Niosomalni nanonosači za poboljšanu dostavu kvercetina u kožu s funkcijama anti-tirozinaze i antioksidansa

Sažetak:

Ova je studija imala za cilj pronaći učinkovit flavonoid s obećavajućim izbjeljivanjem i antioksidativnim kapacitetima te dizajnirati niosome pune flavonoida kako bi se poboljšala njegova topljivost, stabilnost i prodiranje. Provedeni su in vitro pokusi hvatanja slobodnih radikala protiv tirozinaze i 1,1-difenil-2-pikrilhidrazila (DPPH) kako bi se ispitali izbjeljivanje i antioksidativni kapaciteti nekoliko flavonoida, uključujući kvercetin, morin, festin, miricetin, rutin i breviskapin.

Vodljivost, viskoznost i veličina čestica Span{{0}}RH40-temeljene formulacije vezikula (niosoma) neionskih površinski aktivnih tvari proučavane su s različitim omjerima mase kako bi se odredila najprikladnija formulacija. Niosomi napunjeni lijekom karakterizirani su veličinom, zeta potencijalom, morfologijom i učinkovitošću zarobljavanja. Također su proučavani fotostabilnost, topljivost, otpuštanje, prodiranje lijeka ex vivo i zadržavanje u koži. Rezultati su pokazali da kvercetin ima značajne izbjeljujuće i antioksidativne kapacitete, a Span60-RH40 u omjeru mase 9:11 tvori sferne ili ovalne niosome od 97,6 ± 3,1 nm s rasponom zeta potencijala od 31,1 ± 0,9 mV, a lijek učinkovitost zarobljavanja čak 87,3 ± 1,6 posto. Niosomi su značajno poboljšali topljivost i fotostabilnost kvercetina.

Nadalje, u usporedbi s otopinom kvercetina, liposomi kvercetina imali su prednosti produljenog oslobađanja i poboljšanog transdermalnog prodiranja, uz zadržavanje kože 2,95 puta veće od otopine kvercetina.

Antioksidans je svaka tvar koja može učinkovito inhibirati oksidacijsku reakciju slobodnih radikala pri niskim koncentracijama. Njegov mehanizam djelovanja može biti izravno djelovanje na slobodne radikale ili neizravno konzumiranje tvari koje lako stvaraju slobodne radikale kako bi se spriječile daljnje reakcije. Dok ljudsko tijelo neizbježno proizvodi slobodne radikale, ono također prirodno proizvodi antioksidativne tvari koje se odupiru slobodnim radikalima kako bi se suprotstavile oksidativnim napadima slobodnih radikala na ljudske stanice. Studije su dokazale da je antioksidativni sustav ljudskog tijela sustav sa cjelovitim i složenim funkcijama usporedivim s imunološkim sustavom. Što je antioksidativni kapacitet tijela jači, to je ono zdravije i život mu je duži. U našem smo istraživanju otkrili da Cistanche deserticola ima i antioksidativno djelovanje. Cistanche deserticola je bogata polisaharidima, flavonoidima, alkaloidima, flavonoidnim glikozidima, flavonskim kiselinama i drugim sastojcima, a te tvari imaju snažno antioksidativno djelovanje. Mogu se oduprijeti oksidativnom stresu i smanjiti oštećenje stanica hvatanjem slobodnih radikala, smanjenjem oksidacijskih reakcija i povećanjem aktivnosti antioksidativnog enzima, čime igraju ulogu antioksidansa.

Click cistanche deserticola dodatak proizvodu

Ključne riječi:

anti-tirozinaza; antioksidans; niosomi; fotostabilnost; transdermalna isporuka.

1. Uvod

Flavonoidi su široko rasprostranjeni u voću, povrću i bilju te imaju opsežna biološka djelovanja, uključujući antivirusna, protuupalna, antikancerogena, antioksidacijska i antitirozinazna [1,2]. Nedavno je potraga za sigurnim novim inhibitorom tirozinaze dobila veliku pozornost u području kozmetike, jer neki od dobro poznatih inhibitora, poput kojične kiseline, hidrokinona i kortikosteroida, mogu izazvati zdravstvene probleme, poput dermatitisa i iritacije kože. , okronoza, citotoksičnost i rak kože [3]. Zbog svoje niske toksičnosti i značajnih antioksidativnih i antitirozinaznih aktivnosti, flavonoidi su privukli veliko zanimanje kao potencijalni prirodni izbjeljivači i antioksidansi za upotrebu u proizvodima za njegu kože [4-6].

Međutim, flavonoidi imaju mnogo različitih struktura, uključujući različite konfiguracije s istom matičnom jezgrom, ali je još uvijek nejasno koje vrste struktura posjeduju moćne antitirozinazne i antioksidativne sposobnosti. Osim toga, većina flavonoida ima slabu topljivost u vodi i liposolubilnost, a umjerena lipofilnost i niska molekularna težina faktori su za koje se zna da potiču bolje prodiranje. Drugi značajan čimbenik koji utječe na učinkovitost komponenti su biološke barijere same kože, kao što je stratum corneum. Iako fizikalno-kemijske metode, uključujući iontoforezu, ultrazvuk, mikroiglu, sustave ubrizgavanja bez igle i pojačivače penetracije, mogu pospješiti prodiranje aktivnih sastojaka kroz stratum corneum, te metode mogu biti invazivne, iritirati kožu i skupe su.

S druge strane, pojavili su se neki novi sustavi za isporuku aktivnih sastojaka posredovanih nosačem, uključujući emulzije, micele, vezikule i ciklodekstrin, kako bi se povećala učinkovitost postojećih sastojaka, posebno onih sa slabom topljivošću i bioraspoloživošću. Vezikulama se više pažnje posvećuje transdermalnoj isporuci. Među vezikulama, transfersomi su dobro deformabilni liposomi s povećanom perkutanom propusnošću i mogu poboljšati topljivost i stabilnost lijeka. Transfersomi se sastoje od specifičnog omjera fosfolipida i surfaktanata, dok su fosfolipidi skupi i lako ih je oksidirati.

Stoga je potraga za drugim stabilnim i zamjenjivim vezikulama zanimljiv predmet istraživanja. Niosomi su neionski surfaktantni vezikularni sustavi, prvi put prijavljeni 1979. kada su se primjenjivali u kozmetičkoj industriji [7], ali su od tada proučavani kao sustavi za isporuku lijekova u farmaciji [8-13]. Fizička svojstva, tehnike pripreme i strukture niosoma vrlo su slične onima liposoma. Međutim, niosomi također imaju prednosti u transdermalnoj isporuci lijeka, kao što su produljeno otpuštanje lijeka, bolje prodiranje i veće zadržavanje u koži [14], jeftiniji su za pripremu i stabilniji su [15]. Stoga se niosomi mogu primijeniti u kozmetičkoj industriji [16-18].

Rane vezikule surfaktanata pripremljene su pomoću ionskih tenzida [19-22]. Sveobuhvatna istraživanja toksičnosti surfaktanata pokazala su da su kationski tenzidi najtoksičniji, zatim anionski tenzidi, dok su neionski tenzidi najmanje toksični. Stoga, uzimajući u obzir sigurnost i industrijsku primjenu, uporaba liposoma koji sadrže neionske površinski aktivne tvari bolja je opcija za transdermalno davanje. Zbog strukture amfifilnih dvoslojeva, raspon ljestvice hidrofilno-lipofilne ravnoteže (HLB) od 4 do 8 bit će lakši za formiranje niosoma iz [14,23,24].

