1. DIO Priprema i procjena transdermalne dostave feniletanoidnih glikozida Cistanche Tubulosa na bazi mikroemulzije
Mar 06, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com
JIANHUA YANG1*, HUANHUAN XU1-3*, & et al.
Sažetak.
Primarni cilj ove studije bio je razviti novu formulaciju mikroemulzije (ME) za isporukufeniletanoidni glikozid iz cistanhe(PG) za upotrebu u posvjetljivačima kože i kremama za sunčanje. Uljna faza odabrana je na temelju topljivosti lijeka, dok su surfaktant i pomoćni surfaktant pregledani i odabrani na temelju njihovog kapaciteta topljivosti i učinkovitosti kojom su formirali ME. Konstruirani su pseudo ternarni fazni dijagrami za procjenu ME regija i pet formulacija ME ulja u vodi odabrano je kao nosioci. Provedeni su in vitro pokusi propusnosti kože kako bi se optimizirala formulacija ME i procijenila njezina propusnost u usporedbi s onom slane otopine. Fizikalno-kemijska svojstva optimiziranog ME i sposobnost prodiranja PG(feniletanoidni glikozid iz cistanhe) koje je dostavio ovaj ME također su ispitani. Optimizirana ME formulacija sastojala se od izopropil miristata (7 posto, w/w), Cremorphor EL (21 posto, w/w), propilen glikola (7 posto, w/w) i vode (65 posto, w/w). Kumulativna količina PG(feniletanoidni glikozid iz cistanhe) koja je prodrla kroz izrezanu kožu miša kada je prenesena ME bila je ~1,68 puta nego kada je PG prenesen samo fiziološkom otopinom. Kumulativna količina PG u mikroemulziji (4149,650±37,3 µg·cm-2) bila je znatno veća od one PG u slanoj otopini (2288,63±20,9 µg· cm-2 ). Nadalje, koeficijent propusnosti pokazao je da je optimizirana mikroemulzija učinkovitiji nosač za transdermalno isporuku PG od kontrolne otopine (8,87±0,49 cm/hx10-3 naspram 5,41±0,12 cm/hx10-3). Uzevši sve zajedno, sposobnost prodiranja PG-a koji nosi ME značajno je povećana u usporedbi s fiziološkom otopinom.
Uvod
Herba cistanche,tonik biljka uobičajeno rasprostranjena u pustinjskim regijama, često se koristi u tradicionalnoj kineskoj medicini. Do danas je provedeno više studija kako bi se istražila njegova biofarmaceutska svojstva, uključujući poboljšanje pamćenja, seksualne potencije, hvatanje slobodnih radikala i djelovanje protiv starenja (1). Glavna komponenta H. cistanche jefeniletanoidni glikozid (PG). Prethodne studije otkrile su da PG inhibira aktivnost tirozinaze, enzima koji ograničava brzinu sinteze melanina u ljudskom tijelu (2). Osim toga, PG(feniletanoidni glikozid iz cistanhe) objavljeno je da je odgovoran za uklanjanje 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil radikala (3) i zaštitu keratinocita od ultraljubičastog (UV) zračenja. Stoga ova komponenta može imati potencijal u depigmentaciji kože. Lokalni lijekovi često se koriste u kozmetičkim poljima, s lijekom koji se isporučuje izravno na površinu tijela (4). Mikroemulzije (ME) su novi sustavi za isporuku lijekova koji se uobičajeno sastoje od ulja, surfaktanta, pomoćnog tenzida i vodene faze (5) i navodno poboljšavaju brzinu i apsorpciju lipofilnih lijekova (6). Osim toga, zbog njegove zadovoljavajuće topivosti, niske iritacije kože i visoke propusnosti, očekuje se da će se koristiti u lokalnoj primjeni lijekova (7,8). Koliko nam je poznato, nekoliko je studija provedeno u kojima je PG isporučen putem lokalnih lijekova pomoću mikroemulzije. U ovoj studiji uspostavljen je sustav isporuke nanoemulzije ulje u vodi (O/W) za transdermalnu primjenu, a PG je ugrađen u nanoemulziju (9,10). U međuvremenu, priprema i karakterizacija nanoemulzije na bazi PG provedena je ispitivanjem transdermalnog otpuštanja in vitro.
Materijali i metode Reagensi.
