Renoprotektivni učinak oridonina u mišjem modelu akutne ozljede bubrega putem supresije upale uključene makrofaga

edmund.chen@wecistanche.com

UVOD

Važna značajka akutneozljeda bubrega(AKI) je nagli padrad bubrega. To je globalni zdravstveni problem koji je izazvao široku zabrinutost u društvu. Prema statistikama, oko 13,3 milijuna ljudi diljem svijeta svake godine pati od AKI, od kojih je 85 posto u zemljama u razvoju, što će usmrtiti 1,7 milijuna ljudi.1,2) Značajno, AKI nije samostalna bolest i može biti komplikacija od više bolesti. Normalno, može biti uzrokovan sepsom, šokom, ishemijom-reperfuzijom i trovanjem. Nakon dugotrajnog razvoja ova bolest ima tendenciju progresije u kroničnubolest bubrega,kongestivno zatajenje srca i završni stadijbubrežna bolest.3–5) Ukratko, AKI može prouzročiti golem ekonomski teret, a praktički će povećati psihičko i fizičko opterećenje pacijenata.Bubrežnaishemija-reperfuzija trenutno se smatra najčešćim uzrokom AKI, a obično se javlja tijekom traume, kirurške resekcije ilitransplantacija bubrega. Makrofagi su jedne od ključnih upalnih stanica koje igraju važnu ulogu u progresiji AKI. Minkula se uglavnom eksprimira na mijeloidnim stanicama i neutrofilima, posebno na makrofazima. Ima visoko zadržanu domenu lektina C-tipa koja je glavni igrač u antifungalnom imunitetu. Mincle je izvorno potvrdio Matsumoto kao lipopolisaharid (LPS) - inducirani protein koji može aktivirati nuklearni faktor-kappaB (NF-κB) putem signalizacije Card9-Bcl10-MALT1, što rezultira formiranje učinkovitog T pomagača 1 (Th1) i podtipova Th17 koji promiču ekspresiju upalnih čimbenika za povezivanje urođenih i adaptivnih imunoloških odgovora.6) Nedavna istraživanja su otkrila da Mincle također može prepoznati sve vrste abnormalnih tvari u stanicama, osjetiti oštećenja- povezane signale, a zatim odgovoriti na relevantne odgovore. Na primjer, Mincle se može vezati na -GlcCer koji je sveprisutni intracelularni metabolit iz oštećenih stanica, aktivirajući i inducirajući citokine i pokrećući antigen-specifične T-stanične odgovore.7) Mincle je receptor koji osjeća heterogenu staničnu smrt, može prepoznati endogeni ligand SAP130 koji oslobađaju mrtve stanice, inducira proizvodnju upalnih citokina i potiče infiltraciju neutrofila u oštećena tkiva.8,9) Lanov tim potvrđuje da je Mincle specifično induciran na M1 makrofagima i igra ključnu ulogu u održavanju fenotipa upale M1 makrofagi.6) Stoga, ciljana mješovita terapija može biti ključna za liječenje AKI bolesti.

CISTANCHE ĆE POBOLJŠATI FUNKCIJU BUBREGA/BUBREGA

Oridonin je tetraciklički dipeptidni prirodni spoj s kaurienskim skeletom ekstrahiran iz Londona, koji ima širok raspon bioloških funkcija, uključujući antimikrobna, antitumorska, protuupalna i antifibrozna svojstva. Mnoge vrste istraživanja izvijestile su o antitumorskom potencijalu i mehanizmu ovih prirodnih diterpenoida u nizu staničnih linija raka.10,11) i potvrđeno je da je Oridonin kao lijek protiv raka trenutno u fazi I kliničkih ispitivanja u Kina. Međutim, uloga Oridonina ubolest bubregarijetko se prijavljuje. Nekoliko vrsta istraživanja potvrdilo je da Oridonin može smanjiti proteinuriju ioštećenje bubregau mišjim modelima spontanog eritematoznog lupusa, a in vitro studije su otkrile da Oridonin može smanjiti izlučivanje upalnih citokina i upalni odgovor izazvan LPS-om nakon liječenja Oridoninom.12,13) ​​U ovoj smo se studiji usredotočili na otkrivanje potencijala Oridonina u liječenju AKI, te je li njegov temeljni mehanizam povezan s inhibicijom Minclea u makrofagima. Ova studija može pružiti snažne dokaze za probir terapije za AKI.

