Već postojeći T-stanični imunitet na SARS-CoV-2 kod neizloženih zdravih kontrola u Ekvadoru, otkriven pomoću COVID-19 testa otpuštanja interferona-gama

SAŽETAK

Pozadina: Studije imunološkog odgovora T-stanica protiv SARS-CoV-2 važne su za razumijevanje imunološkog statusa pojedinaca ili populacije. Ovdje koristimo jednostavan, jeftin i brz test stimulacije pune krvi - Interferon-Gamma Release Assay (IGRA) - za proučavanje imunosti T-stanica na SARS-CoV-2 kod pacijenata koji se oporavljaju od COVID-19 i neeksponirani zdravi kontakti iz Quita, Ekvador. Metode: Proizvodnja interferona-gama (INF-g) mjerena je u hepariniziranoj krvi rekonvalescenata i neizloženih subjekata nakon 24 h stimulacije SARS-CoV-2 Spike S1 proteinom, proteinom domene vezivanja receptora (RBD) ili proteina nukleokapsida (NP). Prisutnost IgG-RBD proteinskih protutijela u obje ispitivane skupine određena je "in-house" ELISA testom. Rezultati: Mjereno s proizvodnjom INF-g, 80 posto pacijenata koji su se oporavili od COVID-19, svi seropozitivni na IgG-RBD, imalo je snažan T-stanični odgovor.

Međutim, neočekivano, 44 ​​posto neizloženih zdravih kontrolnih osoba, sve IgG-RBD seronegativne, imalo je snažan odgovor T-stanica specifičan za virus s COVID-19 IGRA-om, vjerojatno zbog prethodne izloženosti koronavirusima koji uzrokuju prehladu ili drugim virusnih ili mikrobnih antigena. Zaključak i rasprava: Visoki postotak neizloženih zdravih subjekata s već postojećim imunitetom sugerira da dio populacije Ekvadora vjerojatno ima T-stanice reaktivne na SARS-CoV-2. S obzirom na to da je IGRA tehnika jednostavna i da se lako može proširiti za istraživanja gdje je potreban veliki broj pacijenata, ova COVID{10}} IGRA može poslužiti za utvrđivanje predstavlja li odgovor samo T-stanica zaštitni imunitet na SARS-CoV -2 infekcija u populacijskoj studiji. © 2021 Autori. Izdavač Elsevier Ltd u ime Međunarodnog društva za zarazne bolesti.

U isto vrijeme, kada je naš imunitet nizak, postoji mnogo načina za poboljšanje imuniteta, unos hrane koja može ojačati imunitet, kao što su cistanke, polisaharidi, proteini, aminokiseline i druge tvari sadržane u cistankama često mogu regulirati tjelesneiimunološki sustav.

Kliknite proizvod u prahu s ekstraktom cistanche tubulosa

Uvod

Imunološki odgovor na infekciju SARS-CoV-2 ne uključuje samo proizvodnju antitijela, već infekcija također pokreće odgovor T-stanica kod pacijenata (Lipsitch i sur., 2020., Ni i sur., 2020.). Općenito, određivanje prisutnosti i veličine specifičnog memorijskog odgovora T-stanica na ovu infekciju koronavirusom provodi se ELISPOT testom utvrđivanjem broja limfocita koji proizvode IFN-g nakon stimulacije antigenima ili peptidima specifičnim za bolest (Ni i sur., 2020., Pai i sur., 2014., Abate i sur., 2013., Braun i sur., 2020., Grifono i sur., 2020., LeBert i sur., 2020., Sekine i sur., 2020.).

Za ovu tehniku, mononuklearne stanice periferne krvi (PBMC) izoliraju se iz svježe heparinizirane krvi centrifugiranjem s gradijentom gustoće; izlučivanje citokina pojedinih T-stanica kvantificira se mikroskopom ili posebnim aparatom – ELISPOT čitačem ploča. ELISPOT test je tehnika "samo za istraživačke laboratorije" koja je vrlo mukotrpna, tehnički zahtjevna, relativno skupa i ne može se jednostavno koristiti u kliničkom laboratoriju ili primijeniti u populacijskim studijama. Zbog troškova, infrastrukture i laboratorijskih zahtjeva potrebnih za izvođenje analize, njegova upotreba u okruženjima s ograničenim resursima, kao što je Ekvador, može biti minimalna.