Cremorphor EL i izopropil miristat (IPM) su kupljeni od Sigma Aldrich; Merck Millipore (Darmstadt, Njemačka). Etanol, oleinska kiselina (OA) i Tween-80 kupljeni su od Guangcheng Chemical Reagent Co., Ltd. (Tianjin, Kina). Etil oleat je kupljen od Shanghai Chemical Reagent Co., Ltd. (Šangaj, Kina). Sve korištene kemikalije i otapala bili su analitičkog reagensa. Priprema i procjena transdermalne dostave feniletanoidnih glikozida Cistanche tubulosa JIANHUA YANG1*, HUAN HUAN XU1-3*, SHANSHAN WU2, BOWIE JU2, DANDAN ZHU2, YAO YAN1, MEI WANG2 i JUMPING HU{{9} na bazi mikro emulzije } Zavod za farmaciju, Prva pridružena bolnica; 2 Odjel za prirodne lijekove, Farmaceutski fakultet, Medicinsko sveučilište Xinjiang, Urumqi, Xinjiang 830011; 3 Department of Pharmacy, Kanghua Hospital, Dongguan, Guangdong 523003, NR Kina Primljeno 2. prosinca 2015.; Prihvaćeno 29. studenog 2016., DOI: 10.3892/MMR.2017.6147 Korespondencija za: dr. Junping Hu, Odsjek za prirodne lijekove, Farmaceutski fakultet, Medicinsko sveučilište u Xinjiangu, 393 Xinyi Road, Urumqi, Xinjiang 830011, PR Kina E-pošta: hujp0551 @yeah.net * Jednako pridonijeli Ključne riječi: feniletanoidni glikozid, mikroemulzija, transdermalna isporuka, posvjetljivač kože, krema za sunčanje yang et al: ME-BASED PG ZA KOZMETIČKU PRIMJENU 1110 Priprema PhG-a. PhG(feniletanoidni glikozid iz cistanhe) pripremljen je kako je rutinski opisano (11).
Suši se na zrakuC. tubulosaje napajan i ekstrahiran perkolacijom s 80 posto EtOH. Perkolat je uparen pod tlakom, nakon čega je uslijedila filtracija zaostale tekućine. Filtrat je koncentriran i kromatografiran na stupcu SP-825 makroporozne smole korištenjem 0, 30, 50, 70 i 90 posto EtOH u vodi kao eluensa. 30-50 posto EtOH eluanata je koncentrirano i osušeno kako bi se dobila frakcija bogata PhG. UV spektrofotometrija pokazala je sadržaj PhG(feniletanoidni glikozid iz cistanhe) iznosio je 87,6 posto. Provjera ulja, surfaktanata i pomoćnih tenzida za ME. Provedeni su testovi topljivosti kako bi se odabrale odgovarajuće komponente za pripremu ME formulacije s visokim kapacitetom punjenja lijekom. U ovom procesu, višak PG je dodan u 4 ml svakog od sljedećih reagensa: IPM, tekući parafin, OA, Cremophor EL, Tween‑80, apsolutni etanol, propilen glikol, glicerin i PEG400 , odnosno. Nakon toga, dobivena smjesa je recipročno mućkana na 37°C tijekom 72 sata, nakon čega je slijedilo centrifugiranje na 12,830 xg tijekom 10 minuta. Nakon toga, talog je resuspendiran u metanolu, a PG je određen uporabom UV spektrofotometrije na 333 nm. Kao slijepa kontrola poslužile su odgovarajuće razrijeđene otopine ulja, tenzida i suotapala u metanolu. Konstrukcija faznog dijagrama. Kako bi se dobio raspon koncentracija komponenata za postojeću granicu mikroemulzije, konstruirani su pseudo ternarni fazni dijagrami pomoću metode titracije vode kao što je prethodno opisano (12). Trofazni dijagrami pripremljeni su s 1:3, 1:1 i 3:1 težinskim omjerima surfaktanta prema ko-tenzidu. Uljna faza i smjesa površinski aktivnih tvari pomiješane su u težinskim omjerima 1:9, 2:8, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 8:2 i 9:1. . Smjesa ulja i surfaktanta je homogeno pomiješana i razrijeđena kap po kap s pročišćenom vodom uz magnetsko miješanje (300 okretaja u minuti) na sobnoj temperaturi sve dok nije dobiven prozirni ME. Zabilježena je koncentracija komponenti