Ključne riječi:Oridonin; akutna ozljeda bubrega (AKI); makrofag; mincle; upala; rad bubrega

MATERIJALI I METODE ŽivotinjeTrideset i šest muških C57BL/6 miševa (starih 8–10 tjedana) dobiveno je od Beijing Vital River Laboratory Animal Technologies Co., Ltd. (Peking, Kina) i smješteno u prostoriju s kontroliranom temperaturom i vlagom -kontrolirana soba Centra za pokuse na životinjama Southwest Medical University (21.0 ± 2,0 stupnja odnosno 65 ± 5 posto). Svi miševi su stohastički podijeljeni u tri skupine: Lažna skupina, skupina modela ishemijsko-reperfuzijske ozljede (IRI) (IRI skupina) i IRI skupina liječena Oridoninom (OR skupina) (15 mg/kg). Prije operacije, miševi su anestezirani intraperitonealnom injekcijom 45 mg/kg natrijeva pentobarbitala. Model AKI miša uspostavljen je bilateralnim stezanjembubrežniarterije 35 min. Miševima u lažnoj skupini bila je izložena trbušna šupljina samo 35 minuta, dok je miševima u OR skupini kontinuirano intragastrično davan oridonin 3 dana nakon operacije, a ostalim skupinama dan je isti volumen slane otopine kao kontrolnoj. Miševi su eutanazirani intraperitonealnom injekcijom pentobarbital natrija razrijeđenog fiziološkom otopinom (200 mg/kg) trećeg dana. Svi postupci pokusa na životinjama provedeni su prema Smjernicama za skrb o laboratorijskim životinjama (broj dozvole 201812-55).

CISTANCHE ĆE POBOLJŠATI ZATAJENJE BUBREGA/BUBREGA

Kemikalije i reagensiOridonin (BP1041, čistoća veća ili jednaka 95 posto) dobiven je od Biopurify phytochemicals Ltd. (Chengdu, Kina). Antitijela NF-κB, p-AKT i inducibilna sintaza dušikovog oksida (iNOS) kupljena su od Cell Signaling Technology (Beverly, MA, SAD). Interleukin (IL)-1, faktor tumorske nekroze (TNF)-, Mincle, p-NF-κB i antitijela AKT kupljena su od Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, SAD). Komplet za ekstrakciju ukupne RNA dobiven je od Tiangen Biochemical Technology (Beijing) Co., Ltd. (Peking, Kina). Komplet za reverznu transkripciju, komplet za PCR u stvarnom vremenu koji osigurava Shanghai Promega Bioproducts Co., Ltd. (Šangaj, Kina). LPS (Escherichia coli 055:B5) osigurao je Sigma Chemical (St. Louis, MO, SAD). Reagens za transfekciju DNA dobiven je od Zeta Life (Zeta Life, SAD).

Kultura stanica i transfekcijeStanice RAW264.7 kupljene su od Banke stanica Kineske akademije znanosti (Šangaj, Kina), uzgojene na 37 stupnjeva u okolini od 5 posto CO2 u Dulbeccovom modificiranom Eagleovom mediju (DMEM) mediju s visokim sadržajem glukoze. Probava je izvršena kada su stanice narasle do 80 posto konfluentnosti. Cijeli eksperiment koristio je stanice logaritamske faze rasta. Prekomjerna ekspresija Minclea u stanicama RAW264.7 provedena je transfekcijom Mincle-prekomjerno ekspresijskog plazmida (Genechem, Šangaj, Kina) u stanice s Zeta Life Advanced DNA transfekcijskim reagensom. Morfologija i status rasta stanica promatrani su svjetlosnim mikroskopom.

Analiza kompleta za brojanje stanica-8 (CCK-8).Tri tisuće stanica nasađeno je u 96-ploču s jažicama sa 6 ponovljenih jažica po skupini. Nakon toga, stanice su izgladnjele u mediju bez seruma 24 sata, nakon čega je uslijedilo tretiranje s medijem koji je sadržavao lijek tijekom 24 sata. Zatim, nakon uklanjanja medija, dodajte 100 µL 10 posto reagensa CCK-8 u svaku jažicu i inkubirajte 3 sata. Stopa preživljavanja stanica izračunata je prema vrijednosti apsorbancije svake jažice.

