Sažetak

Cistanche tubulosaje dragocjena tonična biljka koja se široko primjenjuje u tradicionalnoj kineskoj medicini. Feniletanoidni glikozidi predstavljeni ehinakozidom i akteozidom su njegove osnovne bioaktivne tvari. Ovo istraživanje ima za cilj optimizirati suvremene parametre obrade zaCistanche tubulosadecoction komadića za poboljšanje prinosa echinacoside i acteozida, i dalje istražiti njegov antioksidativni stres i protuupalni mehanizam na staničnoj razini.

Provedeni su eksperimenti s jednim faktorom, nakon čega je uslijedila optimizacija površine odziva Box-Behnken s debljinom kriške, vremenom kuhanja na pari i temperaturom sušenja kao čimbenicima utjecaja. Tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti (HPLC) usvojena je za otkrivanje sadržaja dva spoja markera. Model ozljede makrofaga RAW264.7 izazvan LPS-om konstruiran je za procjenu farmakoloških aktivnosti. Određivani su reaktivni kisikovi spojevi (ROS), dušikov oksid (NO), malondialdehid (MDA), aktivnosti antioksidativnih enzima uključujući sadržaj SOD, CAT, LDH i glutationa (GSH). ELISA je korištena za testiranje razine izlučivanja proupalnih citokina TNF‑, IL‑1 i IL‑6. Western blot test je proveden kako bi se analizirao status fosforilacije ključnih proteina u p38/AKT/JNK/NF‑κB signalnom putu.

Optimalni uvjeti obrade bili su debljina kriške od 0,6 cm, vrijeme kuhanja na pari od 6 minuta i temperatura sušenja od 57 stupnjeva. Pod ovim uvjetima, sadržaj akteozida dosegnuo je 7,25 %, a ehinakozida 31,62 %. Ekstrakti iz optimiziranih komada dekokcija mogli bi značajno smanjiti prekomjernu proizvodnju unutarstaničnih ROS, NO i MDA u stanicama RAW264.7 stimuliranim LPS-om. Pojačao je aktivnosti SOD, CAT, LDH i povećao unutarstaničnu razinu GSH, dok je značajno inhibirao oslobađanje TNF-a, IL-1 i IL-6. Rezultati Western-blota pokazali su da je ekstrakt smanjio omjer fosforilacije p-p38/p38, p-AKT/AKT, p-JNK/JNK i p-NF-κB/NF-κB.

Optimizirana tehnologija obrade pare-sušenja može učinkovito povećati stopu oporavka glavnih feniletanoidnih glikozidaCistanche tubulosa. Komadići dekokcije pokazuju antioksidativne i protuupalne učinke protiv oštećenja stanica izazvanih LPS-om inhibicijom p38/AKT/JNK/NF‑κB signalnog puta. Ova studija daje praktične tehničke parametre za standardiziranu industrijsku preraduCistanche tubulosa, i nudi eksperimentalne dokaze za razvoj funkcionalne hrane i nutricionističkih proizvoda izvedenih iz ovog biljnog izvora.

Ključne riječi: Cistanche tubulosa; tehnologija obrade decoction-piece; akteozid; ehinakozid; antioksidativni stres; RAW264.7 makrofag; p38/AKT/JNK/NF‑κB put

1. Uvod

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight pripada obitelji Orobanchaceae, a njen ljekoviti dio je osušena mesnata stabljika s ljuskastim listovima. U Kini se ova biljka uglavnom sadi u sušnim područjima na sjeverozapadu, s najvećim područjem sadnje u južnom Xinjiangu. Kao dobro poznati tonik biljni lijek, djeluje na tonificiranje bubrežnog janga, obnavljanje esencije i krvi te vlaženje crijeva za ublažavanje zatvora. Klinički se koristi za liječenje nedostatka yanga bubrega, nedostatka esencijalne krvi, neplodnosti, bolova i slabosti u struku i koljenima, kao i zatvor suhoće crijeva.

Feniletanoidni glikozidi, uglavnom ehinakozid i akteozid, primarne su aktivne komponenteCistanche tubulosa. Prema zahtjevima Kineske farmakopeje, ukupni sadržaj ehinakozida i akteozida u kvalificiranim sirovinama za lijekove ne smije biti niži od 1,50 %, što služi kao kritični pokazatelj ocjene kvalitete. Tradicionalni pristupi obradi zaCistanche tubulosauglavnom usvajaju metode namakanja-vlaženja, rezanja-sušenja ili kuhanja vina na pari. Mnoštvo studija usmjereno je na poboljšanje prinosa aktivne komponente, dok su istraživanja koja kombiniraju optimizaciju tehnologije obrade s verifikacijom biološke aktivnosti nedostatna.

