Dio 1: Inhibitor NF-kB i agonist AMPK: Mrežno predviđanje i integracija multi-omika za izvođenje signalnih putova za akteozid protiv Alzheimerove bolesti
Mar 03, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com
Ying-Qi Li1†, Yi Chen1†, Si-Qi Jiang1 , Yuan-Yuan Shi2 , Xiao-Li Jiang1 , Shan-Shan Wu1 , Ping Zhou1 , Hui-Ying Wang1 , Ping Li1* i Fei Li1,2*
1 država Ključ Laboratorija od Prirodno Lijekovi, Kina Farmaceutski Sveučilište, Nanjing, Kina, 2 Koledž od Ljekarna,Medicinsko sveučilište Xinjiang, Urumqi, Kina
UVOD
Sa starenjem i brzim rastom stanovništva, broj slučajeva demencije u svijetu pokazuje trend rasta.Alzheimerova bolest(AD) je česta neurodegenerativna bolest praćena kognitivnim oštećenjem i diskinezijom (Perea i sur., 2020), što je najčešći tip demencije. Karakteriziran je teškim gubitkom neurona, senilnim plakovima i neurofibrilarnim čvorovima (Shiao et al., 2017.). Patogeneza AD(Alzheimerova bolest)je višedimenzionalan i povezan s neuroinflamacijom. Neuroupala je potaknuta aktivacijom glija stanica, što je usko povezano s pojavom i razvojem AD(Alzheimerova bolest)(Hanslik i Ulland, 2020; Linnerbauer i Rothhammer, 2020). Tijekom progresije i egzacerbacije neuroinflamacije, mikroglija se smatra ključnim faktorom.
Mikroglija su primarne imunološke stanice u središnjem živčanom sustavu, koje su usko povezane s kaskadom procesa kao što su razvoj mozga, održavanje živčanog okruženja, kao i odgovori na ozljede i popravke (Perea et al., 2020.). Štoviše, mikroglija se može stimulirati na M1 fenotip i povećati ekspresiju proinflamatornih citokina kada bolesti povezane s neuroinflamacijom kao što je AD(Alzheimerova bolest)(Tsukahara i sur., 2020.). Studije također pokazuju da je polarizacija na fenotip M1 često popraćena metaboličkim poremećajima (Li L. et al., 2020.), što dovodi do neravnoteže energetskog metabolizma i mitohondrijske disfunkcije (Agrawal i Jha, 2020.). Ove nepovoljne promjene dovode do neurodegeneracije, čak i AD(Alzheimerova bolest).
Akteozid(ACT), feniletanoidni glikozid, prvenstveno se dobiva izCistanche tubulosa. Sve više dokaza sugerira da ACT posjeduje brojne farmakološke aktivnosti, uključujući neuroprotektivne (Wei i sur., 2019), protuupalne (Lai i sur., 2019) i antioksidativne (Ji i sur., 2019) učinke. Konkretno, dokazano je da ACT može poboljšati oštećenje učenja i pamćenja, kao i poboljšati energetski metabolizam u štakora izazvanih streptozotocinom (Chen J. i sur., 2020.). Osim toga, također može inhibirati apoptotičku smrt neurona i oštećenje mitohondrija u eksperimentalnih miševa s autoimunim encefalomijelitisom (Li W. et al., 2020.). Međutim, rijetko se izvještava o učinku ACT-a na polarizaciju M1/M2 mikroglije i njegovom mehanizmu. Do sada su mehanizmi poput popravka funkcije mitohondrija i regulacije staničnog metabolizma nejasni i potrebna su daljnja znanstvena istraživanja kako bi se razjasnio točan mehanizam.
Svrha ovog izvješća je istražiti terapijsku učinkovitost ACT-a kao i temeljni molekularni mehanizam ACT-a na AD(Alzheimerova bolest). Ovdje je uspostavljena sustavna in silico metoda identifikacije cilja lijeka na temelju konsolidiranih baza podataka. Dalje istražujemo moguće mehanizme ACT-a na molekularnoj biološkoj razini integracijom RNA-sekvenciranja (RNA-seq) s metabolomičkom metodom i tehnikama molekularne biologije. Kombinacija strategije in silico, in vivo i in vitro sustavnog probira pruža novi protokol za objektivno otkrivanje višeciljnih spojeva tradicionalne kineske medicine.