Stoga će formulirani, neionski surfaktanti s različitim HLB vrijednostima biti lakši za stvaranje niosoma. Span, Tween i Brij uobičajeni su neionski tenzidi koji se koriste za pripremu liposoma [15,25-34]. Neionski surfaktanti s dugim ugljikovodičnim lancima bez dvostrukih veza prihvatljivi su kandidati jer se mogu formirati stabilni niosomi s potencijalom povećanog opterećenja lijekom. Span60, s niskom HLB vrijednošću, široko se koristi za stvaranje niosoma [15,29,31,33,34]. Neionski surfaktanti s visokim HLB vrijednostima, kao što su Tween20, Tween60, Tween80, Brij35 i Brij58, ne mogu lako formirati niosome sami ili bez optimalne količine kolesterola [28,35,36], zbog svoje velike hidrofilnosti glave i kratke lance ugljikovodika. Stoga mogu stvarati niosome samo uz dodatak kolesterola ili kada su formulirani s drugim tenzidima [10,27,31,37–39]. Cremophor RH40 je visoko hidrofilan i ima nisku toksičnost, te se naširoko koristi u formulacijama oralnih lijekova, ali nijedno izvješće ne ukazuje na upotrebu Cremophor RH40 u formulaciji liposoma.

U ovoj smo studiji ispitali flavonoide s dobrim izbjeljivanjem i antioksidativnim učinkom te smo istražili Span60-RH40, neionski površinski aktivni sustav s različitim omjerima lipida za stvaranje niosoma. Niosomi puni kvercetina karakterizirani su veličinom vezikula, zeta potencijalom, učinkovitošću inkapsulacije i transmisijskom elektronskom mikroskopijom (TEM), a također je ispitana njihova topljivost i fotostabilnost. Uz to, štakori su korišteni za ispitivanje transdermalnog prodiranja niosoma napunjenih kvercetinom.

2. Rezultati

2.1. Inhibicija flavonoida tirozinaze

Dobro je poznato da flavonoidi posjeduju višestruke hidroksilne skupine (Slika 1) koje su važne za djelovanje protiv tirozinaze. Zabilježeno je da su broj i položaj hidroksilnih skupina, kao i prisutnost šećernih ostataka povezani s inhibicijom tirozinaze. U tablici 1, miricetin nije pokazao aktivnost protiv tirozinaze jer lako stvara jake međumolekularne vodikove veze koje mogu spriječiti kelaciju s tirozinazom. Rutin i breviskapin nisu pokazali obećavajuću aktivnost protiv tirozinaze, dok su kvercetin, morin i festin pokazali znatno veću aktivnost protiv tirozinaze od arbutina, koji je uobičajeni agens za izbjeljivanje koji se koristi u kozmetici.

2.2. Antioksidativno djelovanje flavonoida

Flavonoids can scavenge free radicals as antioxidants by donating a hydrogen atom. The antioxidant activity of flavonoids is related to the number of hydroxyl groups and their structure. This includes (i) the presence of an ortho-hydroxyl group in the B ring; (ii) the presence of a C2-C3 double bond in the C ring; (iii) or the presence of a C-3 hydroxyl group [40–42]. As shown in Table 2, the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity of the six compounds is in the following order: quercetin = fest in>miricetin=morin > rutin > BHT ≈ breviskapin. Kvercetin i festin imali su najsnažniju sposobnost hvatanja radikala.

2.3. Formulacija niosoma

2.3.1. Vodljivost sustava Span60-RH40

Transfersomi su nestabilni jer se prvenstveno sastoje od fosfolipida koji se lako mogu oksidirati, uzrokujući curenje lijeka. Niosomi su identificirani kao alternativa za transfersome u transdermalnoj isporuci. Iako mnogi neionski tenzidi mogu tvoriti niosome [15,26,28], neionski tenzidi s nezasićenim ugljikovodičnim lancima manje su stabilni od neionskih tenzida sa zasićenim ugljikovodičnim lancima [37]. Stoga smo u ovoj studiji odabrali Span60 i RH40, od kojih oba nemaju dvostruke veze, za stvaranje niosoma kako bi se poboljšala njihova stabilnost.

Provedena su mjerenja vodljivosti kako bi se odredilo agregacijsko ponašanje neionskih površinski aktivnih tvari u vodenoj otopini. Vodljivost Span60-RH40 raspršenog u vodi postupno se povećala od omjera mase od 4:16 do 9:11, zatim se zadržala između omjera mase od 9:11 do 13:7 i smanjila se od 13:7 do 16 :4 (Slika 2a). Dvije prijelomne točke mogu sugerirati promjene u mikrostrukturi agregata. Kao što je prikazano na slici 3, pri omjeru mase 9:11 počeli su se stvarati niosomi.

2.3.2. Veličina sustava Span60-RH40

Veličina čestica je važan pokazatelj procjene nanometarskih čestica. Mjerenje veličine sustava Span60-RH40 s različitim omjerima mase surfaktanta moglo bi dodatno odražavati promjenu u mikrostrukturi agregata u sustavu. Kao što je prikazano na slici 2b, u početku je veličina agregata bila relativno mala i konstantna u omjeru mase od 4:16 do 9:11. Nakon toga, veličina agregata se jako povećala pri omjeru masa od 9:11 do 13:7, a zatim kontinuirano naglo porasla pri omjeru masa od 13:7 do 16:4, što je čak i do ~1 µm. Spontani strukturni prijelaz agregata Span60/RH40 dodatno je potvrđen veličinom agregata u kombinaciji s vodljivošću i viskoznošću.

2.3.3. Viskoznost sustava Span60-RH40

Viskoznost sustava Span60-RH40 prikazana na slici 2c pokazala je odgovarajuće promjene. Prvo, viskoznost sustava Span60-RH40 bila je niska i konstantna pri omjeru masa od 4:16 do 9:11. Zatim se kod masenog omjera od 9:11 do 13:7 viskoznost značajno promijenila, pri čemu se viskoznost povećavala, a zatim smanjivala. Gore razmotrena vodljivost i veličina također su se dogodile u skladu s promjenama u ovom rasponu omjera mase Span60-RH40. Nakon toga, pri omjeru masa od 13:7 do 16:4, viskoznost se naglo povećava.

2.4. Veličina, zeta potencijal, morfologija i učinkovitost hvatanja kvercetin-niosoma

Kvercetin je napunjen niosomima Span60-RH40, a zatim homogeniziran s 1500 bara. Kao što je prikazano u tablici 3, hidrodinamički promjer niosoma i kvercetin-liposoma bio je 146,4 ± 5,4 nm, odnosno 97,6 ± 3,1 nm.

Zeta potencijal proučavan je kako bi se razumjeli površinski naboji niosoma. Zeta potencijal praznih niosoma i kvercetin-niosoma bio je -41,2 ± 0,6 mV odnosno -31,1 ± 0,9 mV (Tablica 3). TEM slika na slici 4b pokazala je da su kvercetin-niosomi sferični ili ovalni. Učinkovitost hvatanja liposoma kvercetina bila je 87,3 ± 1,6 posto, što je više od onih u rasponu od 48,4 posto do 78,4 posto u prethodnim radovima [37,43,44]. Povećana učinkovitost hvatanja lijeka može se pripisati afinitetu između lijekova i dvoslojeva niosoma [45].

2.5. Topljivost u vodi i ravnotežna topljivost kvercetina

Kao što je prikazano na slici 5, topljivost kvercetina u vodi bila je izuzetno niska. Njegova topljivost nije imala značajne razlike (P > 0.05) u fosfatnom puferu s različitim pH u usporedbi s onom u vodi. Rezultat ravnotežne topljivosti kvercetina pokazao je da je kvercetin vrlo liposolubilna komponenta. Kao što se vidi na slikama 6 i 7, ravnotežna topljivost kvercetina ostala je stabilna u različitim omjerima vode/n-oktanola, ali se smanjila pri pH 8,0 jer se struktura kvercetina promijenila u bazičnim uvjetima, uzrokujući povećanje topljivosti u vodi.

