Dio 3: Različite uloge za domenu deacetilaze HDAC3 u hipokampusu i medijalnom prefrontalnom korteksu u formiranju i izumiranju pamćenja

za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Kliknite ovdje natrag na 2. dio

KlikCistanches i Cistanche za poboljšanje pamćenja

Priznanja

Posebno zahvaljujemo dr. Norbertu J. Fortinu na pomoći u statističkoj analizi.

Izvori financiranja: Ovaj rad su podržali Nacionalni institut za zlouporabu droga i Nacionalni institut za mentalno zdravlje (DA025922, DA036984, MH101491) za MAW i NIDA i Nacionalni institut za starenje (NIA) (F32 DA043998 i T32 AG{{ 6}}) za YA.

Reference

Alenghat T, Meyers K, Mullican SE, Leitner K, Adeniji-Adele A, Avila J, Bucan M, Ahima RS, Kaestner KH, Lazar MA. Nuklearni receptor korepresor i histon deacetilaza 3 upravljaju cirkadijalnom metaboličkom fiziologijom. Priroda. 2008.; 456: 997-1000. [PubMed: 19037247]

Balderas I, Rodriguez-Ortiz CJ, Salgado-Tonda P, Chavez-Hurtado J, McGaugh JL, Bermudez-Rattoni F. Konsolidacija prepoznavanja objekata i kontekstamemorijauključuju različite regije temporalnog režnja. Naučite Mem. 2008.; 15: 618-624. [PubMed: 18723431]

Baltan S, Bachleda A, Morrison RS, Murphy SP. Ekspresija histonskih deacetilaza u staničnim dijelovima mozga miša i učinci ishemije. Transl Stroke Res. 2011.; 2:411–423. [PubMed: 21966324]

Barrett RM, Malvaez M, Kramar E, Matheos DP, Arrizon A, Cabrera SM, Lynch G, Greene RW, Wood MA. Hipokampalni žarišni nokaut CBP-a utječe na specifične modifikacije histona, dugoročno potenciranje i dugoročnomemorija. Neuropsihofarmakologija. 2011.; 36: 1545-1556. [PubMed: 21508930]

Bowers ME, Xia B, Carreiro S, Ressler KJ. Inhibitor HDAC klase I RGFP963 pojačava konsolidaciju nagoveštenog izumiranja straha. Naučite Mem. 2015.; 22: 225-231. [PubMed: 25776040]

Broide RS, Redwine JM, Aftahi N, Young W, Bloom FE, Winrow CJ. Raspodjela histonskih deacetilaza 1-11 u mozgu štakora. J Mol Neurosci. 2007.; 31:47-58. [PubMed: 17416969]

Burger C, Gorbatyuk OS, Velardo MJ, Peden CS, Williams P, Zolotukhin S, Reier PJ, Mandel RJ, Muzyczka N. Rekombinantni AAV virusni vektori pseudotipizirani virusnim kapsidama iz serotipova 1, 2 i 5 pokazuju diferencijalnu učinkovitost i stanični tropizam nakon isporuka u različite regije središnjeg živčanog sustava. Mol Ther. 2004.; 10: 302-317. [PubMed: 15294177]

Dere E, Huston JP, De Souza Silva MA. Farmakologija, neuroanatomija i neurogenetika prepoznavanja predmeta u jednom pokusu kod glodavaca. Neurosci Biobehav Rev. 2007; 31: 673-704. [PubMed: 17368764]

Ennaceur A. Jednokratno prepoznavanje objekata kod štakora i miševa: metodološka i teorijska pitanja. Behav Brain Res. 2010.; 215: 244-254. [PubMed: 20060020]

Fanselow MS, Dong HW. Jesu li dorzalni i ventralni hipokampus funkcionalno različite strukture? Neuron. 2010.; 65:7-19. [PubMed: 20152109]

Fischle W, Dequiedt F, Hendzel MJ, Guenther MG, Lazar MA, Voelter W, Verdin E. Enzimska aktivnost povezana s HDAC-ima klase II ovisi o multiproteinskom kompleksu koji sadrži HDAC3 i SMRT/N-CoR. Mol ćelija. 2002; 9:45–57. [PubMed: 11804585]

