Novi glikozidi tvrtke Cistanche Salsa

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Li Lei^a, Yong Jiang^aet al

Šest novihGlikozidi, salsa strane A – F (1–6, resp.), izolirane su od stabljikaCistanche salsa, zajedno sa sedam poznatih glikozidnih spojeva. Njihove strukture razjašnjene su hidrolizom estera i kemijskom derivacijom, dubinskim NMR spektroskopskim i masenim spektrometrijskim analizama te usporedbom s podacima iz literature o srodnim spojevima. NoviGlikoziditemelje se na b-D-glukozi (Glc) i a-L-rhamnozi (Rha), noseći acetil (Ac), benzil (Bn), fenetil, koumaroil (Cou) i kofeoil (Caf) supstituente.

Cistanche salsa ima mnogo učinaka

Uvod

–Cistanche salsa(C. A. MEY.) G. BECK, jedna od vrsta HerbeCistanche, kratka je parazitska biljka Orobanchaceae porijeklom iz sjeverozapadne Kine. Kao važan tonik u tradicionalnoj kineskoj medicini (TCM), stabljike Herbe Cistanche Kinezi i Japanci već dugo koriste protiv nedostatka bubrega, ženske neplodnosti, morbidne leukoreje, neurastenije i senilnog zatvora zbog kolonske inercije itd. [1]. Baš kao i u drugim cistanche biljkama, na bazi fenetilaGlikozidisu glavni aktivni sastojci C. salse. Ovi spojevi su prijavljeni da imaju neuroprotektivnu aktivnost protiv 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidroridina (MPTP) izazvane dopaminergičkom toksičnošću kod miševa C57 [2-4]. Postoji samo nekoliko fitokemijskih studija koje se tiču C. salse, prve koje datiraju oko 20 godina [5-8]. [9] [10] [10] izvijestili su da je biljni materijalCistanche salsaje identificiran lažno kada je istraživao izvore HerbeCistanches japanskog medicinskog tržišta [9] [10]. Stoga je potrebno ponovno istražiti kemijske sastojke C. salse.

U sadašnjem radu naCistanche salsa, prijavljujemo izolaciju i razjašnjenje strukture šest novihGlikozidi, salsa strane A-F (1-6), s različitim supstituentima, uključujući acetil (Ac), benzil (Bn), kofeoil (Caf) i coumaroyl (Cou) ostatke. Iz istog ekstrakta izolirani su i sljedećih sedam poznatihGlikozidi:tubuloside B [11], acteoside [6], izoacteoside [11], 2' -acetylacteoside [7], ehinacozid [6], cistanozid C [7], i cistanozid D [7].

Rezultati i rasprava

– Spoj 1 izoliran je kao amorfni prah, a njegovu molekularnu formulu hr-ESI-MS (m/ž 596.2348) zaključio je kao C28H34O13 (m/ž 596.2348([M+NH4]+; calc. Podaci 1 H-NMR od 1 (tablica 1) pokazali su karakteristične signale (E)konfigurirane skupine kofeoila (Caf), s aromatičnim signalima tipa ABX na d(H) 7,07 (br. s), 6,76 (br. d, J =8,5 Hz) i 7,03 (d, J =8,5 Hz), dva olefinska H-atoma na d(H) 7,51 (d, J=16,0) i 6,34 (d, J=16,0 Hz), dva olefinska H-atoma na d(H) 7,51 (d, J=16,0) i 6,34 (d, J=16,0 Hz), i Bn moiety s pet aromatičnih rezonancija i dva nedvosmislena H-atoma na d(H) 4.59, 4.77 (2d, J = 12.0 Hz svaki), što je sugeriralo da je 1 spoj zamijenjen Bn-om [12].

glycosides in Cistanche salsa

Ukupna kisela hidroliza 1 priuštene rhamnoze (Rha) i glukoze (Glc). Podaci NMR-a od 1 bili su slični onima tubulozida B [11], osim što su signali 3,4-dihidroksične fenil etanolne jedinice zamijenjeni signalima skupine Bn. U HMBCspectrumu od 1, korelacije između dvaju nepobitnih H-atoma na d(H) 4,59, 4,77 (a-CH2 od aglycone) i d(C) 101,7 (C(1') Glc-a), oba d(H) 4,40 (br. d, J =11,5 Hz, 1 H CH2(6')) i 4,23 (m, 1 H C H2(6')) s d(C) 166,6 (C(a') od estera), i od d(H) 5.04 (br. s, H C(1'')) i d(C) 80.8 (C(3' )) utvrđene su veze između aglikona, estera i šećernih moietiesa.

cistanche salsa

Cistanche salsa

Na temelju gore navedenih spektroskopskih dokaza, u kombinaciji s 2D-NMR podacima, struktura 1 razjašnjena je kao benzil 6-O-[(E)-3-(3,4-dihidroksija fenil)-prop-2-enoil]-3-O-a-L-rhamnopyranosyl-b-D-glucopyranoside1), a nazvana je salsa strana A.

