Dio 2: Ehinakozid inhibira otpuštanje glutamata potiskivanjem Ca2 plus ulaska ovisnog o naponu i protein kinaze C u cerebrokortikalnim živčanim završecima štakora

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 i Su Jane Wang 3,*

Kliknite ovdje natrag na 1. dio

3.2 Terapijske implikacije

Ekscitotoksičnost, patološki proces uzrokovan pretjeranim otpuštanjem glutamata i aktivacijom glutamatnog receptora, glavni je uzrok smrti neurona kod akutnih i kroničnih poremećaja mozga kao što su moždani udar, traumatska ozljeda mozga, Parkinsonova i Alzheimerova bolest [13,41], a terapijske strategije koji uključuju inhibiciju otpuštanja glutamata mogu biti obećavajuće neuroprotektivne strategije za liječenje takvih bolesti. Potvrđeno je da ehinakozid prodire kroz krvno-moždanu barijeru (BBB) ​​i pokazuje neuroprotektivne učinke u različitim in vivo modelima neurotoksičnosti [8,10-12,42]. Iako mehanizam ovih neuroprotektivnih učinaka nije u potpunosti shvaćen, nekoliko je mogućih mehanizama prijavljeno uključujući inhibiciju upalnog odgovora, stabilizaciju mitohondrijske funkcije, antioksidaciju, hvatanje slobodnih radikala i oponašanje neurotrofne funkcije [5,9,12,42]. U trenutnoj studiji, sposobnostehinakozidsmanjenje otpuštanja glutamata iz živčanih završetaka također može djelomično objasniti njegov neuroprotektivni mehanizam. Međutim, doprinosi li ovaj učinak očitom terapeutskom potencijaluehinakozidkod moždanih poremećaja povezanih s eksitotoksičnošću glutamata zahtijeva daljnja istraživanja.

Neuroprotektivni učincicistancon ehinakozid

4.Materijali i metode

4.1. Kemikalije

Fura-2-acetoksimetil ester (Fura-2-AM) i 3',3',3'-dipropiltiadikarbocijanin jodid [DiSC3(5)] kupljeni su od Invitrogena (Carlsbad, CA, SAD). o-konotoksin MVIIC, rottlerin, 2-[1-(3-dimetilaminopropil)indol-3-il]-3-(indol-3-il) maleimid ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahidro- 13-metil-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pirolo[3,{ {27}}c]karbazol-12-propannitril (Go6976) i N-[2-(p-bromocinamilamino)etil]-5-izokinolinsulfonamid (H89) kupljeni su od Tocris Bioscience (Bristol, UK) ).Ehinakozid, dantrolen, DL-treo-beta-benzil-oksiaspartat (DL-TBOA), 7-kloro-5-(2-klorofenil)-1,5-dihidro{ {10}},1-benzotiazepin-2(3H)-on (CGP37157), 2-(2-amino-3- metoksifenil)-4H -1-benzopiran-4-on) (PD98059), etilen glikol bis(-aminoetil eter)-N,N,N/,N/-tetraoctena kiselina (EGTA) i svi ostali reagensi kupljeni su od Sigma- Aldrich Co. (St. Louis, MO, SAD).

4.2. Životinje

Korišteni su dvomjesečni mužjaci štakora Sprague–Dawley. Životinje su bile smještene u standardiziranim uvjetima okoliša (22 ± 1 oC; 50 posto relativne vlažnosti; 12 h ciklusa svjetlost/tama) i omogućen im je neograničen pristup hrani i vodi. Životinje su usmrćene dekapitacijom, a moždana kora je brzo uklonjena na 4 oC. Eksperimentalne postupke odobrio je Institucionalni odbor za skrb i korištenje životinja Fu Jen (A10259), u skladu s vodičem Nacionalnog instituta za zdravlje za skrb i korištenje laboratorijskih životinja. Uloženi su svi napori da se patnja životinja svede na najmanju moguću mjeru i da se koristi minimalni broj životinja potrebnih za dobivanje pouzdanih rezultata.