Procjena bubrežne funkcijeRazina serumskog kreatinina i dušika iz uree mjereni su pomoću odgovarajućeg kita (Jiancheng, Nanjing, Kina). Vrijednosti su izražene kao mmol/L seruma.

Bojanje hematoksilin-eozinom (H&E) i periodičnom kiselinom po Schiffu (PAS)Sakupljenibubregtkivo je stavljeno u 4 postotni paraformaldehid na 24 sata, a zatim stavljeno u otopine etanola različitih koncentracija, te stavljeno u blokove ksilena i voska za ugradnju. Prije bojenja stakalca su stavljena u pećnicu na 60 stupnjeva na 2 sata, a zatim deparafinizirana i rehidrirana. Neki uzorci su obojeni eozinom i hematoksilinskim pigmentima, drugi uzorci odvojeno dodaju alkohol periodne kiseline i Schifffdye otopinu. Na kraju, promatrano i fotografirano mikroskopskom kamerom.

Enzimski imunološki test (ELISA)Razina IL-1, IL-6 i TNF- u supernatantu stanične kulture mjerena je pomoću ELISA kompleta (IL-1: Neobioscience, EMC001b; IL-6: Neobioscience , EMC004; TNF-: Neobioscience, 500850). Provedite ispitivanje uzorka prema metodi koju je dostavio dobavljač reagensa i izračunajte vrijednost koncentracije svake skupine prema standardnoj krivulji.

CISTANCHE ĆE POBOLJŠATI BOLOVE BUBREGA/BUBREGA

Western BlotSvi uzorci životinja i stanica lizirani su u puferu za radioimunoprecipitacijski test (RIPA) na ledu i centrifugirani da se dobije odgovarajući uzorak proteina. Test Coomassie brilliant blue korišten je za određivanje koncentracije proteina u svakom uzorku, a gel je testiran s određenom količinom uzoraka proteina. Svaka skupina proteina odvojena je elektroforezom na natrijevom dodecil sulfatu i poliakrilamidnom gelu (SDS-PAGE), a zatim prebačena na membranu od poliviniliden difluorida (PVDF). Nakon inkubacije membrane s primarnim antitijelima na 4 stupnja preko noći, sekundarna antitijela su inkubirana na sobnoj temperaturi 1 sat. Boja trake razvijena je otopinom za razvijanje boje, a intenzitet sive trake izračunat je softverom Image J.

PCR u stvarnom vremenuUkupna RNA dobivena je prema uputama za uporabu Tiangen kita i otopljena je u vodi bez enzima. Prema relevantnim uputama, koristimo kit za obrnutu transkripciju za sintezu cDNA. Uvjeti RT-PCR reakcije izvedeni su kako slijedi: 37 stupnjeva tijekom 15 minuta, 95 stupnjeva tijekom 5 minuta, a zatim 40 ciklusa

95 stupnjeva 10 minuta, 95 stupnjeva 15 s i 60 stupnjeva 1 minutu. Relativna razina ekspresije mRNA svakog gena normalizirana je u odnosu na gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenazu (GAPDH). Sekvence početnica prikazane su u tablici 1.Imunofluorescentno bojenjeStanice RAW264.7 fiksirane su u 4 posto paraformaldehida, zatim blokirane goveđim serumskim albuminom na sobnoj temperaturi (rt) tijekom 1 sata, te inkubirane s odgovarajućim primarnim antitijelima na 4 stupnja preko noći. Nakon ispiranja fiziološkom otopinom puferiranom fosfatom (PBS) 3 puta, stanice su inkubirane sa sekundarnim protutijelima na sobnoj temperaturi 1 h. Jezgra je obojena 4′-6-diamidino- 2-fenilindolom (DAPI). Imunofluorescentne slike snimljene su Nikon Eclipse mikroskopom (Nikon, Tokio, Japan).Statistička analizaRezultati statističke analize prikazani su kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD), Usporedbe između grupa provedene su korištenjem jednosmjerne ANOVA, p< 0.05="" was="" considered="" significant.="" graphpad="" prism="" 7="" software="" was="" used="" to="" calculate="" data="" for="" statistical="">