Stanični imunološki odgovori također se mogu odrediti jednostavnijim testom: testom oslobađanja interferona gama (IGRA). Ovaj test, in vitro test krvi, kvantificira citokine koje izlučuju T-stanice (tj. gama interferon (IFN-g); međutim, drugi citokini poput TNF-a ili IL-2 također se mogu kvantificirati) nakon stimulacije pune krvi (ne samo izolirani limfociti) sa specifičnim antigenima (Pai i sur., 2014., Abate i sur., 2013.). Izlučeni citokin IFN-g mjeri se ELISA testom, lako dostupnom tehnikom u većini laboratorija, a rezultati se očitavaju pomoću ELISA čitača ploča. IGRA su pronašle primjenu u kliničkom laboratoriju i koriste se za određivanje latentne infekcije s Mycobacterium tuberculosis (MTB), kao i za mjerenje stanično posredovanog imuniteta specifičnog za citomegalovirus (CMV) i predviđanje CMV infekcije kod primatelja transplantata (Pai et al. , 2014., Abate i sur., 2013.). Ovi IGRA testovi su opsežno procijenjeni i, u usporedbi s ELISPOT testom, pokazalo se da pokazuju slične mogućnosti predviđanja MTB ili CMV infekcije. Štoviše, dostupno je nekoliko komercijalnih i FDA ili CE-označenih testova za otkrivanje imuniteta protiv tuberkuloze ili CMV-a koji se naširoko izvode.

U ovoj studiji istražujemo upotrebu COVID-19 IGRA-e i procjenjujemo veličinu otpuštanja IFN-g u rekonvalescentnih COVID-19 pacijenata i zdravih COVID-19 naivnih kontrola kao odgovor na specifične antigeni virusa SARS-CoV-2: RBD protein; S1 dio Spike proteina; ili nukleokapsid (N) protein. Dodatno, utvrđujemo prisutnost SARS-CoV-2 specifičnih IgG antitijela kod tih sudionika pomoću "in-house" ELISA testa (Amanat i sur., 2020., Guevara i sur., 2021.). Pokazujemo da značajan postotak neizloženih donora posjeduje SARS-CoV-2 reaktivne T-stanice i raspravljamo o tim rezultatima.

Materijal i metode

Pacijenti koji se oporavljaju od COVID-a-19, zdrave kontrole i okruženje

Ovo je istraživanje provedeno u Quitu, Ekvador, u rujnu 2020. Nisu korištene statističke metode za unaprijed određivanje veličine uzorka. Tablica 1 prikazuje karakteristike 32 pacijenta u ovoj studiji: trinaest rekonvalescentnih COVID-19 pacijenata, svi s blagim COVID-19 simptomima/znakovima i pozitivnom RT-PCR dijagnozom u lipnju 2020.; i 17 neizloženih zdravih kontrola. Ove zdrave kontrole bile su iznimno oprezne tijekom pandemije, izbjegavale su kontakt s drugim ljudima i same nisu prijavile tipične znakove i simptome COVID-a-19 tijekom trajanja pandemije, kao što su groznica, uporan kašalj, ili gubitak mirisa ili okusa. Također, dva asimptomatska nositelja SARS-CoV-2 bila su uključena u ovu studiju. Ove dvije osobe nikada nisu pokazivale nikakve simptome ili znakove bolesti COVID-19; međutim, RT-PCR tehnika im je provedena kao uvjet za radnu dozvolu u lipnju 2020. i rezultirala je pozitivnim dijagnozama.

Serologija

Serologija i IGRA za sve pacijente i kontrole obavljeni su tijekom zadnja dva tjedna rujna 2020., tri mjeseca nakon RT-PCR dijagnoze rekonvalescenata. Kako bi se utvrdila prisutnost IgG protutijela specifičnih za koronavirus u našoj studijskoj skupini, korišten je "inhouse" SARS-CoV-2 Receptor Binding Domain (RBD) IgG ELISA (9, 10).