Spoj 2 izoliran je kao amorfni prah, a njegova molekularna formula određena je kao C28H34O13 od strane HR-ESI-MS (m/z 596.2345 ([M+NH4]+)). Jedina razlika između 1 i 2 bila je u tome što je moiety Caf priključen na 4' -poziciju u 2 umjesto na 6' -poziciji. To se vidjelo u HMBCspectrumu 2, gdje je signal na d(H) 4,96 (t, J =9,0 Hz, H C(4' )) bio u korelaciji s d(C) 167,3 (C=O o caf-a) i dodatno potkrijepljen u usporedbi s podacima NMR-a 2'-acetilakteozida [4]. Tako je spoj2 identificiran kao benzil 4-O-[(E)-3-(3,4-dihydroxy fenil)prop-2-enoyl]-3-O-a-Lrhamnopyranosyl-b-D-glukopiranozid, a nazvan je salsa strana B.

Salsaside C(3) izoliran je kao amorfni prah, a njegovu molekularnu formulu razjasnio je HR-ESI-MS (m/ž 561.1958 ([M H]; calc.561.1972)). Podaci O NMR-u od 3 bili su slični onima iz 2., osim što su signali skupine Caf zamijenjeni signalima moietyja (E/Z)-coumaroyl (Cou) (vidi tablicu 1.). Prisutnost (E/Z)-smjese kako je naznačeno podijeljenim (2,38: 1) NMR rezonancijama, kao i vršnim udvostručenjem u HPLC kromatogramu, fenomenu koji je već prijavljen kod nekih fennetilaGlikozidi[13] [14]. U HMBCspectrumu od 3, korelacije između dviju nepobitnih aglycone aglycone a-CH2 rezonancija na d(H)4,62, 4,87 (2d, J =11,5 Hz svaki) i d(C) 103,2 (C(1')), između d(H) 4,75/4,71 (t, J=7,5 Hz, H C(4' )) i d(C) 168,3/166,0 (C=O of Cou) i između d(H) 5,02 (br. s, H C(1'")) i d(C) 80.8 (C(3' )) utvrđene su veze između aglyconea, te između d(H) 5,02 (br. s, H C(1')) i d(C) 80.8 (C(3' )) utvrđene su veze između aglyconea, te između d(H) 5,02 (br. s, H C(1'')) i d(C) 80.8 (C(3' )) utvrđene su veze između aglyconea, te između d(H) 5,02 (br. s, H C(1'')) i d(C) 80.8 (C(3' )) utvrđene su veze između aglyconea, te između d(H) 5,02 (br. s, H C(1'')) i d(C) 80.8 (C(3' )) utvrđene su veze između aglyconea, te između d(H) 5,02 (br. s, H C(1'')) i d(C) 80.8 (C(3' )) utvrđene su veze između aglyconea, te između d(H) 5,02 (br. s, H C(1'')) i d(C) 80.8 (C(3' )) utvrđene su veze između aglyconea, te između d(H) 5,02 (br. s, H C(1'')) i d(C) 80.8 (C(3' )) utvrđene su veze između aglyconea, te između d(H) 5,02 (br. s, H C(1'')) i d(C) 80. ester, i šećerne moieties. Tako je struktura spoja 3 razjašnjena kao benzil 4-O-[(E/Z)-3-(4-hidroksifenil)prop-2-enoyl]-3-O-a-L-rhamnopyranosyl-b-Dglucopyranoside, a nazvana je salsa strana C.