Oksidativni stres djeluje kao zajednička patološka osnova za brojne metaboličke i upalne bolesti. Postojeća istraživanja su dokazala da ukupni glikozidi ekstrahirani izCistanche tubulosamože suzbiti upalni odgovor i aktivirati put Nrf2/HO‑1 za ublažavanje ozljede jetre kod životinja s sepsom. Frakcije lignan glikozida iz ove biljke mogu ublažiti upalu makrofaga reguliranjem PI3K/AKT signalizacije. Unatoč tome, farmakološka svojstva moderno prerađenih komada dekokcija i njihov temeljni molekularni mehanizam još uvijek zahtijevaju daljnja istraživanja.

U ovoj studiji, Box-Behnken dizajn površine odziva primijenjen je na temelju jednofaktorskih testova, uzimajući debljinu kriški, vrijeme kuhanja na pari i temperaturu sušenja kao varijable za optimiziranje radnog tijeka obrade. Nakon dobivanja optimalnih tehničkih parametara, uspostavljen je stanični model oksidativnog oštećenja izazvan LPS-om RAW264.7 kako bi se procijenio antioksidativni stres i protuupalni kapacitet te secirao relevantni signalni mehanizam. Ovaj rad namjerava osigurati stabilne i operativne parametre obrade za pilot proizvodnju i postaviti eksperimentalne temelje za sveobuhvatno korištenjeCistanche tubulosasredstva.

2. Materijali i metode

2.1 Biljni materijal, reagensi i instrumenti

Svježe mesnate stabljikeCistanche tubulosaubrani su u jesen iz Hotana, Xinjiang. RAW264.7 mišje monocitno-makrofagne leukemijske stanice kupljene su od Procell Life Science & Technology Co., Ltd (Wuhan, Kina).

Acetonitril i metanol HPLC kvalitete dobiveni su od tvrtke Merck. Referentne standarde ehinakozida (veće ili jednako 98 %) i akteozida (veće ili jednako 98 %) isporučio je Pekinški institut za mjeriteljstvo North Weiye. Dimetil sulfoksid (DMSO) je kupljen od Sigma-Aldrich. DMEM medij s visokim sadržajem glukoze, fetalni goveđi serum (FBS), otopina dvostrukih protutijela na penicilin-streptomicin, kit za kvantifikaciju BCA proteina, kompleti za analizu NO, MDA, SOD, CAT, GSH i LDH, lipopolisaharid (LPS), MTT reagens i kompleti ELISA za upalne citokine bili su komercijalni proizvodi.

Eksperimentalni instrumenti uključivali su tekućinski kromatograf visoke učinkovitosti Shimadzu, rotacijski isparivač, raspršivač kineskog bilja, termostatsku pećnicu za brzo sušenje, kuhalo na paru, čitač mikroploča pune valne duljine, elektroničku analitičku vagu, rashladnu centrifugu, biosigurnosni ormar i invertni optički mikroskop.

2.2 Eksperiment obrade s jednim faktorom

svježeCistanche tubulosamesnate stabljike izrezane su na kriške debljine 0,2 cm, 0,4 cm, 0,6 cm, 0,8 cm, 1,0 cm i 1,2 cm. Kriške su kuhane na pari 3 minute, 6 minuta, 9 minuta, 12 minuta, 15 minuta, 18 minuta i 21 minutu, redom, i osušene pod različitim temperaturnim gradijentima uključujući sobnu temperaturu (25 stupnjeva), 40 stupnjeva, 50 stupnjeva, 60 stupnjeva, 70 stupnjeva i 80 stupnjeva. Osušeni uzorci decoction-a su smrvljeni i prosijani kroz sito od 40 mesha za kasniju detekciju. Kombinirana formula za bodovanje usvojena je za sveobuhvatnu procjenu: Kompozitni rezultat=sadržaj ehinakozida × 50 % + sadržaj akteozida × 50 %.

2.3 HPLC određivanje akteozida i ehinakozida

Priprema otopine uzorka: točno izvažite 1,0 g uzorka praha, dodajte 100 mL 50 % otopine metanola. Nakon 30-minutnog namakanja, provedena je ultrazvučna ekstrakcija tijekom 40 minuta. Gubitak težine nadopunjen je 50 % metanolom nakon hlađenja. Supernatant je filtriran mikroporoznom membranom od 0,22 µm prije HPLC injekcije.