Ispitivanje otpuštanja gama interferona (IGRA)

Za IGRA, uzet je uzorak heparinizirane krvi (4 mL) i podijeljen u alikvote od 250 mL i stimuliran s 2 mg/mL RBD proteina (postupak izolacije iz reference 9) ili 2 mg/mL komercijalno dostupnog nukleokapsida (N) protein ili Spike (S1) protein (ViroGen, kataloški brojevi: 00,221-V odnosno 00,226-V). Krivulja koncentracija doze-odgovor s krvlju IGRA-pozitivnih i IGRA-negativnih pacijenata korištena je za određivanje optimalne koncentracije antigena za stimulaciju u IGRA-i. Pri 2 ug/mL, maksimalni IFN-g odgovor u krvi pacijenata s COVID-19 pronađen je bez stimulacije u neinficiranim kontrolama. Za svakog sudionika uključena je nestimulirana kontrola (NIL) i ispitali smo uzorak krvi od 250 mL s mitogen fitohemaglutininom (PHA), pozitivnom kontrolom za procjenu stope citokinskog odgovora uzorka krvi. Stimulacija je provedena u 96-jažičnoj ELISA ploči s ravnim dnom na 37 C tijekom 24 h. Plazma je sakupljena, a proizvodnja IFN-g je određena s ljudskim IFN-g ELISA (MaxTM Standard Set Biolegend kat. br. 430,101).

Rezultati

RBD IgG ELISA pokazala je da su svi bolesnici sa simptomima COVID{{0}} (RT-PCR pozitivni) bili pozitivni na IgG antitijela protiv RBD proteina tri mjeseca nakon RT-PCR dijagnoze. Dva asimptomatska RT-PCR pozitivna pacijenta i svi zdravi neizloženi kontrolni pacijenti bili su seronegativni s ovim ELISA testom (vidi tablicu 1). Rezultati stimulacije pune krvi u testu COVID-19 IGRA prikazani su na slici 1. Snažna indukcija proizvodnje IFN-g pronađena je u 80 posto pacijenata sa simptomima COVID-19 sva tri antigena, ali N protein i S protein bili su najjači stimulatori IFN-g odgovora (Slika 1 A, B, C). Dva asimptomatska, ali RT-PCR-pozitivna pacijenta (pacijenti 14 i 15), oba bez specifičnih SAR-CoV-2 protutijela, također su pokazala snažan inducibilni T-stanični imuni odgovor. Od COVID-19 naivnih pacijenata, 45 posto pokazalo je inducibilni T-stanični imunitet. Odgovor kod ovih zdravih neizloženih kontrola s T-staničnim odgovorom nije se statistički značajno razlikovao u veličini od pacijenata koji su se oporavljali od COVID-19 za bilo koji od stimulirajućih antigena (p-vrijednost=0.271, 0.437, i 0,719 za RBD, N, odnosno S1 proteine).

Slika 1. Proizvodnja IFN-g nakon stimulacije cijele krvi rekonvalescentnih COVID-19 pacijenata i zdravih neizloženih kontrola s RBD, N ili S1 proteinom.

Rezultati stimulacije rekonvalescentnih pacijenata i kontrola s RBD, N ili S1 proteinom prikazani su na sl. 1A, B i C. Na sl. 1D, INF-g odgovori svakog pacijenta i na tri antigeni su grupirani. Pacijenti s potvrđenom infekcijom COVID-19 označeni su brojevima od 1 do 15, od kojih su pacijenti 14 i 15 bili asimptomatski. Subjekti 16–33 su COVID-19 naivni pacijenti.

