Optimizacija procesa dekolorizacije i antioksidacijsko djelovanje Cistanche deserticola polisaharid ekstrakta metodologijom površinske reakcije

SAŽETAK:

 

Cilj:Da bi se optimizirao proces dekolorizacije polisaharida Cistanche Deserticola i istraživanje njihove antioksidacijske aktivnosti.

Metode korištenja aktivnog ugljika kao dekolorizirajućeg agensa, ispitivani su učinci 4 faktora, uključujući dozu aktivnog ugljika, temperaturu dekolorizacije, vrijeme dekolorizacije i pH na stopu dekolorizacije i stopu oporavka polisaharida. Na temelju eksperimenata s jednim faktorom, proces dekolorizacije cistanche deserticola polisaharidnog ekstrakta optimiziran je metodologijom površinske reakcije. Koristeći in vitro metodu procjene antioksidacijske aktivnosti, sposobnost uklanjanja slobodnih radikala od 1, 1- difenil -2- picrylhidrazin (DPPH), ukupna sposobnost reduciranja, hidroksilna radikalna sposobnost uklanjanja, and2'-azino Bis ({7}} etilbenzothiazole - 6- sulfonska kiselina) Diammonium sol (ABTS) Kation Slobodni radikalni čišćenje polisaharida iz pustinjske pustinje Cistanche. Rezultati Optimalni uvjeti procesa dekolorizacije za ekstrakt polisaharida iz Cistanche Deserticola bili su sljedeći: aktivna doza ugljika 20%, temperatura dekolorizacije 37 stupnjeva, vrijeme dekolorizacije 49 min, pH 5,03. U ovim optimalnim uvjetima, stopa dekoloizracije i stopa oporavka polisaharida bila je 62,66%, odnosno 96,16%. Nakon dekolorizacije, mogućnosti čišćenja radikala DPPH i hidroksilnih slobodnih radikala značajno su povećane, dok su se mogućnosti čišćenja anionskog radikala značajno smanjile. Zaključak Proces dekolorizacije je lako raditi, s dobrim efektima dekolorizacije i stopom oporavka polisaharida. Ima važnu vrijednost primjene i pruža osnovu za kasnije istraživanje i razvoj polisaharida Cistanche Deserticola.

Ključne riječi: Cistanche Deserticolapolisaharid; dekolorizacija; Metodologija površinske odgovore; antioksidacijska aktivnost

Cigancheefekti pustinjske

 

1.2.3 Mjerenje stope oporavka polisaharida

Priprema standardne krivulje:
Korištena je metoda fenol-sumporne kiseline. Otprilike 0. 0 5 0 0 g standard glukoze (osušena do konstantne težine pri 105 stupnjeva) precizno je izvagana i razrijeđena do 50 ml volumetrijske tikvice za pripremu zaliha. Zatim je 1,0 ml zalihe otopine precizno izmjereno i razrijeđeno na 10 ml u volumetrijskoj tikvici da bi se dobila standardna otopina od 0,1 mg/ml. Standardne otopine od 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 i 100 μl glukoze precizno su izmjerene u 1,5 ml epruvete za centrifugu. Destilirana voda je dodana u svaku epruvetu kako bi se sačinio ukupni volumen od 100 μl. Još 1,5 ml epruveta za centrifugu koja sadrži 100 μl destilirane vode korištena je kao prazna otopina za upravljanje. U svaku cijev dodano je 100 μl 5% otopine fenola, temeljito pomiješano, a zatim je brzo dodano 500 μl koncentrirane sumporne kiseline. Cijevi su vrtložene 3 minute i ostavljene da stoje 35 minuta. Zatim je 200 μl reakcijske otopine preneseno u ploču {96-, a apsorbancija je izmjerena na 490 nm pomoću automatskog čitača mikroploča. Standardna krivulja prikazana je s apsorbancijom (y) kao okomita osi i koncentracije glukoze (x, ug/ml) kao vodoravna os. Dobivena standardna jednadžba krivulje bila je:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

Mjerenje sadržaja polisaharida:
Alikvot od 100 μl razrijeđenogPustinaEkstrakt polisaharida točno je izmjeren u cijevi od 1,5 ml centrifuge. Vrijednost apsorpcije određena je gore opisanom metodom, a koncentracija polisaharida izračunata je pomoću standardne krivulje.