kako bi se dovršio pseudo ternarni fazni dijagram. Na temelju ovih dijagrama odabrane su odgovarajuće koncentracije materijala za pripremu ME na bazi PG. Priprema ME i vodene otopine PG. Ukupno 5 ME (ME1-5) odabrano je prema faznim dijagramima s težinskim omjerom surfaktant: kosurfaktant 3:1 (Tablica I). Mikroemulzijski sustavi pripremljeni su miješanjem ulja sa smjesom surfaktanta i ko-tenzida, a voda je dodana precizno u uljne faze uz magnetsko miješanje (300 o/min) na 37˚C. Sustavi su uravnoteženi pomoću laganog magnetskog miješanja tijekom 30 minuta nakon čega je uslijedilo otapanje odgovarajuće količine PG pod ultrazvučnom obradom. Vodena otopina je pripravljena s istim sadržajem PG otopljenim u pročišćenoj vodi. Karakterizacija mikroemulzije. Prosječna veličina kapljica i indeks polidisperznosti ME procijenjeni su fotonskom korelacijskom spektroskopijom (Malvern Instruments, Ltd., Malvern, UK). Svi uzorci su razrijeđeni vodom u omjeru 1:5 i filtrirani kroz filter od 0,22 µm. Ispitivanje je provedeno u termostatskoj komori na 25˚C u tri primjerka. Morfologija PG mikroemulzija promatrana je pomoću transmisijske elektronske mikroskopije (JEM-100CXII; JEOL Ltd., Tokio, Japan). Ukratko, jedna kap razrijeđenog uzorka nanesena je na bakrenu rešetku obloženu filmom, nakon čega je uslijedilo bojanje jednom kapi 2-postotne vodene otopine fosfovolframove kiseline.
Prosječni promjeri kapljica mikroemulzija određeni su instrumentom fotonske korelacijske spektroskopije (BI{{0}}SM; Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, NY, SAD) na sobnoj temperaturi. Viskoznost ME vozila izmjerena je na 25˚C, pomoću digitalnog viskozimetra NDJ-8S (Shanghai Precision and Scientific Instrument Co., Ltd., Šangaj, Kina) s br. 1 rotor postavljen na 60 o/min. određivanje pH. pH vrijednosti ME-a određene su na 25˚C pomoću digitalnog acidimetra Phs‑3C (Shanghai REX Instruments Factory, Šangaj, Kina). Indeksi loma mjereni su termostatskim Abbe refraktometrom (Optical Instrument Factory, Shanghai, Kina). Priprema kožnih tkiva. Muški Kunming miševi težine 20 g kupljeni su od Eksperimentalnog životinjskog centra Medicinskog sveučilišta Xinjiang (Xinjiang, Kina). 10 miševa (starih 6 tjedana) podvrgnuto je prilagođenom hranjenju tijekom 1 tjedna ciklusom 12 h svjetlo/12 h tama, na sobnoj temperaturi (24±2˚C), s vlagom od 50±15 posto. Sve su životinje imale pristup standardnoj prehrani i vodi. Dlačice su uklonjene električnom mašinicom. Nakon terminalne anestezije s kloralhidratom (10 posto) putem supkutane injekcije, kožno tkivo je izrezano iz trbušne regije, a potkožno masno tkivo i vezivno tkivo su uklonjeni. Tkiva su stavljena u hladnjak na 4˚C preko noći. Protokol studije odobrio je Etički odbor Medicinskog sveučilišta Xinjiang (Xinjiang, Kina). Studija propusnosti in vitro. Pokusi prodiranja provedeni su kao što je prethodno opisano (12). Izrezana koža je stegnuta između donora i receptorske komore vertikalne difuzijske ćelije s efektivnom difuzijskom površinom od 2,8 cm2. Receptorna komora je napunjena svježom, normalnom fiziološkom otopinom. Difuzijska ćelija je održavana na 37˚C korištenjem recirkulacijske vodene kupelji, a otopina u receptorskim komorama je kontinuirano miješana na 200 okretaja u minuti. Nakon toga, testna formulacija (1,0 ml) je nježno stavljena u komoru za donore. Nakon toga, 3 ml otopine u receptorskoj komori je uklonjeno i zamijenjeno jednakim volumenom svježe fiziološke otopine u unaprijed određenim intervalima (0, 2, 4, 6, 8, 10 i 24 h). Uzorak dobiven iz receptorske komore korišten je za određivanje PG(feniletanoidni glikozid iz cistanhe)razine pomoću UV spektroskopije na valnoj duljini od 333 nm. Kumulativna količina PG koja je prodrla kroz izrezanu kožu miša izračunata je prema sljedećoj formuli:
