DIO 2 Echinacoside inhibira oslobađanje glutamata suzbijanjem unosa Ca2+ ovisnog o naponu i proteina Kinaze C u terminalima za cerebrokortikalne živce štakora

Za više informacija obratite se na:Joanna.jia@wecistanche.com

KLIKNITE OVDJE DO 1. DIJELA

3. Rasprava

U ovoj studiji, ehinacoside, aktivni spoj uHerba Cistanche, inhibirano oslobađanje glutamata evociranog 4 aminopiridina u terminalima moždane kore štakora. Ovdje se dodatno istražuju i raspravljaju mogući temeljni mehanizmi za inhibiciju oslobađanja glutamata posredovanu u ehinakozidu.

Cistanche deserticola ima mnogo učinaka, kliknite ovdje da biste saznali više

3.1. Mehanizmi na kojima se temelji inhibicija oslobađanja glutamata posredovana ehinakozidom

evocirani 4-aminopiridinom sastoji se od dvije komponente: fiziološki relevantne komponente ovisne o Ca2+, koja se proizvodi egzocitozom sinaptičkih vezikula koje sadrže glutamat; i ca2+-neovisnu komponentu, koja potječe od dugotrajne depolarizacije koja uzrokuje pomak transportera glutamata posredovan u membranskom potencijalu u stabilnom stanju prema vanjskom smjeru, što utječe na citozolnu glutamatnu efluks [31]. Ovdje smo primijetili daehinakozidnije značajno inhibirao oslobađanje glutamata evociranog 4 aminopiridinom u prisutnosti ca2 +slobodnog medija (Ca2 +neovisno oslobađanje). Nadalje, opaženoehinakozid-posredovana inhibicija 4-aminopiridina-evociranog oslobađanja glutamata učinkovito je spriječena bafilomicinom A1 (koji iscrpljuje sadržaj glutamata sinaptičkih vezikula), ali ne i DL-TBOA (koji neselektivno inhibira sve podtipove ekscitatornih aminokiselina transportera). Ovi rezultati sugeriraju daehinakozidutječe na Ca2+ovisnu egzocitozu oslobađanja glutamata bez utjecaja na Ca2 +neovisni citozolilni izljev glutamata preokretom transportera glutamata u živčanoj terminalnoj plazmi. U sinaptičkim terminalima inhibicija Na+ kanala ili aktivacija K+ kanala stabilizira razdražljivost membrane i posljedično smanjuje evocirani ulazak Ca2+ i oslobađanje neurotransmitera [32,33]. Stoga je potencijalni mehanizam na kojem se temeljiehinakozid-posredovana inhibicija oslobađanja glutamata uključuje smanjenje sinaptosomalne razdražljivosti. Međutim, ta je mogućnost neodrživa na temelju dvaju opažanja: (1) depolarizacija membranskog potencijala evociranog membranskim potencijalom, izmjerena membranskim potencijalom osjetljivom bojom DiSC3(5) nije bila pogođena dodavanjemehinakozid; i (2) ehinakozid nije utjecao na 4-aminopiridin-evocirano oslobađanje ca2 +neovisnog glutamata, komponentu oslobađanja koja ovisi samo o membranskom potencijalu [31]. Ako učinak nije uzrokovan supresivošću sinaptosomalne razdražljivosti, može se manifestirati smanjenjem aktivnosti Cav2.2 (N-tip) i Cav2.1 (P/ Q-type) Ca2+ kanala zajedno s egzocitozom glutamata u živčanim terminalima [34–36]. Koristeći fura-2, pokazujemo daehinakozidznačajno smanjuje 4-aminopiridin-evocirano povećanje koncentracije Ca2+. Osim toga, naši podaci pokazuju da inhibitorni učinakehinakozidna 4-aminopiridin-evocirano oslobađanje glutamata smanjilo se s 42.4% ̆ 2.3% na 12.1% ̆ 3.9% nakon izlaganja blokatoru Cav2.2 (N-tip) i Cav2.1 (P / Q-tip) Ca2+ kanala. Nadalje, Sud je primijetio daehinakozidnastavio je značajno inhibirati oslobađanje glutamata evociranog 4 aminopiridinom u prisutnosti intracelularnih inhibitora oslobađanja Ca2+. Ovi rezultati pokazuju da je istodobno potiskivanje aktivnosti Kanala Cav2.2 (N-tipa) i Cav2.1 (P/Q tipa) Ca2+ potencijalni mehanizam na kojem se temeljiehinakozid- posredovana inhibicija oslobađanja glutamata. Međutim, kombinirana aktivacija aktivnosti Kanala Cav2.2 (N-type) i Cav2.1 (P/Q-type) Ca2+ nije mogla blokirati djelovanje cav2.2 (tipa N) i Cav2.1 (P/Q-type) Ca2+ aktivnosti kanalaehinakozidpotpuno. Stoga u inhibiciju mogu biti uključene i druge neidentificirane vrste Ca2+ kanala ili drugih pretinaptičkih putova. Na primjer, GABAA receptori prisutni su na pretinaptičkoj razini, a pokazalo se da njihova aktivacija inhibira ca2+ dotok i oslobađanje glutamata [37]. U ovoj studiji, antagonisti RECEPTORA GABAA SR95531 i bikukulin nisu blokirali inhibiciju oslobađanja glutamata posredovanu u ehinakozidu, što sugerira da GABAA receptori nisu uključeni u smanjenje aktivnosti Ca2+ kanala ovisnog o naponu i u naknadnu inhibiciju oslobađanja glutamata.