Nakon 24 sata stimulacije, koncentracije IFN-g u plazmi određene su korištenjem komercijalno dostupnog kita temeljenog na ljudskom enzimskom imunoanalizi IFN-g (Biolegend kat. br. 430,101). Veličina stimulacije izražena je kao optička gustoća na 450 nm (OD450) za krv stimuliranu antigenom minus OD450 za krv bez stimulacije antigenom. OD od 1,0 odgovarao je približno 400 pg/mL IFN-g. Fitohemaglutinin (PHA) korišten je kao mitogen u konačnoj koncentraciji od 5 mg/mL u IGRA-i za procjenu kvalitete i sposobnosti odgovora krvi. Svi pacijenti i kontrole pokazali su maksimalnu proizvodnju citokina s ovim mitogenom sa srednjom optičkom gustoćom (OD450) od 2,54 (SD=0.13), što predstavlja približno 1000 pg/mL IFN-g. Nije bilo razlike u srednjoj razini IFN-g u nestimuliranoj krvi rekonvalescentnih pacijenata i zdravih kontrola (OD450=0.38, SD=0.14 naspram OD450=0.32. SD=0.16). Ovi rezultati nisu prikazani. Vodoravna linija nacrtana je na svakom grafikonu da predstavlja graničnu vrijednost za stimulaciju. Ta je vrijednost određena izračunavanjem srednje vrijednosti plus dvije standardne devijacije odgovora devet ispitanika (pacijenti 16, 18, 19, 22, 27–31) iz kontrolne skupine s najnižom proizvodnjom INF–g nakon stimulacije.

Rasprava i zaključci

Koristeći test pune krvi koji se jednostavno izvodi i koji procjenjuje odgovore T-stanica, otkrili smo da je većina rekonvalescentnih pacijenata i značajan udio zdravih neizloženih pojedinaca imala specifičan i jak odgovor T-stanica određen proizvodnjom INF-g nakon stimulacije sa SARS-CoV-2 specifičnim antigenima (Slika 1). Nekoliko studija, sve koristeći ELISPOT test, izvijestilo je o prisutnosti odgovora T-stanica kod većine ili svih rekonvalescentnih COVID-19 pacijenata (Braun i sur., 2020., Grifono i sur., 2020., LeBert i sur. , 2020., Sekine i sur., 2020., Moderbacher i sur., 2020., Mateus i sur., 2020., Peng i sur., 2020.).

Međutim, što se tiče odgovora T-stanica kod zdravih neizloženih kontrolnih osoba, zabilježene su stope odgovora između 28 i 50 posto (Doshi, 2020., de Vries, 2020., Lipsitch et al., 2020., Sagar et al., 2020.), a nekoliko studije ne pokazuju odgovor T-stanica kod naivnih kontrolnih pacijenata s COVID-19 (de Vries, 2020., Moderbacher i sur., 2020., Schwarzkopf i sur., 2021.). Većina ovih studija provedena je s ELISPOT testom, ali u Italiji i SAD-u, IGRA je također korišten za otkrivanje SARS-CoV-2 T-staničnog odgovora (Petrone et al., 2020, Murugesan et al. ., 2020). U obje studije, specifičan T-stanični odgovor otkriven je u rekonvalescentnih bolesnika; međutim, IGRA nije otkrila odgovor INF-g kod zdravih neizloženih subjekata.

Prethodno postojeći T-stanični imunitet na SARS-CoV-2 kod COVID-19 naivnih subjekata pregledan je u nekoliko publikacija (Altmann i Boyton, 2020., Dosho et al., 2020., de Vries, 2020., Sette i Crotty, 2020). Razlog zašto bi se specifični odgovor T-stanica na COVID-19 mogao otkriti kod zdravog neizloženog subjekta ostaje nejasan i predmet je nagađanja. Većina ELISPOT studija s COVID{11}} naivnim subjektima koristila je uzorke ljudske krvi dobivene prije nego što je virus SARS-CoV-2 otkriven 2019. godine, dakle prije bilo kakve šanse za izlaganje. Iz tog razloga, ove studije ELISPOT zaključile su da odgovor T-stanica kod neizloženih zdravih subjekata vjerojatno dolazi od prethodnog kontakta s cirkulirajućim koronavirusom "obične prehlade" (Grifoni i sur., 2020., Matheus i sur., 2020.) ili prethodnog izlaganja gripi i/ili CMV virusi (Mahajan i sur., 2020.) ili drugi virusni ili mikrobni antigeni (Tan i sur., 2020.). U našoj studiji korištena je krv uzeta tijekom pandemije od volontera koji su sami prijavili da nisu imali kontakta, bili su seronegativni za COVID-19 antigen RBD i nikada nisu pokazivali nikakve znakove ili simptome COVID-a-19.