Cistanche tubulosa može liječitiAlzheimerova bolest
MATERIJALI I METODE
Mrežno modeliranje
Četiri online platforme kombinirane su za predviđanje i otkrivanje ciljeva ACT-a, naime GeneCards1, pristup ansambla sličnosti (SEA2), SwissTargetPrediction3 i PharmMapper4. Sve genske asocijacije AD(Alzheimerova bolest)neovisno su prikupljeni s DisGeNET5 i GeneCards. Nakon analize interakcije meta-cilja koju je provela baza podataka String6, mreža je dodatno integrirana softverom Cytoscape (verzija 3.8.2). Analiza obogaćivanja GO i KEGG-a provedena je na DAVID bazi podataka7 kako bi se označila i rudarila mreža.
Životinje i grupiranje modela
Divlji tip zebrice (AB soj, star 4 mjeseca) odabran je u ovoj studiji (Nanjing Qi Wu Biotechnology Co., Ltd.). Održavane su u ciklusu svjetlo/tama od 14/10-h na 28oC, prema prethodnoj metodi (Li YQ et al., 2020.). Svi pokusi na zebricama provedeni su pod nadzorom Odbora za etiku životinja Kineskog farmaceutskog sveučilišta.
Ličinke zebrice podijeljene su u šest skupina i tretirane od 3 dana nakon oplodnje (dpf) do 7 dpf: kontrolna skupina, modelna skupina, model plus donepezil hidroklorid (DPZ, Shanghai Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd.) skupina, i model plus ACT (HPLC čistoća 98 posto, Baoji Herbest Bio-Tech Co., Ltd.) grupe. Kontrolna skupina je držana u mediju s 0.2 posto DMSO, a model skupina je tretirana sa 150 uM AlCl3 (pH 5,8). Skupina model plus DPZ zajedno je tretirana s AlCl3 i 8 uM DPZ. Skupine modela plus ACT zajedno su tretirane s AlCl3 i različitim koncentracijama ACT (200, 100 i 50 uM).
Analiza ponašanja
Kretanje ličinki zebrice zabilježeno je ViewPointovim analizatorom ponašanja (Zebralab, 2018., ViewPoint Life Sciences Co., Ltd.) na 28°C. Ukratko, parametri ponašanja i obrada rezultata bili su u skladu s metodom koju smo ranije uspostavili (Li YQ et al., 2020.). Ovdje su prosječna brzina (AS), promjena brzine (AS), stopa oporavka od diskinezije (DRR) i učinkovitost odgovora (RE, posto) odabrani za procjenu oporavka od diskinezije kod zebrica.
Određivanje aktivnosti acetilkolinesteraze i holin acetiltransferaze
Nakon tretiranja od 3 do 7 dpf, ličinke zebrice sakupljene su za mjerenje aktivnosti acetilkolinesteraze (AChE) i kolin acetiltransferaze (ChAT). Na temelju protokola proizvođača, aktivnost je otkrivena setovima za enzimski imunoanalizu (ELISA) (MLBIO Biotechnology Co., Ltd., Šangaj, Kina).
Stanične kulture i tretmani
Stanična linija BV-2 kupljena je od American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, Sjedinjene Države). Uzgajane su u DMEM (KeyGen Biotech Co., Ltd., Nanjing, Kina). Medij je dopunjen s 10 posto FBS-a (Gibco, Grand Island, NY, Sjedinjene Države),
100 U/ml penicilina i 100 mg/ml streptomicina, uz 95 posto zraka/5 posto CO2 na 37oC. BV-2 stanice su inkubirane s ACT (50, 25 i 12,5 uM) ili stimulirane s lipopolisaharidom (LPS, 1 ug/ml; Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Sjedinjene Države) tijekom 24 sata. Stanice su promatrane pod invertnim mikroskopom (Nikon ECLIPSE Ti2, Japan).
Ispitivanje vitalnosti stanica
Komplet za brojanje stanica-8 (CCK-8) test (JianCheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina) korišten je za procjenu održivosti stanica. Ukratko, apsorbancija je izmjerena na 450 nm čitačem mikropločica (Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, Sjedinjene Države).
Ispitivanje proizvodnje dušikovog oksida
Dušikov oksid (NO) određen je mjerenjem razine nitrita u supernatantu kulture BV-2 pomoću Griessovog reagensa. Ukratko, medij (100 ul) je prebačen u novu 96-ploču s jažicama, isti volumen Griessovog reagensa dodan je u svaku jažicu i reagirao je 15 minuta u mraku. Apsorpcija na 540 nm određena je čitačem mikropločica.
