Istraživanje utjecaja Cistanche na slobodne radikale

Za više informacija:Ali.ma@wecistanche.com

Druga šuma oblaka An Old Zhang Hongjing

Trenutačno se vjeruje da je pad imunološke funkcije stroja povezan sa starenjem. Na temelju studije kojaCistanchemože poboljšati humoralne i stanične imunološke funkcije miševa i boriti se protiv modela starenja uzrokovanog d-galaktozom, dodatno smo proučavali učinak lijeka na miševe. Udisanje ozona<. 3)="" induces="" strong="" antagonistic="" effects="" of="" aging="" and="" aging="" caused="" by="" strong="">slobodni radikaliu tijelu. Stopa ekspresije kemiluminiscencije kod miševa u skupini koja je primala lijek se povećala, SOD Povećana vitalnost "Sadržaj lipidnih peroksida u plazmi, tkivima klečanja i bedara i MAOB vitalnost tkiva hodnika se smanjio; postojao je odnos doza-učinak između različitih skupina doza. Anti -učinak starenja kod miševa protiv subakutnog starenja u skladu je s istraživanjemCistanchepoboljšanje imunološke funkcije kod miševa.Cistanchemože poboljšati imunološku funkciju, poboljšati sposobnost tijela protiv stresa, te je prikladno primiti ili neizravno eliminirati oštećenjeslobodni radikalina tijelo. , Inhibira vitalnost 1WMAO-B. Kako bi se postigao učinak odgode starenja. Ovaj eksperiment pruža eksperimentalnu osnovu za primjenuCistancheu borbi protiv starenja i liječenju određenih senilnih bolesti.

Click to cistanche dobrobiti i nuspojave slobodnih radikala

1 Materijal i metode

1.1 Materijal

1.1.1 Lijek i reagensi:Cistanchedeserticola YC Ma je ​​3 puta dekoktiran u vodi, dekokti su spojeni, koncentrirani na odgovarajući volumen i dodana je određena količina etanola. Nakon stajanja 24 sata, filtrira se. Filtrat je uparen da nestane alkohola. Pripremite vodom na pari prije upotrebe 0.25 posto ~0.5 posto koncentracije. ml sadrži sirove droge oko lg). Luminol (luminol), proizvodi tvrtke ®National E Merck Huang Howling Oxidation 88 (HO), Hypochromatic Howling (HX), standardni tetra etoksi propan, svi su proizvodi tvrtke Sigma, sol, benzalkonij, Changzhou Guangming Biochemical Research Institute; cikloheksan, proizvod iz Shanghai reagensa br. 1; Tiobarbiturna kiselina, proizvod iz Šangajskog reagensa br. 2, LuzhanSuperoksidDismutaza, Shanghai Kineska akademija znanosti Proizvodi Instituta za biokemijske proizvode.

Cistanche

1.1. 2 Instrument Beckman LS-98OO33 samo tekuće scintilacijsko brojanje, Shimadzu RF-540 fluorescentni spektrofotometar, 752 ultraljubičaste rešetke spektrofotometar-G1-20Hlađena centrifuga velike brzine, CPS-1A ultrazvučni pulverizer.

1.1.3 Životinjski ICR miševi, stari 2 mjeseca, težine 20±2g, osigurao Jiangsu Experimental Animal Center.

1.2 metoda

Miševi su podijeljeni u kontrolnu (ne ulaze u Q okolinu), modelnu i skupinu za lijekove, svaka s 10 miševa, koji su brzo jeli vodu bez ograničenja. Skupina lijekova podijeljena je u dvije dozne skupine, Svezak 2, Broj 7, 1994., Kineski časopis za kinesku Materiju MedicuCistancheekstrakt100 i 200 mg/kg (ekvivalent sirovim lijekovima 20 i 4Qg/kg) hranjeni su redom. Kontrolna skupina i skupina modela dobivale su jednaku količinu fiziološke otopine svaki dan. Administracijska skupina i modelna skupina dobile su O, okruženje (0,9 X 10-^Oaft stupanj), kontinuirano 2. Dan. Ispitivanje naprezanja svakog prsta obavljeno je 21. dana pokusa.

1. 2.1 Test izdržljivosti Stavite miševe u svakoj od gornjih skupina u vodu dubine od 40 cm i 12±l. U posudi s Water®L počnite mjeriti vrijeme dok ne potone na dno i ne pomakne se, što je vrijeme plivanja za miševe.

   
   

1.2.2 Test otpornosti na toplinu Miš je prvo postavljen na 15. Plivajte u vodi 2 minute, a zatim uđite u zamrzivač 15P kako biste promatrali cijelo vrijeme zamrzavanja.

1.2.3 Test tolerancije na atmosfersku hipoksiju Stavite mali gluten u bocu sa širokim grlom od 250 ml napunjenu natrijevim vapnom i zabilježite vrijeme preživljavanja miševa u svakoj skupini nakon zatvaranja.