Stoga ne možemo isključiti da odgovor T-stanica kod nekih od naših "naivnih" zdravih kontrola na COVID{1}} dolazi od asimptomatskih infekcija virusom SARS-CoV-2. Pacijenti 14 i 15 iz naše studije primjer su toga. Ove su osobe klasificirane kao pacijenti s COVID-19 zbog pozitivnog RT-PCR-a; međutim, bili su asimptomatski i nisu razvili odgovor protutijela protiv RBD proteina, ali su oba pokazala jak odgovor T-stanica.

Moguće je da je, nakon kolonizacije SARS-CoV-2 nazofarinksa, imunološki sustav ova dva asimptomatska pacijenta ostavio odgovor samo na T-stanice pamćenja, a nisu pronađena nikakva SARS-CoV-2 specifična antitijela induciran. Drugo objašnjenje je da odgovor T-stanica dolazi od prethodne infekcije slične koroni, a postojeći imunološki odgovor T-stanica štitio je ova dva pacijenta od razvoja invazivnijeg obrasca bolesti. Već postojeće unakrsno reaktivne T-stanice mogle bi biti značajne u objašnjenju nekih razlika u stopama infekcija ili patologiji (Le Bert i sur., 2020., Sagar i sur., 2020.). Što se tiče kohorte naivnih kontrola, isključili smo da ova skupina sadrži znatan broj osoba zaraženih SARSCoV-2 s neotkrivenom asimptomatskom infekcijom, uglavnom zato što su svi integranti kontrolne skupine IgG seronegativni za RBD antigen.

Drugi razlog je što je prevalencija infekcije u Ekvadoru relativno niska. U vrijeme ove studije, u rujnu 2020., Ekvador je izvijestio o oko 200 000 potvrđenih COVID-19 slučajeva (oko 1,1 posto stanovništva). Naravno, stvarna prevalencija infekcije mogla je biti nekoliko puta veća, ali čak i tako, malo je vjerojatno da se 45 posto ove kontrolne skupine zarazilo, pa stoga promatramo odgovor T-stanica specifičan za SARS-CoV{ {9}} infekcija.

Zaključno, nalaz visokog postotka neizloženih zdravih subjekata s već postojećim imunitetom u Quitu, Ekvador, povećava očekivanje da će značajan dio naše populacije vjerojatno imati SARS-CoV-2 reaktivne T-stanice jer prethodnog izlaganja gripi, CMV virusima ili koronavirusima koji uzrokuju prehladu. Buduća bi istraživanja trebala imati za cilj utvrditi je li već postojeći imunološki odgovor zaštitni i/ili može prevladati težu bolest COVID-19 ili pridonosi bržem oporavku.

Važnost i ograničenja ovog istraživanja

Naša je studija pokazala da je COVID-19 IGRA koristan i osjetljiv novi alat koji može procijeniti izloženost koronavirusima ili unakrsnu reaktivnost na slične viruse određivanjem oslobađanja IFN-g nakon stimulacije antigenima specifičnim za virus. Tehnika je jednostavna, relativno jeftina i može se koristiti u kliničkom laboratoriju. To sigurno nije slučaj s ELISPOT testom. Štoviše, IGRA test se može lako proširiti za populacijske studije i istraživanja gdje je potreban velik broj pacijenata. Zajedno sa serologijom, IGRA se može koristiti za provjeru odgovora protutijela i T-stanica pojedinačnih pacijenata kako bi se bolje razumio imunitet na razini populacije i odredio postojeći imunitet kod seronegativnih pojedinaca.