Razine upalnih citokina u supernatantu
Koncentracije TNF-a, IL-1 i IL-10 u supernatantu BV-2 stanica određene su pomoću ELISA kitova prema uputama proizvođača.
Određivanje staničnog metabolizma HPLC-Q-TOF-MS analizom
BV-2 stanice su nasađene u posudu sa šest jažica zasebno (n=6/skupini). Nakon tretmana, medij je uklonjen, a stanice su isprane tri puta s hladnim PBS-om. Zatim su odmah bili izloženi tekućem dušiku kako bi se suzbio metabolizam stanica. Stanice su sakupljene s 80 posto hladnim metanolom. Kako bi se olakšalo taloženje proteina, stanice su snažno vrtložene 1 minutu i centrifugirane na 13,000 okretaja u minuti (15 minuta, 4oC). Stanična suspenzija je osušena pod strujom dušika. Osušeni ostatak je rekonstituiran u 150 ul prethodno ohlađenog 25 postotnog acetonitrila. Kako bi se osigurala stabilnost i točnost analize sekvence, svaki uzorak stanica s jednakim volumenom (10 ul) kombiniran je kao uzorci za kontrolu kvalitete. Tijekom otkrivanja metabolita, ti su uzorci ubrizgani nakon svakih šest uzoraka kako bi se potvrdila njihova stabilnost. Alikvot 1-ul ubrizgan je za HPLC-Q-TOF-MS.
Analiza je provedena na Agilent 1290 HPLC sustavu
povezan s masenim spektrometrom Agilent 6530 Quadrupole Time-of-Flight (Q-TOF) (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Sjedinjene Države). Odvajanje je provedeno na ACQUITY UPLC BEH C18 koloni (2,1 min 100 mm, 1,7 um). Mobilna faza se sastojala od 0,1 posto mravlja kiselina-voda (v/v; A) i acetonitrila (B).
Brzina protoka je postavljena na {{0}}.4 ml/min sa sljedećim optimalnim uvjetima gradijenta eluacije: 0 do 2 min, 5 posto B; 2 do 20 min, 5 do 95 posto B (način pozitivnih iona); 0 do 2 min, 5 posto B; 2 do 20 min, 5 do 95 posto B (način negativnih iona). Radni parametri masenog spektrometra postavljeni su kako slijedi: temperatura plina, 320oC; plin za sušenje, 10 L/min; nebulizator, 35 psi; VCap, 4, 000 V; fragment, 120 V.
podaci su provedeni s MetaboAnalyst8. U kombinaciji s literaturom, različiti metaboliti (VIP > 1, t-test p < 0.05)="" identificirani="" su="" na="" hmdb9.="" konačno,="" analiza="" puta="" provedena="" je="" pomoću="">
Mjerenje potencijala mitohondrijske membrane
Potencijal mitohondrijske membrane (MMP) detektiran je pomoću fluorescentne sonde JC-1 (Beyotime, Kina) u skladu s uputama proizvođača. Ukratko, stanice iz različitih skupina su isprane s PBS-om i inkubirane s JC-1 otopinom za bojenje 20 minuta na 37°C. Nakon bojenja, stanice su isprane dva puta korištenjem pufera za bojenje. Zatim su fluorescentni signali otkriveni protočnom citometrijom (BD Accuri C6).
Mjerenje mitohondrijskog adenozin 5f-trifosfata
Koncentracija adenozin 5/-trifosfata (ATP) u mitohondrijima detektirana je ATP Assay Kitom (Beyotime, Kina). Ukratko, medij kulture BV-2 stanica iz različitih skupina je odbačen, a stanice su homogenizirane puferom za lizu na ledu. Supernatant dobiven nakon centrifugiranja (12,000 g,
5 min) korišten je za određivanje koncentracije ATP. Svjetljenje je detektirano EnVision Multimode Microplate Reader (PerkinElmer).
Upravljanje od(Alzheimerova bolest)
Mjerenje razine intracelularnih reaktivnih vrsta kisika
Komplet za ispitivanje reaktivnih kisikovih vrsta (ROS) (Beyotime, Kina) korišten je za mjerenje razine ROS-a. Stanice iz različitih skupina su inkubirane s DCFH-DA (10 uM) 20 minuta na 37°C. Nakon punjenja sonde, stanice su isprane tri puta s DMEM. Zatim su fluorescentni signali otkriveni protočnom citometrijom (BD Accuri C6).