Mješovita referentna standardna otopina akteozida i ehinakozida pripremljena je s 50 % metanola i razrijeđena u serijskim koncentracijama za iscrtavanje standardne krivulje. Kromatografski uvjeti: COSMOSIL C18 kromatografska kolona; sustav mobilne faze sastojao se od 0,1 % vodene otopine fosforne kiseline (A) i acetonitrila (B); valna duljina detekcije postavljena je na 330 nm; temperatura kolone 35 stupnjeva; brzina protoka 1 mL/min. Za kvantitativno izračunavanje ciljnih spojeva korištena je metoda vanjskog standarda.

2.4 Eksperimentalni dizajn Box-Behnkenove površine odziva

Prema rezultatima eksperimenta s jednim faktorom, debljina kriške (X₁), vrijeme kuhanja na pari (X₂) i temperatura sušenja (X₃) odabrani su kao neovisne varijable. Sadržaj akteozida (Y₁, %) i sadržaj ehinakozida (Y₂, %) poslužili su kao vrijednosti odgovora. Softver Design-Expert 13.0 korišten je za uspostavljanje Box-Behnken eksperimentalne sheme s tri faktora i tri razine s ukupno 17 grupa testova. Prilagodba modela, analiza varijance i predviđanje parametara dovršeni su softverom. Praktični verifikacijski pokusi provedeni su u tri primjerka nakon prilagođavanja teoretskih optimalnih parametara kako bi odgovarali stvarnoj proizvodnoj operaciji.

2.5 Kultura stanica i priprema uzorka

Uzorak dekokcije dobiven pod optimiziranim uvjetima obrade pripremljen je u prah ekstrakta. Prah je otopljen u DMSO i dalje razrijeđen s potpunim DMEM medijem koji je sadržavao 10 % FBS i 1 % penicilin-streptomicina za stanične eksperimente. Stanice RAW264.7 uzgajane su u vlažnom inkubatoru na 37 stupnjeva s 5 % CO2.

2.6 MTT test za preživljavanje stanica

Stanična suspenzija inokulirana je u ploče s 96 jažica pri gustoći stanica od 8 × 10⁴ stanica/mL. Skupine su postavljene kao kontrolna skupina za otapalo (0,1 % DMSO), LPS modelna skupina (1 ug/mL LPS) i skupine s više koncentracijaCistanche tubulosaekstrakt (3,125, 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200, 400 ug/mL). Nakon 2-satne predinkubacije uzoraka, LPS s konačnom koncentracijom od 1 ug/mL dodan je osim jažica s kontrolom otapala i inkubiran još 24 sata. Otopina MTT (5 mg/mL) dodana je tijekom 4-satne reakcije. Nakon uklanjanja supernatanta, dodan je DMSO da se otopi kristal formazana. Vrijednost apsorpcije pri 490 nm detektirana je čitačem mikropločica kako bi se izračunala vitalnost stanica. Za naknadna funkcionalna ispitivanja odabran je siguran raspon koncentracija.

2.7 Intracelularno mjerenje ROS-a

Stanice RAW264.7 nasađene su u ploče sa 6 jažica u gustoći od 4 × 10⁵ stanica po jažici. Nakon prianjanja na stijenku, stanice su prethodno tretirane gradijentom koncentracijeCistanche tubulosaekstrakt (12,5, 25, 50, 100 ug/mL) 2 h, zatim stimuliran s 1 ug/mL LPS 24 h. Intracelularna razina ROS-a detektirana je kompletom reagensa za fluorescentnu sondu. Intenzitet fluorescencije zabilježen je pri valnoj duljini ekscitacije 488 nm i valnoj duljini emisije 525 nm.

2.8 Detekcija NO, MDA, SOD, CAT, LDH i GSH

Supernatant stanične kulture sakupljen je kako bi se otkrio sadržaj NO putem Griessove metode. Stanice su isprane s prethodno ohlađenim PBS-om i lizirane na ledu. Stanični lizat je centrifugiran na 10 000 okretaja u minuti pod 4 stupnja tijekom 5 minuta kako bi se dobio intracelularni supernatant. Sadržaj MDA, enzimske aktivnosti SOD, CAT, LDH i GSH mjereni su strogo u skladu sa specifikacijama kompleta. Za normalizaciju ukupnih proteina primijenjena je BCA metoda.