Važno ograničenje naše studije je da uzorak studije nije reprezentativan za populaciju. Nisu korištene statističke metode za unaprijed određivanje veličine uzorka. Nadalje, naš test nije razlikovao proizvodnju IFN-g u stanicama CD4 plus ili CD8 plus, ali se može uzeti u obzir stimulacija definiranim peptidima CD8(plus) i CD4(plus) (Grifoni et al., 2020., Peng et al. , 2020) i korišten je u IGRA-ima opisanim u Petrone et al., 2020 i Murugesan et al., 2020). Također, indukcija drugih citokina može se mjeriti ovim IGRA-om (Petrone et al., 2020.). Isto tako, IGRA se može koristiti za praćenje nakon cijepljenja kako bi se odredio razvoj odgovora T-stanica u cijepljenih pojedinaca ili se može koristiti za određivanje je li prisutnost unakrsno reaktivnih memorijskih T-stanica povezana sa zaštitnim imunitetom i može smanjiti manifestacije bolesti izazvane infekcijom SARS-CoV-2 (Sagar et al., 2020.).

Etičko odobrenje i suglasnost za sudjelovanje

Krv je prikupljena nakon informiranog pisanog pristanka. Etičko povjerenstvo Ministarstva zdravstva Ekvadora odobrilo je protokol studije 004–2020.

Sukob interesa

Autori izjavljuju da nemaju suprotstavljenih interesa.

Autorski prilozi

Studirati dizajn; JHW i GE; Prikupljanje podataka i laboratorijski pokusi: GE, AG, JC, AMR i MMV; Analiza podataka; JHW, GE i ET; Pisanje: JHW, GE i ET.

Priznanja

Izražavamo svoju zahvalnost svim donatorima i zdravstvenom osoblju uključenom u ovaj posao, posebno Sandri Vivero i Sandri Fonseca, na pomoći u prikupljanju uzoraka. Ovu studiju je podržao istraživački fond sa Universidad de las Américas. Sustainable Sciences Institute, San Francisco, Kalifornija, SAD, i Zaklada "Por Todos" u Ekvadoru osigurali su RBD protein i "in-house" ELISA. Hvala Howardu E. Takiffu i Flor Pujol (IVIC, Venezuela), Paulini E. Andrade (USFQ, Ekvador) i Lilly Verhagen (UMC, Nizozemska) na njihovim plodnim raspravama.

Reference

Abate D, Saldan A, Mengoli C, Fiscon M, Silvestre C, Fallico L, et al. Usporedba citomegalovirusnih (CMV) enzim-vezanih imunosorbent spot i CMV kvantifikatora gama interferona testova za otpuštanje u procjeni rizika od CMV infekcije kod primatelja presađenog bubrega. J Clin Microbiol 2013;51(8):2501–7.

Altmann DM, Boyton RJ. SARS-CoV-2 T-stanični imunitet: specifičnost, funkcija, trajnost i uloga u zaštiti. Sci Immunol 2020;5(49)eabd6160.

Amanat F, Stadlbauer D, Strohmeier S, Nguyen THO, Chromikova V, McMahon M, et al. Serološki test za otkrivanje serokonverzije SARS-CoV-2 kod ljudi. Nat Med 2020; 26:1033–6.

Braun J, Loyal L, Frentsch M, Wendisch D, Georg P, Kurth F, et al. SARS-CoV-2- reaktivne T stanice u zdravih donora i pacijenata s COVID-19. Nature 2020; 587: 270–4.

de Vries RD. SARS-CoV-2-specifične T-stanice kod neizloženih ljudi: prisutnost unakrsno reaktivnih memorijskih stanica ne znači zaštitni imunitet. Sig Transduct Target Ther 2020; 5: 224.

Doshi P. Covid-19: ima li mnogo ljudi već postojeći imunitet? BMJ 2020; 370: m3563.

Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI, Mateus J, Dan JM, Moderbacher CR, et al. Ciljevi Tcell odgovora na SARS-CoV-2 koronavirus kod ljudi s COVID-19 bolešću i neizloženih pojedinaca. Cell 2020;181(7)1489–501.

Guevara A, Vivero S, Nipaz V, Guaraca V, Coloma J. Jeftina SARS-CoV-2 rRBD ELISA za otkrivanje serostatusa u ekvadorskoj populaciji s COVID-19. Am J Trop Med Hyg [39_TD$DIFF]2021.