Transmisijska elektronska mikroskopija
BV-2 stanice su nasađene u posudu sa šest jažica. Medij je uklonjen i 1 ml 2,5 posto glutaraldehida je brzo dodan u svaku jažicu. Zatim su stanice sakupljene i fiksirane s novim 2,5 postotnim glutaraldehidom na 4°C preko noći. Nakon fiksacije, dehidracije i ugradnje, stanice su promatrane transmisijskim elektronskim mikroskopom HT7800 (Hitachi, Tokio, Japan).
RNA-Seq i bioinformatska analiza podataka
Ukupna RNA iz BV{{{{10}}}} stanica ekstrahirana je korištenjem Trizol reagensa (Vazyme Biotech, Kina). Svi analitički uzorci poslani su u Majorbio (Shanghai Majorbio Bio-pharm Technology Co., Ltd.) za analizu RNA sekvence. Podaci su analizirani na online platformi Majorbio Cloud Platform10. RSEM11 je korišten za kvantificiranje obilja gena. U biti, diferencijalni izraz. Neobrađeni podaci su rađeni pod MassHunter Workstation softverom verzije B.07.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Sjedinjene Države). Neobrađeni podaci prethodno su obrađeni na platformi XCMS. Analiza glavnih komponenti (PCA) i djelomična diskriminantna analiza najmanjih kvadrata (PLS-DA) normalizirane analize provedene su pomoću DESeq2/DEGseq/EdgeR s Q vrijednošću 0,05; DEG s|log2FC| > 1 i Q vrijednost 0,05 (DESeq2 ili EdgeR)/Q vrijednost 0,001 (DEGseq) smatrali su se značajno različito izraženim genima. Osim toga, provedena je analiza funkcionalnog obogaćivanja uključujući GO i KEGG kako bi se identificiralo koji su DEG-ovi značajno obogaćeni u terminima i putevima GO na Bonferroni-korigiranoj p-vrijednosti 0,05 u usporedbi s pozadinom cijelog transkriptoma. Izvorni podaci sekvence predani su u bazu podataka NCBI Sequence Read Archive.
Kvantitativna lančana reakcija polimeraze u stvarnom vremenu
Ukupna RNA BV{0}} stanica sakupljena je pomoću RNA-easyTM Isolation Reagensa (Vazyme Biotech, Kina), a reakcija reverzne transkripcije provedena je s FastKing-RT SuperMix (TIANGEN Biotech, Kina). Reakcije su provedene prema protokolu proizvođača. cDNA je podvrgnuta kvantitativnom testu lančane reakcije polimeraze u stvarnom vremenu (qRT-PCR) sa specifičnim početnicama i TransStart TOP Green qPCR SuperMix (TransGen Biotech, Kina). Početnice su navedene u Dodatnoj tablici 1, a -aktin je korišten kao interna kontrola. Za kvantitativnu analizu korištena je 2-AA CT metoda.
Western Blot analiza
BV-2 stanice su lizirane RIPA puferom za lizu (KeyGen Biotech Co., Ltd., Nanjing, Kina) koji je sadržavao 1 posto koktela inhibitora proteaze (Thermo Fisher) kako bi se dobio ukupni protein. Proteini su odvojeni pomoću 10 posto SDS-PAGE i prebačeni na NC membrane. Nakon blokiranja s 5 posto obranog mlijeka/BSA, membrane su inkubirane s AMPKa (Proteintech), p-AMPKa (Affinity Biosciences), PGC-1a (Proteintech), NF-kB (Proteintech), p-NF- kB (ABclonal), ili GAPDH (ABclonal) antitijela u 5 postotnoj TBST na 4oC preko noći. Membrane su inkubirane sa sekundarnim antitijelom konjugiranim s peroksidazom hrena (ABclonal) na sobnoj temperaturi 1 h. High-sig ECL Western blotting supstrat (Tanon, Kina), Gel imaging sustav (Tanon, Kina) i ImageJ softver korišteni su za vizualizaciju i kvantitaciju.
Molekularno spajanje
Analiza molekularnog spajanja provedena je pomoću softvera Autodock (verzija 4.2). Afinitet između ACT-a i proteina promatran je softverom AutodockTools. Trodimenzionalne (3D) proteinske strukture AMPKa (PDB ID: 5g5j) i NF-kB (PDB ID: 4q3j) preuzete su iz Protein Data Bank12.
