazao blagu reno-zaštitu kao što smo vidjeli prije41, zbog svoje sposobnosti čišćenja oksidansa42. Dnevna primjena Bis-T-23 nadmašila je DMSO u pogledu reno-zaštite (slika 4h). Kako su sve životinje žrtvovane petog dana zbog sistemske toksičnosti cisplatina (dodatna slika 9c), nismo mogli ispitati dugoročne koristi Bis-T-23 narad bubrega. Zajedno, ove studije uvjerljivo pokazuju da očuvanje integriteta bubrežnih stanica putem stabilizacije aktomiozinskog korteksa na apikalnoj membrani sprječava nefrotoksičnost izazvanu cisplatinom.

Stabilizacija aktinskih mreža sprječava AKI izazvanu joheksolom.

Iako točan mehanizam AKI izazvane kontrastnom bojom nije u potpunosti dešifriran, on ostaje primarni uzrok AKI stečenog u bolnici43. Fiziološki gledano, kontrastna boja povećava osmotsko opterećenje, smanjuje bubrežni protok krvi i izaziva suženje bubrežne arterije44. Na staničnoj razini, ROS je kritičan igrač za razliku od AKI45 induciranog bojom. S obzirom na ulogu ROS-a u regulaciji aktinskog citoskeleta i našu hipotezu da stabilizacija aktomiozinskog korteksa može spriječiti oksidativno oštećenje, ispitali smo učinke Bis-T-23 na AKI46 induciran kontrastnom bojom, joheksolom.

Stanični učinci joheksola ispitivani su na ljudimabubreg proksimalno tubularni(HK-2) ćelije. Kao što se vidi za cisplatin, iohexol je inducirao gubitak F-aktina, što je bilo popraćeno značajnim povećanjem razine karboniliranih molekula, što je nepovratna posljedica povišenih razina ROS (Slika 5a, b). Oba su fenotipa djelomično neutralizirana prethodnim tretmanom s Bis-T-23, čime je dodatno uspostavljena sinergija između statusa aktinskog citoskeleta i razine oksidativnog stresa u tim stanicama. Komplementarno testovima koji se temelje na stanicama, svakodnevna primjena Bis T-23 očuvala je bubrežnu funkciju na temelju razina Scr i BUN u BL6 miševa izazvanih kontrastnom bojom (Slika 5c). Željeni odgovor poboljšane stope preživljavanja također je primijećen kod životinja koje su primile Bis-T-23 zajedno s kontrastnom bojom (Slika 5d).

Nedavno smo pokazali da povišene serumske razine topljivog receptora aktivatora plazminogena tipa urokinaze (suPAR) senzibiliziraju bubreg na AKI47 induciran joheksolom. Zatim smo istražili može li dinaminom posredovana zaštita tubularnih stanica također izazvati reno-zaštitu u BL6 miševa koji izražavaju visoke razine suPAR iz masnog tkiva (suPAR-Tg)48. Kao što se očekivalo47, suPAR-Tg miševi pokazali su smanjenje funkcije bubrega 24-48 h nakon injekcije joheksola (Slika 5e). Nasuprot tome, životinje koje su primale dnevnu dozu Bis-T-23 pokazale su seznatno bolji rad bubregaunatoč izazovu kontrastne boje (slika 5e). Značajno smanjenje stope smrtnosti primijećeno je u kohorti miševa koji su primili Bis-T-23 (Slika 5f). Kao što se i očekivalo, opseg oksidativnog oštećenja (karbonilacija biomolekula) u HK-2 stanicama koje su istodobno tretirane s Bis-T-23 bio je značajno niži nego u stanicama koje su primile samo kombinaciju suPAR i Iohexol (dopunska slika 1). 9d).