Međutim, slaba topljivost kvercetina u vodi bila je ograničena na njegovu primjenu. Na temelju tablice 4, topivost kvercetina poboljšana je u surfaktantima o kojima se raspravlja u nastavku, posebno u 0.6 posto Tween80 (P < 0.05). Međutim, njegova topljivost dodatno je poboljšana unošenjem u niosome. Kvercetin (300 µg/mL) je napunjen u niosome i visoka inkapsulacija noizoma Span60-RH40 bila je 87,3 ± 1,6 posto, stoga je topljivost kvercetina u niosomima bila 261,9 ± 4,8 µg/mL, što je {{ 17}} puta veća od one u vodi (P < 0,05).

2.6. Fotostabilnost kvercetin-niosoma

Kvercetin ima slabu fotostabilnost i brzo se razgrađuje pod utjecajem sunčeve svjetlosti ili UV zračenja [46-48], vjerojatno zato što kvercetin podliježe fotooksidaciji nakon UV zračenja [49]. Međutim, fotostabilnost je neophodna da bi kvercetin pokazao svoje aktivnosti. Kao što je prikazano na slici 8, niosomi su učinkovito poboljšali fotostabilnost kvercetina i ostali na 88,06 posto nakon 10 dana izlaganja jakom osvjetljenju. Kvercetin je bio zaštićen od UV zračenja jer je bio inkapsuliran u dvoslojeve niosoma. Molecules 2019, 24, x ZA PEER REVIEW 8 od 18 izlaganja jakom osvjetljenju. Kvercetin je bio zaštićen od UV zračenja jer je bio inkapsuliran u dvoslojeve niosoma.

2.7. In vitro ponašanje otpuštanja kvercetin-niosoma

Odgovarajući medij za otpuštanje je pregledan kako bi se održali uvjeti potonuća, stoga je procijenjena topljivost kvercetina u različitim medijima. Rezultati u tablici 5 pokazuju da je kvercetin imao veću topljivost u vodi Tween80 i da se njegova topljivost postupno povećavala s povećanjem koncentracije Tween80. Topivost kvercetina porasla je na 76,07 ± 3,11 µg/mL u kiselim uvjetima. Stoga je, s obzirom na pH ljudske kože, 0,8 posto Tween80 (pH 5,0) odabrano kao medij za otpuštanje za proučavanje ponašanja slobodnog kvercetina i niosoma kvercetina.

Kao što se vidi na slici 9, u usporedbi s kvercetin-niosomima, slobodni kvercetin oslobađao se puno brže u mediju za otpuštanje, što pokazuje da su niosomi imali učinak produljenog otpuštanja. Produženo otpuštanje skraćuje vrijeme primjene, smanjuje toksičnost i održava učinkovitu koncentraciju lijeka.

2.8. Ex vivo studije propusnosti i zadržavanja kože

{{0}}.6 postotna otopina Tween80 korištena je kao medij za oslobađanje penetracije u ovoj studiji. U našoj exvivo studiji penetracije, kvercetin se nije mogao odrediti u mediju za otpuštanje penetracije, što je pokazalo da kvercetin nije prodro u dermis i došao do medija za otpuštanje, ali niosomi su značajno poboljšali zadržavanje kvercetina u koži (P < 0.{ {20}}5). Kao što je prikazano u tablici 6, zadržavanje kvercetin-niosoma u koži (1,92 plus 0,74 ug/cm?), kvercetin-niosom-1 posto propandiola (2,34 plus 0,40 ug /cm?), a kvercetin-transfersomi (2,53 plus 0,40 ug/cm-) bili su značajno viši u usporedbi s onim za kvercetin-propandiol (0,65 plus 0,10 ug/cm2) (P <0,05).

3. Rasprava

Prethodne studije su utvrdile da slobodna hidroksilna skupina na položaju C-3 igra važnu ulogu u inhibiciji tirozinaze [50-52]. Suprotno tome, 3-O-glikozidi mogu spriječiti njihovo vezanje na aktivna mjesta tirozinaze i mogu biti razlog zašto rutin nije pokazao antitirozinazno djelovanje. Nasuprot tome, šećerni dio smješten na položaju C-7 imao je mali učinak na aktivnost anti-tirozinaze i nije blokirao kelaciju s tirozinazom [51].

Međutim, prisutnost dodatne hidroksilne skupine na položaju C-30 prstena B povećala je inhibiciju tirozinaze [53,54]. Breviskapin nije pokazao aktivnost protiv tirozinaze jer nije imao C-3 hidroksilnu skupinu i C-30 hidroksilnu skupinu koje su možda imale učinak na aktivnost protiv tirozinaze, a ne prisutnost 7- O-glikozidi. U analizi odnosa strukture i aktivnosti kvercetina i morina, primijetili smo da je IC50 vrijednost morina oko 1/3 vrijednosti kvercetina, a jedina razlika između strukture kvercetina i morina je položaj hidroksilnih skupina u B prstenu.

Stoga je prisutnost o-dihidroksilnih skupina u B prstenu povećala aktivnost protiv tirozinaze. Vrijednost IC50 festina bila je oko 1/20 vrijednosti kvercetina, a jedina razlika između strukture kvercetina i festina je u tome što festin nema C-5 hidroksilnu skupinu u A prstenu. Hidroksilna skupina na položaju C-5 također igra važnu ulogu u povećanju aktivnosti inhibicije tirozinaze, jer može kelirati Cu2 plus na aktivnom mjestu tirozinaze s karbonilom na položaju C-4 [50 ]. Kvercetin posjeduje slobodne hidroksilne skupine, ne samo na položajima C-3 i C-5 C prstena već i na C-30 položaju B prstena. Stoga kvercetin pokazuje mnogo jaču inhibiciju tirozinaze u usporedbi s drugim flavonoidima.

Flavonoidi ne samo da imaju obećavajuće djelovanje protiv tirozinaze, već imaju i snažno antioksidativno djelovanje. Kvercetin ima dodatnu C-5 hidroksilnu skupinu; međutim, i kvercetin i fisetin imali su isti antioksidativni kapacitet, što sugerira da je C-5 hidroksilna skupina imala mali utjecaj na uklanjanje radikala. Miricetin ima više hidroksilnih skupina u B prstenu, ali nije pokazao jače antioksidativno djelovanje od kvercetina ili fisetina. To može biti zato što miricetin može stvoriti snažne međumolekularne vodikove veze i smanjiti doniranje atoma vodika.

Slično, morin je pokazao niži antioksidativni kapacitet od kvercetina i festina zbog hidroksilne konfiguracije prstena B, što pokazuje da je o-dihidroksil u prstenu B važan za povećanje kapaciteta hvatanja radikala. Međutim, rutin i breviskapin imali su znatno niže antioksidativne kapacitete jer rutin ima glikozide na C-3 položaju koji stvaraju steričku smetnju. Breviskapin ima jednu hidroksilnu skupinu na B prstenu i ima manje slobodnih hidroksilnih skupina. Posljedično, rezultati u ovom radu pokazuju da je hidroksilna konfiguracija prstena B bila značajna za antioksidativni kapacitet flavonoida, dok je prsten A imao mali utjecaj na sposobnost hvatanja radikala. Dodatno, blokiranje ili uklanjanje hidroksilne skupine na položaju C-3 može smanjiti sposobnost hvatanja radikala flavonoida.

Span60 i RH40 nisu sposobni za ionizaciju. Stoga se čini da naboji potječu od interakcije između hidrofilnih glavnih skupina Span60 i RH40 koje tvore vodikove veze [55], kada se nabijeni agregati formiraju između lipofilnog Span60 i hidrofilnog RH40.