2.9 ELISA detekcija proupalnih citokina

Stanice RAW264.7 tretirane su uzorkom i LPS-om 16 h. Supernatant kulture je sakupljen i centrifugiran na 10 000 okretaja u minuti tijekom 10 minuta. Koncentracije sekrecije TNF‑, IL‑1 i IL‑6 kvantificirane su pomoću ELISA kompleta.

2.10 Western Blot analiza

Nakon 45-minutne intervencije uzoraka i LPS-a, ukupni stanični protein ekstrahiran je pomoću pufera za lizu RIPA. Koncentracija proteina kvantificirana je BCA kitom. Jednaka količina uzorka proteina (50 ug za svaku stazu) je denaturirana, odvojena SDS-PAGE elektroforezom i prenesena na PVDF membranu. Membrana je blokirana s 5 % otopinom obranog mlijeka TBST tijekom 1 sata, zatim inkubirana s primarnim antitijelima preko noći na 4 stupnja. Nakon ponovljenog ispiranja s TBST, sekundarno protutijelo je inkubirano na sobnoj temperaturi 1 h. Trake ciljanog proteina vizualizirane su ECL kemiluminiscencijskim reagensom. Provedena je trakasta analiza sivih skala kako bi se izračunao omjer fosforilacije proteina/ukupnog proteina.

2.11 Statistička analiza

Za crtanje grafikona i statističku analizu korišten je softver GraphPad Prism 8.0.2. Za usporedbu podataka usvojeni su jednosmjerna ANOVA i t-test.P < 0.05 represented statistically significant difference; P < 0.01 and P < 0.001 stood for higher significance. All experimental data were expressed as mean ± standard deviation (\(\bar{x}\pm s\)).

3. Rezultati

3.1 Eksperimentalni rezultati s jednim faktorom

Debljina kriške imala je značajan utjecaj na ciljni sadržaj glikozida. Kriške debljine 0,2 cm lako su se pretjerano kuhale na pari, što je uzrokovalo toplinsku razgradnju aktivnih sastojaka. Predebele kriške spriječile su oslobađanje unutarnjih aktivnih tvari. Kada je vrijeme kuhanja na pari bilo fiksirano na 10 minuta, a temperatura sušenja na 60 stupnjeva, 0,4 cm bio je optimalni parametar debljine kriške u probiru s jednim faktorom.

Nedovoljno vrijeme kuhanja na pari nije moglo u potpunosti uništiti strukturu biljne stanice i dovelo je do niskog prinosa glikozida. Kada je vrijeme parenja prekoračilo 6 minuta, došlo je do dezintegracije tkiva i degradacije ehinakozida i akteozida. Pod fiksnom debljinom kriške od 0,4 cm i temperaturom sušenja od 60 stupnjeva, 6 minuta bilo je najbolje vrijeme kuhanja na pari.

Unutar određenog raspona, sadržaj feniletanoidnih glikozida porastao je zajedno s porastom temperature sušenja, ali je došlo do razgradnje nakon što je temperatura prešla 60 stupnjeva. S debljinom kriške od 0,4 cm i vremenom kuhanja na pari od 6 minuta, 60 stupnjeva pokazalo je najbolju sveobuhvatnu izvedbu u probiru s jednim faktorom.

3.2 Optimizacija i verifikacijski test odzivne površine

Analiza varijance pokazala je da su regresijski modeli za sadržaj akteozida i ehinakozida bili značajni (P < 0.05, P < 0.01). The lack‑of‑fit term was non‑significant (P >0,05), što ukazuje na dobar stupanj uklapanja modela. Koeficijent determinacije R² bio je blizu 1, što je dokazalo visoku korelaciju između predviđene vrijednosti i stvarnih eksperimentalnih podataka.

Utjecajni redoslijed faktora za sadržaj akteozida bio je debljina kriški > temperatura sušenja > vrijeme kuhanja na pari. Za sadržaj ehinakozida redoslijed je bio vrijeme kuhanja na pari > temperatura sušenja > debljina kriške.

Teoretski optimalni parametri izračunati softverom bili su debljina kriške 0,600 cm, vrijeme kuhanja na pari 5,685 min i temperatura sušenja 57,009 stupnjeva. Uzimajući u obzir praktične uvjete proizvodnje, parametri su podešeni na debljinu kriške 0,6 cm, vrijeme kuhanja na pari 6 min i temperaturu sušenja 57 stupnjeva. Tri skupine paralelnih verifikacijskih eksperimenata dale su sadržaj akteozida od 7,25 % i sadržaj ehinakozida od 31,62 %. Odstupanje između praktične vrijednosti i teoretske predviđene vrijednosti bilo je 3,89 % odnosno 4,92 %, što je pokazalo pouzdanost ovog modela površine odziva.