Statistička analiza
Svi podaci su izraženi kao srednja standardna devijacija i analizirani softverom GraphPad Prism (verzija 8.0.1). Razlike između skupina analizirane su jednosmjernom analizom varijance (ANOVA), nakon čega je slijedio Tukeyjev test višestruke usporedbe. p < 0.05="" smatra="" se="" statistički="">
Cistanche dodatak za Alzheimerovu bolest
REZULTATI
ACT-AD cilja mrežnu interakciju i predviđanje puta
Konsolidacijom više baza podataka prikupljena su 253 cilja ACT-a, dok je prikupljeno ukupno 1697 ciljeva koji se odnose na AD. Nakon mapiranja ciljne mreže, ukupno 70 ciljeva apsorbirano je u ACT-AD ciljnu interakcijsku mrežu (Slika 1A). Analiza obogaćivanja KEGG-om implicirala je da bi ACT mogao imati učinak širokog spektra i višestrukih ciljeva (Slika 1B). Također sugerira da ACT ima više putova, ciljnih točaka i elemenata u AD(Alzheimerova bolest)liječenje. Klasificirajte ove putove kako biste dobili točnu interpretaciju mehanizama. ACT bi mogao uglavnom korelirati s prijenosom signala, endokrinim sustavom, imunološkim sustavom te rastom i smrću stanica kako bi igrao konfrontirajuću ulogu protiv AD-a(Alzheimerova bolest)(Slika 1C). Vrijedno je napomenuti da je velika većina ovih putova povezana s upalnom reakcijom. Nagađa se da bi protuupalno djelovanje ACT-a moglo biti neodvojivi dio njegove konfrontacijske uloge protiv AD-a.(Alzheimerova bolest).
ACT je ublažio diskineziju i poboljšao funkciju kolinergičkog sustava kod AD(Alzheimerova bolest)Larve zebrice
Za provjeru mrežnog modela, AlCl3-induciran AD(Alzheimerova bolest)model u ličinkama zebrice korišten je za demonstraciju učinka ACT-a. Promatrano je kretanje ličinki zebrice unutar ciklusa svjetlo/tama i zabilježeni su njihovi plivački tragovi (Slika 1D). Rezultati su pokazali da je ACT učinkovito povećao AS i AS zebrice, a sinergistički učinak se povećavao s povećanjem doza (Slika 1E). DRR i RE otkrili su intuitivniju usporedbu ACT i DPZ (Slika 1F). Sukladno tome, ACT je ublažio diskineziju, pokazujući slične učinke kao DPZ.
Općenito se slaže da kolinergički sustav igra važnu ulogu u procesima učenja i pamćenja. Stoga su aktivnosti AChE i ChAT korištene za otkrivanje učinka ACT-a. Izloženost AlCl3 u zebricama prikazana je kolinergičkom promjenom mozga (Slika 1G). Bilo je značajno da je liječenje ACT-om potisnulo aktivnost AChE. Dodatno, aktivnost ChAT-a pokazala je smanjenje nakon tretmana ACT-om. Stoga je ACT pokazao dubok utjecaj na AlCl3-inducirani AD(Alzheimerova bolest)ličinke zebrice.
ACT je potisnuo M1 polarizaciju i pospješio M2 polarizaciju u BV-2 stanicama izazvanim LPS-om
Kako bi se dodatno potvrdila mreža, protuupalni učinak ACT-a proučavan je in vitro pomoću BV-2 mikroglijalnih stanica. Nakon tretmana LPS-om tijekom 24 sata, vitalnost BV-2 stanica se značajno smanjila. Srećom, ACT je povećao vitalnost stanica BV-2 induciranih LPS-om (Slika 2A). Osim toga, promatrana je morfologija BV-2 stanica. Nakon 24 sata stimulacije LPS-om, pokazalo se da su BV-2 stanice prošle M1 stanje polarizacije. Morfološke promjene su spriječene ACT ko-tretmanom (Slika 2B).