REZULTATI

Oridoninom inhibirana ishemijom-reperfuzijom inducirana ozljeda i upala bubregaKako bi se procijenio zaštitni učinak oridonina na AKIbubregizazvane ishemijom-reperfuzijom, ispitivali smo kreatinin u krvi, dušik uree ibubrežniindeks tubularne ozljede miševa u svakoj skupini, kao i ekspresiju upalnih citokina u bubrežnom tkivu i procijenilibubrežnipatologija H&E i PAS bojanjem. Rezultat je prikazan na slici da su razine kreatinina u serumu (Slika 1a) i dušika iz uree (Slika 1b) u modelnoj skupini AKI smanjene nakon kontinuiranog ubrizgavanja Oridonina tijekom tri dana. U skladu s tim, indeks tubularne ozljede pokazao je da Oridonin snažno smanjuje tubularnu nekrozu ububregAKI miševa (slika 1c). Rezultati PCR-a u stvarnom vremenu pokazali su da Oridonin značajno snižava razine mRNA IL-1, MCP-1 i F4/80 ububreggrupe modela AKI (sl. 1d–f). Štoviše, rezultati patološkog bojenja i imunofluorescencije pokazali su da je Oridonin značajno smanjio tubularnu nekrozu (Slika 1g) i razinu proteina upalnih citokina (Slika 1h) u AKI miševa, što je učinkovito poboljšalo oštećenje bubrega, što ukazuje da je Oridonin imao značajan učinak protiv ozljeda i protuupalne učinke na AKI model.

Oridoninom inhibiran Mincle/AKT/NF-κB signalni put u bubrezima AKI miševaDa bi se razjasnio terapijski mehanizam Oridonina nabubrežniupale, dodatno smo ispitali aktivaciju Mincle/AKT/NF-κB signalizacije nakon primjene Oridonina. Rezultati Western blota pokazali su da Oridonin intervencija može značajno smanjiti ekspresiju proteina povezanih s upalom IL-1 i iNOS u AKIbubregai smanjuju aktivaciju proteina puta AKT i NF-κB (Slike 2a–e), što ukazuje da Oridonin može inhibirati upalu izazvanu IRI-jem ububregod AKI. Naime, rezultati PCR-a u stvarnom vremenu i Western blota pokazali su da je Oridonin učinkovito smanjio razinu mRNA i proteina Minclea ububregmodela AKI (sl. 2f, g). Kako bi se otkrila lokacija Minclea ububreg, izvršili smo imunofluorescenciju u svakoj skupini (slika 2h), rezultati su pokazali da se Mincle nalazi ububrežniintersticiju i ko-lokaliziran s markerom makrofaga F4/80, što ukazuje da se Mincle uglavnom eksprimirao ububrežnimakrofaga, i snažno pojačano nakon AKI. Rezultati imuno-FL fluorescencije također su pokazali da se makrofagi značajno povećali nakon AKI, što ukazuje na važnu ulogu makrofaga u razvoju AKI. Naime, Oridonin je značajno inhibirao Mincle inbubrežnimakrofaga AKI miševa. Gore navedeni rezultati pokazuju da bi se Oridonin mogao poboljšatibubregupale i ozljede inhibicijom Mincle/AKT/NF-κB signalizacije.

Oridonin je značajno obnovio morfološke promjene makrofaga RAW264.7 izazvane LPS-omKako bismo proučili učinak Oridonina na upalne makrofage, upotrijebili smo LPS da stimuliramo stanice RAW264.7 da konstruirajumodel upalnih stanica. Kemijska struktura oridonina prikazana je na slici 3a. Stoga smo testirali toksičnost Oridonina u različitim koncentracijama na stanicama RAW264.7. Rezultati CCK8 pokazuju da kada je koncentracija 5 µM, Oridonin nema značajan učinak na morfologiju stanice (Slika 3b), što je korišteno u narednim in vitro eksperimentima. Iznenađujuće smo otkrili da Oridonin značajno poboljšava morfologiju makrofaga izazvanu LPS-om (Slika 3c), uključujući smanjenje unutarstaničnih vakuola i čineći stanice čvršćima.

Oridonin je potisnuo izlučivanje i ekspresiju upalnih čimbenika u RAW-u stimuliranom LPS-om264.7Stanice Kako bismo razjasnili protuupalni učinak oridonina na stanice RAW264.7 stimulirane LPS-om, upotrijebili smo FL fluorescentnu PCR u stvarnom vremenu, ELISA i imunofluorescenciju za mjerenje upalnih faktora koje luči svaka skupina stanica. Rezultati su pokazali da Oridonin značajno smanjuje razine mRNA IL-1, IL-6, TNF-, iNOS i MCP-1 u stanicama stimuliranim LPS-om (Slike 4a–e). Nadalje, Oridonin je također značajno smanjio izlučivanje IL-1, IL-6 i TNF- u supernatantu u modelu upalnih stanica (Slike 4f–h), kao i razine proteina upalnih citokina u LPS-stimuliranom makrofagu (slika 4i). Gore navedeni rezultati pokazuju da Oridonin ima očiti protuupalni učinak u makrofagima.