4.3. Sinaptosomski pripravci

Sinaptosomi su pročišćeni iz cerebralnog korteksa štakora na diskontinuiranim Percollovim gradijentima kao što je prethodno opisano [43,44]. Ukratko, tkivo je homogenizirano u mediju koji sadrži 0.32 M saharozu (pH 7,4), homogenat je centrifugiran 10 min na 3000× g (5{{25} }00 okretaja u minuti u rotoru JA 25.5; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, SAD) i 4 oC, a supernatant je ponovno centrifugiran 12 minuta na 14 500 × g (11, 000 okretaja u minuti u rotoru JA 25.5). Talog je lagano resuspendiran u 0,32 M saharoze (pH 7,4), a alikvot ove sinaptosomske suspenzije (2 mL) stavljen je na 3 mL Percoll diskontinuirani gradijent koji sadrži 0,32 M saharozu, 1 mM EDTA, 0,25 mM DL-ditiotreitol i 3 posto, 10 posto i 23 posto Percoll (pH 7,4). Nakon centrifugiranja na 32 500 x g (16 500 okretaja u minuti u rotoru JA 20.5) tijekom 7 minuta na 4 oC, sinaptosomi su izdvojeni iz između 10 posto i 23 posto Percollovih traka, te su razrijeđeni u konačnom volumenu od 30 mL HEPES puferski medij (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2﹒ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glukoze i 10 mM HEPES (pH 7,4)). Nakon daljnjeg centrifugiranja na 27,000× g (15 000 okretaja u minuti u JA 25.5) tijekom 10 minuta, talog sinaptosoma resuspendiran je u 3 mL HEPES puferskog medija, a sadržaj proteina određen je korištenjem Bradfordovog testa. Konačno, 0,5 mg suspenzije sinaptosoma razrijeđeno je u 10 ml HEPES puferskog medija i centrifugirano na 3000 x g (5000 okretaja u minuti u JA 20.1 rotoru) 10 minuta. Supernatant je odbačen, a pelete koje su sadržavale sinaptosome pohranjene su na ledu i iskorištene unutar 4-6 h.

cistanche herb

4.4. Oslobađanje glutamata

Otpuštanje glutamata ispitano je online fluorimetrijom kao što je prethodno opisano [45,46]. Sinaptosomske pelete resuspendirane su u HEPES puferskom mediju (0.5 mg/mL) i prethodno inkubirane na 37 oC tijekom 10 minuta u prisutnosti 16 uM goveđeg serumskog albumina kako bi se vezale sve slobodne masne kiseline otpuštene iz sinaptosoma tijekom predinkubacije. 2-mL alikvot sinaptosoma prenesen je u miješanu kivetu koja je sadržavala 2 mM NADP plus, 50 jedinica glutamat dehidrogenaze i 1,2 mM CaCl2, a fluorescencija NADPH je izmjerena u Perkin-Elmer LS{{14 }} spektrofluorimetar (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, SAD) na valnim duljinama ekscitacije i emisije od 340, odnosno 460 nm. Kako sinaptosomi nisu podložni električnoj stimulaciji, blokator kalijevih kanala 4-aminopiridin korišten je za stimuliranje oslobađanja glutamata. 4-aminopiridin destabilizira membranski potencijal i smatra se da uzrokuje ponavljajuću spontanu depolarizaciju ovisnu o Na plus kanalu koja je bliska in vivo depolarizaciji sinaptičkog terminala što dovodi do aktivacije Ca2 plus kanala ovisnih o naponu i otpuštanja neurotransmitera [47 ]. Podaci su dobiveni u intervalima od 2 s. Standard egzogenog glutamata (5 nmol) dodan je na kraju svakog eksperimenta. Vrijednost promjene fluorescencije proizvedene standardnim dodatkom korištena je za izračunavanje oslobođenog glutamata kao nanomola glutamata po miligramu sinaptosomskog proteina (nmol/mg). Vrijednosti otpuštanja navedene u tekstu su razine postignute u stabilnom stanju nakon 5 minuta depolarizacije (nmol/mg/5 minuta). Kumulativni podaci analizirani su korištenjem proračunskih tablica Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, SAD) i MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SAD).

4.5. Potencijal plazma membrane

Potencijal plazma membrane određen je bojom osjetljivom na membranski potencijal, DiSC3(5) [48]. Sinaptosomi su resuspendirani u HEPES puferskom mediju, a alikvoti od 2 mL prebačeni su u miješanu kivetu koja je sadržavala 5 uM DiSC3(5) na 37 oC u Perkin–Elmer LS{10}} spektrofluorometru (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA , SAD). Nakon što je smjesa ostavljena da se uravnoteži 3 minute, određena je fluorescencija pri valnim duljinama ekscitacije i emisije od 646, odnosno 674 nm. Podaci su prikupljani u intervalima od 2 s. Kumulativni podaci analizirani su pomoću MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SAD) i izraženi u jedinicama fluorescencije.