Stoga, vodljivost može biti posljedica kombinacije Span60 i RH40. Vodljivost se u početku povećala, vjerojatno zato što dodatak Span60, koji se povezuje s RH40, stvara nabijene miješane micele. Povećanje Span60 također je povećalo broj nabijenih agregata i vodljivost se postupno povećavala. Prijelomna točka se dogodila pri omjeru masa 9:11. Iznenadna promjena sugerira da se mikrostruktura agregata može promijeniti i mogu nastati niosomi. Vodljivost se nakon toga malo smanjila i ostala relativno konstantna, što može ukazivati ​​na stvaranje niosoma, jer su naboji bili zatvoreni. Druga prijelomna točka dogodila se pri omjeru masa od 13:7 i vodljivost se naglo smanjila, međutim, veličina agregata se povećala s povećanjem Span60, vjerojatno zbog stvaranja gustih nakupina većih multilamelarnih niosoma i pojave bijelog taloga [56]. ,57], uzrokujući smanjenje slobodnih nabijenih agregata.

Spontani strukturni prijelaz agregata Span60-RH40 dodatno je potvrđen veličinom agregata u kombinaciji s vodljivošću i viskoznošću. Kada je maseni udio RH40 bio dominantan, veličina agregata bila je relativno konstantna i mala. Sustav je imao viskoznost sličnu vodi i mogu nastati miješane micele. S povećanjem masenog udjela Span60 povećavala se hidrofobnost sustava, povećavala se viskoznost i veličina agregata. Povećanje Span60 može potaknuti stvaranje niosoma. Međutim, s daljnjim povećanjem Span60, viskoznost i veličina su također naglo porasle zbog postojanja obilnih većih multilamelarnih niosoma, koji su uzrokovali stvaranje precipitata. Nastanak niosoma također je potvrđen TEM-om (Slika 3).

Kada je koncentracija Span60 bila niska, sustav Span60-RH40 imao je viskoznost sličnu vodi, a veličina agregata bila je relativno mala, što ukazuje na stvaranje miješanih micela. Od masenog omjera 9:11 do 13:7, viskoznost i zamućenost sustava su se istovremeno povećale. Očita promjena viskoznosti može biti povezana s prijelazom micele u kruti i viskozni noisom, budući da su površinski aktivne tvari čvrsto pakirane i formiraju se dvoslojevi; ovo zapažanje bilo je u skladu s literaturom [57,58]. Između masenih omjera 13:7 i 16:4, viskoznost se značajno povećala, vjerojatno zbog postojanja obilnih većih multilamelarnih niosoma koji uzrokuju stvaranje taloga.

Zanimljivo je da su kvercetin-niosomi imali manje veličine od praznih niosoma, što je bilo prema prethodno objavljenim studijama [43]. Ilustrirano je da ako su molekule koje pokazuju dobar afinitet sa sastavnim surfaktantima niosoma ugrađene unutar dvoslojeva, to bi uzrokovalo smanjenje veličine vezikula. Ovo zapažanje može biti posljedica učinka jakog afiniteta za lijekove i niosome na držanje različitih lamela zajedno, čineći membranu krućom [14]. Apsolutna vrijednost zeta potencijala za kvercetin-liposome bila je niža nego za prazne liposome (Tablica 3). To može biti posljedica interakcije kvercetina s glavnom skupinom surfaktanata koji neutraliziraju negativne naboje na površini niosoma. Ovo zapažanje je također objavljeno ranije; da bi lijekovi mogli smanjiti negativne površinske naboje [59].

Utvrdili smo da je kvercetin netopljiv u vodi i fosfatnom puferu. U prethodnim studijama, za održavanje stanja potonuća slabo topljivih lijekova u mediju za otpuštanje penetracijom, često se koriste kootapala, uključujući alkohole i surfaktante [14], stoga je 0.6 postotna otopina Tween80 korištena kao sredstvo za otpuštanje penetracije kako bi se zadržalo stanje potonuća.

Međutim, s obzirom na učinkovitost, za njegu kože i liječenje kožnih bolesti učinkovitije je i sigurnije zadržati komponente ili lijekove duboko u koži nego ući u krvotok. U našem istraživanju, iako kvercetin nije prodro kroz dermis u medij, eksperimenti zadržavanja kože pokazali su da u usporedbi sa slobodnim kvercetinom, niosomi poboljšavaju prodiranje kvercetina u epidermis.

Stoga bi niosomi mogli biti obećavajući sustav dostave u kozmetičke svrhe i liječenje kožnih bolesti. Kvercetin je vrlo liposolubilan, a njegova niska topljivost u vodi ograničila je njegov razvoj i primjenu. Niosomi puni kvercetina ne samo da su poboljšali topljivost u vodi nego i transdermalnu apsorpciju kvercetina. Niosomi kvercetina imali su 3-struko veće zadržavanje u koži u odnosu na otopinu kvercetin-propandiola. Nakon dodavanja 1 posto propandiola, pojačivača penetracije, u izvornu formulaciju niosoma Span60-RH40, poboljšala se njegova transdermalna apsorpcija, usporediva s onom kvercetin-transfersoma.

4. Materijali i metode

4.1. Materijali

Kvercetin, morin, festin, miricetin, rutin i breviskapin nabavljeni su od DATIAN Biology Co (Shanxi, Kina), -arbutin od Beijing Brilliance Biochemical Co, Ltd (Peking, Kina), a 1,1-difenil{{ 3}}picrylhydrazyl (DPPH) iz Guangzhou Qiyun Bio-technology Co (Guangzhou, Kina). Natrijev dihidrogen fosfat, dinatrijev hidrogen fosfat, dimetil sulfoksid (DMSO) i apsolutni etil alkohol kupljeni su od DAMAO CHEMICAL REAGENT FACTORY (Tianjin, Kina). Span60 je kupljen od Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co, Ltd (Tianjin, Kina), a Cremophor RH40 od ​​Guangzhou Jiefu Trading Co, Ltd (Guangzhou, Kina). Muški štakori Sprague-Dawley (200 ± 20 g) korišteni su i isporučeni od Guangdong Animal Experiment Center (Guangzhou, Kina). Štakori su držani pri standardnoj temperaturi, vlažnosti i svjetlosnim uvjetima, sa standardnom prehranom za glodavce i vodom. Istraživanje je odobrilo Povjerenstvo za etiku eksperimentalnih životinja Guangdong Pharmaceutical University (BR. SPF2017120, Guangzhou, Kina).

4.2. In vitro aktivnost inhibicije tirozinaze flavonoida

Ispitivanje inhibicije tirozinaze provedeno je na temelju prethodne studije uz male modifikacije [2]. Aktivnost inhibicije tirozinaze određena je pomoću spektrofotometra praćenjem stvaranja dopakroma na 493 nm. Reakcijski sustav, kao što je prikazano u tablici 7, sadržavao je 0.5 mL različitih koncentracija flavonoida, uključujući arbutin, kvercetin, morin, festin, rutin i breviskapin, i 0.5 mL tirozinaze (120 jedinica/mL u fosfatnom puferu, pH 6,8), koji su pomiješani s 1,5 mL fosfatnog pufera (pH 6,8). Nakon inkubacije na 30 ◦C tijekom 10 minuta, u sustave je dodano 0,5 mL l-tirozina. Reakcijski sustavi su inkubirani na 30 ◦C tijekom 20 minuta, a apsorbancija je određena na 493 nm. Arbutin je korišten kao pozitivna kontrola. Stupanj inhibicije uzorka izražen je kao koncentracija inhibicije od 50 posto (IC50).