3.3 Rezultat provjere viabilnosti stanica

Unutar raspona koncentracija od 0-100 ug/mL,Cistanche tubulosaEkstrakt uvarka nije imao očitu citotoksičnost na stanice RAW264.7 i pokazao je lagani učinak poticanja proliferacije. Kada je koncentracija dosegla 200 ug/mL i više, vitalnost stanica značajno se smanjila. Stoga su 12,5 ug/mL, 25 ug/mL, 50 ug/mL i 100 ug/mL odabrane kao radne koncentracije za naknadne stanične pokuse.

3.4 Učinak na unutarstaničnu razinu ROS

U usporedbi s kontrolnom skupinom s otapalom, LPS modelna skupina pokazala je izrazito povišen intracelularni intenzitet fluorescencije ROS (P < 0.001), proving the successful establishment of oxidative‑stress injury model. Pretreatment of Cistanche tubulosaekstrakt smanjio prekomjerno nakupljanje ROS-a na način ovisan o dozi (P < 0.001 versus model group).

3.5 Uredba o NO, MDA i pokazateljima povezanim s antioksidansima

Stimulacija LPS-om izazvala je nagli porast sadržaja NO i MDA u stanicama RAW264.7. U usporedbi s modelnom skupinom LPS-a, intervencija ekstrakta značajno je snizila razinu NO s tendencijom ovisnom o dozi. 12.5 ug/mL ekstrakt nije proizveo očit učinak na sadržaj MDA, dok je ekstrakt od 25-100 ug/mL vidljivo smanjio koncentraciju MDA (P < 0.001).

Nakon tretmana LPS-om, aktivnosti SOD-a, CAT-a, LDH-a i unutarstaničnog sadržaja GSH-a znatno su se smanjile. 12.5 ug/mL ekstrakta mogao je povećati aktivnost SOD-a bez poboljšanja aktivnosti CAT-a i LDH-a. Ekstrakt u koncentraciji od 25-100 ug/mL značajno je povećao aktivnost enzima SOD, CAT, LDH i sadržaj GSH na način ovisan o koncentraciji.

3.6 Inhibicijski učinak na proupalno izlučivanje citokina

LPS stimulacija je pokrenula masivno otpuštanje TNF-a, IL-1 i IL-6 u makrofagima RAW264.7.Cistanche tubulosaprethodna obrada ekstrakta decoction-piecea značajno je suzbila izlučivanje gore spomenuta tri proupalna citokina (P < 0.001), presenting prominent dose‑dependent anti‑inflammatory property.

3.7 Modulacija na p38/AKT/JNK/NF‑κB signalnom putu

U usporedbi s kontrolnom skupinom otapala, LPS intervencija je povećala omjer fosforilacije p-p38/p38, p-AKT/AKT, p-JNK/JNK i p-NF-κB/NF-κB. Skupine ekstrakata sa srednjim i visokim dozama značajno su smanjile omjer p-p38/p38 i p-JNK/JNK. Sve koncentracijske skupine smanjile su razinu p-AKT/AKT i p-NF-κB/NF-κB (P < 0.05 or P < 0.001). Results illustrated that optimized Cistanche tubulosaEkstrakt decoction-piecea obuzdao je aktivaciju p38/AKT/JNK/NF‑κB signalnog puta inhibiranjem fosforilacije proteina.

4. Rasprava

Trenutačni zahtjevi za obraduCistanche tubulosazabilježeni u Kineskoj farmakopeji opisuju samo kvalitativne korake rada bez preciznih kvantitativnih parametara. Prethodna istraživanja pokazala su da bi različite metode obrade uzrokovale velike razlike u kemijskom sastavu i farmakološkoj aktivnosti između sirove i prerađeneCistanche tubulosauzorci. Prerađeni proizvodi pokazuju bolju antioksidacijsku i imunološku regulaciju u usporedbi sa sirovinama.

U ovom istraživanju, moderna obrada pare-sušenje optimizirana metodologijom odzivne površine dala je puno veći prinos ehinakozida i akteozida od mnogih tradicionalnih tehnika obrade. Sugerira da precizna kontrola nad debljinom kriški, trajanjem kuhanja na pari i temperaturom sušenja može učinkovito zadržati i poboljšati sadržaj feniletanoidnih glikozidaCistanche tubulosa.