Gdje je Qn bila akumulirana količina u određenom vremenu t, Cn je koncentracija lijeka u prijemnoj otopini u svakom vremenu uzorkovanja, Ci je koncentracija lijeka u uzorku, S je efektivno područje difuzije (S{{0 }}.8 cm2 ), a V0 i Vi volumeni otopine prijamnika odnosno uzorka. Kumulativna količina (Qn) PG(feniletanoidni glikozid iz cistanhe)propušten je nacrtan kao funkcija vremena (t) za svaku formulaciju. Stopa prodiranja PG u stabilnom stanju (Jss, µg/cm-2 /h-1) kroz kožu miša izračunata je iz nagiba linearnog dijela grafikona Qn u odnosu na vrijeme. Koeficijent propusnosti (Kp, cm/h) izračunat je prema sljedećoj formuli:
Gdje je Kp koeficijent propusnosti, Jss je efluks izračunat u stabilnom stanju, a C0predstavlja koncentraciju lijeka koja je ostala konstantna u nosaču. Studija zadržavanja kože. Sljedeći odjeljci detaljno prikazuju usporedbu ex vivo permeacijskog ponašanja, kumulativne količine, brzine propusnosti, koeficijenta propusnosti i karakteristika zadržavanja kože između optimiziranih ME formulacija (sadržaj PG, 2 posto, w/w) i vodene otopine. Na kraju eksperimenta prodiranja, rezidualna razina lijeka u koži određena je metodom homogenizacije. Nakon ispiranja fiziološkom otopinom, koža je izrezana na male dijelove i stavljena u staklenu cijev koja je sadržavala 3 ml metanola u ledenoj kupelji. Uzorak je homogeniziran brzinom od 12{10}}00 o/min. okretaja u minuti 2 minute, a zatim centrifugirano na 12,830 xg vodoravno 30 minuta na 25˚C. Supernatant je propušten kroz mikroporozni filter (0,45 µm) i PG(feniletanoidni glikozid iz cistanhe)razine u supernatantu određene su UV spektroskopijom na valnoj duljini od 333 nm. Studija stabilnosti. Fizička stabilnost ME s PG-om je ispitana putem bistrine, analize veličine čestica i razdvajanja faza, što je promatrano na 2-8˚C i na sobnoj temperaturi tijekom 3 mjeseca. Centrifugiranje je provedeno na 12,830 xg tijekom 30 minuta na 25˚C kako bi se procijenila fizička stabilnost ME. Razdvajanje faza i koncentracija PG ispitivani su mjesečno kako bi se procijenila optimalna temperatura skladištenja. Kemijska stabilnost procijenjena je na formulacijama napunjenim lijekom, pohranjenim na 2-8˚C i na sobnoj temperaturi, sa sadržajem PG-a određenim UV spektrofotometrijom na 333 nm. Test osjetljivosti kože. Testovi osjetljivosti kože provedeni su na kunićima (teži 2,02,5 kg) kako bi se procijenio iritirajući potencijal lokalne primjene razvijene formulacije kako je prethodno opisano (13). Devet holandskih zečeva (starih 16 tjedana; težine 2.0-2.5 kg; 5 mužjaka i 4 ženke) dobiveno je iz Centra za eksperimentalne životinje Medicinskog sveučilišta Xinjiang. Životinje su bile podvrgnute prilagođenom hranjenju tijekom 1 tjedna ciklusom 12 h svjetlo/12 h tama, na sobnoj temperaturi (24±2˚C), s vlagom od 50±15 posto. Sve su životinje imale pristup standardnoj prehrani i vodi. Za žrtvovanje je korištena zračna embolija. Protokoli korišteni u ovoj studiji odobrio je Etički