4.3. In vitro antioksidacijska aktivnost flavonoida

Antioksidacijska aktivnost flavonoida mjerena je brzinom izbjeljivanja DPPH, koju je objavio Blois [60]. U svom radikalnom obliku, DPPH apsorbira na valnoj duljini od 515 nm, ali se njegova apsorpcija smanjuje nakon redukcije antioksidansom ili radikalnim spojem. Aktivnost hvatanja DPPH radikala flavonoida procijenjena je prema metodi koju je opisao Rui Yang, uz neke modifikacije [61]. Ukratko, 5 mL DPPH (30 µg/mL) pomiješano je s 0,1 mL apsolutnog etilnog alkohola i 0,1 mL uzoraka različitih koncentracija. Zatim je određena apsorbancija smjesa na 515 nm. Aktivnost hvatanja DPPH radikala izračunata je na sljedeći način:

4.4. Formulacija niosoma

Na temelju prethodnih istraživanja i objavljenih radova koji su pokazali da je Span60 uobičajeni surfaktant koji se koristi za formiranje niosoma [15,27,31], dizajnirali smo sustav formulacije neionskih tenzida korištenjem Span60 i RH40 u različitim omjerima mase. Vodljivost, viskoznost i veličina kao indeksi ispitani su kako bi se odredio odgovarajući omjer neionskih površinski aktivnih tvari koje tvore liposome.

Ispitivani omjeri mase Span60 i RH40 bili su 4:16, 6:14, 8:12, 9:11, 10:10, 12:8, 13:7, 14:6 , 15:5 i 16:4 (ukupna težina: 2 g). Span60 je otopljen na 80 ◦C i zatim miješan s RH40 2 minute. Zatim su smjese hidratizirane sa 100 mL vode na 80 ◦C tijekom 10 minuta. Vodljivost (DDS-11A konduktometar, Shanghai Ridao Scientific Instruments Co., Ltd., Šangaj, Kina), viskoznost (Ubbelode viskozimetar, 0,4–0,5 mm, Shanghai Liangjing Glass Instrument Factory, Šangaj, Kina) i veličina (Nano-ZS90, Malvern, Malvern, UK) sustava neionskih tenzida mjereni su na sobnoj temperaturi.

4.5. Priprema i procjena niosoma napunjenih kvercetinom

4.5.1. Priprava niosoma napunjenih kvercetinom

Na temelju TEM slike sustava Span{{0}}RH40 (Slika 3), Span60 i RH40 pri omjeru mase 9:11, čini se da se formiraju sferni ili ovalni niosomi. Stoga su niosomi napunjeni kvercetinom pripremljeni s omjerom masa Span60/RH40 od ​​9:11 pomoću uređaja za magnetsko miješanje. Span60 (0,9 g), RH40 (1,1 g) i kvercetin (30 mg) su zajedno otopljeni. Zatim je u smjesu dodano 100 mL pročišćene vode na 80 ◦C i hidratizirano 10 min. Formirani su niosomi puni kvercetina i potom ohlađeni na sobnu temperaturu. Bistri niosomi dobiveni su obradom uz visokotlačnu homogenizaciju na 1500 bara.

4.5.2. Veličina, Zeta potencijal i morfologija niosoma napunjenih kvercetinom

Veličina i zeta potencijal praznih niosoma i niosoma napunjenih kvercetinom izmjereni su pomoću Malvern Zetasizer (ZS90 plus MPT-2, Malvern, Malvern, UK). Morfologija niosoma napunjenih kvercetinom karakterizirana je transmisijskom elektronskom mikroskopijom. Uzorci kvercetin-niosoma taloženi su na bakrenu rešetku i nakon 1 minute višak uzorka uklonjen je filter papirom. TEM je korišten za promatranje uzoraka nakon negativnog bojenja fosfovolframovom kiselinom.

4.5.3. Učinkovitost zarobljavanja lijeka

Učinkovitost hvatanja lijeka u niosome napunjene kvercetinom određena je tehnikom centrifugiranja u minikoloni. Minikolona je pripremljena korištenjem hidratizirane disperzije Sephadex G50 u štrcaljki od 5 mL, koja je centrifugirana 30 s na 900 okretaja u minuti. Alikvot niosoma napunjenih kvercetinom (400 µL) uzet je u minikolonu i eluati su sakupljeni centrifugiranjem na 1500 okretaja u minuti tijekom 3 minute. Eluati su razrijeđeni do 10 mL s metanolom i vorteksirani, a 10 µL filtriranih uzoraka ubrizgano je u tekućinsku kromatografiju visoke učinkovitosti (HPLC). Potom je slobodni kvercetin eluiran centrifugiranjem s 25 mL 80 postotnog metanola, a sadržaj kvercetina određen HPLC-om.

4.6. Topljivost u vodi i ravnotežna topljivost kvercetina

Topljivost kvercetina u vodi mjerena je s 15 mL pročišćene vode, fosfatnim puferima različitih pH vrijednosti (pH 5.0, 6.0, 6.8, 7.4, 8.0) , i višak kvercetina, i stavljen u bočice. Bočice su mućkane 24 sata u vodenoj kupelji na 37 ◦C, a supernatant je određen HPLC-om nakon centrifugiranja.

Ravnotežna topljivost kvercetina provedena je korištenjem sustava n-oktanol-voda s omjerima n-oktanol/voda od 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1: 7 i 1:8. Zatim je pripremljeno 70 µg/mL otopine kvercetina vodom zasićenom otopinom n-oktanola i 1 mL 70 µg/mL otopine kvercetina uzeto je u osam bočica, a zatim 1 mL, 2 mL, 3 mL, 4 mL, 5 mL 6 mL, 7 mL i 8 mL pročišćene vode je dodano u odgovarajuće bočice.

Proučavana je i ravnotežna topljivost kvercetina u n-oktanol-puferskim sustavima pri različitim pH vrijednostima. Omjer n-oktanol-pufera odabran je na 1:2 na temelju rezultata ravnotežne topljivosti kvercetina u sustavu n-oktanol-voda. Volumen od 2 mL od 70 µg/mL otopine kvercetina i 4 mL otopine fosfatnog pufera zasićene n-oktanolom pri različitim pH vrijednostima dodano je u bočice i bočice su mućkane 24 sata na 37 ◦C vodena kupka. Zatim je uzeto 0,2 mL otopine kvercetina u sloju n-oktanola i razrijeđeno do 5 mL (oko 2,8 µg/mL) pomoću mobilne faze (metanol-1 posto fosforne kiseline=60:40). Uzorci su određeni pomoću HPLC. Standardna otopina kvercetin n-oktanola (70 µg/mL) je razrijeđena i određena kao što je gore opisano.

4.7. Fotostabilnost kvercetin-niosoma

Otopina kvercetin metanola (300 µg/mL) dodana je u prozirne bočice i stavljena pod sunčevu svjetlost. Zatim je HPLC-om određen sadržaj kvercetina na 0, 12, 24, 36, 48, 60 i 72 h. Niosomi kvercetina podijeljeni su u prozirne bočice i stavljeni u komoru za ispitivanje stabilnosti na svjetlost (PTOP-500B, Zhejiang TOP Instrument Co., Ltd., Zhejiang, Kina) s osvjetljenjem od 4500 ± 500 LX tijekom 10 dana. Uzorak od 0,2 g liposoma kvercetina uzet je 0., 5. i 10. dana i otopljen u 10 mL etanola. Uzorci su određeni pomoću HPLC nakon centrifugiranja i filtracije s 0,22 µm Millipore filter membranom. Fotostabilnost je procijenjena postotkom preostalog kvercetina u različitim vremenima zračenja, u usporedbi s neeksponiranim uzorcima.

4.8. Studija oslobađanja in vitro

4.8.1. Topivost kvercetina u različitim medijima za otpuštanje

Topivost kvercetina ispitivana je u različitim medijima za otpuštanje, uključujući {{0}}.1 posto, 0.2 posto, 0.3 posto, 0.4 postotak , {{10}}.6 posto , i 0.8 posto Tween80 vodena otopina, kao i 0.2 posto , 0,4 posto , i 0,6 postotna vodena otopina SDS. Vodena otopina od 15 mL Tween80 i SDS u različitim koncentracijama i višak kvercetina stavljeni su u svaku od bočica. Bočice su mućkane u vodenoj kupelji na 32 ◦C tijekom 24 sata. Nakon 24 h, suspenzija od 5 mL je centrifugirana na 3000 RMP tijekom 15 minuta, a 0,2 mL supernatanta je razrijeđeno do 2 mL i određeno pomoću HPLC.