Fuchs RA, Evans KA, Ledford CC, Parker MP, Case JM, Mehta RH, vidi RE. Uloga dorzomedijalnog prefrontalnog korteksa, bazolateralne amigdale i dorzalnog hipokampusa u kontekstualnom ponovnom uspostavljanju traženja kokaina kod štakora. Neuropsihofarmakologija. 2005; 30: 296-309. [PubMed: 15483559]

Fuchs RA, Eaddy JL, Su ZI, Bell GH. Interakcije bazolateralne amigdale s dorzalnim hipokampusom i dorzomedijalnim prefrontalnim korteksom reguliraju ponovnu uspostavu traženja kokaina kod štakora izazvanu kontekstom droga. Eur J Neurosci. 2007.; 26: 487-498. [PubMed: 17650119]

Gräff J, Tsai LH. Acetilacija histona: molekularna mnemotehnika kromatina. Nat Rev Neurosci. 2013.; 14:97–111. [PubMed: 23324667]

Guenther MG, Barak O, Lazar MA. SMRT i N-CoR korepresori su aktivirajući kofaktori za histon deacetilazu 3. Mol Cell Biol. 2001.; 21: 6091-6101. [PubMed: 11509652]

Guenther MG, Yu J, Kao GD, Yen TJ, Lazar MA. Sastavljanje represijskog kompleksa SMRT-histonske deacetilaze 3 zahtijeva TCP-1 kompleks prstena. Genes Dev. 2002; 16: 3130-3135. [PubMed: 12502735]

Haberland M, Montgomery RL, Olson EN. Mnoge uloge histonskih deacetilaza u razvoju i fiziologiji: implikacije za bolest i terapiju. Nat Rev Genet. 2009.; 10:32–42. [PubMed: 19065135]

Hartig J, Stefanko DP, Multani ML, Figueroa DX, McQuown SC, Wood MA. HDAC inhibicija dugoročno modulira hipokampus ovisanmemorijaza lokaciju objekta na način ovisan o CBP-u. Naučite Mem. 2011.; 18:71–79. [PubMed: 21224411]

Haettig J, Sun Y, Wood MA, Xu X. Inaktivacija hipokampalnog CA1 specifična za tip stanice remeti prepoznavanje objekta ovisno o lokaciji kod miša. Naučite Mem. 2013.; 20:139-146. [PubMed: 23418393]

Isaac WL, Nonneman AJ, Neisewander J, Landers T, Bardo MT. Lezije prefrontalnog korteksa različito ometaju uvjetovanu preferenciju mjesta pojačanu kokainom, ali ne i uvjetovanu averziju prema okusu. Behav Neurosci. 1989; 103: 345-355. [PubMed: 2706078]

Jenuwein T, Allis CD. Prevođenje histonskog koda. Znanost. 2001.; 293: 1074-1080. [PubMed: 11498575]

Kalivas PW, McFarland K. Moždani sklopovi i ponovno uspostavljanje ponašanja traženja kokaina. Psihofarmakologija (Berl). 2003; 168:44-56. [PubMed: 12652346]

Kojima N, Wang J, Mansuy IM, Grant SG, Mayford M, Kandel ER. Spašavanje oštećenja dugoročnog potenciranja kod miševa s nedostatkom fyn uvođenjem Fyn transgena. Proc Natl Acad Sci US A. 1997; 94:4761-4765. [PubMed: 9114065]

Kouzarides T. Modifikacije kromatina i njihova funkcija. Ćelija. 2007.; 128: 693-705. [PubMed: 17320507]

Krasnova IN, Li SM, Wood WH, McCoy MT, Prabhu VV, Becker KG, Katz JL, Cadet JL. Transkripcijski odgovori na pojačane učinke kokaina u hipokampusu i korteksu štakora. Geni Ponašanje mozga. 2008.; 7: 193–202. [PubMed: 17640290]

Kwapis JL, Alaghband Y, López AJ, White AO, Campbell RR, Dang RT, Rhee D, Tran AV, Carl AE, Matheos DP, Wood MA. Kontekst i slušni strah različito su regulirani aktivnošću HDAC3 u lateralnim i bazalnim subnukleusima amigdale. Neuropsihofarmakologija. 2017.; 42: 1284-1294. [PubMed: 27924874]