glycosides in cistanche salsa

table 1-2

Salsazid D (4) dobiven je kao amorfni prah, a njegovu molekularnu formulu kao C31H38O15 odredio je HR-ESI-MS (m/z 668.2563 ([M+NH4]+; calc.668.2554). 1H-NMR spektar od 4 (tablica 2) pokazivao je signale karakteristične za skupinu (E)-Caf i (4-hidroksifenil)etoksidnu skupinu [d(H) 2,65 (m, 2 H), 3,55 (m,1 H), 3,90 (m, 1 H), 6,64 (d, J =8,0 Hz, 2 H), 6,97 (d, J=8,0 Hz, 2 H)]. Ukupna kisela hidroliza od 4 priuštene Rha i Glc. Vrhunac iona fragmenta uočen u negativnom FAB masenom spektru na m/z 43, a NMR signali na d(H) 1,95 (s, 3 H) i na d(C) 169,3 i 20,7, ukazivali su na prisutnost izmjenične skupine. Podaci 1H- i 13C-NMR bili su vrlo slični podacima syringalide A 3'-a-L-rhamnopyranoside, osim dodatnog AC signala [15]. U HMBCspectrumu od 4, signal na d(H) 4,68 (t, J =9,0 Hz, H C(2')) bio je u korelaciji s d(C) 169,3 (C=O iz ac), što je ukazivalo na to da je Ac moiety povezan s C(2) Glc-a. Tako je struktura spoja 4 razjašnjena kao 2-(4-hidroksifenil)etil 2-O-acetil-4-O-O-[(E)-3-(3,4-dihydroxy fenil)prop-2- enoyl]-3-O-a-rhamnopyranosyl-b-D-glucopyranoside, a nazvana je salsa strana D.

content of Cistanche Salsa

SadržajCistanche salsa

Spoj 5 izoliran je kao amorfni prah, a njegova molekularna formula određena je kao C32H40O16 od strane HR-ESI-MS (m/z 679.2228 ([M H]; calc. 679.2238). Podaci 1H i 13C-NMR od 5 (tablica 2.) bili su vrlo slični podacima 4., osim signala fenetilne moiety. U spektru 1H-NMR od 5 nalazio se AMX sustav [d(H) 6,63 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,77 (br. s, 1 H)] i MeO signal na d(H) 3,85 (s, 3 H). U HMBCspectrumu je MeO signal bio u korelaciji s d(C) 148,7 (C(3)), što je pak koreliralo s d(H) 6,69 (d, J=8,0 Hz, HC(5)) i 6,77 (br. s, H C(2)). Stoga je zamjena za MeO bila na C(3) fenetilne moiety, što je potkrijepljeno usporedbom s podacima iz literature [7]. Stoga je struktura spoja 5 razjašnjena kao 2-(4-hidroksi-3-metoksifenil)etil2-O-acetil-4-O-[(E)-3-(3,4-dihydroxy phenyl)prop-2-enoyl]-3-O-a-L-rhamnopyranosyl-b-D-glukopiranozid, a nazvana je salsa strana E.

table 2

Spoj 6 izoliran je kao amorfni prah, a njegova molekularna formula određena je kao C31H38O15 od strane HR-ESI-MS (m/z 668.2543 ([M+NH4]+; calc. 1H-NMR spektar od 6 izloženih signala karakterističnih za (E)-Cou skupinu [d(H)6,35 i 7,46 (2d, J =16,0 Hz svaki, po 1 H), 6,69 (d, J =7,5 Hz, 2 H), 7,45 (d, J =7,5Hz, 2 H)], od (3,4-dihidroksiksy fenil)etoksij moiety [d(H) 6,31 (br. d, J=8,0 Hz, 1 H), 6,46 (br. s, 1 H), 6,49 (br. d, J=8,0 Hz, 1 H), 2,49 (m,CH2), 3,41 i 3,72 (po 2 m, po 1H)], te od dvije anomerične rezonancije [d(H) 4,45 (d, J=8,5 Hz, H C(1')), 4,55 (be. s, H C(1''))]. Kao i u 4 i 5, postojala je i AcO grupa prisutna u 6 [d(H) 1,88 (s, 3 H); d(C) 169.2, 20.6], koja je bila na C(2') Glc moiety, kako je utvrđeno HMBCexperiments. U HMBCpectrumu su uočene korelacije između signala CH2(6') i d(C) 166,6 (C=O of Cou), između d(H) 3,41, 3,72 (2 m, a-CH2 aglycone) i d(C) 99,5 (C(1')), te između d(H) 4,55 (br. s, H C(1')) i d(C) 68,8 (C(3')), iz kojih su uspostavljene sve veze. Tako je struktura spoja 6 taložena kao 2-(3,4-dihydroxy phenyl)etil 2-O-acetil-6-O-[(E)-3-(4-hidroksifenil)prop-2-enoyl]-3-O-a-L-rhamnopyranosyl-b-D-glukopiranozid, a nazvana je salsa strana F.

