Preliminarno istraživanje promotivnog učinka i mehanizma polisaharida iz Cistanche Deserticola na proliferaciju limfocita
Dec 04, 2025
Metode
MTT test korišten je za otkrivanje proliferacije limfocita slezene u miševa. Ciklofosfamid (Cy) korišten je za repliciranje životinjskih modela imunokompromitiranih životinja, a izmjereni su indeksi slezene i timusa normalnih i imunokompromitiranih životinja. Aktivnost interleukina-2 (IL-2) mjerena je testom proliferacije timocita. Rezultati: Polisaharid Cistanche deserticola značajno je pospješio proliferaciju mitogenom (ConA i LPS) aktiviranih limfocita i neaktiviranih normalnih stanica te pospješio izlučivanje IL-2 u limfocitima. Intraperitonealna primjena pokazala je da polisaharid Cistanche deserticola značajno povećava indeks slezene normalnih i imunokompromitiranih miševa, a također ima značajan antagonistički učinak na smanjenje indeksa timusa uzrokovanog Cy. Zaključak: polisaharid Cistanche deserticola može značajno pospješiti proliferaciju limfocita slezene kod miševa, što može biti povezano s njegovim poticanjem lučenja IL-2.
Pustinjska živa cistanča
[Ključne riječi]Polisaharid Cistanche deserticola; Indeks slezene; Indeks timusa; Proliferacija limfocita; Interleukin-2
Biljni polisaharidi su privukli široku pozornost zbog svojih široko rasprostranjenih imunomodulacijskih učinaka i relativno niske toksičnosti [1]. Cistanche deserticola ma, poznat kao "pustinjski ginseng", je ljuskava, suha, mesnata stabljika Cistanche deserticola, biljke Orobaceae, koja ima opsežne farmakološke učinke. Njegov vodeni uvarak može značajno povećati fagocitni postotak i fagocitni indeks makrofaga. Daljnja istraživanja su pokazala da je njegova materijalna osnova ukupni polisaharid Cistanche deserticola [3]. Zeng Qunli i sur. [4] su otkrili da jedna komponenta polisaharida Cistanche deserticola ima značajan proliferativni učinak na limfocite mišjeg timusa in vitro. Učinak polisaharida Cistanche deserticola na proliferaciju limfocita opažen je in vivo i in vitro.
Molekulska formula Cistanche deserticola
1Materijal i metode
1.1 Lijekovi i reagensi
Polisaharid iz Cistanche deserticola osigurava Biljno-kemijski odjel Instituta za medicinu i sadjarstvo Medicinskog fakulteta. Ekstrahira se iz praha ekstrakta Cistanche, a sadržaj polisaharida je 87%.
Ekstrakt cistanče u prahu
Prije uporabe in vivo pokusa, otopite i razrijedite fiziološkom otopinom do potrebne koncentracije i prokuhajte za sterilizaciju. Prije upotrebe in vitro eksperimenata, RPMI-1640 medij kulture je otopljen i razrijeđen te je izvršena sterilizacija pod visokim pritiskom. Lipopolisaharid (LPS), konkanavalin (ConA), deksametazon (DEX) i MTT svi su proizvodi Sigma Corporation. Ciklofosfamid, kinesko-američko zajedničko ulaganje tvrtke Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., fetalni goveđi serum, medij kulture RPMI1640 i tripsin svi su Gibco proizvodi. Ostali reagensi su domaći analitički reagensi.
1.2 Životinje
BALB c mlade miševe (SPF razina) osigurava Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Peking) 2002.-2003.]. Životinje SPF stupnja uzgajaju se u prostoriji i slobodno se hrane i piju.
1.3 Uređaji
Multikan Ascent enzimski marker, proizvod Thermo Electron Company, SAD. Leici PHS-3B Precision pH Meter, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 inkubator ugljičnog dioksida, NAPCO, SAD. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Invertirani mikroskop, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.