Lahm A, Paolini C, Pallaoro M, Nardi MC, Jones P, Neddermann P, Sambucini S, Bottomley MJ, Lo Surdo P, Carfi A, Koch U, De Francesco R, Steinkuhler C, Gallinari P. Razotkrivanje skrivene katalitičke aktivnosti histonske deacetilaze klase IIa kralježnjaka. Proc Natl Acad Sci US A. 2007; 104:17335-17340. [PubMed: 17956988]

LaLumiere RT, Niehoff KE, Kalivas PW. Infralimbički korteks regulira konsolidaciju izumiranja nakon samoprimjene kokaina. Naučite Mem. 2010.; 17: 168-175. [PubMed: 20332188]

Laurent V, Westbrook RF. Inaktivacija infralimbičkog, ali ne i prelimbičkog korteksa otežava konsolidaciju i vraćanje izumiranja straha. Naučite Mem. 2009.; 16: 520-529. [PubMed: 19706835]

Lebrón K, Milad MR, Quirk GJ. Odgođeno prisjećanje nestanka straha kod štakora s lezijama ventralnog medijalnog prefrontalnog korteksa. Naučite Mem. 2004.; 11: 544-548. [PubMed: 15466306]

Levenson JM, Sweatt JD. Epigenetski mehanizmi: zajednička tema kod kralješnjaka i beskralješnjakamemorijaformiranje. Cell Mol Life Sci. 2006.; 63:1009-1016. [PubMed: 16596331]

López AJ, Kramar E, Matheos DP, White AO, Kwapis J, Vogel-Ciernia A, Sakata K, Espinoza M, Wood MA. Promotor-specifični učinci DREADD modulacije na hipokampalnu sinaptičku plastičnost iFormiranje pamćenja. J Neurosci. 2016.; 36:3588-3599. [PubMed: 27013687]

Malvaez M, Sanchis-Segura C, Vo D, Lattal KM, Wood MA. Modulacija modifikacije kromatina olakšava izumiranje kokainom izazvane uvjetovane preferencije mjesta. Biol psihijatrije. 2010.; 67:36-43. [PubMed: 19765687]

Malvaez M, Mhillaj E, Matheos DP, Palmery M, Wood MA. CBP u nucleus accumbens regulira acetilaciju histona izazvanu kokainom i kritičan je za ponašanja povezana s kokainom. J Neurosci. 2011.; 31:16941-16948. [PubMed: 22114264]

Narvaez M, McQuown SC, Rogge GA, Astarabadi M, Jacques V, Carreiro S, Rusche JR, Wood MA. Selektivni inhibitor HDAC3-pospješuje izumiranje ponašanja traženja kokaina na uporan način. Proc Natl Acad Sci US A. 2013; 110: 2647-2652. [PubMed: 23297220]

Maren S. Neurobiologija pavlovljevog straha do stanja. Annu Rev Neurosci. 2001.; 24: 897-931. [PubMed: 11520922]

Marie-Claire C, Laurendeau I, Canestrelli C, Courtin C, Vidaud M, Roques B, Noble F. Fos, ali ne i Cart (transkript reguliran kokainom i amfetaminom) prekomjerno je izražen kod nekoliko droga zlouporabe: komparativna studija u stvarnom vremenu kvantitativna lančana reakcija polimeraze u mozgu štakora. Neurosci Lett. 2003; 345:77-80. [PubMed: 12821175]

McQuown SC, Wood MA. HDAC3 i hipoteza o molekularnoj kočnoj pločici. Neurobiol Naučite Mem. 2011.; 96:27-34. [PubMed: 21521655]

McQuown SC, Barrett RM, Matheos DP, Post RJ, Rogge GA, Alenghat T, Mullican SE, Jones S, Rusche JR, Lazar MA, Wood MA. HDAC3 je kritični negativni regulatorformiranje dugoročnog pamćenja. J Neurosci. 2011.; 31: 764-774. [PubMed: 21228185]