Ca2+ ulaz kroz Ca2+ kanale ovisne o naponu aktivira nekoliko protein kinaza povezanih s oslobađanjem glutamata u živčanim terminalima, uključujući protein kinazu aktiviranu mitogenom, protein kinazu C i protein kinazu A. Ovdje pokazujemo da su inhibitori protein kinaze C učinkovito antagoniziraliehinakozid- posredovana inhibicija oslobađanja glutamata; ipak, inhibitor protein kinaze aktiviran mitogenom PD98059 ili inhibitor protein kinaze A H89 bio je neučinkovit. Nadalje, to. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1006 8 od 13 4-aminopiridin-inducirana fosforilacija protein kinaze C smanjila se u sinaptosomima nakon predobrade sehinakozidu koncentraciji učinkovitoj za inhibiciju oslobađanja glutamata. Stoga, signalni putehinakozid-posredovana inhibicija oslobađanja glutamata može uključivati protein kinazu C. Protein kinaza C važan je unutarstanični signalni sustav koji je prisutan na pretinaptičkoj razini i ima ključnu ulogu u egzocitozi neurotransmitera. Na primjer, nekoliko sinaptičkih proteina uključenih u trgovinu sinaptičkim vezikulama ili novačenje i egzocitoza, kao što je miristoilirani supstrat C kinaze bogat alaninom, fosforoidirani su proteinskom kinazom C [38,39]. Ovaj proces fosforilacije može se povećati unosom Ca2+ stimuliranim depolarizacijom, što olakšava oslobađanje glutamata [40]. Stoga možemo razumno nagađati da je inhibitorni učinakehinakozidna Ca2+ unos koji se ovdje promatra može smanjiti aktivnost protein kinaze C, a time i oslobađanje glutamata.