Oridonin je blokirao signalni put Mincle/AKT/NF-κB u upalnim makrofagima in vitroMincle, kao receptor za prepoznavanje uzoraka, bitan je za poticanje upale povezane s makrofagima ububregod AKI. Gore navedeni rezultati pokusa na životinjama pokazali su da Oridonin može smanjiti ekspresiju Minclea ububregod AKI. Stoga smo dodatno istražili može li Oridonin smanjiti razinu mRNA i proteina Minclea u modelu upale makrofaga stimuliranom LPS-om. Rezultati Western blota, imunofluorescencije i PCR-a u stvarnom vremenu pokazali su da 5 µM oridonina ne samo da je značajno smanjilo ekspresiju mRNA (Slika 5c), već je također smanjilo razinu proteina Minclea u upalnom makrofagu (Slike 5a, b , d). Štoviše, Oridonin je značajno smanjio razinu proteina iNOS i fosforiliranog-AKT i NF-κB u stanicama RAW264.7 tretiranim LPS-om.

Prekomjerna ekspresija Minclea eliminirala je inhibitorni učinak oridonina na upalu u stanici RAW264.7 stimuliranoj LPS-omKako bismo utvrdili je li Mincle glavna meta Oridonina za inhibiciju upale u makrofagu, transficirali smo stanice RAW264.7 s Mincle prekomjerno ekspresijskim plazmidom kako bismo povećali ekspresiju Minclea. Prema rezultatima PCR-a u stvarnom vremenu i Western blota, pokazalo se da su razine mRNA i proteina Minclea u stanicama RAW264.7 povećane nakon transfekcije (Slike 6a, b). Plazmid je zatim transfektiran u upalne stanice tretirane Oridoninom, a rezultati su pokazali da je ekspresija Minclea također povećana u stanicama ove skupine (Slike 6c, d). Vektor je transfektiran u stanice kao negativna kontrola. Rezultati eksperimenata oporavka pokazali su da prekomjerna ekspresija Minclea u upalnim makrofagima tretiranim Oridoninom pojačano regulira aktivaciju AKT i NF-κB povećanjem razine fosforilacije ova dva proteina (Slike 6d–g), što sugerira da Oridonin inhibira upalu makrofaga može putem Mincle regulacije prema dolje i njegove nizvodne AKT i NF-κB signalizacije. Štoviše, rezultati PCR-a i ELISA-e u stvarnom vremenu pokazali su da je prekomjerna ekspresija Minclea obnovila ekspresiju i izlučivanje citokina u upalnim makrofagima tretiranim Oridoninom (Slike 6h–l). Gore navedeni rezultati pokazuju da Oridonin inhibira upalu u makrofagima reguliranjem Mincle/AKT/NF-κB signalizacije.

RASPRAVA

AKI je klinički sindrom uzrokovan različitim etiologijama i patološkim mehanizmima.BubrežnaIshemijsko-reperfuzijska ozljeda čest je patofiziološki proces u klinikama i jedan je od glavnih uzroka akutnogozljeda bubrega.14,15) Upalni odgovor složena je mreža uključena ububrežniparenhimske stanice i rezidentne imunološke stanice, u kojima makrofag igra važnu ulogu uozljeda bubrega.16) Zbog promjena u imunološkom mikrookruženju, makrofagi će se polarizirati u nekoliko fenotipova, uglavnom podijeljenih na M1 i M2 tipove. Ekspresija iNOS je znak tipa M1. Studije in vivo i in vitro otkrile su da je ekspresija iNOS-a povećana u skupini modela, a ekspresija se smanjuje nakon tretmana. Lektin C-tipa (Mincle) induciran makrofagom je lektinski receptor C-tipa eksprimiran na aktiviranim makrofagima i genetski je lokaliziran na mišjem 6F2 i ljudskom kromosomu 12P31. Neke su studije izvijestile da Mincle sudjeluje u pokretanju urođenog imunološkog odgovora prepoznavanjem receptora za prepoznavanje molekularnih uzoraka povezanih s patogenom.17) Neke eksperimentalne studije su otkrile da nakon cerebralne ishemijske ozljede kod miševa, povećana infiltracija bijelih krvnih stanica u ozlijeđenom području može dovesti do gubitka neurona u području vaskularne perfuzije, a nokaut Minclea može značajno