1.4 Metoda
1.4.1 Utjecaj na proliferaciju limfocita [5]:
Rutinska priprema limfocita slezene iz BALB/c miševa, korištenjem RPMI-1640 za podešavanje koncentracije stanica na 1 × 107 mL, inokuliranih na ploči s kulturom s 96 jažica, sa 100 staničnih suspenzija dodanih u svaku jažicu μL-50. Uzgajan je zajedno s različitim koncentracijama polisaharida Cistanche deserticola (konačna koncentracija polisaharida Cistanche deserticola za proliferaciju neaktiviranih limfocita bila je 6,25, 12,5, 25, 50 i 100 mg/L redom; konačna koncentracija polisaharida Cistanche deserticola za proliferaciju ConA-aktiviranih T limfocita bila je 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 i 62,5 mg/L redom, a konačna koncentracija polisaharida Cistanche deserticola za proliferaciju LPS aktiviranih limfocita B bila je 1,56, 3,13, 6,25, 12,5 i 25 mg/L redom) i ConA ili LPS, Medij RPMI-1640 korišten je kao kontrola. Ukupni volumen svake rupe je 200 μL. Kada se dodaju mitogen ConA i LPS (kontrola je RPMI-1640 koja sadrži odgovarajuće koncentracije ConA ili LPS), konačne koncentracije oba su 2,5 mg/L odnosno 10 mg/L. Napravljene su tri paralelne rupe za različite tretmane. Stavite ploču s kulturom u inkubator s vlagom 37 stupnjeva i 5% CO2 na 68 sati, dodajte MTT i nastavite s kulturom 4 sata. Izmjerite vrijednost A540 nm enzimskim markerom pomoću MTT metode za otkrivanje proliferacije. Kada uspoređujete svaku skupinu, pretvorite vrijednost A540nm u stopu proliferacije limfocita prema sljedećoj formuli:stopa proliferacije limfocita=AA uzorak A kontrola × 100 %.
Djelovanje Cistanche-Poboljšanje imuniteta
1.4.2 Učinak na težinu imunoloških organa kod normalnih miševa [6,7]:
Mladi BALB c miševi (muški, stari 4 tjedna, tjelesne težine 10-15 g) nasumično su podijeljeni u skupinu s slijepom probom (fiziološkom otopinom) i skupine s različitim dozama (125 mg (kg · tjelesne težine) i 250 mg (kg · tjelesne težine)), s 11 štakora u svakoj skupini. Lijek je primijenjen intraperitonealno jednom dnevno tijekom 7 uzastopnih dana. Miševi su ubijeni nakon dislokacije vrata maternice. Uzeti su slezena i timus, uklonjeno je masno tkivo i tkivo fascije, a površinska tekućina je osušena filter papirom. Nakon vaganja, indeks slezene=100 × Težina slezene (mg) Tjelesna težina (mg); Hthymusindex=100 × Težina timusa (mg) Tjelesna težina (mg). Izračunajte indeks slezene i indeks timusa za svakih 100 mg tjelesne težine.
1.4.3 Učinak na težinu imunološkog organa u imunokompromitiranih miševa [7,8]:
Mladi BALB c štakori (mužjaci, stari 6 tjedana, tjelesne težine 15-20 g) nasumično su podijeljeni u 12 skupina prema tjelesnoj težini. Osim normalne kontrolne skupine (intraperitonealna injekcija ekvivalentnog volumena fiziološke otopine), ostalim skupinama intraperitonealno je injiciran Cy 50 mg (kg · tt) dnevno, a otopina ispitivanog lijeka primijenjena je intraperitonealno [125 i 250 mg (kg · tt)], normalnoj kontrolnoj skupini i modelnoj skupini dan je isti volumen fiziološke otopine tijekom 13 uzastopnih dana, jednom dnevno. Promjene u težini životinja promatrane su tijekom pokusa . 24 sati nakon zadnje primjene, indeksi slezene i timusa izmjereni su i izračunati koristeći istu metodu kao u 1.4.2.