Meyers RA, Zavala AR, Neisewander JL. Dorzalne, ali ne ventralne lezije hipokampusa ometaju kondicioniranje kokainskog mjesta. Neuroizvještaj. 2003; 14: 2127-2131. [PubMed: 14600510]

Mullican SE, Gaddis CA, Alenghat T, Nair MG, Giacomin PR, Everett LJ, Feng D, Steger DJ, Schug J, Artis D, Lazar MA. Histon deacetilaza 3 je epigenomska kočnica u alternativnoj aktivaciji makrofaga. Genes Dev. 2011.; 25: 2480-2488. [PubMed: 22156208]

Mumby DG. Perspektive pamćenja prepoznavanja objekata nakon oštećenja hipokampusa: lekcije iz studija na štakorima. Behav Brain Res. 2001.; 127: 159-181. [PubMed: 11718890]

Parkinson JA, Olmstead MC, Burns LH, Robbins TW, Everitt BJ. Disocijacija u učincima lezija jezgre i ljuske nucleus accumbens na apetitivno pavlovljevo ponašanje i potenciranje uvjetovanog potkrepljenja i lokomotorne aktivnosti D-amfetaminom. J Neurosci. 1999; 19: 2401-2411. [PubMed: 10066290]

Peixoto L, Abel T. Uloga acetilacije histona u formiranju pamćenja i kognitivnih oštećenja. Neuropsihofarmakologija. 2013.; 38:62-76. [PubMed: 22669172]

Penney J, Tsai LH. Histon deacetilaze u pamćenju i spoznaji. Sci Signal. 2014.; 7:re12. [PubMed: 25492968]

Peters J, LaLumiere RT, Kalivas PW. Infralimbički prefrontalni korteks odgovoran je za inhibiciju traženja kokaina kod ugašenih štakora. J Neurosci. 2008.; 28: 6046-6053. [PubMed: 18524910]

Peters J, Kalivas PW, Quirk GJ. Krugovi izumiranja straha i ovisnosti preklapaju se u prefrontalnom korteksu. Naučite Mem. 2009.; 16: 279-288. [PubMed: 19380710]

Pfaffl MW. Novi matematički model za relativnu kvantifikaciju u RT-PCR-u u stvarnom vremenu. Nucleic Acids Res. 2001.; 29:e45. [PubMed: 11328886]

Pfaffl MW, Georgieva TM, Georgiev IP, Ontsouka E, Hageleit M, Blum JW. RT-PCR kvantifikacija inzulinu sličnog faktora rasta (IGF)-1, IGF-1 receptora, IGF-2, IGF-2 receptora, inzulinskog receptora, hormona rasta receptor, IGF-vezujući proteini 1, 2 i 3 kod goveda. Domest Anim Endocrinol. 2002; 22:91–102. [PubMed: 11900967]

Quirk GJ, Russo GK, Barron JL, Lebron K. Uloga ventromedijalnog prefrontalnog korteksa u oporavku ugašenog straha. J Neurosci. 2000; 20:6225-6231. [PubMed: 10934272]

Quirk GJ, Garcia R, Gonzalez-Lima F. Prefrontalni mehanizmi u izumiranju uvjetovanog straha. Biol psihijatrije. 2006.; 60: 337-343. [PubMed: 16712801]

Rescorla RA. Usporedba stopa asocijativne promjene tijekom akvizicije i ekstinkcije. J Exp Psychol Anim Behav Process. 2002; 28: 406-415. [PubMed: 12395498]

Rogge GA, Singh H, Dang R, Wood MA. HDAC3 je negativni regulator formiranja sjećanja povezanog s kontekstom kokaina. J Neurosci. 2013.; 33:6623-6632. [PubMed: 23575859]

Roozendaal B, Hernandez A, Cabrera SM, Hagewoud R, Malvaez M, Stefanko DP, Haettig J, Wood MA. Glukokortikoidna aktivnost povezana s membranom neophodna je za modulaciju dugotrajne memorije modifikacijom kromatina. J Neurosci. 2010.; 30: 5037-5046. [PubMed: 20371824]