U spojevima 1– 6, konfiguracija u anomernom središtu ostatka Glc-a procijenjena je na b od J vrijednosti od 7,5 do 8,5 Hz. U slučaju ostataka Rha, anomerična konfiguracija izvedena je usporedbom relevantnih podataka od 13C-NMR s onima iz literature [6]. Apsolutne konfiguracije šećera, DGlc i L-Rha, određene su GC analizom kiralnih derivata (vidi Exper. dio) u usporedbi sa standardnim monosaharidima [16].

Ovu studiju financijski su poduprli Kineski nacionalni prirodoslovni fondovi (br. 30070887). Ljubazno priznajemo dr. Haiming Shi za pomoć tijekom pripreme rukopisa.

Cistanche salsa products

Cistanche salsaprerađevina

Eksperimentalni dio

Općenito. Silikagel (mreža 200–300; Qing Dao Hai Yang Chemical Group, Co.), Sephadex LH-20 (Farmacija), D101 smola (Tianjin Chemical, Co.) i ODS (mreža 100 – 200; Fuji Sylisia Chemical, Ltd.) korišteni su za kromatografiju stupca (CC). HPLC je izveden na instrumentu Waters-600, koristeći stup RP-C18 (10 M 250 mm i.d.; Alltech) brzinom protoka od 2,5 ml/min (UV detekcija na 330 nm). GC analiza provedena je na plinskom kromatografu Agilent-6890N, pomoću kapilarnog stupa HP-5 (28 m M 0,32 mm i.d.), FID detektora na 260 °i temperature kolone od 180 °, s plinom nosača N2 i brzinom protoka od 40 ml / min. λmax (log e) in nm. Optičke rotacije određene su na digitalnom polarimetru Perkin-Elmer 243B. IR Spectra zabilježeni su na spektrometru Nicolet Avatar-360 FT-IR; u cm-1. NMR spektri snimljeni su u CD3OD ili (D6)DMSO na Bruker AM-500 spektrometru; d u ppm rel. na Me4Si, J u Hz. FAB- i HR-ESI maseni spektri zabilježeni su na KYKY-ZHP-5 i Bruker APEX masenim spektrometrima, resp.

Biljni materijal. StabljikeCistanche salsaprikupljeni su iz Yanchija, autonomna regija Ningxia Hui, Kina, u travnju. Tvornicu je identificirao prof. Peng-Fei Tu, Škola farmaceutskih znanosti, Sveučilište u Pekingu. Uzorak vaučera pohranjen je u Herbariju Centra za moderna istraživanja tradicionalne kineske medicine Sveučilišta u Pekingu.

Izvlačenje i izolacija. Osušene stabljikeCistanche salsa(8,0 kg) ekstrahirani su sa 75% aq. EtOH (80l) na r.t. perkolation. Otapalo je uklonjeno, ostatak je suspendiran u H2O (4 l) i ekstrahiran naftnim eterom (PE; 12 l), AcOEt (12 l) i BuOH (12 l) kako bi si nakon uklanjanja otapala priuštio 100 g PE-, 99 g AcOEt-i 100 g ekstrakta topljivog u BuOH-u. Dio ekstrakta topivog u AcOEt-u (90 g) podvrgnut je CC-u (SiO2; CHCl3/ MeOH 0: 1→1: 2) da si priuštite 75 frakcija (Fr.). Fr. 51 – 53 (6,0 g) kombinirani su (=Fr. A) i rekromatografirani (Sephadex LH-20; MeOH/H2O 1: 1) priuštiti si jedanaest podfrakcija (fr. A1 –A11). Fr. A6 i Fr. A7 kombinirani su (2,5 g; fr. B) i ponovno su podneseni CC-u (ODS; MeOH/H2O 1: 9 – 5:5) kako bi se osiguralo još 35 frakcija (fr. B1 – B35). Fr. B16 – B25 kombinirani su (0,5 g; Fr. C) i rekromatografirani (Sephadex LH-20; zatim prep. HPLC, MeCN/ MeOH/ H2O 10 : 18 : 75) kako bi se osigurao tubulozid B [11] (55 mg). Fr. B26 - B32 (0,35 g) kombinirani su (0,35 g, fr. D) i rekromatografirani (Sephadex LH-20; 20% aq. MeOH) kako bi se dobilo sedam frakcija (Fr. D1 –D7). Fr. D1 (70 mg) je pročišćen prep. HPLC(MeCN / MeOH / H2O 10 : 26 : 72) da si priušti 2 (23 mg), 3 (8 mg) i cistanozid C [7] (12 mg). Fr. D3 (45 mg) pročišćen je prep. Fr. D4 (36 mg) je pročišćen prep. HPLC(MeCN/MeOH/H2O 9 : 18 : 73) kako bi osigurao 5 (20 mg). Fr.D5 (55 mg) je pročišćen prep. HPLC(MeCN/ MeOH / H2O 10 : 24 : 66) da si priušti 1 (28 mg). Fr. D7 (40mg) je pročišćen prep. HPLC(MeCN/ MeOH / H2O 10 : 16 : 74) kako bi osigurao 4 (18 mg). Izvorni Fr.54 i Fr. 55 kombinirani su i pročišćeni ponovljenim CC-om (Sephadex LH-20) kako bi si priuštili akteozid [6] (0,1 g) i 2'-acetilakteozida (8,9 mg) [10]. Fr. 56 – 58 kombinirani su i pročišćeni ponovljenim CC -om (Sephadex LH-20 i ODS) za opremanje izoakteozida (25 mg) [11] i cistanozida D (32 mg) [7]. Fr. 59 – 64 kombinirani su i pročišćeni ponovljenim CC (Sephadex LH-20) i prep. HPLC(MeCN/MeOH/H2O 10 : 15 : 84) kako bi si priuštio ehinakozid (33 mg) [6].