4.6. Citosolna Ca2 plus koncentracija ([Ca2 plus ]C)

[Ca2 plus ]C mjeren je Ca2 plus indikatorom fura-2. Sinaptosomi (0.5 mg/mL) prethodno su inkubirani u HEPES puferskom mediju koji sadrži 5 uM fura-2 i 0.1 mM CaCl2, 30 minuta na 37 oC u miješanoj epruveti . Nakon punjenja fura-2 sinaptosomi su centrifugirani u mikrocentrifugi 30 s pri 3000× g (5000 okretaja u minuti). Sinaptosomske pelete su resuspendirane u HEPES puferskom mediju, a sinaptosomska suspenzija je miješana u termostatiranoj kiveti u Perkin-Elmer LS-55 spektrofluorometru (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, SAD). CaCl2 (1 mM) je dodan nakon 3 minute i daljnji dodaci su napravljeni nakon dodatnih 10 minuta. Podaci o fluorescenciji prikupljeni su pri valnim duljinama ekscitacije od 340 i 380 nm (valna duljina emisije 505 nm) u intervalima od 2 s. [Ca2 plus ]C (nM) izračunat je pomoću postupaka kalibracije [49] i jednadžbi opisanih ranije [50]. Kumulativni podaci analizirani su pomoću MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SAD).

4.7. Western Blotting

Sinaptosomi su homogenizirani u puferu za lizu (10 mM HEPES pufer, pH 7,4), 1 posto Triton X-100 i smjesi inhibitora proteaze. Lizati su pročišćeni centrifugiranjem, a koncentracija proteina određena je pomoću kompleta za analizu proteina (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, SAD). Jednake količine proteina odvojene su elektroforezom natrijevog dodecil sulfata i poliakrilamidnog gela (SDS-PAGE) i prebačene na nitroceluloznu membranu. Membrane su blokirane s Tris-puferiranom fiziološkom otopinom koja je sadržavala 5 posto mlijeka s niskim udjelom masnoće i inkubirane s odgovarajućim primarnim antitijelima (fosfo-protein kinaza C (pan), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, SAD) preko noći na 4 oC. Nakon tri ispiranja u Tris-puferiranoj fiziološkoj otopini, membrana je zatim tretirana sekundarnim antitijelom konjugiranim s peroksidazom hrena (1:3000) tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi. Membrane su zatim isprane najmanje tri puta s Tris-puferiranom fiziološkom otopinom i vizualizirane korištenjem poboljšanog sustava kemiluminiscencije (Amersham, Buckinghamshire, UK). Alikvot uzoraka je napunjen i ispitan s anti-PKC antitijelom za detekciju PKC kao kontrole punjenja. Razina ekspresije ili fosforilacije procijenjena je gustoćom trake, koja je kvantificirana denzitometrijom. Denzitometrijska kvantifikacija traka analizirana je korištenjem softvera Syngene (Synoptics, Cambridge, UK).

4.8. Statistička analiza

Podaci su dobiveni iz jednog sinaptosomskog preparata i nisu bili neovisni jedni o drugima. Za testiranje značajnosti učinka lijeka u odnosu na kontrolu, korišten je dvostrani Studentov t-test. Kada je bila potrebna dodatna usporedba (kao što je je li drugi tretman utjecao na djelovanje ehinakozida), korištena je jednosmjerna ANOVA praćena Tukeyevim testom. Analiza je dovršena pomoću softvera SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, SAD). Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SEM; značajnost je procijenjena na p < 0.05="" za="" sve="" statističke="">

cistanche

5. Zaključci

Ovo je prva studija koja pokazuje da ehinakozid inhibira otpuštanje glutamata iz cerebrokortikalnih sinaptosoma štakora smanjenjem Ca2 plus influksa kroz Cav2.2 i Cav2.1 kanale, a ovo inhibicija otpuštanja vjerojatno ovisi o supresiji puta protein kinaze C, barem u dio. Ovo otkriće je vrijedno jer pruža novi uvid u mehanizme djelovanja ehinakozida u mozgu.

Zahvale: Ovaj je rad potpomognut potporom Ministarstva znanosti i tehnologije (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Doprinosi autora: Tzu Yu Lin i Su Jane Wang osmislili su i dizajnirali eksperimente; Cheng Wei Lu izveo je pokuse; Cheng Wei Lu i Shu Kuei Huang analizirali su podatke; Su Jane Wang napisala je rad.

Sukob interesa: Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.

ekstrakt biljke cistanche

Reference

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analiza feniletanoidnih glikozida Herba cistanchis pomoću RP-HPLC. Acta Pharm. Grijeh. 1997., 32, 294–300.

