Odnos između serumskih Bcl-3, Gal-3, TGF- 1 i renalne intersticijske fibroze u štakora s kroničnom bolešću bubrega

Sažetak:

Cilj: Istražiti odnos između adeninom induciranog serumskog Bcl-3, Gal-3, TGF- 1 i bubrežnogintersticijska fibroza u štakora s kroničnom bolešću bubrega. Metode Dvadeset mužjaka štakora SPF stupnja nasumično je podijeljeno u kontrolnu skupinu (n=10) i modelnu skupinu (CKD skupina, n=10), a modelnoj skupini je davan adenin sondom, a kontrolnoj skupini dat je jednaki volumen fiziološke otopine sondom, a štakori su pogubljeni u 3. odnosno 6. tjednu, a krv je ostavljena da se detektuju urea dušik, kreatinin i Bcl-3, Gal-3 i bubrežni patološke promjene promatrane su HE bojenjem, težina intersticijske fibroze Massonovim bojanjem, a ekspresija -SMA proteina u bubrežnom tkivu imunohistokemijskim bojenjem. U usporedbi s kontrolnom skupinom, razine uree u krvidušik,kreatinin, Bcl{{0}}, Gal-3 i TGF- 1 bili su značajno viši u skupini s KBB u svim vremenskim točkama (P＜0.0 5). Relativna površina intersticijskih kolagenih vlakana u skupini s CKD bila je značajno viša od one u kontrolnoj skupini (P < 0.05). Korelacijska analiza pokazala je pozitivnu korelaciju između razina Bcl-3, Gal-3, TGF- 1 u krvi i relativnog područja bubrežne intersticijske fibroze (rs=0.776, P < 0,001 ; rs=0.58, P < 0,001; rs=0.52, P=0.001).

Zaključak Serumske razine Bcl-3, Gal-3 i TGF- 1 bile su značajno povećane kod štakora s modelom CKD izazvanog adeninom i bile su usko povezane s težinomfibroza bubrega, za koji se očekuje da će biti novi biomarker za procjenufibroza bubrega.

Ključne riječi:kronična bolest bubrega; intersticijska fibroza; Bcl-3; Gal-3; TGF- 1

Kliknite ovdje za više informacija o liječenju CistancheomKronična bolest bubrega

Kronična bolest bubregaKBB je globalni javni problem i njegova prevalencija raste svake godine [1].Kronična bolest bubrega(CKD) je globalni javni problem, a njegova prevalencija raste iz godine u godinu [1]. Nasuprot tome, bubrežna fibrilacija glavna je patologija progresije kronične bubrežne bolesti do krajnjeg stadija. CKD je velika patološka promjena i zajednički put kojim sve vrste CKD napreduju do krajnjeg stadija. Ozbiljnost bubrežne fibroze usko je povezana s izborom liječenja i prognozom bolesnika. Stoga je vrlo važno točno procijeniti stupanj bubrežne fibroze [2]. Stoga je točna procjena stupnja bubrežne fibroze od velike važnosti [2]. Biopsija bubrega je zlatni standard za dijagnozu bubrežne fibroze i može točno i vizualno razumjeti patološke promjene u bubregu i odrediti opseg bubrežne fibroze. Međutim, invazivan je i ima neka ograničenja u provedbi. B ultrazvuk, CT, MRI i druge neinvazivne metode mogu se donekle koristiti za određivanje fibroze bubrega. Međutim, ovi testovi mogu samo neizravno reflektirati fibrozu bubrega kroz anatomske promjene u bubregu. Međutim, ovi testovi mogu samo neizravno reflektirati fibrozu bubrega kroz anatomske promjene u bubregu, a teško je otkriti i procijeniti njezinu težinu u ranoj fazi [3]. Međutim, ovi testovi mogu samo neizravno reflektirati bubrežnu fibrozu kroz anatomske promjene u bubregu, što otežava rano otkrivanje i određivanje njezine težine [3]. Nasuprot tome, biomarkeri mogu procijeniti ili kvantitativno izmjeriti i biološke i patološke procese bolesti. biomarkeri mogu procijeniti ili kvantificirati biološke i patološke procese bolesti, a također služe i kao terapijske mete za bolest [4]. Biomarkeri mogu procijeniti ili kvantificirati biološke i patološke procese bolesti, a također služe i kao terapeutske mete za bolest [4]. Identificirano je nekoliko biomarkera za dijagnozu fibroze bubrega. Međutim, ne postoji univerzalno prihvaćen marker za određivanje fibroze bubrega. Stoga je važno istražiti i tražiti vrijedne biomarkere.