1.2.4 Određivanje moždane monoaminooksidaze tipa B (MACXB) Prema oralnoj metodi iz literature, uzmite cijeli mozak miša, dodajte odgovarajuću količinu prethodno ohlađenog 0.2mol/L fosfatnog pufera (PH7.4 ), homogenizirati i ultrazvukom (24kC) Zdrobiti 3 puta, ukupno dva puta, s intervalom od 30sr1000r/min, 0C 30 min, uzeti supernatant pri 17000 o/min, 4C tijekom 30 minuta, odbacite supernatant i uzmite talog te upotrijebite odgovarajuću količinu. .2mo(/L PH7.4) Kiselina se puferira i resuspendira kako bi se dobila sirova otopina za fermentaciju. Uzmite odgovarajuću količinu sirove otopine za fermentaciju, dodajte 16 mmol/L benzamidina u 0,3 ml, upotrijebite gornji fosfatni pufer da nadoknadite 3 ml i upotrijebite bačvu s fosfornom kiselinom. 3 ml otopine pufera koristi se kao prazna epruveta. Sve epruvete se stave na 37°C. Mućkajte u vodenoj kupelji 3 sata, izvadite je van, dodajte 6 posto peroksi kiseline da prekinete reakciju, zatim dodajte 3m [cikloheksana, protresite da se promiješa, centrifugirajte na 1000 o/min 1 Omin, i uzmite je. Apsorpcija bistre otopine mjeri se na 242 nm, a prazna epruveta se mora držati toplom prije dodavanja kineskog amina. Zamućenost proteina se određuje Folin-fenol metodom, s telećim serumskim albuminom kao standardnim proteinom. Jedna jedinica enzimske aktivnosti i jedna jedinica enzimske aktivnosti definirane su kao da 37P proizvodi količinu enzima s promjenom apsorbancije od 0,01/3h.'

1. 2. 5 Serumsuperoksiddismutaza(SOD) određivanje aktivnosti (5 mu I, mišji serum 10M, dodan u luminiscentnu smjesu (pomiješana s 0, 1 mmol/L luminola i 0,1 mmol/L hipoksantina) U 980", čuvati u inkubatoru na 37°C tijekom 20 minuta. Nakon što ga izvadite, dodajte Huang Guanyin oksidazu da započnete reakciju. U tekućem flash mediju Beckman LS~98OO, broj luminiscencija na kraju 1 minute izračunava se na temelju stupnja detekcija jednog fotona. Com se koristi kao jedinica. Stopa inhibicije luminiscencije izračunava se s inferiornom serumskom skupinom kao slijepom probom. Dodatno, standardnisuperoksiddismutacijakoncentracija (apscisa) i brzina inhibicije luminescencije (koordinata) koriste se kao standardno određivanje sadržaja proteina kao i prije. 1. 2.6 Određivanje lipidnog peroksida (LPO) u plazmi, mozgu i jetri ④ Uzmite 50 limenki mišje plazme, homogenizirajte jetru i mozak (upotrijebite 0.2mol/L fosfatnog pufera pH7,4 , u homogenizatoru Napravljeno u 10 postotnoj koncentraciji) svakih 50 predaka, dodajte l/24mol/L sumporne kiseline 4 ml, 1 posto fosforne kiseline 0,5 ml, pomiješajte i stavite 5 minuta, centrifugirajte na 1000 r/mm 10 minuta, i aspirirao supernatant. Talogu dodati 2ml l/24mol/L sumporne kiseline i 0,3ml 10 postotnog kalcijevog fosfata, dobro promiješati, centrifugirati na 1000r/min i dodati 1ml rezistentne kukavne vode u talog, dobro promiješati da se dobije suspenzija, dodati slomljeni reagens barbitalne kiseline 1 ml, na 95. Nakon hlađenja 14 °C u uljnoj kupelji, dodajte 5 ml n-butanola, dobro promiješajte *100 Ili/min centrifugiranje 10 mtn, uzmite fazu n-butanola i izmjerite intenzitet fluorescencije na RF{{ 33}}OS spektrofotometar (valna duljina ekscitacije 515 mn, duljina emisije 553 nm), Osim toga, koristite standardni tetra etoksi propan i relativni intenzitet fluorescencije kao standardnu ​​krivulju.

   
   

2. 

2 rezultata

2.1 Utjecaj na test izdržljivosti miševa ozlijeđenih slobodnim radikalima

Vrijeme plivanja miševa u modelnoj skupini bilo je znatno kraće od onog u kontrolnoj skupini, dok je vrijeme plivanja u skupini koja je primala lijek trajalo dulje, a skupini koja je primala visoke doze bilo je slično kontrolnoj skupini (Tablica 1).