odbor Medicinskog sveučilišta Xinjiang (Xinjiang, Kina). Dlake na leđima su uklonjene ~24 h prije primjene ME formulacija. Životinje su podijeljene u sljedeće skupine: Optimizirana ME skupina (n=3), s lokalnom primjenom optimiziranog ME koji sadrži 2 posto (w/w) PG; skupina PG fiziološke otopine (n=3), s lokalnom primjenom fiziološke otopine koja sadrži 2 posto (w/w) PG; i kontrolna skupina s fiziološkom otopinom (n=3), podvrgnuta lokalnoj primjeni fiziološke otopine. Primjena je obavljena dva puta dnevno tijekom 5 dana. Životinje su promatrane zbog bilo kakvih znakova svrbeža ili promjena na koži, uključujući eritem, papulu, perutanje i suhoću (14). Nakon povlačenja lijeka, promatranje za jednu ili višestruku primjenu je nastavljeno 3 dana. Rezultati iritacije testnog područja procijenjeni su procjenom opsega eritema i edema prema sljedećim kriterijima: 1, nema vidljive reakcije; 2, blaga reakcija; 3, umjerena reakcija i 4, teška reakcija (15,16). Konačno, ukupni rezultati iritacije za svako stanje izračunati su pomoću sljedeće jednadžbe:
Statistička analiza. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± standardna devijacija. Analiza podataka provedena je pomoću jednosmjerne analize varijance nakon koje je slijedio test najmanje značajne razlike. Podaci su analizirani korištenjem SPSS softvera verzije 19.0 (IBM SPSS, Armonk, NY, SAD). P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Rezultati i rasprava
Provjera ulja, surfaktanata i ko-tenzida za ME. PG(feniletanoidni glikozid iz cistanhe)bio je gotovo netopljiv u tekućem parafinu i oleinskoj kiselini, ali je uočena umjerena topljivost u IPM (Tablica II). IPM povećava koeficijent difuzije u koži i rezultira povećanjem koeficijenta propusnosti (17,18). Osim toga, IPM se obično odabire za pripremu ME zbog svojih dobro poznatih svojstava povećanja propusnosti i biokompatibilnosti. Odabir površinski aktivnih tvari ključan je za uspješnu formulaciju ME jer pridonosi smanjenju međupovršinske napetosti stvaranjem filma na granici ulja i vode (19). U ovoj studiji, PG je pokazao veću topljivost u Cremophor-EL (40,193 mg/ml; Tablica II) u usporedbi s Tweenom-80 (28,051 mg/ml; Tablica II). Stoga je CremophorEL odabran za upotrebu u daljnjim studijama zbog svog profila topljivosti i niske razine toksičnosti kao neionskog surfaktanta. Nadalje, njegova vodena otopina pokazala je dobru topljivost PG-a. Najveća topljivost PG među pomoćnim tenzidima uočena je u propilen glikolu (48,714 mg/ml; Tablica II). Osim toga, propilen glikol ima sposobnost stvaranja ME s IPM i CremophorEL. Uzeti zajedno, IPM, CremophorEL i propilen glikol korišteni su kao uljna faza, površinski aktivna tvar, odnosno pomoćna površinski aktivna tvar za formulaciju ME s PG-om. Konstrukcija pseudo‑ternarnih faznih dijagrama. U ovoj studiji konstruirani su fazni dijagrami za odabir raspona koncentracija komponenata za mikroemulzije, a označena područja označavaju čisto O/WME područje (slika 1). Prethodno je zabilježena bliska povezanost između učinka hidratacije stratum corneuma i dermalne permeacije (20), a termodinamička aktivnost lijekova u ME bila je značajna pokretačka snaga iza oslobađanja i prodiranja lijekova u kožu (20,21). ). Pokazalo se da je termodinamička aktivnost lijekova u ME s nižim udjelom smjese tenzida važna pokretačka snaga za oslobađanje i prodiranje lijeka u kožu (22,23).