4.8.2. Otpuštanje lijeka dijalizom

Studija topljivosti kvercetina prikazana u tablici 5 pokazala je da 0.8 posto Tween80 (pH 5.0) vodena otopina ispunjava uvjete povlačenja i odgovara pH vrijednosti ljudske kože. Stoga je ponašanje slobodnog kvercetina i liposoma kvercetina pri otpuštanju ispitano u 0.8 postotnoj vodenoj otopini Tween80 (pH 5,0).

Vrećica dijalizata (8000–14,000 granična molekulska težina) obrađena je s 2 posto otopina NaHCO3 i 1 mmol/mL EDTA. 10 mL (300 µg/mL) otopine kvercetin-niosoma i kvercetin-propandiola dodano je u vrećice za dijalizat i stavljeno u posude za otapanje koje sadrže 1000 mL 0,8 postotne vodene otopine Tween80 (pH 5,0) na 32 ◦C. Posude za otapanje su postavljene na magnetsku miješalicu pri brzini od 100 okretaja u minuti. Medij za otpuštanje (2 mL) je izvađen nakon 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 i 24 h i zamijenjen s medijem za slijepo otpuštanje (2 mL). Izvučenih 2 mL medija za otpuštanje je centrifugirano na 3000 o/min tijekom 15 minuta i filtrirano. Oslobođeni kvercetin je kvantificiran HPLC-om.

4.9. Ex vivo studije prodiranja lijeka i zadržavanja kože

Štakori su žrtvovani dislokacijom cerviksa, dlake na abdomenu su obrijane, a zatim je trbušna koža odvojena i stavljena u fiziološku otopinu. Nakon toga, potkožno tkivo (mišić, masno tkivo i vaskulum) uklonjeno je kirurškim škarama i hemostatskim pincetama i zatim pohranjeno na 4 ◦C s fiziološkom otopinom za daljnje ispitivanje.

Studije prodiranja i zadržavanja lijeka u koži kvercetin-niosoma, kvercetin-niosoma-1 posto propandiola, kvercetin-transfersoma (sastavljenih od fosfolipida i Tween80 u omjeru mase 9:11) i slobodnog kvercetina -propandiol otopine provedene su kako bi se ispitala njihova transdermalna isporuka pomoću TK-20B transdermalnog difuzijskog uređaja s efektivnom difuzijskom površinom od 2,99 cm2. Zatim je 0.6 postotna otopina Tween80 odabrana kao medij za oslobađanje penetracije. Kožna tkiva su postavljena između difuzijske stanice i receptorske stanice, a na kožu je naneseno 0.4 mL pripravaka kvercetina (ekvivalentno 120 µg kvercetina). Penetracijski medij (0,5 mL) povučen je iz receptorske stanice nakon 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 i 24 sata uz zamjenu svježeg penetracijskog medija (0,5 mL). Sredstva za prodiranje izvučena u različitim vremenskim točkama razrijeđena su do 7 mL s metanolom i određena pomoću HPLC nakon centrifugiranja i filtracije.

Nakon eksperimenta prodiranja, proveden je eksperiment zadržavanja lijeka u koži. Nakon 24 h, kožna tkiva su izolirana, zatim potpuno ošišana u 7 mL metanola nakon ispiranja kvercetina s površine destiliranom vodom i ekstrahirana 40 min ultrazvučno. Zatim su uzorci vorteksirani i centrifugirani, a supernatant je analiziran HPLC-om nakon filtracije kroz Millipore filter membranu od 0,22 µm.

4.10. HPLC metoda

Analitički stupac bio je Dimark C18 (150 mm × 4,6, 5 µm). Mobilna faza se sastojala od metanola i 1 posto H3P04 (60:40, v/v). Brzina protoka je postavljena na 1 mL/min na 30 ◦C i volumen injekcije od 10 µL. Vrh kvercetina je detektiran na 363 nm.

4.11. Statistička analiza

Podaci su izraženi kao srednja vrijednost eksperimenata ± standardna devijacija (SD) i analizirani su korištenjem jednosmjerne analize varijance (ANOVA), praćene Tukeyjevim post-testom višestruke usporedbe. Statističke razlike koje daju P < 0.05 smatraju se statistički značajnima.

5. Zaključci

Ispitali smo kvercetin, prirodni flavonoid koji ima snažna svojstva izbjeljivanja i antioksidansa, te formulirali liposome korištenjem neionskog sustava surfaktanata za poboljšanje topljivosti, fotostabilnosti i sposobnosti prodiranja kvercetina u kožu.

Doprinosi autora:

Konceptualizacija, WC i XL; metodika, WC; softver, YH; validacija, BL, YH i ZC; formalna analiza, BL; istraga, JY; resursi, HX; čuvanje podataka, BL; pisanje—originalna priprema nacrta, BL; pisanje—pregled i uređivanje, XL; vizualizacija, WC; nadzor, XL; nabava sredstava, XL

Financiranje:

Ovo istraživanje nije dobilo vanjska sredstva.

Sukob interesa:

Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.

Reference

1. Chhikara, N.; Kaur, R.; Jaglan, S.; Sharma, R.; Gat, Y.; Panghal, A. Bioaktivni spojevi i farmakološka i prehrambena primjena Syzygium cumini—Pregled. Funkcija hrane. 2018, 9, 6096. [CrossRef] [PubMed]

2. Carol López de Dicastillo Carol López Bustos, F.; Valenzuela, X.; López-Carballo, G.; Vilariño, JM; Galotto,MJ Čileanska bobica, Ugni molinae, Turcz. Ekstrakt voća i lišća sa zanimljivim antioksidativnim, antimikrobnim i inhibicijskim svojstvima tirozinaze. Food Res. Int. 2017., 102, 119–128.

3. Chiari, ME; Vera, DM; Palacios, SM; Carpinella, MC Tirozinazna inhibitorna aktivnost 6-izoprenoida supstituiranog flavanona izoliranog iz Dalea elegans. Bioorg. Med. Chem. 2011, 19, 3474–3482. [CrossRef] [PubMed]

4. Sirat, HM; Rezali, MF; Ujang, Z. Izolacija i identifikacija uklanjanja radikala i inhibicije tirozinaze polifenola iz Tibouchina semidecandra. J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 10404–10409. [CrossRef] [PubMed]

5. Xiong, Z.; Liu, W.; Zhou, L.; Chen, J. Polifenol oksidaza gljive (Agaricus bisporus) inhibirana apigeninom: multispektroskopske analize i računalna simulacija pristajanja. Food Chem. 2016, 203, 430–439. [CrossRef] [PubMed]

6. Yan-Zhen, Z.; Da-Fu, C.; Geng, D.; Guo, R. Učinak supstituenta na aktivnost uklanjanja radikala apigenina. Molecules 2018, 23, 1989.