3.2. Terapijske implikacije

Ekscitotoksičnost, patološki proces uzrokovan prekomjernim oslobađanjem glutamata i aktivacijom receptora glutamata, glavni je uzrok neuronske smrti kod akutnih i kroničnih poremećaja mozga kao što su moždani udar, traumatska ozljeda mozga, Parkinsonova bolest i Alzheimerove bolesti [13,41], a terapijske strategije koje uključuju inhibiciju oslobađanja glutamata mogu biti obećavajuće neuroprotektivne strategije za liječenje takvih bolesti.Ehinakozidpotvrđeno je da prodire u krvno-moždanu barijeru (BBB) i pokazuje neuroprotektivne učinke u različitim in vivo modelima neurotoksičnosti [8,10–12,42]. Iako mehanizam ovih neuroprotektivnih učinaka nije u potpunosti shvaćen, prijavljeno je nekoliko mogućih mehanizama, uključujući inhibiciju upalnog odgovora, stabilizaciju mitohondrijske funkcije, antioksidaciju, čišćenje slobodnih radikala i oponašanje neurotrofične funkcije [5,9,12,42]. U trenutnoj studiji, sposobnost ehinakozida da smanji oslobađanje glutamata iz živčanih terminala također može djelomično objasniti njegov neuroprotektivni mehanizam. Međutim, da li ovaj učinak doprinosi očitom terapijskom potencijalu ehinakozida u poremećajima mozga povezanim s ekscitoksičnosti glutamata, to zahtijeva daljnja istraživanja.

4. Materijali i metode

4.1. Kemikalije

Fura-2-acetoksimetil ester (Fura-2-AM) i 3',3',3'-dipropiltiadicarbocyanine jodid[DiSC3(5)] kupljeni su od Invitrogena (Carlsbad, CA, SAD). ω-konotoksin MVIIC, rottlerin,2-[1-(3-dimetilaminopropil)indol-3-yl]-3-(indol-3-yl) maleimid (GF109203X), 5,6,7,13-tetrahidro-13-metil-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pirrolo[3,4-c]karbazol-12-propanenitrile (Go6976) i N-[2-(pbromocinnamylamino)etil]-5-izokinolinesulfonamid (H89) kupljeni su od TocrisBioscience (Bristol, UK). Ehinakozid, dantrolen, DL-threo-beta-benzil-oksiaspartat (DL-TBOA), 7-kloro-5-(2-klorfenija)-1,5-dihidro-4,1-benzotiazepin-2(3H)-jedan (CGP37157), 2-(2-amino-3-metoksifenil)-4H-1-benzopyran-4-one) (PD98059), etilen glikol bis (β-aminoetilni ether)-N,N,N1,N1,N1-benzotiazepin-2(3H)-jedan (CGP37157), 2-(2-amino-3-metoksifenil eter)-4H-1-benzopyran-4-one) (PD98059), etilen glikol bis (β-amino-amino-3-methyl ether)-N,N1,N1,N1-tetraacetička kiselina (EGTA) i svi ostali reagensi kupljeni su od Sigma-Aldrich Co.(St. Louis, MO, USA).

4.2. Životinje

Korišteni su dvomjesečni muški štakori Sprague-Dawley. Životinje su bile smještene u standardiziranim uvjetima okoline (22 ̆ 1 ̋C; 50% relativne vlažnosti; 12 h svjetlosnog/ tamnog ciklusa) i omogućile su neograničen pristup hrani i vodi. Životinje su ubijene odrubljivanjem glave, a moždana kora je brzo uklonjena na 4 ̋C. Eksperimentalne postupke odobrio je Fu Jen InstitutionalAnimal Care and Useation Committee (A10259), u skladu s Nacionalnim vodičem za zdravlje za njegu i uporabu laboratorijskih životinja. Uloženi su svi napori kako bi se smanjila patnja životinja i iskoristio minimalan broj životinja potrebnih za postizanje pouzdanih rezultata.