Tablica 1: UčinakCistanchena testu izdržljivosti plivanja modela miša s ozljedom u slobodnoj grobnici

2.2 Utjecaj na sposobnost održavanja topline

Miševi u modelnoj skupini brzo se smrzavaju na niskim temperaturama, a vrijeme je kraće nego u kontrolnoj skupini, dok je vrijeme smrzavanja skupina s dvije dozeCistanchenije samo duža od modelne skupine, već i duža od kontrolne skupine, što ukazuje na toCistanchene samo da ima učinak protiv oštećenja slobodnih radikala, već ima i očite učinke. Povećajte sposobnost grijanja od hladnoće (Tablica 2).

Tablica 2: UčinakCistancheo sposobnosti Senhana u mišjem modelu slobodne dobre ozljede

2.3 Utjecaj na sposobnost podnošenja hipoksije pri atmosferskom tlaku

Nakon primjeneCistanche, miševi su preživjeli pod normalnim tlakom i hipoksijom.CistancheUčinak miša Senhana na sposobnost slobodne ozljede bio je značajno dulji nego kod modelne skupine i također veći od onog kontrolne skupine, što ukazuje daCistanchemože povećati toleranciju miševa na hipoksiju. Sila (tablica 3)

Tablica 3:Cistanche's mišji model oštećenja slobodnih radikala

2.4 Utjecaj na vitalnost MAO-B

Nakon inhalacije O, aktivnost MAO-B u moždanom tkivu modelne skupine bila je značajno viša od one u drugoj skupini, a povećanje aktivnosti MAO-B u skupini koja je primala bilo je značajno inhibirano

Tablica 4: UčinakCistancheo aktivnosti 1SB tipa monoamin oksida vinove loze (MAO~B) u mišjem modelu ozljede slobodnog groba

2. 5 Utjecaj na vitalnost SOD

Stopa inhibicije kemiluminiscencije seruma u modelnoj skupini bila je značajno niža od one u drugim skupinama, a aktivnost SOD značajno je smanjena. SOD aktivnost skupine lijeka bila je značajno povećana, a skupina s visokim dozama bila je viša od aktivnosti kontrolne skupine (vidi donju tablicu 5)

Tablica 5: Model serumasuperoksidaktivnost dismutaze (SOD) je najglasnija2.6 Utjecaj na sadržaj lipidnog peroksida (ZLPO)

2.6 Sadržaj lipidnog peroksida (LFO) u plazmi, jetri i tkivu mozga modelne skupine bio je značajno povećan, a sadržaj LPO značajno je smanjen nakon primjene. Skupina s velikom dozom i dozom smanjila je LPO u moždanom tkivu na razinu kontrolne skupine (Tablica 6).

Tablica 6: Učinak mesa Axun na razinu plazme, jetre i lipidnog peroksida (LPO) u mišjem modelu oštećenja slobodnim radikalima

3 Rasprava

Starenje je pozitivna pojava u procesu života. Tradicionalna medicina domovine sakupila je bogato iskustvo i izvore medicine u godinama protiv starenja. Posljednjih su se godina domaći znanstvenici usredotočili na pronalaženje učinkovitih lijekova protiv starenja iz tradicionalne kineske medicine. Trenutačno se sve više razmatra teorija slobodnih radikala o starenju tijela. Iakoslobodni radikalistvaraju u tijelu u normalnim uvjetima, stanice tkiva su zaštićene zbog kontinuiranog uklanjanja SOD i drugih enzimskih sustava protiv toksičnosti kisika. Oa je jak oksidans. , Može pokrenuti reakciju slobodnih radikala u tijelu. Pretjerano udisanje kisika uzrokuje stvaranjeslobodni radikaliu tijelu, što premašuje sposobnost čišćenja tjelesnog antitolerancijskog sustava stele, uzrokujući oštećenje nukleinskih kiselina, proteina, aminokiselina, ugljikohidrata i lipidnih spojeva, čime se oštećuje formiranje i funkcija stanica i dovodi do starenja ⑶. Ovaj pokus pokazuje da su nakon udisanja kisika7 smanjena fizička snaga miševa, sposobnost održavanja topline i tolerancija na hipoksiju, slično opadanju fizioloških funkcija starih životinja. To pokazuje da mladi miševi mogu uzrokovati starenje modela nakon primanja d stimulacije.Cistancheznačajno je poboljšao promjene navedenih pokazatelja.

Superoksidslobodni radikalipostoje u tijelu kratko vrijeme i uglavnom ih eliminira SOD. Općenito, razina ili se odražava mjerenjem aktivnosti SOD. Razni antioksidansi u tijelu miševa koji prirodno stare i miševa oštećenih slobodnim radikalima su smanjeni, aktivnost busena se smanjuje, čime se smanjuje sposobnost čišćenjaslobodni radikali, što dovodi do povećanja sadržaja lipidnih peroksida. Aktivnost monoaminooksidaze tipa B (MA0-B) u mozgu raste s godinama. MAOB je glavna kontrola biološkog sata starenja u središnjem hipotalamusu. Rad sata usko je povezan sa starenjem. ⑴. Aktivnost MA0-B u mozgovima miševa u ovoj skupini eksperimentalnog modela je povećana, pokazujući biokemijske promjene u skladu s onima kod starijih životinja.