Oksidativni stres i upala usko su povezani patološki procesi. Prekomjerni ROS dovodi do peroksidacije lipida i nakupljanja MDA; u međuvremenu aktivira nizvodne upalne kaskade i potiče stvaranje NO i višestrukih proupalnih citokina. Upalni medijatori dodatno ubrzavaju proizvodnju ROS i stvaraju začarani patološki krug. Naši eksperimentalni rezultati na stanici pokazali su da je to optimiziranoCistanche tubulosaEkstrakt decoction-piece mogao bi eliminirati suvišni ROS, smanjiti markere oksidativnog oštećenja NO i MDA, obnoviti aktivnost antioksidativnog enzimskog sustava predstavljenog SOD, CAT, LDH i nadoknaditi unutarstanični GSH, kao i inhibirati otpuštanje proupalnih citokina s očitim odnosom doza-učinak.

p38, JNK koji pripada obitelji MAPK i os AKT-NF-κB središta su središta prijenosa signala koja posreduju oksidativno-upalni odgovor makrofaga. LPS stimulacija potiče fosforilaciju p38, JNK i AKT, dodatno aktivira NF‑κB i inducira transkripciju brojnih proupalnih gena. Podaci Western blota su to otkriliCistanche tubulosaekstrakt decoction-piecea blokirao je aktivaciju fosforilacije p38, JNK, AKT i NF‑κB. Pretpostavlja se da ehinakozid i akteozid s visokim sadržajem iz optimizirane obrade zajedno doprinose suzbijanju signalne kaskade p38/AKT/JNK/NF‑κB, kako bi se ublažio oksidativni stres uzrokovan LPS-om i upalna ozljeda u makrofagima RAW264.7.

Još uvijek postoje ograničenja u ovoj studiji. Sve farmakološke procjene dovršene su na in-vitro staničnom modelu. Potrebni su daljnji pokusi na razini životinja kako bi se potvrdila in vivo učinkovitost i metaboličke karakteristike prerađenogCistanche tubulosakomadići odvarka.

Zaključno, ova je studija uspostavila mjerljivu i skalabilnu modernu tehnologiju obrade zaCistanche tubulosakomadići odvarka. Pod parametrima obrade debljine kriške od 0,6 cm, vremena kuhanja na pari od 6 minuta i temperature sušenja od 57 stupnjeva, sadržaj glavnih feniletanoidnih glikozida je znatno poboljšan. Prerađeni komadići dekokcije mogu ublažiti oksidativni stres i upalna oštećenja u makrofagima RAW264.7 stimuliranim LPS-om inhibicijom signalnog puta p38/AKT/JNK/NF-κB. Ovo istraživanje pruža praktičnu tehničku referencu za industrijaliziranu proizvodnju i nudi eksperimentalnu osnovu za razvoj proizvoda funkcionalne hrane i dodataka prehrani podrijetlom iz XinjiangaCistanche tubulosa.

Priznanja

Ovaj rad je podržan od strane Projekta kultiviranja kapaciteta za inovacije okosnice znanosti i tehnologije Xinjiang Akademije poljoprivrednih znanosti (xjnkq‑2022022) i Xinjiang "Tianchi Doctor Program" (2021.).

Reference

[1] Lin J, Yu H, Zhao Y, et al. Ekstrakcija ehinakozida izCistanche tubulosai istraživanje njegovog zaštitnog učinka na ozljedu jetre kod štakora sa sepsom.Prehrambena znanost i tehnologija. 2023;43:e010523.

[2] Guo J, Tang S, Miao Y, et al. Protuupalni učinci lignanskih glikozida izCistanche tubulosaproizlazi iz stanica makrofaga RAW264.7 izazvanih LPS/IFN‑ preko PI3K/AKT puta.Trenutna farmaceutska biotehnologija. 2021;22(10):1380‑1391.

[3] Rani V, Deep G, Singh RK, et al. Oksidativni stres i metabolički poremećaji: Patogeneza i terapijske strategije.Znanosti o životu. 2016;148:183‑193.

[4] Martínez‑de-Toda I, Ceprián N, Díaz‑de-Castro E. Uloga oksi-upalnog starenja u ljudskoj patofiziologiji.Stanice. 2021;10(11):2974.

[5] Chung YC, Song SJ, Lee A, et al. Isobavachin ublažava upalne odgovore izazvane lipopolisaharidima u makrofagima i ribama zebricama potiskivanjem MAPK i NF‑κB signalnih putova.Časopis za etnofarmakologiju. 2024;321:117501.