4.3. Sinaptosomski pripravci

Sinaptosomi su pročišćeni iz moždane kore štakora na diskontinuiranim gradijentima Percolla kako je prethodno opisano [43,44]. Ukratko, tkivo je homogenizirano u mediju koji sadrži saharozu od 0,32 M (pH 7,4), homogenat je centrifugiran 10 minuta pri 3000ˆ g (5000 o / min u rotoru JA 25,5; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, SAD) i 4 ̋C, a supernatant je ponovno centrifiran 12 min pri 14,500ˆ g (11,000 o / min u JAR 25.5 rotoru). Kuglica je nježno ponovno potrošena u saharozi od 0,32 M (pH 7,4), a alikvot ovog sinaptosomskog ovjesa (2 mL) stavljen je na 3 mL Percoll diskontinuirani gradijent koji sadrži saharozu od 0,32 M, 1 mM EDTA, 0,25 mM DL-ditiothreitol i 3%, 10%, i 23% Percoll (pH 7,4). Nakon centrifugacije na 32.500ˆ g (16.500 o / min u JA 20.5 rotoru) tijekom 7 minuta pri 4 ̋C, sinaptosomi su oporabljeni između 10% i 23% Percoll pojaseva, a razrijeđeni su u konačnom volumenu od 30 mL HEPES puferskog medija (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2 ̈ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, glukoza od 10 mM i 10 mM HEPES (pH 7,4)). Nakon daljnje centrifugacije na 27.000ˆ g (15.000 o / min u JA 25.5) tijekom 10 minuta, sinaptosomska kuglica ponovno je potrošena u 3 mL HEPES puferskog medija, a sadržaj proteina određen je pomoću Bradfordovog testa. Konačno, 0,5 mg suspenzije sinaptosoma razrijeđeno je u 10 ml HEPES puferskog medija i centrifugirano na 3000ˆ g (5000 o / min u JAR 20,1 rotoru) tijekom 10 minuta. Supernatant je odbačen, a pelete koje sadrže sinaptosome pohranjene su na ledu i korištene unutar 4-6 h.

4.4. Oslobađanje glutamata

Oslobađanje glutamata analizirana je internetskom fluorimetrijom kako je prethodno opisano [45,46]. Sinaptosomske pelete ponovno su potrošene u HEPES puferskom mediju (0,5 mg/mL) i prethodno ininkubirane na 37 ̋C tijekom 10 minuta u prisutnosti albumina goveđeg seruma od 16 μM kako bi se vezale sve slobodne masne kiseline oslobođene iz sinaptosoma tijekom predinkubacije. 2-mL aliquot sinaptosoma prenesen je u miješanu kivetu koja sadrži 2 mM NADP+, 50 jedinica glutamat dehidrogenaze i 1,2 mM CaCl2, a FL fluorescencija NADPH izmjerena je u Perkin-Elmer LS-55 spektrofluorimetru (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) pri pobudnim i emisijskim valnim duljinama od 340 i 460 nm, odnosno. Budući da sinaptosomi nisu podložni električnoj stimulaciji, blokator kalijevih kanala 4-aminopiridin korišten je za poticanje oslobađanja glutamata. 4-aminopiridin destabilizira membranski potencijal i smatra se da uzrokuje ponavljajuću spontanu depolarizaciju ovisnu o Na+ kanalu koja usko aproksimira in vivo depolarizaciju sinaptičkog terminala koja dovodi do aktivacije Ca2+ kanala ovisnih o naponu i oslobađanja neurotransmitera [47]. Podaci su dobiveni u intervalima od 2 s. Na kraju svakog eksperimenta dodan je standard egzogenog glutamata (5 nmol). Vrijednost promjene FL fluorescencije dobivene standardnim dodatkom korištena je za izračunavanje oslobođenog glutamata kao nanomola glutamata po miligramu sinaptosomskog proteina (nmol/mg). Vrijednosti otpuštanja navedene u tekstu su razine postignute u stabilnom stanju nakon 5 minuta depolarizacije (nmol/mg/5 min). Kumulativni podaci analizirani su pomoću proračunskih tablica Lotusa 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, SAD) i MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SAD).

4.5. Potencijal membrane plazme

Potencijal membrane plazme određen je bojom osjetljivom na membranski potencijal, DiSC3(5) [48]. Sinaptosomi su se ponovno potrošili u HEPES puferskom mediju, a alikvoti od 2 ml preneseni su u miješanu kivetu koja sadrži 5 μM DiSC3(5) pri 37 ̋C u spektrofluotru Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, SAD). Nakon što je smjesi omogućeno da se uravnoteži 3 minute, FL fluorescencija određena je na pobudnim i emisijskim valnim duljinama od 646 odnosno 674 nm. Podaci su prikupljeni u intervalima od 2 s. Kumulativni podaci analizirani su pomoću MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SAD) i izraženi u FL fluorescencijskim jedinicama.