2. Dalby-Brown, L.; Barnett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Sinergistički antioksidativni učinci alkamida, derivata kavene kiseline i frakcija polisaharida iz Echinacea purpurea na in vitro oksidaciju ljudskih lipoproteina niske gustoće. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 9413–9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapaš, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Imunomodulacija posredovana biljnim sirupom koji sadrži standardizirani ekstrakt korijena ehinaceje: Pilot studija na zdravim ljudima o ekspresiji gena citokina. Fitomedicina 2014, 21, 1406–1410. [CrossRef] [PubMed]

4. On, WJ; Fang, TH; Tu, PF Napredak istraživanja farmakoloških aktivnosti ehinakozida. Kina J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF; Jiang, Y.; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside spašava neuronske stanice SHSY5Y od apoptoze izazvane TNFalpha. Eur. J. Pharmacol. 2004, 505, 11–18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro neuroprotektivne aktivnosti feniletanoidnih glikozida iz Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005., 71, 778–780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH Ehinakozid štiti od 6-mitohondrijske disfunkcije izazvane hidroksidopaminom i upalnih odgovora u PC12 stanicama smanjenjem proizvodnje ROS. Evid. Na temelju komplementa. Alternativa. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Prolazna izloženost ehinakozidu dovoljna je za aktiviranje Trk signalizacije i zaštitu neuronskih stanica od rotenona. J. Neurochem. 2013, 124, 571–580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Neuroprotektivni učinci ehinakozida u mišjem MPTP modelu Parkinsonove bolesti. Eur. J. Pharmacol. 2007., 564, 66–74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y.; Tu, PF; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Učinci ehinakozida na histio-centralne razine aktivne mase kod štakora s okluzijom srednje cerebralne arterije. Biomed. okoliš. Sci. 2012, 25, 238–244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Preokret vodenim ekstraktima Cistanche tubulosa iz nedostataka u ponašanju kod modela štakora nalik Alzheimerovoj bolesti: značaj za taloženje amiloida i funkciju središnjeg neurotransmitera. BMC komplement. Alternativa. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Neurotrofični i neurorescue učinci Echinacosidea u subakutnom MPTP mišjem modelu Parkinsonove bolesti. Brain Res. 2010, 1346, 224–236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamat kao neurotransmiter u mozgu: pregled fiziologije i patologije. J. Nutr.2000, 130, 1007S–1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; Ne, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Koenzim Q10 inhibira ekscitotoksičnost glutamata i mitohondrijske promjene posredovane oksidativnim stresom u mišjem modelu glaukoma. Istražite. Ophthalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993–1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Kalcij i ekscitotoksična ozljeda neurona. Ann. NY Acad. Sci. 1994., 747, 162–171. [CrossRef][PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamatni receptori, neurotoksičnost i neurodegeneracija. Pflugers. Arh. 2010, 460, 525–542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Molekularni mehanizmi ekscitotoksične neuronske stanične smrti posredovane receptorom glutamata. Mol. Neurobiol. 2001., 24, 107–129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neuroprotekcija antagonistima glutamatnih receptora protiv ekscitotoksične stanične smrti izazvane napadajima u mozgu koji stari. Exp. Neurol. 2010, 224, 207–218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpour, S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Neuroprotektivni učinci NMDA i antagonista metabotropnih glutamatnih receptora skupine I protiv neurodegeneracije inducirane homocisteinom u hipokampusu štakora: In vivo studija. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551–557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Uloga ekscitotoksičnosti u neurodegenerativnim bolestima: implikacije za terapiju. Pharmacol. Ther.1999, 81, 163–221. [CrossRef]

21. Muir, KW Terapijski pristupi temeljeni na glutamatu: Klinička ispitivanja s antagonistima NMDA.Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 53–60. [CrossRef] [PubMed]

22. González, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sánchez-Prieto, J.; Gandía, L.; García, AG; Jordan, J.; Hernández-Guijo, JM Neuroprotektant minociklin smanjuje glutamatergičku neurotransmisiju i Ca2 plus signalizaciju u neuronima hipokampusa. Eur. J. Neurosci. 2007., 26, 2481–2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantin smanjuje oslobađanje glutamata putem inhibicije napona ovisnog Ca2 plus ulaska i protein kinaze C u živčanim završecima cerebralnog korteksa štakora: mehanizam neovisan o NMDA receptoru. Neurochem. Int. 2010., 57, 168–176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Nekompetitivni metabotropni antagonist receptora glutamata 5 (E)-2-metil-6- stiril-piridin (SIB1893) smanjuje otpuštanje glutamata putem inhibicije napona ovisnog Ca2 plus ulaska u cerebrokortikalne živčane završetke štakora (sinaptosome). J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004, 309, 951–958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Brza metoda za izolaciju sinaptosoma na Percollovim gradijentima. Brain Res. 1986, 372, 115–129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE protein ovisno o oslobađanju glutamata iz astrocita.J. Neurosci. 2000, 20, 666–673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Terapijski pristupi temeljeni na glutamatu: Ciljanje na transportni sustav glutamata.

Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 103–107. [CrossRef] [PubMed]

29. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Sarkoplazmatski retikulum Ca2 plus kanal/rianodin receptor: Modulacija endogenim efektorima, lijekovima i bolesnim stanjima. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1–51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Protein kinazom C delta posredovana citotoksičnost 6-hidroksidopamina putem stalne aktivacije kinaze 1/2 regulirane izvanstaničnim signalom u stanicama PC12. Neurol. Res. 2014, 36, 53–64.[CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Müller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, novi inhibitor protein kinaze. Biochem. Biophys. Res. Komun. 1994., 199, 93–98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. O kalciju ovisno i neovisno oslobađanje glutamata iz sinaptosoma praćeno kontinuiranom fluorometrijom. J. Neurochem. 1987, 49, 50–57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Spajanje receptora neurotransmitera na ionske kanale u mozgu. Science 1988, 241,545–551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Presinaptička inhibicija izazvanog otpuštanja neurotransmitera. Trends Neurosci. 1997, 20, 204–212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Farmakološka karakterizacija presinaptičkih kalcijevih kanala korištenjem subsekundnih biokemijskih mjerenja sinaptosomske neurosekrecije. Neuropharmacology 1995, 34, 1469–1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Diferencijalno spajanje kalcijevih kanala tipa N i P/Q na egzocitozu glutamata u cerebralnom korteksu štakora. Neurosci. Lett. 2002., 330, 29–32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Presinaptička modulacija otpuštanja glutamata cilja na različite kalcijeve kanale u cerebrokortikalnim živčanim završecima štakora. Eur. J. Neurosci. 1997, 9, 2009–2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Dugi, P.; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN GABAA receptori živčanog terminala aktiviraju Ca2 plus/kalmodulin-ovisnu signalizaciju za inhibiciju naponskog Ca2 plus influksa i otpuštanja glutamata. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726–8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Angle, JM; Crni, ED; Joyal, JL; Sacks, DB; Madara, JL PKC-ovisna regulacija transepitelne rezistencije: Uloge MLC i MLC kinaze. Am. J. Physiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peers, C. Regulacija izlučivanja neurotransmitera protein kinazom C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125–155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DG; Pocock, JM Fosforilacija sinapsina I i MARCKS-a u živčanim završecima je posredovana ulaskom Ca2 plus preko Aga-GI osjetljivog Ca2 plus kanala koji je povezan s egzocitozom glutamata. FEBS Lett. 1994., 353, 264–268. [CrossRef]

42. Obrenovitch, TP; Urenjak, J. Promijenjeni glutamatergički prijenos u neurološkim poremećajima: od visokog izvanstaničnog glutamata do prekomjerne sinaptičke učinkovitosti. Prog. Neurobiol. 1997., 51, 39–87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinacoside inhibira amiloidnu fibrilizaciju HEWL i štiti od A-inducirane neurotoksičnosti. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243–253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin inhibira otpuštanje glutamata u cerebrokortikalnim živčanim završecima štakora. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233–243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidin inhibira otpuštanje glutamata i djeluje neurozaštitno od ekscitotoksičnosti izazvane kainskom kiselinom u hipokampusu štakora. Neurotoksikologija 2015, 2015, 157–169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DG; Sihra, TS Sinaptosomi posjeduju egzocitotski skup glutamata. Nature 1986, 321, 772–773.[CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, antihistaminik, inhibira otpuštanje glutamata u cerebrokortikalnim živčanim završecima štakora. Eur. J. Pharmacol. 2014, 734, 67–76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG Ponavljajući akcijski potencijali u izoliranim živčanim završecima u prisutnosti 4-aminopiridina: Učinci na oslobođeni Ca2 plus i glutamat u citosolu. J. Neurochem. 1989, 53, 1693–1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Ionska ovisnost membranskog potencijala i odgovora povezanih s glutamatnim receptorom u sinaptoneurosomima mjereno cijaninskom bojom, DiSC2(5).J. Neurochem. 1987, 48, 552–559. [CrossRef] [PubMed]

50. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Lokalizirani ulazak Ca2 plus preferirano utječe na defosforilaciju proteina, fosforilaciju i oslobađanje glutamata. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983–1989. [PubMed]

51. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Nova generacija Ca2 plus indikatora sa znatno poboljšanim svojstvima fluorescencije. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440-3450. [PubMed]