7. Handjani-Vila, RM; Ribier, A.; Rondot, B.; Vanlerberghie, B. Disperzije lamelarnih faza neionskih lipida u kozmetičkim proizvodima. Int. J. Cosmet. Sci. 1979, 1, 303–314. [CrossRef] [PubMed]

8. Yoshida, H.; Lehr, CM; Kok, W.; Junginger, HM; Verhoef, JC; Bouwstra, JA Niosomi za oralnu dostavu peptidnih lijekova. J. Kontrola. Izdanje 1992., 21, 145–153. [CrossRef]

9. Uchegbu, IF; Duplo, JA; Kelland, LR; Turton, JA; Florence, AT Aktivnost niosoma doksorubicina protiv stanične linije raka jajnika i tri in vivo modela mišjih tumora. J. Drug Target. 1996, 3, 399–409. [CrossRef]

10. Alsarra, IA; Bosela, AA; Ahmed, SM; Mahrous, GM Proniosomi kao nosač lijeka za transdermalnu dostavu ketorolaka. Eur. J. Pharm. Biopharm. 2005., 59, 485–490. [CrossRef]

11. Hong, M.; Zhu, S.; Jiang, Y.; Tang, G.; Pei, Y. Učinkovito ciljanje tumora hidroksi kamptotecinom opterećenih PEGiliranim liposomima modificiranim transferinom. J. Kontrola. Izdanje 2009., 133, 96–102. [CrossRef] [PubMed]

12. Tavano, L.; Muzzalupo, R.; Picci, N.; de Cindio, B. Ko-enkapsulacija antioksidansa u liposomske nosače: Gastrointestinalne studije otpuštanja za nutraceutičke primjene. Koloidno surfanje. B Biointerface 2014, 114, 82–88. [CrossRef] [PubMed]

13. Sohrabi, S.; Haeri, A.; Mahboubi, A.; Mortazavi, A.; Dadashzadeh, S. Chitosan gel-embedded moxifloxacin niosomes: Učinkovit antimikrobni hibridni sustav za infekciju opeklina. Int. J. Biol. Macromol. 2016, 85, 625–633. [CrossRef] [PubMed]

14. Kumar, N.; Goindi, S. Statistički dizajnirani neionski površinski aktivni vezikuli za dermalnu isporuku itrakonazola: Karakterizacija i in vivo procjena korištenjem standardiziranog modela infekcije Tinea pedis. Int. J. Pharm. 2014., 472, 224–240. [CrossRef] [PubMed]

15. Cerqueira-Coutinho, C.; Dos Santos, EP; Mansur, CR Niosomi kao nano-sustavi isporuke u farmaceutskom polju. krit. Rev. Ther. Lijek Carr. Syst. 2016, 33, 195. [CrossRef]

16. Yeh, MI; Huang, HC; Liaw, JH; Huang, MC; Huang, KF; Hsu, FL Dermalna isporuka niosomima ekstrakta crnog čaja kao sredstva za zaštitu od sunca. Int. J. Dermatol. 2013, 52, 239–245. [CrossRef] [PubMed]

17. Manconi, M.; Sinico, C.; Valenti, D.; Loy, G.; Fadda, AM Niosomi kao nosači za tretinoin. I. Priprema i svojstva. Int. J. Pharm. 2002., 234, 237–248. [CrossRef] 18. Manconi, M.; Valenti, D.; Sinico, C.; Lai, F.; Loy, G.; Fadda, AM Niosomi kao nosači za tretinoin: II. Utjecaj vezikularne inkorporacije na fotostabilnost tretinoina. Int. J. Pharm. 2003, 260, 261–272. [CrossRef]

20. Kunitake, T.; Takahata, Y. Sintetička dvoslojna membrana. J. Am. Chem. Soc. 1977, 99, 3860–3861. [CrossRef]

20. Brady, JE; Evans, DF; Kačar, B.; Ninham, BM Spontane vezikule. J. Am. Chem. Soc. 1984, 106, 4279–4280. [CrossRef]

22. Kaler, E.; Murthy, A.; Rodriguez, B.; Zasadzinski, J. Spontano stvaranje vezikula u vodenim smjesama površinski aktivnih tvari s jednim repom. Znanost 1989, 245, 1371–1374. [CrossRef] [PubMed]

23. Kaler, EW; Herrington, KL; Murthy, AK; Zasadzinski, JAN Fazno ponašanje i strukture smjesa anionskih i kationskih površinski aktivnih tvari. J. Phys. Chem. 1992, 96, 6698-6707. [CrossRef]

23. Uchegbu, IF; Vyas, SP Vezikule (niosomi) na bazi neionskih surfaktanata u isporuci lijekova. Int. J. Pharm. 1998, 172, 33–70. [CrossRef]

24. Mahale, NB; Thakkar, PD; Mali, RG; Walunj, DR; Chaudhari, SR Niosomi: Novi neionski stabilni vezikularni sustavi s produženim otpuštanjem - Pregled. Adv. Colloid Interface Sci. 2012., 183–184, 46–54. [CrossRef] [PubMed]

25. Udupa, N.; Chandraprakash, KS; Umadevi, P.; Pillai, GK Formulacija i procjena niosoma metotreksata. Drug Dev. Komun. 1993, 19, 12. [Unakrsna Ref.]

26. Uchegbu, IF; Florence, AT Neionski površinski aktivni vezikuli (niosomi): fizikalna i farmaceutska kemija. Adv. Colloid Interface Sci. 1995., 58, 1–55. [CrossRef]

28. Yoshioka, T.; Sternberg, B.; Florence, AT Priprava i svojstva vezikula (niosoma) sorbitan monoestera (Span 20, 40, 60 i 80) i sorbitan triestera (Span 85). Int. J. Pharm. 1994., 105, 1–6. [CrossRef]

28. Manosroi, A.; Wongtrakul, P.; Manosroi, J.; Sakai, H.; Sugawara, F.; Yuasa, M.; Abe, M. Karakterizacija vezikula pripremljenih s različitim neionskim surfaktantima pomiješanim s kolesterolom. Koloidno surfanje. B Biointerface 2003, 30, 129–138. [CrossRef]

29. Alsarra, IA Procjena proteasoma kao alternativne strategije za optimizaciju transdermalne isporuke piroksikama. J. Microencapsul. 2009, 26, 272–278. [CrossRef]

30. Sharma, S.; Das, A.; Dasgupta, A.; Lee, WM; Kim, JO; Oh, DH; Kim, DD; Kim, JS; Yoo, BY; Choi, HG; et al. Formulacija i in vitro procjena niosoma minoksidila za poboljšanu isporuku u kožu. Int. J. Pharm. 2009, 377, 1–8.

31. Junyaprasert, VB; Singh, P.; Suksiriworapong, J.; Chantasart, D. Fizikalno-kemijska svojstva i propusnost kože Span 60/Tween 60 niosoma elaginske kiseline. Int. J. Pharm. 2012, 423, 303. [CrossRef] [PubMed]

32. Manosroi, A.; Khanrin, P.; Lohcharoenkal, W.; Götz, F.; Manosroi, W.; Manosroi, J. Povećanje transdermalne apsorpcije kroz kožu štakora galidermina učitanog u liposome. Int. J. Pharm. 2010, 392, 304–310. [CrossRef] [PubMed]

33. Auda, SH; Fathalla, D.; Fetih, G.; El-Badry, M.; Shakeel, F. Niosomi kao transdermalni sustav za isporuku lijeka za celekoksib: In vitro i in vivo studije. Polym. Bik. 2016, 73, 1229–1245. [CrossRef]

34. Manosroi, A.; Jantrawut, P.; Manosroi, J. Protuupalna aktivnost gela koji sadrži nove elastične niosome zarobljene diklofenak dietil amonijem. Int. J. Pharm. 2008., 360, 156–163. [CrossRef] [PubMed]

35. Shahiwala, A.; Misra, A. Studije lokalne primjene normalno uhvaćenog nimesulida. J. Pharm. Pharm. Sci. 2002, 5, 220–225. [PubMed]

36. Pardakhty, A.; Varshosaz, J.; Rouholamini, A. In vitro studija polioksietilen alkil eter niosoma za isporuku inzulina. Int. J. Pharm. 2007., 328, 130–141. [CrossRef] 37. Abdelbary, G.; El-Gendy, N. Niosome-inkapsulirani gentamicin za oftalmološki kontroliranu isporuku. Aaps Pharmscitech 2008, 9, 740-747. [CrossRef] [PubMed]