4.6. Citozolska koncentracija Ca2+ ([Ca2+]C)

[Ca2+]C izmjereno je s ca2+ indikatorom fura-2. Sinaptosomi (0,5 mg/mL) prethodno su ispitani u HEPES puferskom mediju koji sadrži 5 μM fura-2 i 0,1 mM CaCl2, 30 min pri 37 ̋C u miješanoj epruveti. Nakon opterećenja fura-2, sinaptosomi su centrifirani u mikrocentrifugi za 30 s na 3000ˆ g (5000 o / min). Sinaptosomske pelete ponovno su korištene u HEPES puferskom mediju, a sinaptosomska suspenzija miješana je u termostatiranoj kiveti u Perkin-Elmer LS-55 spektrofluorometru (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, SAD). CaCl2 (1 mM) dodan je nakon 3 minute, a daljnji dodaci napravljeni su nakon dodatnih 10 min. Podaci o fluorescenciji akumulirani su na valnim duljinama pobude od 340 i 380 nm (valna duljina emisije 505 nm) u intervalima od 2 s. [Ca2+] C (nM) izračunat je postupkom kalibracije [49] i prethodno opisanim jednadžbama [50]. Kumulativni podaci analizirani su pomoću MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SAD).

4.7. Zapadno nadutost

Sinaptosomi su homogenizirani u puferu lize (HEPES pufer od 10 mM, pH 7,4), 1% Triton X-100 i mješavina inhibitora proteaze. Lizati su razjašnjeni centrifugacijom, a koncentracija proteina određena je pomoću kompleta za analizu proteina (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, SAD). Jednake količine proteina odvojene su elektroforezom natrijevog dodecil sulfata-poliakrilamidnog gela (SDS-PAGE) i prenesene u membranu nitroceluloze. Membrane su bile blokirane fiziološkom otopinom s Trisovim puferom koja je sadržavala 5% mlijeka s niskim udjelom masti i inkubirana odgovarajućim primarnim antitijelima (fosfo-proteinska kinaza C (tava), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, SAD) preko noći u 4 ̋C. Nakon tri pranja u Tris-puferiranoj fiziološkoj otopini, membrana je zatim tretirana sekundarnim antitijelima konjugiranim hrenom (1:3000) za 1 h na sobnoj temperaturi. Membrane su zatim oprane najmanje tri puta fiziološkom otopinom Tris-puferiranom fiziološkom otopinom i vizualizirane pomoću poboljšanog sustava čemiluminescencije (Amersham, Buckinghamshire, Velika Britanija). Aliquot uzoraka učitan je i ispitan anti-PKC protutijelima za otkrivanje PKC-a kao kontrole opterećenja. Razina ekspresije ili fosforilacije procijenjena je gustoćom pojasa, koja je kvantificirana gustoćom. Denzitometrijska kvantifikacija pojaseva analizirana je pomoću softvera Syngene (Synoptics, Cambridge, UK).

4.8. Statistička analiza

Podaci su dobiveni iz jednog sinaptosomskog pripravka i nisu bili neovisni jedni o drugima. Da bi se testirao značaj učinka lijeka u odnosu na kontrolu, korišten je dvokraki Studentov t-test. Kada je bila potrebna dodatna usporedba (na primjer je li drugi tretman utjecao na djelovanje ehinakozida), korištena je jednosmjerna ANOVA nakon koje je uslijedio Tukeyjev test. Analiza je dovršena putem softvera SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, SAD). Podaci se izražavaju kao srednji ̆ S.E.M.; značaj je procijenjen na p< 0.05="" for="" all="" statistical="">

5. Zaključci

Ovo je prva studija koja pokazuje daehinakozidinhibira oslobađanje glutamata iz cerebrokortičnih sinaptosoma štakora smanjenjem priljeva Ca2+ kroz Kanale Cav2.2 i Cav2.1, a ova inhibicija oslobađanja vjerojatno ovisi o suzbijanju puta C protein kinaze, barem djelomično. Sadašnji nalaz je vrijedan jer pruža novi uvid u mehanizme djelovanja ehinakozida u mozgu.