Slika 4 Dynaminov agonist štiti bubrežne tubule od ozljeda izazvanih cisplatinom stabilizirajući korteks aktomiozina na apikalnoj membrani. PR-EM slika lamelipodija u MDCK stanicama tretiranim s DMSO (0.1%) ili Bis-T-23 (5 µM, 0.1% DMSO) 1 h prije uz dodatak cisplatina (35 µM) tijekom 23 h. Korteks aktomiozina bio je žuto obojen. b Slike s većim povećanjem uokvirenih područja u (a). Različite razine debljine označene su bojama. Gornji i donji paneli prikazuju mreže koje čine kraći filamenti, odnosno dulji filamenti. c Grafikon koji prikazuje gustoću aktinskih filamenata na vodećem rubu (žuti okvir u (a); izbrojano je 18–20 područja). d Stupčasti dijagram koji prikazuje relativni transepitelni električni otpor (%) u živim MDCK stanicama tretiranim kako je navedeno u (a), osim za koncentracije cisplatina (50 µM) i Bis-T-23 (30 µM) (12 očitanja po uzorku). Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SEM (***P < 0,001, ****P < 0,0001, nespareni dvostrani t-test). ns, nije značajno. e Shematski prikaz detekcije karbonilacije izazvane oksidativnim stresom pomoću TFCH testa. f Slike koje prikazuju razine biomolekulskih karbonila određene pomoću TFCH. Stanice su tretirane kao što je opisano u (a), osim za koncentraciju cisplatina (5 uM). Mjerna traka, 20 µm. Grafikon koji prikazuje relativne razine TFCH fluorescencije povezane s karbonilima biomolekula po stanici (podatkovne točke (n)=83–116; svaka točka predstavlja prosječni intenzitet od 4–9 stanica). g Štakorkriške bubregaobojen anti-aktin antitijelima.Bubrežne kriškesu inkubirani u puferu, DMSO (0.1%) ili Bis-T-23 (30 µM) 1 h prije dodavanja cisplatina (200 µM) ili pufera 8 h. Regije s bijelim kvadratima su povećane. Mjerne trake, 40 µm. Grafikon koji prikazuje intenzitet F-aktina na četkastom rubu po tubulu (100-236). Za c, f, g, podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SD (vrijednosti P prikazane su na slici, jednosmjerna ANOVA s Tukeyjevim testom višestruke usporedbe). h Dijagrami s raspršenim točkama koji pokazuju AKI izazvanu cisplatinom određenom razinom dušika ureje u krvi (BUN) ili kreatinina u serumu (SCr). Životinjama je ubrizgan ili DMSO (1%) ili Bis-T-23 (20 mg/kg) (n=12, po stanju za SCr; n=17, po stanju za BUN) jednom dnevno počevši 24 sata prije injekcije cisplatina (15 mg/kg). Mjerenja su obavljena u naznačenim vremenima. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SEM (vrijednosti P prikazane su na slici, nespareni dvostrani t-test). ns, nije značajno.

Za razliku od stanične ozljede posredovane ROS-om uzrokovane cisplatinom i joheksolom, suPAR potiče ozljedu tubularnih stanica djelomično povećanjem stope potrošnje kisika (OCR)47. Kako bismo povezali fiziološki učinak Bis-T-23 u suPAR transgenim miševima s njegovim učinkom na metabolizam stanica, ispitali smo smanjuje li stabilizacija aktinske mreže putem dinamina OCR izazvan suPAR-om. OCR je mjeren u stvarnom vremenu u HK-2 stanicama pod bazalnim uvjetima i kao odgovor na sekvencijalne injekcije mitohondrijskih inhibitora pomoću analizatora izvanstaničnog protoka Seahorse XFe24 (Slika 5g). Dodatak anti-suPAR protutijela ili Bis-T-23 poboljšanog suPAR-a povećava bazalno disanje mitohondrija, proizvodnju ATP-a, maksimalnu brzinu disanja i rezervni respiratorni kapacitet (Slika 5f). Ovi podaci pokazuju pozitivne učinke Bis-T-23 na metabolizam stanica nakon ozljede. Zajedno, ove studije dodatno potvrđuju izvedivost zaštite od više vrsta AKI i time poboljšavaju stopu preživljavanja u modelima glodavaca putem dynamina kao zamjene.

Simultana stabilizacija aktina urazličite bubrežne staniceublažava oštećenje nefrona. Prethodno smo pokazali da je farmakološka aktivacija polimerizacije aktina vođene dinaminom obnovila strukturu i funkciju podocita u različitim mišjim modelima CKD12. U ovoj smo studiji pokazali sposobnost dynamina da očuva integritet tubularnih stanica nakon akutne ozljede umrežavanjem aktinskog citoskeleta. Zajedno, ovi su nas uvidi doveli do zamisli o mogućnosti istovremenog suzbijanja i ozljede glomerula i tubula, farmakološkim ciljanjem dinamina.