Štoviše, rezultati su pokazali da su, za razliku od BV-2 stanica stimuliranih LPS-om, BV-2 stanice tretirane zajedno s ACT-om značajno potisnule TNF-a, IL-1 i NO (Slika 2C) ekspresije u staničnom supernatantu. To su klasični proinflamatorni citokini kao pokazatelji polarizacije M1 mikroglije. Slično rezultatima ELISA-e, rezultati qPCR-a otkrili su da TNF-a, sintaza dušikovog oksida (iNOS),
Ekspresije IL-1 i CD86 mRNA bile su značajno inhibirane liječenjem ACT-om u usporedbi s LPS grupom (Slika 2D).
Nadalje, izmjerili smo razinu polarizacije M2 mikroglije pomoću ELISA (Slika 2C) i qPCR (Slika 2E), a rezultati su pokazali da je ACT značajno povećao razine ekspresije markera povezanih s M2 mikroglijom (IL-10, CD206, TGF- i Arg-1). Jednom riječju, ovi rezultati su pokazali da je ACT potisnuo M1 polarizaciju mikroglije i promovirao M2 fenotip.
ACT regulirana M1/M2 polarizacija preko inhibicije NF-kB puta
Transkriptomsku analizu proveo je RNA-seq kako bi se istražio mehanizam ACT-a u BV-2 stanicama s ukupne razine. PCA je pokazao da se kontrolne, LPS i ACT skupine mogu dobro razlikovati (Slika 3A). Otkrio je 899 različito izraženih gena (DEG) između kontrolne skupine i LPS skupine, te 49 DEG između LPS skupine i ACT-a.
skupinu (Slika 3B). Dosljedno, GO (Slika 3C) i KEGG analiza obogaćenja (Slika 3D) otkrile su da je učinak ACT-a uključen u NF-kB put. Skup gena povezanih s NF-kB putem dodatno je potvrđen, a LPS je sigurno utjecao na njihovu homeostazu. Kao što se očekivalo, ACT je značajno utjecao na njihovu ekspresiju (Slika 3E).
NF-kB put je klasični put za regulaciju napredovanja upale, što u konačnici rezultira otpuštanjem proinflamatornih čimbenika. Kako bi se dobila mehanička podrška, ključni protein NF-kB puta je procijenjen Western blotom. LPS stimulacija dovela je do aktivacije NF-kB, povezanog s promicanjem M1 polarizacije. U skladu s analizom RNA-seq, ACT je inhibirao fosforilaciju NF-kB stimuliranu LPS-om (Slika 3F). Stoga ACT može ublažiti polarizaciju M1 izazvanu LPS-om putem puta NF-kB u stanicama BV-2.
ACT oslabio biosintezu arginina, kao i biosintezu pantotenata i CoA
Mrežno predviđanje ACT-a otkrilo je da je povezan s metabolizmom arginina (Arg) i prolina (Slika 1B). RNA-seq je pokazao da putovi na koje utječe ACT također uključuju biosintezu Arg kao i biosintezu pantotenata i CoA (Slika 3D). Pretpostavlja se da su poremećaji metabolizma BV-2 stanica inducirani LPS stimulacijom povezani s M1 polarizacijom (Orihuela i sur., 2016.). Tako,
neciljani stanični metabolom pomoću HPLC-Q-TOF-MS korišten je za identifikaciju učinka ACT-a na stanični metabolizam. PCA i PLS-DA (Slika 3G) pokazuju da se kontrolne, LPS i ACT skupine mogu dobro razlikovati na temelju unutarstaničnih metabolita. Razine različitih metabolita u BV-2 stanicama izazvanim LPS-om promijenjene su nakon tretmana ACT-om (Slika 3H). U usporedbi s kontrolnom skupinom, bilo je 11 metabolita koji su se značajno promijenili u LPS skupini (Dodatna tablica 2), dok je 14 metabolita bilo jasno promijenjeno nakon liječenja ACT-om (Dodatna tablica 3), uključujući 11 metaboličkih putova (Slika 3I). Učinak ACT-a uglavnom se sastojao od regulacije metabolizma aminokiselina, metabolizma nukleotida, energetskog metabolizma i metabolizma kofaktora i vitamina. Zanimljivo je da su metabolički putovi dobiveni metabolomom bili u skladu s predviđanjem mreže i RNA-seq, uključujući biosintezu Arg kao i biosintezu pantotenata i CoA. Gore navedeno je pokazalo da ACT može regulirati biosintezu Arg kao i biosintezu pantotenata i CoA u BV- 2 stanicama stimuliranim LPS-om.
Ekstrakt cistanke protivAlzheimerova bolest
Kliknite ovdje za 2. dio