Priznanja:Taj je rad potkrijepljen bespovratnim sredstvima Ministarstva znanosti i tehnologije (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Prilozi autora:Tzu Yu Lin i Su Jane Wang osmislili su i osmislili eksperimente; Cheng Wei Lu izvodio je eksperimente; Cheng Wei Lu i Shu Kuei Huang analizirali su podatke; Su Jane Wang je napisala novine.

Sukob interesa:Autori ne izjavljuju sukob interesa.

Sukob interesa: Autori ne izjavljuju sukob interesa.

Reference

1. Tu, P.F.; Wang, B.; Dejama, T.; Zhang, Z.G.; Lou, Z.C. Analiza feniletanoidnih glikozidaHerba cistancheby RP-HPLC. Acta Pharm. Sin. 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barrett, H.; Landbo, također poznat kao; Meyer, A.S.; Molgaard, P. Sinergistički antioksidativni učinci alkamida, derivata kofeinske kiseline i frakcija polisaharida iz Echinacea purpurea na in vitro oksidaciju ljudskih lipoproteina niske gustoće. 2005, 53, 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovič, D. Imunomodulacija posredovana biljnim sirupom koji sadrži standardizirani ekstrakt korijena Echinacee: Pilot studija na zdravim ljudskim subjektima o ekspresiji gena citokina. Fitomedicina 2014, 21,1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. On, W.J.; Očnjak, T.H.; Tu, P.F. Napredak istraživanja na farmakološkim aktivnostima ehinakozida. Kina J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Deng, M.; Zhao, J.Y.; Tu, PF.; Jiang, Y; Li, Z.B.; Wang, Y.H. Echinacoside spašava SHSY5Y neuronske stanice iz Apoptoze izazvane TNFalphom. Eur. J. Pharmacol. 2004, 505,11-18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, K.A.; Pjevano, S.H.; Park, J.H.; Kim, S.H.; Lee, K.Y.; Kim, Y.C. In vitro neuroprotektivne aktivnosti feniletanoidnih glikozida iz Callicarpa dihotoma. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, Y.H.; Xuan, Z.H.; Tian, S.; Du, G.H. Echinacoside štiti od 6-hidroksidopamine-inducirane mitohondrijske disfunkcije i upalnih odgovora u PC12 stanicama smanjenjem proizvodnje ROS- a. Evid. Dopuna na temelju. Altern. med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Prolazna izloženost ehinakozidu dovoljna je za aktiviranje Trk signalizacije i zaštitu neuronskih stanica od rotenona. J. Neurokemija. 2013,124, 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, X.; Tu, P.; Pu, X. Neuroprotektivni učinci ehinakozida u mišjem MPTP modelu Parkinsonove bolesti. Eur. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, L.L.; Chen, H.; Jiang, Y; Tu, PF.; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, C.Y Učinci ehinakozida na histiocentralnu razinu aktivne mase kod štakora okluzije srednjih cerebralnih arterija. Biomed. Okružiti. 2012,25, 238-244. [PubMed]

11. Wu, C.R.; Lin, H.C.; Su, M.H. Preokret vodenim ekstraktimaCistanche tubulosaod deficita u ponašanju u modelu štakora sličnog Alzheimerovoj bolesti: Relevantnost za taloženje amiloida i središnju funkciju neurotransmitera. BMC dopuna. Altern. 2014., 14., 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Neurotrofni i neurorezkutni učinci Echinacosidea u subakutnom MPTP mišjem modelu Parkinsonove bolesti. 2010, 1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, B.S. Glutamat kao neurotransmiter u mozgu: pregled fiziologije i patologije. J. Nutr. 2000, 130, 1007s-1015s. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, M.S.; Kim, K.Y.; Noh, Y.H.; Kim, H.; Kim, S.Y.; Weinreb, R.N.; Ju, W.K. Koenzim Q10 inhibira ekscitoksičnost glutamata i oksidativnu mitohondrijsku promjenu posredovanu stresom u mišjem modelu glaukoma. Investig. Oftalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, D.W. Kalcij i ekscitoksična neuronska ozljeda. Ann. N. Y. Acad. Sci. [CrossRef] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamat receptori, neurotoksičnost, i neurodegeneracija. Pflugeri. Slavoluk 2010, 460, 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Molekularni mehanizmi oslobađajuće smrti neuronskih stanica posredovanih glutamatskim receptorima. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107-129. [CrossRef]