Rumbaugh G, Sillivan SE, Ozkan ED, Rojas CS, Hubbs CR, Aceti M, Kilgore M, Kudugunti S, Puthanveettil SV, Sweatt JD, Rusche J, Miller CA. Farmakološka selektivnost unutar klase I histonskih deacetilaza predviđa učinke na sinaptičku funkciju i spašavanje pamćenja. Neuropsihofarmakologija. 2015.; 40: 2307-2316. [PubMed: 25837283]

Sando R 3rd, Gounko N, Pieraut S, Liao L, Yates J 3rd, Maximov A. HDAC4 upravlja transkripcijskim programom bitnim za sinaptičku plastičnost i pamćenje. Ćelija. 2012.; 151: 821-834. [PubMed: 23141539]

Sierra-Mercado D Jr, Corcoran KA, Lebron-Milad K, Quirk GJ. Inaktivacija ventromedijalnog prefrontalnog korteksa smanjuje izražavanje uvjetovanog straha i oštećuje naknadno prisjećanje izumiranja. Eur J Neurosci. 2006.; 24:1751-1758. [PubMed: 17004939]

Stafford JM, Raybuck JD, Ryabinin AE, Lattal KM. Povećana acetilacija histona u hipokampusno-infralimbičkoj mreži pojačava izumiranje straha. Biol psihijatrije. 2012.; 72:25-33. [PubMed: 22290116]

Stefanko DP, Barrett RM, Ly AR, Reolon GK, Wood MA. Modulacija dugotrajne memorije za prepoznavanje objekata putem HDAC inhibicije. Proc Natl Acad Sci US A. 2009; 106:9447-9452. [PubMed: 19470462]

Sun Z, Feng D, Fang B, Mullican SE, You SH, Lim HW, Everett LJ, Nabel CS, Li Y, Selvakumaran V, Won KJ, Lazar MA. Funkcija HDAC3 neovisna o deacetilazi u transkripciji i metabolizmu zahtijeva jezgreni supresor nuklearnog receptora. Mol ćelija. 2013.; 52: 769-782. [PubMed: 24268577]

Tzschentke TM, Schmidt WJ. Diskretne lezije kinolinske kiseline prelimbičkog medijalnog prefrontalnog korteksa štakora utječu na kokain i MK-801-, ali ne na morfij i amfetamin induciranu nagradu i psihomotornu aktivaciju mjereno paradigmom uvjetovanja preferencija mjesta. Behav Brain Res. 1998.; 97:115-127. [PubMed: 9867237]

Tzschentke TM, Schmidt WJ. Funkcionalna heterogenost medijalnog prefrontalnog korteksa štakora: učinci diskretnih lezija specifičnih za podpodručje na uvjetovanu preferenciju mjesta izazvanu lijekom i senzibilizaciju ponašanja. Eur J Neurosci. 1999; 11: 4099-4109. [PubMed: 10583498]

Vogel-Ciernia A, Matheos DP, Barrett RM, Kramar EA, Azzawi S, Chen Y, Magnan CN, Zeller M, Sylvain A, Haettig J, Jia Y, Tran A, Dang R, Post RJ, Chabrier M, Babayan AH, Wu JI, Crabtree GR, Baldi P, Baram TZ, Lynch G, Wood MA. Kromatinska regulatorna podjedinica BAF53b specifična za neurone neophodna je za sinaptičku plastičnost i pamćenje. Nat Neurosci. 2013.; 16: 552-561. [PubMed: 23525042]

Vogel-Ciernia A, Wood MA. Pregradnja kromatina specifična za neurone: karika koja nedostaje u epigenetskim mehanizmima koji leže u osnovi sinaptičke plastičnosti, pamćenja i poremećaja intelektualne nesposobnosti. Neurofarmakologija. 2014.; 80:18-27. [PubMed: 24140580]

White AO, Kramar EA, López AJ, Kwapis JL, Doan J, Saldana D, Davatolhagh MF, Alaghband Y, Blurton-Jones M, Matheos DP, Wood MA. BDNF spašava sinaptičku plastičnost ovisnu o BAF53b i pamćenje povezano s kokainom u nucleus accumbens. Nat Commun. 2016.; 7:11725. [PubMed: 27226355]

Winters BD, Saksida LM, Bussey TJ. Memorija prepoznavanja objekata: neurobiološki mehanizmi kodiranja, konsolidacije i dohvaćanja. Neurosci Biobehav Rev. 2008; 32: 1055-1070. [PubMed: 18499253]