Le Bert N, Tan AT, Kunasegaran K, Tham CYL, Hafezi M, Chia A, et al. SARS-CoV-2- specifičan T-stanični imunitet u slučajevima COVID-a-19 i SARS-a, te neinficirane kontrole. Nature 2020;584(7821):457–62.

Lipsitch M, Grad YH, Sette A, Crotty S. Unakrsno reaktivne memorijske T stanice i kolektivni imunitet na SARS-CoV-2. Nat Rev Immunol 2020.

Mahajan S, Kode V, Bhojak K, Magdalene CM, Lee K, Manoharan M, et al. Imunodominantni T-stanični epitopi iz SARS-CoV-2 šiljastog antigena otkrivaju snažan već postojeći T-stanični imunitet kod neizloženih pojedinaca. bioRxiv 2020.

Mateus J, Grifoni A, Tarke A, Sidney J, Ramirez SI, Dan JM, et al. Selektivni i unakrsno reaktivni epitopi T stanica SARS-CoV-2 kod neizloženih ljudi. Znanost 2020;370 (6512):89–94.

Moderbacher RC, Ramirez SI, Dan JM, Grifoni A, Hastie KM, Weiskopf D, et al. Antigen-specifična adaptivna imunost na SARS-CoV-2 u akutnom COVID-u-19 i povezanost s dobi i težinom bolesti. Ćelija 2020; S0092-8674(20):31235–6.

Murugesan K, Jagannathan P, Pham TD, Pandey S, Bonilla HF, Jacobson K, et al. Test otpuštanja gama interferona za točnu detekciju odgovora T stanica SARS-CoV-2. Clin Infect Dis 2020;ciaa1537.

Ni L, Ye F, Cheng ML, Feng Y, Deng YQ, Zhao H, et al. Otkrivanje SARS-CoV-2- specifične humoralne i stanične imunosti kod COVID-19 rekonvalescentnih pojedinaca. Imunitet 2020;52(6)971–7.

Pai M, Denkinger CM, Kik SV, Rangaka MX, Zwerling A, Oxlade O, et al. Testovi otpuštanja gama interferona za otkrivanje infekcije Mycobacterium tuberculosis. Clin Microbiol Rev 2014;27(1):3–20.

Peng Y, Mentzer AJ, Liu G, Yao X, Yin Z, Dong D, et al. Široko i snažno pamćenje CD4 plus i CD8 plus T stanice inducirane SARS-CoV-2 kod rekonvalescenata u UK nakon COVID-a-19. NatImmunol 2020.

Petrone L, Petruccioli E, Vanini V, Cuzzi G, Fard SN, Alonzi T, et al. Test cijele krvi za mjerenje SARS-CoV-2-specifičnog odgovora kod pacijenata s COVID-19. Clin Microbiol Infect 2020.

Sagar M, Reifler K, Rossi M, Miller NS, Sinha P, White L, et al. Nedavna endemska infekcija koronavirusom povezana je s lakšom bolešću COVID-a-19. J Clin Invest 2020.

Schwarzkopf S, Krawczyk A, Knop D, Klump H, Heinold A, Heinemann FM, et al. Stanična imunost kod COVID{0}} rekonvalescenata s PCR-om potvrđenom infekcijom, ali s nemjerljivim SARS-CoV-2-specifičnim IgG. Emerg Infect Dis. 2021; 27 (1).

Sekine T, Perez-Potti A, Rivera-Ballesteros O, Strålin K, Gorin JB, Olsson A, et al. Snažan T-stanični imunitet kod rekonvalescenata s asimptomatskim ili blagim COVID-om-19. Cell 2020;183(1)158–68.

Sette A, Crotty S. Već postojeći imunitet na SARS-CoV-2: poznato i nepoznato. Nat Rev Immunol. 2020; 20(8)457–8.

Tan CCS, Owen CJ, Tham CYL, Bertoletti A, van Dorp L, Balloux F. Već postojeća unakrsna reaktivnost posredovana T stanicama na SARS-CoV-2 ne može se objasniti samo prethodnom izloženošću endemskim ljudskim koronavirusima. bioRxiv 2020;2020.

For more information:1950477648nn@gmail.com