18. Schauwecker, P.E. Neuroprotekcija antagonista glutamatnih receptora protiv smrti ekscitotoksičnih stanica izazvanih napadajima u mozgu starenja. 2010, 224, 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpoui; S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Neuroprotektivni učinci NMDA i metabotropnih glutametnih receptora antagonista skupine I protiv neurodegeneracije izazvane homocisteinom u hipokampusu štakora: In vivo studija. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Uloga ekscitotoksičnosti u neurodegenerativnim bolestima: implikacije za terapiju. Pharmacol. Ther. 1999, 81,163-221. [CrossRef]

21. Muir, K.W. Terapijski pristupi na bazi glutamata: Klinička ispitivanja s antagonistima NMDA. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, J.C.; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, F.J.; Sanchez-Prieto, J.; Gandia, L.; Garcia, A.G.; Jordan, J.; Hernandez-Guijo, J.M. Neuroprotektantni minociklin deprimira glutamatergičnu neurotransmisiju i Ca2+ signalizaciju u hipokampalnim neuronima. Eur. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, C.W.; Lin, T.Y.; Wang, S.J. Memantine deprimira oslobađanje glutamata inhibicijom unosa Ca2+ ovisnog o naponu i protein kinaze C u terminalima živaca moždane kore štakora: mehanizam neovisan o NMDA receptorima. Neurokemija. 2010, 57,168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, S.J.; Sihra, T.S. Nekonkurentni metabotropni glutamat 5 receptor antagonist (E)-2-metil-6- stiril-piridin (SIB1893) deprimira oslobađanje glutamata inhibicijom unosa Ca2+ ovisnog o naponu u terminale cerebrokortičnih živaca štakora (sinaptosomi). J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004, 309, 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR.; Jarvie, P.E.; Heath, J.W.; Kidd, G.J.; Rostas, J.A. Brza metoda za izolaciju sinaptosoma na Percoll gradijentima. 1986, 372,115-129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, R.T.; Haydon, P.G. SNARE oslobađanje glutamata ovisnog o proteinima iz astrocita. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, terapijski pristupi temeljeni na J. Glutamatu: Ciljanje transportnog sustava glutamata. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6,103-107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Sarkoplazmatski retikulum Ca2+ kanal / ryanodin receptor: Modulacija endogenim efektorima, lijekovima i stanjima bolesti. Pharmacol. Velečasni 1997, 49,1-51. [PubMed]

29. Ventilator, Y.; Li, J.; Zhang, Y.Q.; Jiang, L.H.; Zhang, Y.N.; Yan, C.Q. Protein kinaza C delta posredovana citotoksičnost 6-hidroksidopamine putem kontinuirane izvanstanične signalom regulirane kinaze 1/2 aktivacije u PC12 stanicama. 2014, 36, 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Muller, H.J.; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, novi inhibitor protein kinaze. Biokemija. Biofiziju. Komuna. 1994, 199, 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, D.G.; Sihra, T.S.; Sanchez-Prieto, J. Kalcij-ovisno i neovisno oslobađanje glutamata iz sinaptosoma praćenih kontinuiranom fluorometrijom. J. Neurokemija. 1987, 49, 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, R.A. Spajanje neurotransmiterskih receptora s ionskim kanalima u mozgu. Znanost 1988, 241, 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, L.G.; Saggau, P. Presinaptička inhibicija izmamljenog oslobađanja neurotransmitera. Trendovi Neurosci. 1997, 20, 204-212. [CrossRef]