Zhang J, Kalkum M, Chait BT, Roeder RG. N-CoR-HDAC3 jezgropresorski kompleks nuklearnog receptora inhibira JNK put kroz integralnu podjedinicu GPS2. Mol ćelija. 2002; 9: 611-623. [PubMed: 11931768]

Naglasci

► Blokiranje aktivnosti HDAC3 deacetilaze u dorzalnom hipokampusu poboljšalo je dugoročno pamćenje lokacije objekta, ali nije imalo učinka na formiranje pamćenja povezanog s kokainom. ► Oštećenje domene deacetilaze HDAC3 u prelimbičkom korteksu nije imalo učinka na formiranje sjećanja povezanog s kokainom. ► Blokiranje aktivnosti HDAC3 deacetilaze u infralimbičkom korteksu nije imalo učinka na izumiranje. ► Poremećaj aktivnosti HDAC3 deacetilaze u dorzalnom hipokampusu rezultirao je olakšanim izumiranjem.

Slika 1.

Dominantni negativni točkasti mutant virus (HDAC3(Y298H)-v5 eksprimira se učinkovito u dorzalnom hipokampusu. (A) Epitop V5 dodan je točkasto mutantnom virusu. (B) Reprezentativna imunofluorescentna slika koja pokazuje ekspresiju oznake V5 epitopa (zeleno) u dorzalni hipokampus (DH) nakon infuzije AAV-HDAC3(Y298H)-v5. Nije primijećeno V5 bojenje s kontrolnim virusom AAV-EV. Stanice su obojene DAPI (plavo). (C) V5 mRNA značajno je povećana u DH miševa kojima je dat infuziju AAV-HDAC3(Y298H)-v5, AAV-EV n {{20}}, HDAC3(Y298H)-v5 n=4. (D) HDAC3 je također značajno povećan u DH miševa kojima je dat infuziju AAV-HDAC(Y298H)-v5 u usporedbi s AAV-EV kontrolama, AV-EV n=6, HDAC3(Y298H)-v5 n=6. *p < 0,05.

Slika 2.

Blokiranje HDAC3 aktivnosti u DH poboljšanoj memoriji za lokaciju objekta (OLM), ali ne i za prepoznavanje objekta (ORM). (A) Miševi su prošli trening ispod praga (3 minute) u okruženju s dva identična objekta i primili test zadržavanja 24 sata kasnije u kojem se jedan objekt premješta na novo mjesto. Shematski prikaz opisuje metode za B i C. (B) Miševi kojima je dat AAV-HDAC3(Y298H)-v5 pokazali su značajnu sklonost prema lokaciji novog objekta 24 sata nakon treninga u usporedbi s EV kontrolama, AAV-EV n {{10 }}, HDAC3(Y298H)-v5 n=6. (C) Grupe se nisu razlikovale u ukupnom vremenu istraživanja dvaju objekata. (D) Miševi su primili trening ispod praga (3 minute) u okruženju s dva identična objekta i primili test zadržavanja 24 sata kasnije u kojem je jedan objekt zamijenjen novim (ORM), AAV-EV n=9, HDAC3(Y298H)-v5 n=7. Shematski prikaz opisuje metode za E i F. (E) Ni AAV-EV kontrola ni AAV-HDAC3(Y298H)-v5 miševi nisu pokazali značajnu sklonost prema novom objektu. (F) Grupe se nisu razlikovale u ukupnom vremenu istraživanja dvaju objekata. *p <>

Slika 3.

Blokiranje aktivnosti HDAC3 u dorzalnom hipokampusu nema učinka na formiranje kokainom izazvanog CPP pamćenja. (A) Shema postupka kokain-CPP. (B) Kokain-CPP ekspresija naznačena srednjim CPP rezultatom (vrijeme provedeno u kokainu u paru (CS plus ) minus fiziološka otopina u paru (CS−) ± sem). Pri kondicionoj dozi kokaina od 5 mg/kg, miševi AAV-HDAC3(Y298H)-v5 pokazali su sličan CPP rezultat kao EV kontrole tijekom post-testa, AAV-EV n=15, HDAC3(Y298H)-v5 n {{ 19}}.