Mjerenje stope oporavka polisaharida:
Masa polisaharida uPustinaEkstrakt prije i nakon dekolorizacije izmjeren je metodom gore. Stopa oporavka polisaharida izračunata je pomoću jednadžbe (2):

Stopa oporavka polisaharida (%)
= (maftermbefore) × 100%\ lijevo (\ frac {m _ \ text {after}} {m _ \ Text {prije}} \ desno) \ puta 100 \
Gdje:

MBeforem _ \ Text {prije} Mbefore i Mafterm _ \ Text {After} Mafter su mase odPustinaPolisaharidi prije i nakon dekolorizacije, odnosno (G).

 

 

1.2.4 jednofaktorski eksperimentalni dizajn

Učinci četiri faktora-aktivirane doze ugljika, temperatura dekolorizacije, vrijeme dekolorizacije i pH-na brzinu dekolorizacije i brzina oporavka polisaharida odPustinaIstraženi su ekstrakt polisaharida.

Učinak doze aktivnog ugljika:
Fiksno vrijeme dekolorizacije u 30 minuta, temperatura dekolorizacije na 50 stupnjeva i pH na 5,03 (izmjerena vrijednost uzorka). Proučavan je utjecaj doze aktivnog ugljika na brzinu dekolorizacije i brzinu oporavka polisaharida.

Učinak temperature dekolorizacije:
Fiksna doza aktivnog ugljika na 20% (m: m), vrijeme dekolorizacije u 30 minuta i pH na 5,03. Proučavan je utjecaj temperature dekolorizacije na brzinu dekolorizacije i brzinu oporavka polisaharida.

Učinak vremena dekolorizacije:
Fiksna doza aktivnog ugljika na 20%, temperatura dekolorizacije na 50 stupnjeva i pH na 5,03. Proučavan je utjecaj vremena dekolorizacije na stopu dekolorizacije i stopu oporavka polisaharida.

Učinak pH:
Fiksna doza aktivnog ugljika na 20% (m: m), temperatura dekolorizacije na 50 stupnjeva i vrijeme dekolorizacije u 30 minuta. Proučavan je utjecaj pH na stopu dekolorizacije i stopu oporavka polisaharida.

 

1.2.5 Eksperimentalni dizajn površinske optimizacije odgovora

Na temelju optimalnih raspona stanja identificiranih u jednofaktornim eksperimentima, za provođenje uvjeta dekolorizacije korištena je eksperimentalna metoda eksperimentalnog dizajnaPustinaEkstrakt polisaharida. Kao indeksi evaluacije korišteni su stopa dekolorizacije i stopa oporavka polisaharida. Parametri dizajna prikazani su u tablici 1.

1.2.6 Određivanje antioksidacijskog djelovanjaPustinaPolisaharidi

(1) OdređivanjePustinaSposobnost uklanjanja radikala polisaharida

Na temelju metode Kan Jintao i sur. [21] s malim modifikacijama, 0. 5 ml od 1. 0 mg/ml polisaharidska vodena otopina pomiješana je s 2,4 ml 0. 1 mmol/l dpph etanol otopine (1, {{1 {0}} difenil -2- picrylhidrazin) i 1,1 ml destilirane vode. Smjesa je ostavljena da reagira u mraku na 37 stupnjeva 30 minuta. Apsorbancija reakcijske otopine izmjerena je na 517 nm, a brzina uklanjanja radikala DPPH od 1,0 mg/ml polisaharida prije i nakon dekolorizacije izračunata je pomoću jednadžbe (3):

Stopa čišćenja radikala DPPH (%)

{{0}} [1− (a1 -a2) a 0] × 100%= \ lijevo [1 - \ frac \ puta {} {{}} {{}} {{}} \ 100 \%= [1 - A0 (A1 −A2)] × 100%

Gdje:

A1A _1 A1 je apsorbancija epruvete za uzorke,

A2A _2 A2 je apsorbancija kada bezvodni etanol zamjenjuje otopinu DPPH,

A {{0}} a _0 a0 je apsorbancija kada destilirana voda zamijeni uzorak.