Bcelllymphoma3 (Bcl-3), Bcl-3 u štakora i Bcl-3 u štakora identificirani su kao najvažniji biomarkeri za dijagnozu fibroze bubrega. Bcl-3 (Bcl-3) i galektin-3 (Gal-3) obećavajući su potencijalni bubrežni markeri posljednjih godina. godine, ali njihovu vrijednost Međutim, njegovu vrijednost treba dodatno istražiti. U ovoj studiji, cilj nam je bio uspostaviti model CKD štakora izazvan adeninom i istražiti vrijednost galektina 3. U ovoj studiji uspostavili smo model CKD štakora izazvan adeninom i izmjerili serumski Bcl-3, Gal -3, transgeni faktor 1 i drugi biomarkeri u štakora. Cilj ove studije bio je uspostaviti model KBB-a kod štakora izazvan adeninom i izmjeriti serumske razine Bcl-3, Gal-3, transformirajućeg faktora rasta- 1 (TGF{{16 }}) i TGF- 1.

(TGF- 1) razine i analizirati njihov odnos s bubrežnom intersticijskom fibrozom, kako bi se istražilo mogu li oni biti osnova za određivanje bubrežne fibroze. Razine TGF- 1, Gal-3 i TGF- 1 analizirane su kako bi se utvrdilo mogu li oni biti novi biomarkeri bubrežne fibroze.

1 Materijali i metode

1.1 Pokusne životinje

Dvadeset mužjaka SD štakora SPF stupnja, tjelesne težine (200±10) g, starih 8 tjedana, kupljeni su od Experimental Animal Center of Southwest Medical University [SCXK (Chuan) 2018-17]. Štakori su smješteni i sakupljeni u sobi za životinje Istraživačkog centra za integrativnu medicinu pridružene bolnice tradicionalne kineske medicine Southwest Medical University [SYXK (Chuan) 2018-065]. Eksperiment je slijedio "3R" princip humane skrbi. Povjerenstvo za etiku eksperimentalnih životinja Southwest Medical University odobrilo je studiju (swmu20220018).

1.2 Glavni instrumenti i reagensi

Adenin (Sigma, SAD); Gal{0}} ELISA kit (Jiangsu Enzyme Free Industry Co., Ltd., Kina), Rat TGF- 1 ELISA kit (Jiangsu Enzyme Free Industry Co.

Ltd., Kina), štakorski Bcl-3 ELISA komplet (Jiangsu Enzyme Free Industry Co., Ltd., Kina); Masson otopina za bojenje (Hefei Bomei Biotechnology Co., Ltd., Kina); -SMA antitijela (Wuhan PhD Bioengineering Co., Ltd., Kina); centrifuga za zamrzavanje velike brzine (Eppendorf Co. Ltd.

Ltd., Njemačka); automatski biokemijski analizator (Siemens, Njemačka); parafinski mikroskop (Thermo, SAD); svjetlosni mikroskop (Nikon, Japan); instrument za standardizaciju enzima (Rayto, RT-6100).

1.3 Eksperimentalne metode

1.3.1 Eksperimentalno grupiranje i priprema modela Dvadeset muških SD štakora SPF stupnja nasumično je podijeljeno u kontrolne (n=10) i modelne skupine (CKD, n=10) nakon 1 tjedna prilagođenog hranjenja. Adenin je otopljen u destiliranoj vodi da se dobije 2,5 postotna suspenzija. 250 mg/(kg-d) suspenzije adenina davano je skupini s kroničnim bolestima bolesti gavažom redovito od 1. do 4. tjedna, a 125 mg/(kg-d) suspenzije adenina davano je kontrolnoj skupini od 5. do 6. tjedan; isti volumen fiziološke otopine dan je kontrolnoj skupini putem sonde, a obje su skupine hranjene normalnom hranom. Svi štakori su slobodno hranjeni i napojeni, s pola svjetla i pola mraka, a sobna temperatura je bila 18 stupnjeva -25 stupnjeva.