38. Wadda Abbad, S.; Yu, F.; Munyendo, WLL; Wang, J.; Lv, H.; Zhou, J. Formulacija, karakterizacija i farmakokinetika niosoma Morin hidrata pripremljenih od različitih neionskih površinski aktivnih tvari. Int. J. Pharm. 2013, 456, 446–458. [CrossRef]

39. Mishra, J.; Swain, J.; Mishra, AK Ispitivanje temperaturno ovisnih promjena međupovršinske hidratacije i viskoznosti Tween20: kolesterol (1:1) niosomske membrane korištenjem fisetina kao fluorescentne molekularne sonde. Phys. Chem. Chem. Phys. 2018, 20, 13279–13289. [CrossRef]

41. Procházková, D.; Boušová, I.; Wilhelmová, N. Antioksidativna i prooksidacijska svojstva flavonoida. Fitoterapia 2011, 82, 513–523. [CrossRef]

41. Cherrak, SA; Mokhtari-Soulimane, N.; Berroukeche, F.; Bensenane, B.; Cherbonnel, A.; Merzouk, H.; Elhabiri, M. In Vitro Antioksidans u odnosu na svojstva keliranja metalnih iona flavonoida: Istraživanje strukture i aktivnosti. PLoS ONE 2016, 11, e0165575. [CrossRef] [PubMed]

42. Amić, D.; Davidović-Amić, D.; Beslo, D.; Rastija, V.; Lučić, B.; Trinajstić, N. SAR i QSAR antioksidativnog djelovanja flavonoida. Curr. Med. Chem. 2007., 14, 827–845. [CrossRef] [PubMed]

43. Machado, ND; Fernando, SO; De Rossi, RH; Fernandez, MA Ciklodekstrin je modificirao niosome da inkapsuliraju hidrofilne spojeve. Adv. RSC 2018, 8, 29909–29916. [CrossRef]

45. Imran, M.; Shah, MR; Ullah, F.; Ullah, S.; Elhissi, AMA; Nawaz, W.; Ahmad, F.; Sadiq, A.; Ali, I. Liposomalni nanonosač na bazi glikozida za poboljšanu in vivo izvedbu cefiksima. Int. J. Pharm. 2016, 505, 122–132. [CrossRef] [PubMed]

45. Hao, Y.; Zhao, F.; Li, N.; Yang, Y.; Li, K. Studije o visokoj inkapsulaciji kolhicina pomoću noisomskog sustava. Int. J. Pharm. 2002, 244, 73–80. [CrossRef]

46. ​​Anandam, S.; Selvamuthukumar, S. Proizvodnja ciklodekstrinskih nanospužvi za isporuku kvercetina: fizikalno-kemijska karakterizacija, fotostabilnost i antioksidativni učinci. J. Mater. Sci. 2014, 49, 8140–8153. [CrossRef]

47. Lv, X.; Liu, T.; Ma, H.; Tian, ​​Y.; Li, L.; Li, Z.; Gao, M.; Zhang, J.; Tang, Z. Priprema mikroemulzija na bazi eteričnog ulja za poboljšanje topljivosti, pH stabilnosti, fotostabilnosti i prodiranja kvercetina u kožu. AAPS PharmSciTech 2017, 18, 3097–3104. [CrossRef]

49. Azzi, J.; Jraij, A.; Auezova, L.; Fourmentin, S.; Greige-Gerges, H. Nova otkrića za enkapsulaciju i konzerviranje kvercetina s ciklodekstrinima, liposomima i lijekom u ciklodekstrinu u liposomima. Food HydroColloid 2018, 81, 328–340. [CrossRef]

49. Smith, GJ; Thomsen, SJ; Markham, KR; Andary, C.; Cardon, D. Fotostabilnosti 5-hidroksi flavona, flavonola, njihovih glikozida i njihovih aluminijevih kompleksa. J. Photochem. Photobiol. A Chem. 2000, 136, 87–91. [CrossRef]

51. Kubo, I.; Kinsthori, I. Flavonoli iz cvijeta šafrana: inhibitorna aktivnost tirozinaze i mehanizam inhibicije. J. Agric. Food Chem. 1999, 47, 4121-4125. [CrossRef]

51. Kim, YJ; Uyama, H. Inhibitori tirozinaze iz prirodnih i sintetskih izvora: Struktura, mehanizam inhibicije i perspektiva za budućnost. Ćelija. Mol. Life Sci. 2005., 62, 1707–1723. [CrossRef] [PubMed]

53. Kim, D.; Park, J.; Kim, J.; Han, C.; Yoon, J.; Kim, N.; Seo, J.; Lee, C. Flavonoidi kao inhibitori tirozinaze gljiva: Studija gašenja fluorescencije. J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 935–941. [CrossRef] [PubMed]

54. Fan, M.; Zhang, G.; Hu, X.; Xu, X.; Gong, D. Kvercetin kao inhibitor tirozinaze: Inhibitorna aktivnost, konformacijska promjena i mehanizam. Food Res. Int. 2017, 100, 226–233. [CrossRef] [PubMed]

54. Didem ¸Söhreto ˘glu Suat, S.; Burak, B.; Özel, A. Inhibicija tirozinaze nekim flavonoidima: Inhibicijska aktivnost, mehanizam prema in vitro i silico studijama. Bioorg. Chem. 2018, 81, 168–174. [CrossRef] [PubMed]

55. Gopinath, D.; Ravi, D.; Karwa, R.; Rao, B.; Shashank, A.; Rambhau, D. Farmakokinetika zidovudina nakon intravenske bolusne primjene novog pripravka niosoma bez kolesterola. Arzneimittelforschung 2011, 51, 924–930. [CrossRef] [PubMed]

56. Ghosh, S.; Ghatak, C.; Banerjee, C.; Mandal, S.; Kuchlyan, J.; Sarkar, N. Spontani prijelaz micele-vezikule-micele u mješavini kationske površinski aktivne tvari i ionske tekućine slične anionskoj površinski aktivnoj tvari: čista nelipidna mala unilamelarna vezikularna šablona koja se koristi za istraživanje otapala i rotacijske relaksacije. Langmuir 2013, 29, 10066–10076. [CrossRef]

58. Sakai, T.; Ikoshi, R.; Toshida, N.; Kagaya, M. Termodinamički stabilna formacija vezikula i prijelaz iz vezikula u micele jednostranog anionskog površinski aktivnog sredstva u vodi. J. Phys. Chem. B 2013, 117, 5081. [CrossRef]

59. Ghosh, S.; Mondal, S.; Pan, A.; Mitra, RK; Ghosh, S. Prijelaz micele u vezikule posredovan ionskom tekućinom kationskog gemini surfaktanta: spektroskopsko istraživanje. Meka materija 2018, 14, 4185–4193.

60. Mukherjee, B.; Patra, B.; Layek, B.; Mukherjee, A. Produženo oslobađanje aciklovira iz nano-liposoma i nano-liposoma: In vitro studija. Int. J. Nanomed. 2007., 2, 213–225.

60. Blois, MS Određivanje antioksidansa upotrebom stabilnog slobodnog radikala. Nature 1958, 181, 1199–1200. [CrossRef]

61. Rui, Y.; Ying, G.; Weixin, W.; Chen, H.; On, Z.; Jia, A.-Q. Antioksidativni kapacitet fenola u cvjetovima Camellia nitidissima Chi i njihova identifikacija pomoću HPLC Triple TOF MS/MS. PLoS ONE 2018, 13, e0195508.

Dostupnost uzorka:

Uzorci spojeva nisu dostupni od autora.

© 2019 autora. Vlasnik licence MDPI, Basel, Švicarska. Ovaj je članak članak s otvorenim pristupom koji se distribuira pod uvjetima licence Creative Commons Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

Primljeno: 2. travnja 2019.; Prihvaćeno: 21. lipnja 2019.; Objavljeno: 24. lipnja 2019

For more information:1950477648nn@gmail.com