Kako bismo testirali ovu hipotezu, ispitali smo može li Bis-T-23 odgoditi gubitakrad bubregau mišjem modelu Alportovog sindroma (AS). AS je nasljedni oblikprogresivno zatajenje bubregazbog mutacija u genima COL4A3, COL4A4 ili COL4A5 koji zajedno kodiraju kolagen tipa IV, glavnu komponentu glomerularne bazalne membrane (GBM)49,50. Iako je primarni defekt u AS-u brisanje nastavka stopala i proteinurija.

Kako bismo testirali ovu hipotezu, ispitali smo može li Bis-T-23 odgoditi gubitakrad bubregau mišjem modelu Alportovog sindroma (AS). AS je nasljedni oblikprogresivno zatajenje bubregazbog mutacija u genima COL4A3, COL4A4 ili COL4A5 koji zajedno kodiraju kolagen tipa IV, glavnu komponentu glomerularne bazalne membrane (GBM)49,50. Iako je primarni defekt u AS-u brisanje nastavka stopala i proteinurija.

Rasprava Od identifikacije izravnih interakcija dinamina i aktina10, sve više dokaza utvrđuje ovu GTPazu kao jednog od glavnih regulatora aktinskog citoskeleta u stanici. Za razliku od kanonskih ABP-a, mehanizmi kojima dinamin utječe na aktin su vrlo svestrani i specifični za stanični tip. To je zbog kombinacije višestrukih oligomerizacijskih stanja dinamina i njegove sposobnosti da veže F-aktin na dva različita vezna mjesta. Interakcije F-aktina s dinaminskim prstenovima i heliksima putem njegovog C-terminalnog PRD-a rezultiraju aktinskim snopovima i hiper-snopovima, koji su uključeni u formiranje filopodija56 i membranskih izbočina tijekom fuzije mioblasta28. Interakcije između dinaminove srednje domene i F-aktina uključene su u regulaciju aktinskih mreža u lamelipodiji26, organizaciju postsinaptičkog citoskeleta i razvoj neuromuskularnog spoja27, krutost aktinskog snopa u endosomima tijekom fuzije mioblasta25 i formiranje procesa stopala podocita12. Dok je formiranje procesa stopala potaknuto polimerizacijom aktina stimuliranom dinaminom, ova studija sugerira da bi molekularni mehanizam kojim dinamin utječe na te druge procese vođene aktinom mogao biti djelomično posljedica njegove sposobnosti unakrsnog povezivanja F-aktina u razgranate mreže . Naša trenutna studija proširuje ulogu formiranja mreže ovisne o dinaminu kako bi uključila stvaranje aktomiozinskog korteksa na apikalnoj membrani polariziranih epitelnih stanica i uspostavljanje krutosti stanica.

Rasprava Od identifikacije izravnih interakcija dinamina i aktina10, sve više dokaza utvrđuje ovu GTPazu kao jednog od glavnih regulatora aktinskog citoskeleta u stanici. Za razliku od kanonskih ABP-a, mehanizmi kojima dinamin utječe na aktin su vrlo svestrani i specifični za stanični tip. To je zbog kombinacije višestrukih oligomerizacijskih stanja dinamina i njegove sposobnosti da veže F-aktin na dva različita vezna mjesta. Interakcije F-aktina s dinaminskim prstenovima i heliksima putem njegovog C-terminalnog PRD-a rezultiraju aktinskim snopovima i hiper-snopovima, koji su uključeni u formiranje filopodija56 i membranskih izbočina tijekom fuzije mioblasta28. Interakcije između dinaminove srednje domene i F-aktina uključene su u regulaciju aktinskih mreža u lamelipodiji26, organizaciju postsinaptičkog citoskeleta i razvoj neuromuskularnog spoja27, krutost aktinskog snopa u endosomima tijekom fuzije mioblasta25 i formiranje procesa stopala podocita12. Dok je formiranje procesa stopala potaknuto polimerizacijom aktina stimuliranom dinaminom, ova studija sugerira da bi molekularni mehanizam kojim dinamin utječe na te druge procese vođene aktinom mogao biti djelomično posljedica njegove sposobnosti unakrsnog povezivanja F-aktina u razgranate mreže . Naša trenutna studija proširuje ulogu formiranja mreže ovisne o dinaminu kako bi uključila stvaranje aktomiozinskog korteksa na apikalnoj membrani polariziranih epitelnih stanica i uspostavljanje krutosti stanica.