usporiti ishemijsku ozljedu uzrokovanu okluzijom srednje cerebralne arterije. Najnovije istraživanje otkriva da Mincle može osjetiti smrtbubrežnitubularne epitelne stanice koje se spajaju s -glukozilceramidom, ubrzavajući upalni odgovor i odgađajući eliminaciju upale.18) Studije obolest bubregaisti je kao rezultati našeg istraživanja koji su pokazali da je Mincle visoko izražen u modelima ishemije-reperfuzije i AKI izazvanog cisplatinom, a specifično je izražen na makrofagima tipa M1-. Ukratko, ciljana studija Mincle mogla bi biti novi tretman za povezane bolesti uzrokovane upalnim makrofagima. Naša je studija otkrila da je ekspresija Minclea povećana u modelu AKI miševa

izgrađena ishemijom-reperfuzijom. Prema rezultatima imunofluorescentne kolokalizacije, Mincle se uglavnom izražava nabubregmakrofaga miševa modelne skupine i u skladu je s rezultatima Lanovog istraživanja. Mincle se inducira specifično na M1 makrofagima, gdje Mincle-sky signalizacija potiče i održava upalne fenotipove M1 makrofaga u akutnojupala bubrega.6) Mincle pripada lektinskom receptoru tipa C (CLR) koji može prepoznati gljivice i druge oblike mikroorganizama ili aseptičke opasnosti. Oni induciraju upalu preko proteina poveznice CARD9, nakon čega slijedi sklapanje kompleksa CARD9-Bcl10 i tipična regulacija NF-κB. Postoji regulatorni odnos

između NF-κB i AKT proteina.10,19) U studiji upale LPS-stimuliranih makrofaga, potvrđeno je da je ekspresija AKT i NF-κB povećana. Nakon toga smo transficirali visoko ekspresijski plazmid Minclea u stanicu koja je tretirana intervencijom lijeka, a rezultati su otkrili da je signalni put AKT i NF-κB signalni put ponovno aktiviran. Može se zaključiti da Mincle može utjecati na ekspresiju proteina ovog puta. Međutim, nije jasno na koji način Mincle regulira ta dva signalna puta i nije jasno aktivira li se protein kroz nebeski put, kao što objavljeno istraživanje kaže.

Oridonin je prirodni diterpenoidni spoj ekstrahiran iz Oriona i ima širok raspon farmakoloških učinaka, uključujući antitumorsko, protuupalno i neuroprotekciju. U istraživanju neuroprotektivne funkcije Oridonina, Wenov tim je otkrio da Oridonin može blokirati inzulinsku rezistenciju inhibiranjem autofagije radi poboljšanja kognitivne disfunkcije.20) Linov tim je otkrio da Oridonin može zaštititi od Parkinsonove bolesti i napadaja smanjenjem neurooksidativnog stresa i drugih neuroprotektivnih učinaka. 21) Najtemeljitije je proučen antitumorski učinak Oridonina. Istraživački tim napravio je lijek u čestice koje se mogu inhalirati za liječenje miševa na modelu karcinoma pluća nemalih stanica, koji su pokazali snažan učinak inhibicije angiogeneze i pro-apoptotski učinak te su imali značajan učinak protiv raka.22) Oridonin također može djelovati protuupalno. posljedica. Može inhibirati Notch put, potaknuti polarizaciju makrofaga da se prebace na protuupalni fenotip i potisnuti pojavu autoimunog neuritisa.23)