1.4.4 Utjecaj na aktivnost IL-2:
① Indukcija IL-2 [9]: Dodajte 50 u svaku jažicu u staničnoj ploči s 96 jažica μL različite koncentracije polisaharida Cistanche deserticola (konačne koncentracije redom: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5, 125 mg/L, dodajte 50 mg/L u kontrolnu jažicu μL medija kulture) i 50 μL ConA (konačna koncentracija 5 mg/L), dodajte još 1 po jažici × 106 stanica slezene. Inkubirajte 24 sata na 37 stupnjeva, 5% CO2 zasićenom vlažnom inkubatoru, centrifugirajte 20 minuta na 2500 r/min, uzmite stanični supernatant i pohranite ga na - 20 stupnjeva za pripravnost. ② IL-2 otkrivanje aktivnosti [9,10]: Osnovna metoda temelji se na literaturi [9], a odgovarajuće prilagodbe su napravljene u skladu s literaturom [10]. Konvencionalna priprema suspenzije mišjih timocita BALB c, ploča za kulturu stanica s 96 jažica, 1 inokulacija po jažici × 106 timocita, uz dodavanje 50 stanica po jažici μL ConA (konačna koncentracija 2,5 mg/L), a zatim dodajte pripremljeni IL-2 supernatant 50 μL (dodajte 50 u prazninu kontrolne rupe μL otopine kulture), inkubirajte zajedno za 54 sata, dodajte MTT, nastavite inkubirati 4 sata, centrifugirajte 10 do 15 minuta na 1000 r min, odbacite supernatant i dodajte DMSO 100 po jažici μL, protresite mikrooscilatorom 8 minuta i izmjerite vrijednost A540 nm enzimskim markerom.
1.5 Statistička analiza
Podaci su izraženi kao srednja vrijednost i standardna devijacija (x ± s). Za uspoređivanje podataka korišten je softver Microsoft Excel i proveden je t-test. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.
2. Rezultati
2.1 Utjecaj na proliferaciju limfocita
Kao što se može vidjeti iz tablice 1, dodavanje polisaharida Cistanche deserticola u medij kulture limfocita mišje slezene kultiviranih in vitro u koncentraciji iznad 25 mg/L može značajno stimulirati proliferaciju limfocita, što ukazuje da sam polisaharid Cistanche deserticola ima mitotski učinak. Istovremeno,iz tablica 2 i 3 može se vidjeti da CDPS ima značajan pospješujući učinak na proliferaciju ConA-induciranih T limfocita ili LPS-induciranih B limfocita.
Tab.1 Utjecaj polisaharida Cistanche deserticola na proliferaciju neaktiviranih limfocita (x ±s, n =3)
Nije: u usporedbi s kontrolnom skupinom, ＊P<0.05.
Tab.2 Utjecaj polisaharida Cistanche deserticola na proliferaciju T limfocita induciranu ConA (x ±s, n =3)
Napomena: u usporedbi s grupom ConA, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.
Tab.3 Utjecaj polisaharida Cistanche deserticola na proliferaciju B limfocita induciranu LPS-om (x ±s, n =3)
Napomena: u usporedbi s LPS grupom, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.
2.2 Učinak na težinu imunoloških organa kod normalnih miševa
Kao što se može vidjeti iz tablice 4,Polisaharid Cistanche deserticola može značajno povećati indeks slezene normalnih BALB/cc mladih štakora, ali ne utječe na timusnu žlijezdu.
2.3 Učinak na težinu imunološkog organa u imunokompromitiranih miševa
Iz tablice 5,može se vidjeti da su indeksi organa slezene i timusa miševa u Cy imunosupresivnoj skupini niži od onih u kontrolnoj skupini, a polisaharid Cistanche deserticola (125, 250 mg/kg) može značajno poboljšati indekse slezene i timusa.
2.4 Učinak na aktivnost IL-2
Kao što se može vidjeti iz tablice 6,kada doza polisaharida Cistanche deserticola dosegne 7,82 mg/L, može značajno povećati otpuštanje IL-2 iz stanica mišje slezene.