34. Turner, T.J.; Dunlap, K. Farmakološka karakterizacija presinaptičkih kalcijevih kanala pomoću subsekundnih biokemijskih mjerenja sinaptosomske neurosecrecije. Neurofarmakologija 1995, 34, 1469-1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Diferencijalna spojnica kalcijevih kanala tipa N i P / Q za egzocitozu glutamata u moždanoj kori štakora. Neurosci. Letonac. 2002, 330, 29-32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Presinaptička modulacija oslobađanja glutamata cilja različite kalcijeve kanale u terminalima cerebrokortičnih živaca štakora. Eur. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Dugo, P; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, G.J.; Sihra, T.S.; Jovanović, J.N. Nervni terminal GABAA receptori aktiviraju ca2+ / calmodulin-ovisnu signalizaciju kako bi inhibirali dotok i oslobađanje glutamata ca2+ na naponu. 2009,284, 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, J.R.; Kut, J.M.; Crna, E.D.; Joyal, J.L.; Vreće, D.B.; Madara, J.L. PKC-ovisna regulacija transepitelne otpornosti: Uloge MLC-a i MLC kinaze. 1999,277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughan, P.F.; Walker, J.H.; Peters, C. Regulacija izlučivanja neurotransmitera proteinskom kinazom C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, E.T.; Sihra, T.S.; Nicholls, D.G.; Pocock, J.M. Fosforilacija sinapsina I i MARCKS u živčanim terminalima posredovani su Ca2+ unosom putem Aga-GI osjetljivog Ca2+ kanala koji je povezan s egzocitozom glutamata. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [CrossRef]

41. Obrenovitch, T.P.; Urenjak, J. Promijenjen glutamatergijski prijenos u neurološkim poremećajima: Od visokog izvanstaničnog glutamata do prekomjerne sinaptičke učinkovitosti. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39-87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, J.B. Echinacoside inhibira amiloidnu fibrilizaciju HEWL-a i štiti od ap-inducirane neurotoksičnosti. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, T.Y.; Lu, C.W.; Wang, C.C.; Lu, J.F.; Wang, S.J. Hispidulin inhibira oslobađanje glutamata u terminalima cerebrokortičnih živaca štakora. Toksikol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, C.Y.; Lin, T.Y.; Lu, C.W.; Huang, S.K.; Wang, Y.C.; Chou, S.S.; Wang, S.J. Hesperidin inhibira oslobađanje glutamata i vrši neurozaštitu protiv ekscitotoksičnosti izazvane kainičnom kiselinom u hipokampusu štakora. Neurotoksikologija 2015,2015,157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, D.G.; Sihra, T.S. Sinaptosomi posjeduju egzocitotički bazen glutamata. Priroda 1986, 321, 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. Wang, C.C.; Kuo, J.R.; Wang, S.J. Dimebon, antihistaminski lijek, inhibira oslobađanje glutamata u terminalima cerebrokortičnih živaca štakora. Eur. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, G.R.; Barrie, A.P.; van Mieghem, F.J.; Mc-Mahon, H.T.; Nicholls, D.G. Repetitivni akcijski potencijali u izoliranim živčanim terminalima u prisutnosti 4-aminopiridina: Učinci na citozolično slobodno Ca2+ i oslobađanje glutamata. J. Neurokemija. 1989,53,1693-1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, tj. Scott, L.G.; Heikkila, J.E.; Heinonen, E. Ionska ovisnost membranskog potencijala i odgovora povezanih s glutamatskim receptorima u sinaptoneurosomima mjereno cijaninskom bojom, DiSC2(5). J. Neurokemija. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, T.S.; Bogonez, E.; Nicholls, D.G. Lokalizirani Unos Ca2+ preferencijalno utječe na defosforilaciju proteina, fosforilaciju i oslobađanje glutamata. J. Biol. Chem. 1992, 267,1983-1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, R.Y. Nova generacija Ca2+ pokazatelja s uvelike poboljšanim svojstvima fluorescencije. 1985, 260,3440-3450. [PubMed]