Dobro je utvrđeno daCKD i AKI, iako mehanički različiti, usko su međusobno povezani, a AKI je prepoznat kao čimbenik rizika za razvoj i napredovanje CKD-a 66. Do sada se AKI ne može liječiti67. Ovo je posebno važno u svjetlu trenutne pandemije koronavirusne bolesti 2019. (COVID-19), gdje hospitalizirani pacijenti s COVID-om-19 i povišenom razinom suPAR u plazmi razvijaju AKI alarmantnim stopama. Povišene razine suPAR povezane su s AKI47 i CKD69, dodatno pojačavajući molekularnu vezu između ova dvarazličite bolesti bubrega. Stoga postaje sve važnije razviti lijekove koji mogu zaštititi od niza bubrežnih oštećenja na više vrsta stanica70. Ovdje izvješćujemo o reno-zaštitnom učinku agonista dinamina u genetskom modelu AS-a, koji pokazuje oštećenje i podocita i tubularnih stanica. Naša studija uspostavlja sveobuhvatan pristup za razvoj novih terapeutika koji se bave aktinskom mrežom u više tipova stanica unutar nefrona i liječe bezbrojbolesti bubregabez obzira na mjesto ozljede.

Metode Kultura stanica. Stanice MDCK (Madin-Darby pseći bubreg) (ATCC CCL-34) i stanice unutarnjeg medularnog sabirnog kanala miša (mIMCD-3) (ATCC CRL-2123) uzgajane su u DMEM/F12 (ThermoFisher Scientific) koji sadrži 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS) i 1X antibiotik-antimikotik (penicilin, streptomicin i amfotericin B; Gibco). LLC-PK1 (Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1) stanice (ATCC CL- 101) uzgajane su u DMEM s 4,5 g/L glukoze, L-glutaminom, natrijevim piruvatom (Corning), 10% FBS-om i 1X antibiotikom -Antimikotik. Stanice MDCK i LLC-PK1 uzgajane su ~24 h, odnosno ~72 h prije početka pokusa. HK-2 (Ljudski bubreg 2) proksimalne tubularne stanice (ATCC CRL-2190) uzgajane su u DMEM/Ham's F12 mediju (Corning) koji sadrži 10% FBS, 100 U/ml penicilina i 100 ug/ml streptomicina kada se koristi za bioenergetske eksperimente. Za analizu statusa aktinskog citoskeleta i stanične karbonilacije, HK-2 stanice su uzgajane u DMEM F-12 (ATCC) koji sadrži 10% FBS, 1X antibiotik-antimikotik i 1X ITS (inzulin, transferin i natrijev selenit) dodatak tekućim medijima (Sigma-Aldrich). Za uspostavljanje dynamin 2 (Dyn2) oborene stanične linije (mIMCD Dyn2KD), stanice su zaražene lentivirusima koji nose shRNA koji kodira DNM2 gen (5′CGGCCTAGTGGACATGACAATGAACTCGAGTTCATTGTCATGTC CACTAGGTTTTTG3′)10 ili kodiranu shRNA (Sigma-Aldrich) u potpunom mediju koji sadrži polibrene (8 µg/ml). Nakon 24 sata, medij je zamijenjen svaki drugi dan s medijem koji je sadržavao puromicin kako bi se odabrali stabilni transfektanti. Opseg obaranja Dyn2 procijenjen je Western blotom. Sve stanične linije uzgajane su na staklenim pokrovnim stakalcima obloženim kolagenom.