1.3.2 Prikupljanje uzoraka

Štakori su pogubljeni na kraju 3. odnosno 6. tjedna, a krv je sakupljena iz trbušne aorte; bubrežna tkiva su fiksirana u 10 posto neutralnoj otopini formalina i napravljena u parafinske rezove, a drugi dio bubrežnih tkiva je zamrznut i pohranjen na 80 stupnjeva. Drugi dio bubrežnog tkiva je zamrznut i pohranjen na 80 stupnjeva u hladnjaku.

1.3.3 Pokazatelji dušika ureje u krvi, kreatinina, Bcl-3, Gal-3 i TGF- 1

Bubrežna funkcija štakora mjerena je potpuno automatskim biokemijskim analizatorom. Imunoenzimski test ELISA korišten je za određivanje Bcl-3, Gal-3 i TGF- 1 u serumu. Količine Bcl-3, Gal-3 i TGF- 1 određene su ELISA testom. Svi setovi su kupljeni od Jiangsu Enzyme Free Industrial Co. Svi setovi su kupljeni od Jiangsu Enzyme Free Industrial Co.

1.3.4 Bojanje bubrežnog tkiva HE Fiksirana tkiva bubrega su dehidrirana, ugrađena, izrezana i deparafinirana.

Fiksirana bubrežna tkiva su dehidrirana, ugrađena, izrezana i deparafinirana do vode

Tablica 1. Usporedba bubrežne funkcije između dvije skupine štakora (&x±s)

2.2 Usporedba serumskih razina Bcl-3, Gal-3 i TGF- 1 između dviju skupina U usporedbi s kontrolnom skupinom, Bcl-3, Gal-3 u krvi i razine TGF- 1 u skupini s CKD bile su više od onih u kontrolnoj skupini. U usporedbi s kontrolnom skupinom, razine Bcl-3, Gal-3 i TGF{{10}} u krvi bile su značajno više u skupini s KBB u svim vremenskim točkama (P < {{14 }}.05). Razine TGF- 1 bile su značajno više u skupini s kroničnom bubrežnom bolesti (P ​​< 0,05); unutar skupine s kroničnom bolesti bolesti, razine Bcl-3 3 bile su značajno više nakon 6 tjedana u usporedbi s 3 tjedna u skupini s kroničnom bolesti bolesti (P ​​<0,05). Pogledajte sliku 1

2.3 Bojanje HE tkiva bubrega u dvije skupine Nije bilo očitih patoloških promjena u tkivu bubrega kontrolne skupine u svakoj vremenskoj točki, dok su tkiva bubrega u skupini s kroničnom bubrežnom bolesti viđena u svakoj vremenskoj točki. Nije bilo očitih patoloških promjena u bubrežnom tkivu kontrolne skupine u svakoj vremenskoj točki, dok su u skupini s kroničnom bubrežnom bolesti bubrežne. Bubrežne epitelne stanice u skupini s kroničnom bubrežnom bolesti pokazale su degenerativnu nekrozu, dilataciju, proliferaciju intersticijskog fibroznog tkiva i infiltraciju upalnih stanica. Promjene su bile očitije u 6. tjednu nego u 3. tjednu, vidi sliku 2

2.4 Massonovo bojenje bubrežnih tkiva i rezultati intersticijske fibrilacije dviju skupina štakora Intersticij štakora kontrolne skupine na kraju 3. i 6. tjedna Nije uočeno očito taloženje kolagenskih vlakana u intersticiju štakora kontrolne skupine na kraju 3. i 6. tjedan. Povećanje taloženja kolagenih vlakana u intersticiju štakora s kroničnom bubrežnom bolesti na kraju 6. tjedna u usporedbi s krajem 3. tjedna （Relativna površina intersticijskih kolagenih vlakana u skupini s kroničnom bubrežnom bolesti bila je također značajno veća od one u kontrolnoj skupini . Relativna površina intersticijskih kolagenih vlakana u skupini s CKD također je bila značajno viša od one u kontrolnoj skupini, te je bila veća na kraju 6. tjedna nego na kraju 3. tjedna (P < {{10} }.05). (P <0,05). Pogledajte sliku 3.

Slika 3. Massonovi rezultati bojanja i relativni rezultat površine kolagenih vlakana u bubrežnom intersticiju