 

(2) Određivanje ukupne smanjenja snagePustinaPolisaharidi

Pozivajući se na metodu Lu Xue i sur. [22], 1. 0 mg/ml polisaharidi prije i nakon dekolorizacije. Uzorak od 5 μl i 180 μl FRAP (željezni ion smanjujući radno rješenje antioksidans) dodan je u ploču 96-, temeljito miješan i ostavljen da reagira na 37 stupnjeva 5 minuta. Apsorbancija je izmjerena na 593 nm, a ukupna smanjena snaga polisaharida izražena je u smislu koncentracije standardne otopine FESO4.

(3) Određivanje sposobnosti uklanjanja hidroksilnih radikalaPustinaPolisaharidi

Slijedeći metodu opisanu u literaturi [23] i upute kompleta ispitivanja hidroksilnog radikala, 1. 0 mg/ml polisaharida prije i nakon dekolorizacije. Destilirana voda korištena je za zamjenu vodikovog peroksida za apsorpciju kontrolne skupine (acontrola _ \ Tekst {Control} Acontrol), a destilirana voda je korištena za zamjenu uzorka za praznu skupinu apsorbancije (ablanka _ \ tekst {blank} ablank). Vrijednosti apsorpcije izmjerene su na 550 nm, a brzina čišćenja hidroksilnog radikala izračunata je pomoću jednadžbe (4):

Stopa čišćenja hidroksilnog radikala (%)

= [(Acontrol -Sample) (Acontrol -ablank)] × 100%= \ lijevo [\ frac {(a _ \ tekst {kontrola} - {}} {uzorak}) A _ \ Text {blank})} \ desno] \ Times 100 \%= [(Acontrol −blank) (Acontrol −Asple)] × 100%

Gdje:

Asamplea _ \ Text {uzorak} ASPAMPLE je apsorbancija uzorka grupe,

Acontrola _ \ Text {Control} Acontrol je apsorbancija kontrolne skupine,

Ablanka _ \ Text {prazno} ablank je apsorbancija prazne grupe.

 

(4) Određivanje sposobnosti čišćenja radikala ABTS kationPustinaPolisaharidi

Prema metodi opisanoj u literaturi [24] i uputama ABTS kation radikalnog kita za ispitivanje, 1. 0 mg/ml polisaharida prije i nakon dekolorizacije. Uzorak od 10 μl pomiješan je s 20 μl radne otopine reagensa četiri i 170 μl radne otopine ABTS, temeljito pomiješan i ostavljen da reagira u mraku na sobnoj temperaturi 6 minuta. Deionizirana voda korištena je kao prazna kontrola. Apsorbancija je izmjerena na 405 nm, a brzina čišćenja radikala ABTS kation izračunata je pomoću jednadžbe (5):

Stopa čišćenja radikala ABTS kation (%)

= [(bblank -bbple) bblank] × 100%= \ lijevo [\ frac {(b _ \ text {blank} - b {5} \ {\ {{{6 100 \%= [bblank (bblank −bsple)] × 100%

Gdje:

BBLANKB _ \ Tekst {blank} bblank je apsorbancija reakcije između destilirane vode i ABTS otopine,

BSampleb _ \ Text {uzorak} bSample je apsorbancija reakcije između uzorka i ABTS otopine.

 

1.3 Obrada podataka

SIGMAPLOT 12.5 softver korišten je za crtanje, a za analizu podataka korišten je softver za dizajn 8. 0. 6.