Slika 6. Farmakološka aktivacija dinamina istovremeno cilja na aktinski citoskelet u dvije različite stanice nefrona. a Col4a3−/− miševima ubrizgan je DMSO (1%) ili Bis-T-23 (20 mg/kg) jednom dnevno kada su bili stari 42 dana (0. dan). Korišten je jednak broj miševa tretiranih DMSO ili Bis-T-23 (n=10 za ACR; n=8 za BUN). Dijagram raspršene točke prikazuje razinu proteinurije (omjer albumina i kreatinina, ACR) iozljeda bubregaodređena razinom BUN-a. Stupci pogrešaka, srednja vrijednost ± SD (vrijednosti P prikazane su na slici, nespareni dvostrani t-test). b Log-Rank (Mantel-cox) test je proveden kako bi se analizirale krivulje preživljenja dviju liječenih skupina. c Reprezentativna histopatologija bubrega određena periodičnom kiselinom po Schiffu (PAS) i H&E bojenjem na uzorcima dobivenim od Col4a3−/− miševa opisanih u (a). Životinje su bile stare 62 dana (20. dan tretmana Bis-T-23 ili DMSO). Glomerulopatija u životinja tretiranih Col4a3−/− DMSO-om karakterizirana je mezangijskom ekspanzijom opaženom na PAS bojenju (crna strelica), povećanom celularnošću i povećanjem Bowmanova prostora. Degenerativne promjene u tubulima uključivale su stvaranje odljeva (*) i prisutnost tubularne skleroze. Liječenje Bis-T-23 tijekom 20 dana djelomično je očuvalo morfologiju glomerula (smanjena mezangijska ekspanzija) i tubula (nedostatak odljeva). d Shema nefrona (slika pripisana Nacionalnom institutu za dijabetes i probavni sustavBolesti bubrega, Nacionalni instituti za zdravlje) i mehanizam uključen u reno-zaštitu reguliranu dinaminom. U polariziranim epitelnim stanicama bubrežnih tubula, dinamin uspostavlja polaritet stanica umrežavanjem aktinskih filamenata u mreže (ova studija). Dynaminova sposobnost da umreži filamente u snopove uključena je u stvaranje mikrovila. Akutna ozljeda povećava proizvodnju ROS-a, mijenja metabolizam stanica i remeti dinamiku aktina, što dodatno pojačava proizvodnju ROS-a što dovodi do izraženijih staničnih oksidativnih oštećenja (karbonilacija biomolekula). Povećanje dinaminove sposobnosti unakrsnog povezivanja u korteksu aktomiozina čuva cjelovitost tubularnih stanica, što ih djelomično štiti od oksidativnog oštećenja. Dodatno, dinamin je bitan za strukturu i funkciju podocita. Farmakološka aktivacija dinamina obnavlja procese stopala potičući polimerizaciju aktina. Naše istraživanje pokazuje da farmakološka aktivacija dinaminske oligomerizacije pokazuje dvostruki povoljan učinak na nefron ciljajući dva različita molekularna mehanizma: očuvanje cjelovitosti podocita (polimerizacija aktina) i bubrežnih tubularnih stanica (poprečno povezivanje aktinskih filamenata).

Reference

1. Basile, DP, Anderson, MD & Sutton, TA Patofiziologija akutne ozljede bubrega.Kompr. Physiol. 2, 1303–1353 (2012).

2. Bonventre, JV & Yang, L. Stanična patofiziologija ishemijske akutne ozljede bubrega.J. Clin. Investirati. 121, 4210–4221 (2011).

3. Campanale, JP, Sun, TY & Montell, DJ Kratak pregled razvoja i dinamike polariteta stanica.J. Cell Sci. 130, 1201–1207 (2017).

4. Salbreux, G., Charras, G. & Paluch, E. Mehanika korteksa aktina i stanična morfogeneza.Trends Cell Biol. 22, 536–545 (2012). 

5. Vicente-Manzanares, M., Ma, X., Adelstein, RS & Horwitz, AR Nemišićni miozin II zauzima središnje mjesto u staničnoj adheziji i migraciji.Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10, 778–790 (2009). 

6. Chugh, P. i sur. Arhitektura aktinskog korteksa regulira površinsku napetost stanice.Nat. Cell Biol. 19, 689–697 (2017). 7. Nguyen, LT & Hirst, LS Polimorfizam visoko umreženih mreža F-aktina: ispitivanje višestrukih skala duljina.Phys. Rev. E Stat. Nonlin Soft Matter Phys. 83, 031910 (2011).

Usluga podrške Wecistanche-najvećeg izvoznika cistanche u Kini:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/telefon:+86 15292862950

Dućan:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop