Promitotično djelovanje Oenothera Biennis na stare ljudske dermalne fibroblaste 2. dio

3. Rasprava

U ovoj smo studiji istraživali učinak ekstrakta hidrofilnih stanica Oenothera biennis (ObHEx) na staničnu starenje, budući da je pokazao svojstva protiv starenja kože kada je testiran u in vitro i ex vivo modelima [18]. Koristili smo sličan model starenja NHDF-a podvrgnutog SIPS-u za tretman s H2O2 [21,22].

Glikozid cistanhe također može povećati aktivnost SOD-a u tkivima srca i jetre, te značajno smanjiti sadržaj lipofuscina i MDA u svakom tkivu, učinkovito čisteći različite reaktivne kisikove radikale (OH-, H₂O₂, itd.) i štiteći od oštećenja DNA uzrokovanog pomoću OH-radikala. Cistanche feniletanoidni glikozidi imaju snažnu sposobnost hvatanja slobodnih radikala, veću reducirajuću sposobnost od vitamina C, poboljšavaju aktivnost SOD u suspenziji spermija, smanjuju sadržaj MDA i imaju određeni zaštitni učinak na funkciju membrane spermija. Cistanche polisaharidi mogu pojačati aktivnost SOD i GSH-Px u eritrocitima i plućnom tkivu eksperimentalno starih miševa uzrokovanu D-galaktozom, kao i smanjiti sadržaj MDA i kolagena u plućima i plazmi, te povećati sadržaj elastina, imaju dobar učinak čišćenja na DPPH, produžiti vrijeme hipoksije u starim miševima, poboljšati aktivnost SOD u serumu i odgoditi fiziološku degeneraciju pluća u eksperimentalno starim miševima Uz stančnu morfološke degeneraciju, pokusi su pokazali da Cistanche ima dobru antioksidacijsku sposobnost i ima potencijal da bude lijek za prevenciju i liječenje bolesti starenja kože. U isto vrijeme, ehinakozid u Cistancheu ima značajnu sposobnost hvatanja slobodnih radikala DPPH i sposobnost hvatanja reaktivnih kisikovih vrsta i sprječavanja slobodnih radikala.

induciranu degradaciju kolagena, a također ima dobar učinak popravka na oštećenje aniona slobodnih radikala timina.

Kliknite Gdje mogu kupiti Cistanche

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Kako bismo razumjeli mehanizam djelovanja ObHEx-a na stare ljudske dermalne fibroblaste, otkrivanjem bioloških putova promijenjenih ekstraktom, izveli smo ultraduboki proteomski pristup masovne spektrometrije neovisan o podacima. To nam je omogućilo da dobijemo do sada najcjelovitiju analizu proteoma stanica koje stare i, po prvi put, istodobnu kvantifikaciju brojnih markera starenja.

Prije svega, kako bismo procijenili indukciju starenja tretmanom H2O2 na NHFD stanicama, kvantificirali smo poznate markere starenja. Naši proteomski podaci potvrdili su indukciju starenja oksidativnim stresom: doista, primijetili smo izmijenjene razine već poznatih markera starenja povezanih s povećanim sadržajem lizosoma (GLB1 i FUCA1), oštećenjem DNK (ATR, ATM, MACROH2A1 i MACRO2A2) i G2 fazom staničnog ciklusa uhićenje (CDK1NA i MKI67). Štoviše, analiza puta obogaćivanja proteina s najnižom regulacijom u H2O2 tretiranim u usporedbi s kontrolnim stanicama ukazuje na mitozu, odražavajući zaustavljanje proliferacije u starenju.

Uspoređujući proteome SIPS NHDF stanica tretiranih ObHEx-om u odnosu na netretirane, otkrili smo da je tretman ekstraktom uspio djelomično obnoviti razine proteina i kompleksa koji igraju ključnu ulogu u nekoliko faza mitoze. ObHEx inkubacija povećala je razine CDK1, ključnog mitotičkog proteina koji pokreće ulazak u mitozu formiranjem kompleksa s ciklinom B [34]. Štoviše, svih pet podjedinica kompleksa kondenzina I bilo je regulirano prema gore. Ovaj kompleks se sastoji od dvije podjedinice strukturnog održavanja kromosoma (SMC), SMC2 i SMC4, i tri podjedinice koje nisu SMC, NCAPD2, NCAPH i NCAPG. U prometafazi, funkcija kompleksa kondenzina I je promicanje tipske kondenzacije kromosoma uvođenjem pozitivnih superzavojnica u DNA na način ovisan o ATP-u [35]. Osim toga, ekstrakt je regulirao KNTC1, NUF2 i TRIP13, tri proteina povezana s kinetohorom, velikim kompleksom koji, tijekom prometafaze, povezuje centromerni kromatin s mikrotubulama sa suprotnih polova vretena kako bi pogodovao odvajanju sestrinskih kromatida [ 36,37]. Također je otkrivena djelomična obnova razina MCM proteina. Ti su proteini u jezgri kompleksa replikacijske helikaze koji odmotava dvolančanu DNA kako bi se dobile jednolančane kao predlošci za DNA polimerazu. MCM kompleks se pretvara u aktivnu helikazu tijekom S faze, ali je već učitan u kromatin tijekom telofaze [38,39]. Ekstrakt je također povećao razine IQGAP3, PBK i DHFR. Prvi, IQGAP3, važan je regulator mitotičke progresije jer potiče aktivnost cdk7, bitnu za aktivaciju Cdc2 [40,41]; PBK je kinaza aktivna samo u mitozi; kada se fosforilira, stupa u interakciju s p53, destabilizirajući ga i umanjujući put oštećenja DNA [42]; a DHFR je ključni enzim u biosintezi DNA čije su razine izrazito smanjene u starim ljudskim fibroblastima [43].

Bio-ortogonalni testovi također su pokazali sposobnost ObHExa da djelomično poništi obilježja starenja, naime lizosomsku aktivnost i zaustavljanje staničnog ciklusa. Doista, kako bismo potvrdili da li obnova ekspresije mitotskog proteina pomoću ObHEx-a znači reaktivaciju staničnog ciklusa, izveli smo eksperimente FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting) na SIPS NHDF stanicama tretiranim ili ne s ekstraktom. Pokazali su da je ObHEx uspio smanjiti udio stanica blokiranih u G2 fazi i pospješiti njihov ponovni ulazak u stanični ciklus stanica koje stare.

4. Materijali i metode

4.1. Kultura stanica

Normalni ljudski dermalni fibroblasti (NHDF; Promocell) uzgajani su u Dulbeccovom modificiranom Eagle mediju (DMEM; Gibco) dopunjenom s 10 posto fetalnog goveđeg seruma (FBS; Gibco) i 500 U/mL penicilin-streptomicina (Gibco) u 95 postotnom zraku , 5 posto CO2 i vlažna atmosfera na 37 ◦C.

4.2. Indukcija preuranjenog starenja izazvanog stresom (SIPS)

Ukupno 10 1200 000 NHDF stanica nasađeno je u svaku od 60 mm posuda za kulturu stanica, jedan dan prije njihove inkubacije sa 100 µM H2O2 na 37 ◦C tijekom 2 sata [21,22]. Nakon toga, H2O2 je ispran s fosfatnim puferiranim fiziološkim rastvorom (PBS; Gibco) da se prekine tretman i stanice su uzgajane u normalnom mediju 4 dana. Za stanice koje nisu stare, korištene kao kontrola, 2240 000 NHDF stanice su posijane u svaku od 60 mm posuda za kulturu stanica. Pokus je izveden u 5 bioloških ponavljanja.

4.3. Pripravak hidrofilnog ekstrakta Oenothera Biennis (ObHEx).

Ekstrakt je pripremljen u laboratorijima Arterra Bioscience SpA [18]. Kulture stanica dobivene su iz listova biljke Oenothera biennis (dobavlja GEEL Floricultura ss) induciranjem proliferacije meristematskih stanica na pločama čvrstog agara do dobivenih žuljeva. Stanice su prebačene u tekući medij za rast (Gamborg B5, nadopunjen 2,4 dikloro fenoksi octenom kiselinom (1 mg/L), adeninom (1 mg/L) i kinetinom (0.01 mg/L )) i uzgojene kao suspenzijske kulture uz orbitalno mućkanje. Nakon što su dobivene kulture od oko 150 g/L, stanice su sakupljene i lizirane u PBS-u na pH 7,4 kako bi se pripremio ekstrakt topiv u vodi. Nakon liofilizacije, dobiveni prašak je otopljen u vodi ili mediju stanične kulture u odgovarajućim koncentracijama za ispitivanje.

4.4. Liječenje hidrofilnim ekstraktom Oenothera Biennis (ObHEx).

NHDF stanice su inkubirane 24 sata s 0.01 posto (p/v) ObHEx u potpunom mediju. Nakon toga, stanice su isprane tri puta s PBS-om i tretirane dodatna 24 sata s 0,01 posto (p/v) ObHEx u mediju bez seruma. Zatim su odvojeni tripsinizacijom, centrifugirani na 500 g 10 minuta na 4 ◦C i dva puta isprani s PBS-om. Netretirane kontrolne stanice podvrgnute su istim inkubacijama bez ObHEx-a.

4.5. Priprema uzorka za proteomsku analizu

Peleti su resuspendirani u 60µL pufera za radioimunoprecipitacijski test (RIPA) i lizirani sonikacijom. Koncentracija proteina staničnih lizata je kvantificirana korištenjem DC™ Protein Assay Kit (Biorad; #5000112). S-TrapTM mikro spin kolona (Protifi, Huntington, CA, SAD) digestija je izvedena na 50 µg staničnih lizata prema uputama proizvođača. Ukratko, uzorci su reducirani s 20 mM tris(2- karboksietil)fosfina (TCEP) i alkilirani s 50 mM tioacetamida (CAA) 15 minuta na sobnoj temperaturi. Zatim je dodana vodena otopina fosforne kiseline do konačne koncentracije od 2,5 posto, nakon čega je uslijedio dodatak pufera za vezanje S-Trap (90 postotni vodeni metanol, 100 mM TEAB, pH 7,1). Smjese su zatim nanesene na S-Trap kolone. Provedeno je pet dodatnih koraka ispiranja za temeljitu eliminaciju SDS-a. Zatim su stanični lizati digestirani s 2,5 µg tripsina (Promega) na 47 ◦C tijekom 1 sata. Nakon eluiranja, peptidi su osušeni u vakuumu, resuspendirani u 2 posto ACN, 0,1 posto FA i kvantificirani pomoću Nanodrop.

4.6. nanoLC-MS/MS Identifikacija i kvantifikacija proteina

Ukupno 400 ng svakog uzorka ubrizgano je na nanoploču (Bruker Daltonics, Bremen, Njemačka) sustav tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti (HPLC) povezan s timsTOF Pro (Bruker Daltonics, Bremen , Njemačka) maseni spektrometar. HPLC odvajanje (otapalo A: {{30}}.1 posto mravlje kiseline u vodi; otapalo B: 0,1 posto mravlje kiseline u acetonitrilu) provedeno je pri 250 L/min korištenjem napunjene emiterske kolone (C18, 25 cm × 75 µm 1,6 µm) (Ion Optics, Fitzroy, Australija) koristeći gradijentnu eluciju (2 do 13 posto otapala B tijekom 41 minute; 13 do 20 posto tijekom 23 minute; 20 posto do 30 posto tijekom 5 minuta; 30 posto do 85 posto tijekom 5 minuta i, konačno, 85 posto tijekom 5 minuta za pranje kolone). Maseni spektrometrijski podaci dobiveni su metodom prikupljanja paralelne akumulacije serijske fragmentacije neovisne o podacima (diaPASEF). Postavke pelena bile su: raspon mase od 400 do 1200 Da, raspon mobilnosti od 0,60 do 1.43 1/k0, broj prozora mobilnosti 1, procjena vremena ciklusa 1,79 s, koraka mase po ciklusu 32.

4.7. MS obrada podataka i bioinformatička analiza

Analiza podataka provedena je pomoću softvera DIA-NN (verzija 1.8) [44]. Pretraživanje ljudske baze podataka UniProtKB/Swiss-Prot Homo sapiens (izdanje veljače 2021., 20 408 unosa) provedeno je pomoću tijeka rada bez biblioteke. U tu svrhu provjerene su opcije "FASTA sažetak za besplatno pretraživanje knjižnice/generiranje knjižnice" i "Spektri dubokog učenja, predviđanje RT-a i IM-a" za generiranje prekursora iona. Dopuštena su najviše 2 propuštena cijepanja tripsinom, a maksimalna varijabilna modifikacija postavljena je na 5. Karbamidometilacija (Cys) postavljena je kao fiksna modifikacija, dok su proteinska N-terminalna ekscizija metionina, oksidacija metionina i N-terminalna acetilacija postavljene kao varijabla preinake. Raspon duljine peptida postavljen je na 7-30 aminokiselina, raspon naboja prekursora 2-4, raspon m/z prekursora 300-1800, a raspon iona fragmenta m/z 200-1800. Za pretraživanje matične mase i fragmenata iona, DIA-NN je automatski zaključio točnost i postavila je oko 13 ppm za svaku analizu. Stope lažnih otkrića (FDR) na razini proteina i peptida postavljene su na 1 posto. Utakmica između trčanja bila je dopuštena. Za strategiju kvantifikacije korišten je Robust LC (visoka preciznost) kako je preporučeno u dokumentaciji softvera, dok su zadane postavke zadržane za ostale parametre algoritma.

Statistička i bioinformatička analiza provedena je softverom Perseus (verzija 1.6.15) koji je besplatno dostupan na web stranici (pristupljeno 22. lipnja 2021) [45] i R/R Studio i RStudio verzija 20 21.09.1 30 (pristupljeno 12. studenog 2021.). Sve R statističke analize provedene su korištenjem R stats paketa. Korišten je izlaz matrice pg izvješća DIA-NN, a intenziteti su log2 transformirani za statističku analizu. Za statističku usporedbu postavili smo četiri skupine od kojih svaka sadrži 5 bioloških ponavljanja. Zatim smo filtrirali podatke kako bismo zadržali samo proteine ​​s najmanje 3 važeće vrijednosti u barem jednoj skupini. Zatim su podaci imputirani kako bi se popunile podatkovne točke koje nedostaju stvaranjem Gaussove distribucije nasumičnih brojeva sa standardnom devijacijom od 33 posto u odnosu na standardnu ​​devijaciju izmjerenih vrijednosti i 1,8 standardne devijacije pomakom prema dolje srednje vrijednosti kako bi se simulirala distribucija niske vrijednosti signala. Studentov t-test proveden je između SEN i CTRL FDR < 0,05, S0=0.1 kako bi se potvrdila prisutnost markera specifičnih za starenje. Zatim, kako bi se istražilo je li razlika u veličini učinka između odsutnosti ili prisutnosti tretmana ista za stanice u kojima je inducirano starenje ili ne, interakcija između oba čimbenika (tj. Indukcije i Tretmana) ispitana je pomoću dvosmjerne ANOVA u R. Zatim su p-vrijednosti dobivene za interakciju oba faktora prilagođene za višestruko testiranje pomoću Benjamini–Hochberg [46] metode za kontrolu stope lažnih otkrića (FDR). Konačno, Tukey HSD post hoc analiza je provedena na proteinima koji pokazuju q-vrijednost < 0,05. Podaci proteomike masene spektrometrije pohranjeni su u ProteomeXchange Consortium putem PRIDE [47] partnerskog repozitorija s identifikatorom skupa podataka PXD034222.

4.8. Bojanje ß-galaktozidazom povezano sa starenjem

Aktivnost ß-galaktozidaze (SA-ß-gal) povezana sa starenjem procijenjena je pomoću kompleta za bojenje Cell Signaling Technology (#9860). Ukupno 1250 000 NHDF stanica po jažici nasađeno je u 6-ploču s jažicom jedan dan prije SIPS-a; dok, kao kontrola, 250 000 stanica/jažici. Nakon 4 dana u normalnom mediju, stanice su inkubirane ili ne s 0.01 posto (p/v) ObHEx tijekom 48 h. Nakon toga su isprani s PBS-om i tretirani otopinom za fiksiranje 15 minuta. Nakon dva ispiranja s PBS-om, stanice su inkubirane s otopinom za bojenje ß-gal (konačni pH 6,0) koja sadrži 5-bromo-4-kloro-3-indolil- -D-galakto -piranozid (X-Gal) na 37 ◦C u suhom inkubatoru 20 h. Pozitivne ćelije su plave. Boja je posljedica cijepanja X-Gal u galaktozi i 5-bromo-4-kloro-3-indoksil (X) pomoću SA-ß-gal. Indoksil se oksidira u 5,50 -dibromo-4,40 -diklor-indigo koji stvara intenzivan plavi talog. Postotak pozitivnih stanica u ukupnom broju stanica procijenjen je brojanjem 100-150 stanica u 5 nasumično odabranih slika snimljenih mikroskopom, za svako stanje. Stanice su izbrojane pomoću softvera ImageJ. Pokus je izveden u tri primjerka.

4.9. Analiza sortiranja stanica aktivirana fluorescentno

Ukupno {{0}} NHDF stanica po jažici nasađeno je u 6-ploču s jažicom jedan dan prije SIPS-a; dok, kao kontrola, 50 000 stanica/jažici. Nakon 4 dana u normalnom mediju, kontrolne i stare stanice tretirane su ili ne s 0,01 posto (p/v) ObHEx tijekom 72 sata. Zatim su stanice inkubirane u prisutnosti 5 µg/mL Hoechsta 33342 30 minuta na 37 ◦C. Nakon tripsinizacije i centrifugiranja na 500 g tijekom 2 minute, oni su resuspendirani u 200 µL PBS-a. Konačno, stanična fluorescencija izmjerena je BD LSRFortessa Cell Analyzerom. Podaci su analizirani pomoću softvera FlowJo v10.8.1. Pokus je izveden u tri primjerka.

5. Zaključci

Globalno profiliranje proteoma povezano sa dubokim starenjem koje je ovdje dobiveno daje stotine proteina dereguliranih pomoću SIPS-a koje znanstvena zajednica može iskoristiti za daljnje razumijevanje starenja i procjenu učinaka novih potencijalnih modulatora. Štoviše, naš rad dokazuje pro-mitotski mehanizam djelovanja ObHEx-a na stare ljudske dermalne fibroblaste: putem povećanja ekspresije mitotičkih proteina, on potiče obnovu proliferacije starih stanica. Stoga, na temelju ovih rezultata, predlažemo ObHEx kao snažan adjuvans protiv starenja povezanog sa starenjem kože.

Doprinosi autora:Konceptualizacija, SC, MCM i ICG; metodologija, SC, KR, IM, CC (Cerina Chhuon) i ICG; softver, KR; istraga, SC, IM, CC (Cerina Chhuon), KT, SF, ADL, IP i CC (Corinne Cordier); resursi, MCM i ICG; pisanje—priprema izvornog nacrta, SC i ICG; pisanje—recenzija i uređivanje, SC, MCM i ICG Svi su autori pročitali i složili se s objavljenom verzijom rukopisa.

Izjava o dostupnosti podataka:Podaci proteomike masene spektrometrije pohranjeni su u ProteomeXchange Consortium putem PRIDE [47] partnerskog repozitorija s identifikatorom skupa podataka PXD034222 (Podaci o računu recenzenta: Korisničko ime: recenzent_pxd034222@ebi.ac.uk; Lozinka: fK9Pjv90) .

Priznanja: Ova studija je podržana od strane Programma Operativo Complementare Ricerca e Innovazione 2014–2020, Asse I "Capitale Umano", Azione I.1 "Dottorati Innovativi con caratterizzazione Industriale". Zahvaljujemo ostalim članovima platforme Proteomics Necker Vincent Jung i Joanna Lipecka na njihovoj neprocjenjivoj znanstvenoj podršci i plodonosnim prijedlozima.

Reference

1. Di Micco, R.; Križhanovski, V.; Baker, D.; d'Adda di Fagagna, F. Stanično starenje u starenju: od mehanizama do terapijskih mogućnosti. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2021, 22, 75–95. [CrossRef] [PubMed]

2. González-Gualda, E.; Baker, AG; Fruk, L.; Muñoz-Espín, D. Vodič za procjenu staničnog starenja in vitro i in vivo. FEBS J. 2021, 288, 56–80. [CrossRef] [PubMed]

3. Sikora, E.; Bielak-˙Zmijewska, A.; Mosieniak, G. Što jest, a što nije stanično starenje. Postepy Biochem. 2018, 64, 110–118. [CrossRef] [PubMed]

4. Choi, E.-J.; Kil, IS; Cho, E.-G. Izvanstanični vezikuli izvedeni iz senescentnih fibroblasta umanjuju dermalni učinak na diferencijaciju keratinocita. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1022. [CrossRef] [PubMed]

5. Krtolica, A.; Parrinello, S.; Lockett, S.; Desprez, PY; Campisi, J. Stari fibroblasti potiču rast epitelnih stanica i tumorogenezu: Veza između raka i starenja. Proc. Natl. Akad. Sci. SAD 2001, 98, 12072–12077. [CrossRef]

6. Wlaschek, M.; Maity, P.; Makrantonaki, E.; Scharffetter-Kochanek, K. Starenje vezivnog tkiva i fibroblasta u starenju kože. J. Invest. Dermatol. 2021, 141, 985–992. [CrossRef]

7. Paez-Ribes, M.; González-Gualda, E.; Doherty, GJ; Muñoz-Espín, D. Ciljanje senescentnih stanica u translacijskoj medicini. EMBO Mol. Med. 2019, 11, e10234. [CrossRef]

8. Soto-Gamez, A.; Demaria, M. Terapeutske intervencije za starenje: slučaj staničnog starenja. Drug Discov. Danas 2017, 22, 786–795. [CrossRef]

9. Latorre, E.; Birar, VC; Sheerin, AN; Jeynes, JCC; Hooper, A.; Dawe, HR; Melzer, D.; Cox, LS; Faragher, RGA; Ostler, EL; et al. Modulacija malih molekula ekspresije faktora spajanja povezana je sa spašavanjem od starenja stanica. BMC Cell Biol. 2017, 18, 31. [CrossRef]

10. Munir, R.; Semmar, N.; Farman, M.; Ahmad, NS Ažurirani pregled farmakoloških aktivnosti i fitokemijskih sastojaka noćurka (rod Oenothera). azijski pak. J. Trop. Biomed. 2017, 7, 1046–1054. [CrossRef]

11. Timoszuk, M.; Bielawska, K.; Skrzydlewska, E. Biološka aktivnost noćurka (Oenothera biennis) ovisi o kemijskom sastavu. Antioksidansi 2018, 7, 108. [CrossRef]

12. Lee, SY; Kim, CH; Hwang, BS; Choi, K.-M.; Yang, I.-J.; Kim, G.-Y.; Choi, YH; Park, C.; Jeong, J.-W. Zaštitni učinci Oenothera Biennis protiv oksidativnog stresa izazvanog vodikovim peroksidom i stanične smrti u keratinocitima kože. Život 2020, 10, 255. [CrossRef]

13. Granica, S.; Czerwi ´nska, ME; Piwowarski, JP; Ziaja, M.; Kiss, AK Kemijski sastav, antioksidativno i protuupalno djelovanje ekstrakata pripremljenih iz zračnih dijelova Oenothera Biennis L. i Oenothera Paradoxa Hudziok dobivenih nakon uzgoja sjemena. J. Agric. Food Chem. 2013, 61, 801–810. [CrossRef]

14. Fecker, R.; Buda, V.; Alexa, E.; Avram, S.; Pavel, IZ; Muntean, D.; Cocan, I.; Watz, C.; Minda, D.; Dehelean, CA; et al. Fitokemijski i biološki pregled Oenothera Biennis L. hidroalkoholnog ekstrakta. Biomolecules 2020, 10, 818. [CrossRef]

15. Schäfer, L.; Kragballe, K. Suplementacija uljem noćurka kod atopijskog dermatitisa: učinak na masne kiseline u neutrofilima i epidermisu. Lipidi 1991, 26, 557–560. [CrossRef]

17. Barbulova, A.; Apone, F.; Colucci, G. Kulture biljnih stanica kao izvor kozmetičkih aktivnih sastojaka. Kozmetika 2014, 1, 94–104. [CrossRef]

17. Cezar, LK; Cech, NB Sinergija i antagonizam u ekstraktima prirodnih proizvoda: kada 1 plus 1 nije jednako 2. Nat. proizvod Rep. 2019, 36, 869–888. [CrossRef]

18. Ceccacci, S.; De Lucia, A.; Tito, A.; Tortora, A.; Falanga, D.; Arciello, S.; Ausanio, G.; Di Cicco, C.; Monti, MC; Apone, F. Ekstrakt staničnih kultura Oenothera Biennis s djelovanjem protiv starenja kože poboljšava mehanička svojstva stanica. Metaboliti 2021, 11, 527. [CrossRef]

20. Farwick, M.; Köhler, T.; Schild, J.; Mentel, M.; Maczkiewitz, U.; Pagani, V.; Bonfigli, A.; Rigano, L.; Bureik, D.; Gauglitz, GG Pentaciklički triterpeni iz Terminalia Arjuna pokazuju višestruke dobrobiti na ostarjeloj i suhoj koži. Skin Pharmacol. Physiol. 2014, 27, 71–81. [CrossRef]

20. Bonte, F.; Dumas, M.; Chaudagne, C.; Meybeck, A. Utjecaj azijske kiseline, madekaske kiseline i azijskikozida na sintezu ljudskog kolagena I. Planta Med. 1994., 60, 133–135. [CrossRef]

21. Chowdhary, S. Učinci oksidativnog stresa na poticanje starenja ljudskih fibroblasta. J. South Carol. Akad. Sci. 2018, 16, 2.

22. Wang, Z.; Wei, D.; Xiao, H. Metode indukcije stanične starenja korištenjem oksidativnog stresa. Metode Mol. Biol. 2013, 1048, 135–144. [PubMed]

23. Hildebrand, DG; Lehle, S.; Borst, A.; Haferkamp, ​​S.; Essmann, F.; Schulze-Osthoff, K. -Fukozidaza kao novi pogodni biomarker za staničnu senescenciju. Stanični ciklus 2013, 12, 1922–1927. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, BY; Han, JA; Ja, JS; Morrone, A.; Johung, K.; Goodwin, EC; Kleijer, WJ; DiMaio, D.; Hwang, ES Beta-galaktozidaza povezana sa starenjem je lizosomska beta-galaktozidaza. Stanica starenja 2006, 5, 187–195. [CrossRef] [PubMed]

26. Gorgoulis, V.; Adams, PD; Alimonti, A.; Bennett, DC; Bischof, O.; Bishop, C.; Campisi, J.; Collado, M.; Evangelou, K.; Ferbeyre, G.; et al. Stanično starenje: definiranje puta prema naprijed. Ćelija 2019, 179, 813–827. [CrossRef]

26. Matsuoka, S.; Ballif, BA; Smogorzewska, A.; McDonald, ER; Hurov, KE; Luo, J.; Bakalarski, CE; Zhao, Z.; Solimini, N.; Lerenthal, Y.; et al. Analiza supstrata ATM i ATR otkriva opsežne mreže proteina koje reagiraju na oštećenje DNK. Znanost 2007, 316, 1160–1166. [CrossRef]

27. Zhang, R.; Chen, W.; Adams, PD Molekularna disekcija formiranja žarišta heterokromatina povezanih sa starenjem. Mol. Cell Biol. 2007., 27, 2343–2358. [CrossRef]

28. LaBaer, ​​J.; Garrett, MD; Stevenson, LF; Slingerland, JM; Sandhu, C.; Chou, HS; Fattaey, A.; Harlow, E. Nove funkcionalne aktivnosti za P21 obitelj CDK inhibitora. Genes Dev. 1997, 11, 847–862. [CrossRef]

30. Scholzen, T.; Gerdes, J. Protein Ki-67: od poznatog do nepoznatog. J. Cell Physiol. 2000, 182, 311–322. [CrossRef]

30. Passos, JF; von Zglinicki, T. Metode za razvrstavanje stanica mladih i starih stanica. Metode Mol. Biol. 2007., 371, 33–44.

31. Dai, Y.; Tang, H.; Pang, S. Ključne uloge fosfolipida u starenju i regulaciji životnog vijeka. Ispred. Physiol. 2021, 12, 1998. [CrossRef]

32. Dashty, M. Hedgehog signalni put povezan je s bolestima povezanim sa starenjem. J. Diabetes Metab. 2014, 5, 2. [CrossRef]

33. Wang, D.; Lu, P.; Liu, Y.; Chen, L.; Zhang, R.; Sui, W.; Dumitru, AG; Chen, X.; Wen, F.; Ouyang, H.-W.; et al. Izolacija živih prijevremeno ostarjelih stanica pomoću FUCCI tehnologije. Sci. Rep. 2016, 6, 30705. [CrossRef]

34. Qian, J.; Beullens, M.; Huang, J.; De Munter, S.; Lesage, B.; Bollen, M. Cdk1 naređuje mitotičke događaje kroz koordinaciju fosfataznog prekidača povezanog s kromosomom. Nat. Komun. 2015, 6, 10215. [CrossRef]

35. Kong, M.; Cutts, EE; Pan, D.; Beuron, F.; Kaliyappan, T.; Xue, C.; Morris, EP; Musacchio, A.; Vannini, A.; Greene, EC Ljudski kondenzin I i II pokreću ekstenzivno ATP-ovisno zbijanje DNK vezane za nukleosome. Mol. Cell 2020, 79, 99–114.e9. [CrossRef]

36. Kops, GJPL; Gassmann, R. Krunjenje kinetohora: fibrozna kruna u segregaciji kromosoma. Trends Cell Biol. 2020, 30, 653–667. [CrossRef]

37. Ma, HT; Poon, RYC TRIP13 Funkcije u uspostavljanju kontrolne točke sklopa vretena dopunjavanjem O-MAD2. Cell Rep. 2018, 22, 1439–1450. [CrossRef]

38. Kuipers, MA; Stasevich, TJ; Sasaki, T.; Wilson, KA; Hazelwood, KL; McNally, JG; Davidson, MW; Gilbert, DM Visoko stabilno učitavanje Mcm proteina na kromatin u živim stanicama zahtijeva replikaciju za rasterećenje. J. Cell Biol. 2011, 192, 29–41. [CrossRef]

39. Meng, Q.; Gao, J.; Zhu, H.; On, H.; Lu, Z.; Hong, M.; Zhou, H. Proteomska studija serijski pasiranih stanica fibroblasta ljudske kože otkriva nižu regulaciju proteina kromosomskog kondenzinskog kompleksa uključenih u replikativno starenje. Biochem. Biophys. Res. Komun. 2018, 505, 1112–1120. [CrossRef]

40. Larochelle, S.; Pandur, J.; Fisher, RP; Salz, HK; Suter, B. Cdk7 je bitan za mitozu i in vivo Cdk-aktivaciju kinazne aktivnosti. Genes Dev. 1998, 12, 370–381. [CrossRef]

42. Leone, M.; Cazorla-Vázquez, S.; Ferrazzi, F.; Wiederstein, JL; Gründl, M.; Weinstock, G.; Vergarajauregui, S.; Eckstein, M.; Krüger, M.; Gaubatz, S.; et al. IQGAP3, YAP cilj, potreban je za pravilno napredovanje staničnog ciklusa i stabilnost genoma. Mol. Cancer Res. 2021, 19, 1712–1726. [CrossRef] [PubMed]

42. Nandi, AK; Ford, T.; Fleksher, D.; Neuman, B.; Rapoport, AP. Atenuacija kontrolne točke oštećenja DNA pomoću PBK, nove mitotičke kinaze, uključuje interakciju protein-protein s tumorskim supresorom P53. Biochem. Biophys. Res. Komun. 2007., 358, 181–188. [CrossRef] [PubMed]

43. Dobri, L.; Dimri, GP; Campisi, J.; Chen, KY Regulacija ekspresije gena dihidrofolat reduktaze i komponenti E2F u ljudskim diplomatskim fibroblastima tijekom rasta i starenja. J. Cell Physiol. 1996, 168, 580–588. [CrossRef]

45. Demičev, V.; Messner, CB; Vernardis, SI; Lilley, KS; Ralser, M. DIA-NN: Neuralne mreže i korekcija smetnji omogućuju duboku pokrivenost proteoma u visokoj propusnosti. Nat. Metode 2020, 17, 41–44. [CrossRef]

46. ​​Tyanova, S.; Temu, T.; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, MY; Geiger, T.; Mann, M.; Cox, J. Računalna platforma Perseus za sveobuhvatnu analizu (Prote)Omics podataka. Nat. Metode 2016, 13, 731–740. [CrossRef]

46. ​​Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Kontroliranje stope lažnih otkrića: praktičan i moćan pristup višestrukom testiranju. JR Stat. Soc. Ser. B (Methodol.) 1995, 57, 289–300. [CrossRef]

47. Perez-Riverol, Y.; Bai, J.; Bandla, C.; García-Seisdedos, D.; Hewapathirana, S.; Kamatchinathan, S.; Kundu, DJ; Prakash, A.; Frericks-Zipper, A.; Eisenacher, M.; et al. Resursi baze podataka PRIDE u 2022.: Središte za proteomičke dokaze temeljene na spektrometriji mase. Nucleic Acids Res. 2021, 50, D543-D552. [CrossRef]

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】