Slika 4.

Fokalna homozigotna delecija gena Hdac3 u dorzalnom hipokampusu nema učinka na formiranje kokainom izazvanog CPP pamćenja. (A) Shema postupka kokain-CPP. (B) Ekspresija kokain-CPP označena srednjim rezultatom CPP (vrijeme provedeno u kokain-uparenom (CS plus ) minus fiziološka otopina u paru (CS−) ± sem). Pri kondicionoj dozi kokaina od 5 mg/kg, miševi Hdac3flox/flox pokazali su sličan CPP rezultat kao Hdac3 plus/plus kontrole tijekom post-testa. (C) Reprezentativna imunofluorescentna slika koja pokazuje ekspresiju HDAC3 (zeleno) u dorzalnom hipokampusu nakon infuzije AAV2.1 Cre unesene u Hdac3 plus / plus i Hdac3flox/flox miševe. Stanice su obojene DAPI (plavo). (D) Kvantifikacija imunološkog bojenja potvrdila je da je HDAC3 bio značajno smanjen u Hdac3flox/flox miševa u usporedbi s Hdac3 plus / plus kontrolama, Hdac3 plus / plus n=12, Hdac3flox/flox n=11. *p <>

Slika 5.

Blokiranje aktivnosti HDAC3 u prelimbičkom korteksu (PrL) nema učinka na formiranje kokainom izazvanog CPP pamćenja. (A) Shema postupka kokain-CPP. (B) Kokain-CPP ekspresija naznačena srednjim CPP rezultatom (vrijeme provedeno u kokainu u paru (CS plus ) minus fiziološka otopina u paru (CS−) ± sem). Pri kondicionoj dozi kokaina od 5 mg/kg, miševi AAV-HDAC3(Y298H)-v5 pokazali su sličan CPP rezultat kao EV kontrole tijekom post-testa, AAV-EV n=12, HDAC3(Y298H)-v5 n {{ 19}}. (C) Reprezentativna imunofluorescentna slika koja pokazuje ekspresiju epitopske oznake V5 (zeleno) nakon infuzije AAV-HDAC3(Y298H)-v5 koja cilja PrL. Nije uočeno V5 bojenje s kontrolnim virusom AAV-EV. Stanice su obojene s DAPI (plavo), a neuroni s NeuroTrace (crveno). Ekspresija V5 bila je uglavnom ograničena na prelimbičku regiju medijalnog prefrontalnog korteksa. (D) Ciljana virusna infuzija u PrL. Osjenčana područja slika atlasa miša ilustriraju reprezentativan opseg virusne infuzije.

Slika 6.

Blokiranje aktivnosti HDAC3 u infralimbičkom korteksu (IL) nema učinka na odumiranje kokainom izazvanog CPP pamćenja. (A) Shema postupka kokain-CPP. (B) Kokain-CPP ekspresija naznačena srednjim CPP rezultatom (vrijeme provedeno u kokainu u paru (CS plus ) minus fiziološka otopina u paru (CS−) ± sem). Životinje su u početku trenirane na 20 mg/kg kokaina. Nakon toga, životinje su primile intra-IL AAV-EV ili AAV-HDAC3(Y298H)-v5 virusne infuzije, te je ispitano pamćenje izumiranja. AAV-HDAC3(Y298H)-v5 miševi pokazali su sličan CPP rezultat kao EV kontrole tijekom post-testova 2-5, AAV-EV n=17, HDAC3(Y298H)- v5 n=16. (C) Reprezentativna imunofluorescentna slika koja pokazuje ekspresiju epitopske oznake V5 (zeleno) nakon infuzije AAV-HDAC3(Y298H)-v5 koja cilja IL. Nije uočeno V5 bojenje s kontrolnim virusom AAV-EV. Stanice su obojene s DAPI (plavo), a neuroni s NeuroTrace (crveno). Ekspresija V5 bila je uglavnom ograničena na infralimbičku regiju medijalnog prefrontalnog korteksa. (D) Ciljana virusna infuzija u IL. Osjenčana područja slika atlasa miša ilustriraju reprezentativan opseg virusne infuzije.