The decreased concentration of surfactant in dispersed systems may also increase the rate of drug release and its permeation in the skin (24,25). Thus, the water content ranged between 50 and 70%, while that of the surfactant and cosurfactant ranged between 20 and 45%. The microemulsion domain was determined by visual inspection for clarity and fluidity. The rest of the region in the phase diagrams represents turbid and conventional emulsions based on visual observation (Fig. 1). No liquid crystalline structure was observed using the cross polarizer. The area of the O/W ME region was expanded following the increase of the Km value (Fig. 1). These findings were consistent with previous studies, which demonstrated that a higher level of surfactant reduces interfacial tension of the colloidal solution more effectively, thereby improving the fluidity of the interface and increasing the entropy of the system (21,24). Thus, it is reasonable to speculate that the effect of CremophorEL on ME regions depends on the other ME components, especially the cosurfactant. The combination of short to medium carbon chain length alcohols, including propylene glycol, with single-chain surfactants, may lower interfacial tension due to increased fluidity at the interface. Additionally, medium carbon chain length alcohols may induce elevation of miscibility of the aqueous and oily phases due to the partitioning behavior between the two phases. Finally, in the presence of a Km ratio of 3:1, the ratio of the surfactant mixture to oil was 1:9 or 2:8. MEs prepared with a ratio of surfactant mixture to oil >2:8 bile su zamućene i nestabilne (slika 2).
Konačni sastavi ME1-5 navedeni su u tablici I. Priprema ME i karakterizacija. Fizička svojstva ME1-5 navedena su u tablici III. Disperzni sustavi su makroskopski identični, homogeni i prozirni, bez precipitata. Srednje veličine kapljica ovih ME kretale su se između 30.56 i 79.21 nm (Slika 3; Tablica III), s vrijednostima indeksa polidisperznosti u rasponu između 0.187 i 0.321 (Tablica III). To je ukazivalo na uniformni ME s uskom distribucijom veličine. Osim toga, veličina kapljica se povećala proporcionalno sadržaju ulja, ali se smanjila s sadržajem mješavine površinski aktivnih tvari. Ovaj se fenomen može pripisati širenju ME uljne jezgre i visokoj koncentraciji surfaktanta koja snažno smanjuje međufaznu napetost ulje-voda kako bi se smanjila veličina kapljica. Nadalje, ME viskoznost je bila povišena kao rezultat povećane razine surfaktanta i smanjene količine vode. pH vrijednosti svih ME-a bile su unutar odgovarajućeg raspona od 5.0-7.5 (Tablica III) i stoga su bile kompatibilne s vrijednostima tkiva kože. Što se tiče fizičke stabilnosti, nije primijećeno odvajanje faza, lomljenje ili taloženje lijeka ni u jednom od testiranih ME, što ukazuje da su ME posjedovali zadovoljavajuću termodinamičku stabilnost u odnosu na centrifugiranje. Test topljivosti boje otkrio je da je boja topljiva u vodi (metiloranž) ravnomjerno raspoređena kroz ME sustav, što implicira da je formirani ME bio O/W tipa (podaci nisu prikazani). Mikrografije su otkrile odvojene pojedinačne kapljice ME5 sa sfernim obrisom (slika 4). Exvivo studija propusnosti kože. Profili propusnosti svih testiranih nosača pratili su kinetiku otpuštanja nultog reda (26,27), a ME5 je omogućio najveći transdermalni protok PG (86.795±0.23 µg/cm{{28 }} /h-1; slika 5; tablica III). U ovoj studiji utvrđeni su učinci sadržaja ulja i mješavine površinski aktivnih tvari na prodiranje PG-a kroz kožu. Rezultati su pokazali da surfaktanti poboljšavaju prodiranje kože povećavajući fluidnost membrane, solubilizaciju lijeka i ekstrakciju lipida iz stratum corneuma. Brzina propusnosti ME5 (86.795±0.23µg/cm-2 /h-1) značajno je povećana u usporedbi sa stopama propusnosti ME1 (69.57±{ {48}}.78, P=0.0094), ME2 (44.326±0.84, P{{50}} .0052), ME3 (79,859±0,12, P=0.039) i ME4 (58,332±0,39 µg/cm-2/h-1 , P=0.0063, sl. 5; tablica III) Ovo je bilo u skladu s rezultatima prethodne studije, u kojoj se termodinamička aktivnost ME lijeka može smanjiti s povećanjem razine surfaktanta (12,28 ). Viskoznost ME5 (30,43±0,12 mPa.s) bila je niža u usporedbi s drugim ME1 (80,51±0,87 mPa.s, P=0.0076), ME2 (47,52±0,54 mPa.s, P{{88 }}.0089), ME3 (60,49±1,34 mPa.s, P=0.0094) i ME4 (43,27±0,21 mPa.s, P=0.0059).