Tab.4 Učinak polisaharida Cistanche deserticola na težinu imunoloških organa kod normalnih miševa (x ±s, n =11)
Napomena: u usporedbi s kontrolnom skupinom, ＊＊P<0.01.
Tab.5 Učinak polisaharida Cistanche deserticola na težinu imunoloških organa u imunodepresivnih miševa (x ±s, n =12)
Napomena: u usporedbi s kontrolnom skupinom, ## P < 0,01; u usporedbi sa skupinom modela, ＊＊P<0.01.
Tab.6 Utjecaj polisaharida Cistanche deserticola na proizvodnju IL-2 limfocita slezene u miševa (x ±s, n =3)
Napomena: u usporedbi s kontrolnom skupinom, ＊＊P<0.01.
3. Rasprava
ConA i LPS-inducirana proliferacija limfocita slezene u miševa in vitro je eksperiment za otkrivanje funkcije T i B limfocita i važan je pokazatelj specifične imunološke sposobnosti. Studije su pokazale da kada je konačna koncentracija polisaharida Cistanche deserticola iznad 25 mg/L, može značajno pospješiti proliferaciju limfocita, što ukazuje da ima određeni mitotski učinak. U prisutnosti mitogena (ConA ili LPS), manja doza polisaharida Cistanche deserticola može poboljšati ako tijelo pokazuje značajnu proliferativnu aktivnost. Znamo da ConA i LPS uglavnom induciraju proliferaciju T limfocita odnosno B limfocita. Studije su pokazaleZdravstvene prednosti praha cistanche: Polisaharid Cistanche deserticola može pospješiti i proliferaciju T limfocita i proliferaciju B limfocita, ali je njegov proliferativni učinak na B limfocite znatno jači nego na T limfocite.
Cistanche prašak za zdravlje - Poboljšanjee imunitet
Kliknite ovdje za pregled Cistanche proizvoda za poboljšanje imuniteta
【Tražite više】 E-pošta: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692
Timus i slezena glavni su imunološki organi kod životinja. Imunološke stanice u slezeni su uglavnom zreli B limfociti, dok su timus uglavnom nezreli T limfociti. Indeksi timusa i slezene mogu odražavati razvoj imunoloških organa i funkcionalni status imunoloških stanica. Intraperitonealna injekcija polisaharida Cistanche deserticola može značajno povećati indeks slezene normalnih i imunosuprimiranih miševa i ima značajan antagonistički učinak na atrofiju timusa izazvanu Cy u miševa.
Polisaharid Cistanche deserticola nema značajan učinak na indeks timusa u normalnih životinja, što je u skladu s rezultatima in vitro eksperimenata u kojima polisaharid Cistanche deserticola potiče proliferaciju B limfocita, a ne T limfocita.
Cistanche dodatak u mojoj blizini-Poboljšajimunitet
IL-2 je citokin koji proizvode T limfociti od G1 faze staničnog ciklusa do S faze. To je glavni čimbenik rasta T stanica koji djeluje kao autokrini čimbenik rasta. Osim toga, IL-2 može pospješiti proliferaciju B stanica i sintezu protutijela [11,12]. Polisaharid Cistanche deserticola potiče oslobađanje IL-2 iz limfocita, što je očito povezano s polisaharidom Cistanche deserticola koji potiče proliferaciju limfocita slezene.
Medicinska istraživanja pokazuju da Cistanche sadrži polisaharide, Echinacosides i Acteoside, koji mogu aktivirati limfocite i poboljšati stanje tijela; funkcionalne komponente feniletanoidnih glikozida cistanche imaju značajan učinak na oporavak stanica nakon oštećenja 60 Co gama zrakama, a također mogu poboljšati imunološku funkciju protiv oštećenja zračenjem. Svakodnevnim uzimanjem dodataka Cistanche deserticola može se postići učinak poboljšanja imuniteta.