Također može ublažiti pojavu osteoartritisa inhibicijom izlučivanja upalnih čimbenika i proizvodnje reduktivne oksidaze.24) Neke studije su pokazale da Oridonin također ima značajne učinke na različitebolesti bubrega. Studije su pokazale da Oridonin može surađivati ​​s 5-fluorouracilom (5-FU) u ispoljavanju antitumorskih učinaka i pojačavanju citotoksičnosti 5-FU-a ububrežnistanice raka.25) Prema rezultatima in vivo pokusa ove studije, Oridonin može značajno smanjiti serumski dušik kreatinin uree kod miševa s ishemijsko-reperfuzijskom ozljedom i značajno smanjiti njegova patološka oštećenja. Rezultati su također pokazali da Oridonin može inhibirati upalnu aktivnost povezanu sa suzbijanjem AKT i NF-κB puta, što je slično rezultatima istraživanja intervencije Oridonina u dijabetičkoj nefropatiji i može istovremeno smanjiti infiltraciju upalnih citokina i aktivnost toll- poput receptora 4 (TLR4)/NF-κB signalnog puta.26) Gore navedeni rezultati sugeriraju da Oridonin može inhibirati Mincle i potisnuti aktivnost AKT i NF-κB puta. U in vitro eksperimentima, ovi pokazatelji puta bili su povećani u modelu upale makrofaga stimuliranom LPS-om, a također smanjeni Oridoninom. Rezultati pokusa obnavljanja pokazali su da je prekomjerna ekspresija Minclea u upalnim makrofagima tretiranim Oridoninom povećala aktivnosti AKT i NF-κB signalizacije, što je rezultiralo pojačanom ekspresijom i lučenjem upalnih citokina u stanicama tretiranim Oridoninom, što je sugeriralo da Oridonin inhibira upalu u makrofag može putem supresije Mincle i AKT/NF-κB signalizacije

CISTANCHE ĆE POBOLJŠATI BUBREŽNE/BUBREŽNE INFEKCIJE

Postoji mnogo načina za konstruiranje AKI životinjskih modela, uključujući bilateralnu ishemiju-reperfuziju, unilateralnu IRI s kontralateralnom nefrektomijom, cisplatin, toksin difterije, LPS, aristolohičnu kiselinu ili folnu kiselinu. Međutim, injekcija cisplatina ne može u potpunosti simulirati kliničke bolesnike. Model induciran injekcijom toksina difterije nastoji produžiti napredovanjebolest bubrega, što uglavnom može dovesti dobubrežnififibroza i glomerularna skleroza, kao i blago oštećenje tubula. Nefropatija aristolohične kiseline je tubulointersticijski nefritis, a folna kiselina je također induktor nefrotoksičnostibubrežnififibroza, ali je klinička incidencija ove dvije bolesti niska.27) IRI-inducirana akutnaozljeda bubregaglobalni je javnozdravstveni problem povezan s visokim pobolom, smrtnošću i troškovima zdravstvene skrbi. Stoga koristimo ishemiju-reperfuziju za konstruiranje akutnebubregmodel ozljede miša. Nekoliko je studija izvijestilo o različitim vremenima stezanjabubrežniarterija. Istraživački tim uspostavio je IRI životinjski model za bilateralno stezanjebubrežnipeteljke Sprague-Dawley (SD) štakora tijekom 1 sata.28) Drugi istraživački tim stegao je obostranobubrežniarterije tijekom 45 minuta da se pripremi reperfuzijski model u Wistar štakorima. Osim toga, provedena je studija upotrebom C57BL/6J miševa za stezanje bilateralnih bubrežnih peteljki na 35 minuta kako bi se napravio model.29) Na temelju prethodnih eksperimentalnih rezultata, utvrđeno je da je reperfuzija nastavljena nakon bilateralnebubrežniarterija je stegnuta na 20 minuta, a serumski kreatinin vratio se na normalnu početnu razinu tri dana kasnije. Stoga smo odlučili stegnuti bilateralne bubrežne arterije na 35 minuta prije reperfuzije, a promjene kreatinina u serumu bile su stabilne nakon operacije tri dana. Tijekom operacije možemo primijetiti da je bojabubregmijenja se iz ružičaste u svijetlocrvenu, što je uzrokovanobubrežniarterijska vaskularna ishemija. Nakon uklanjanja isječka 35 minuta kasnije, možemo primijetiti da je bojabubregvraća u normalu, konstruiran je IRI-AKI model. Ukratko, ovo je otkriće pokazalo da Oridonin ima značajan protuupalni učinak i može zaštititi bubrege u AKI od ozljeda, što uglavnom može uključivati ​​inhibiciju Minclea i aktivnosti njegovog nizvodnog signaliziranja NF-κB i AKT. Ova studija pruža novi potencijalni mehanizam liječenja Oridoninom za AKI, koji može pružiti opcije za kliničko liječenje AKI.