SalsasideA(=Benzyl6-O-[(E)-3-(3,4-Dihydroxyphenyl)prop-2-enoyl]-3-O-a-L-rhamnopyranosylb-D-glukopiranozid; 1). Amorfni prah. UV (MeoH): 328 (3,50). [a]20D = 35,6 (c=0,1, MeOH). IR (KBr): 3421, 1690, 1628, 1605, 1520. 1H- i 13C-NMR: vidjeti tablicu 1. FAB-MS: 577 ([M-H]-). HRESI-MS: 596.2348 ([M+NH4]+, C28H38NO+13 ; calc. 596.2343).

SalsasideB(=Benzyl4-O-[(E)-3-(3,4-Dihydroxyphenyl)prop-2-enoyl]-3-O-a-L-rhamnopyranosylb-D-glukopiranozid; 2). Amorfni prah. UV (MeoH): 332 (3,20). [a] 20D = 35,6 (c=0,1, MeOH). IR (KBr): 3411, 1692, 1630, 1600, 1514. 1H- i 13C-NMR: vidjeti tablicu 1. HR-ESI-MS: 596.2345([M+NH4]+, C28H38NO+13 ; calc. 596.2343).

SalsasideC(=4-O-[(E/Z)-3-(4-hidroksifenil)prop-2-enoyl]-3-O-a-L-rhamnopyranosyl-b-D-glukopiranozid; 3). Amorfni prah. UV (MeoH): 315 (3,23), 225 (1,80). IR (KBr): 3432, 1689, 1628,1609, 1519. 1H- i 13C-NMR: vidjeti tablicu 1. HR-ESI-MS: 561.1958 (([M-H]-), C28H33O-12 ; calc. 561.1972).

SalsasideD(=2-(4-hidroksifenil)etil2-O-Acetil-4-O-[(E)-3-(3,4-dihidroksifenil)prop-2-enoil]-3-O-a-L-rhamnopyranosyl-b-D-glukopiraranozid;4). Amorfni prah. UV (MeoH): 328(3.40). [a]20D = 58,3 (c=0,1, MeOH). IR (KBr): 3397, 1720, 1692, 1630, 1596, 1512. 1 H- i 13C-NMR:vidi tablicu 2. FAB-MS: 649 ([M-H]-), 443 ([M-H-Ac-Caf]-). HR-ESI-MS: 668.2563 ([M+NH4]+, C31H42NOþ 15 ; calc. 668.2554).

SalsasideE(=2-(4-Hydroxy-3-metoksifenil)etil2-O-Acetil-4-O-O-[(E)-3-(3,4-dihidroksifenil)-prop-2-enoil]-3-O-a-L-rhamnopyranosyl-b-D-glukopiranozid;5). Amorfni prah. UV (MeoH):330 (3.21). [a]20D = 33.3 (c=0.1, MeOH). IR (KBr): 3370, 1721, 1690, 1630, 1600, 1514. 1H- i 13CNMR: vidjeti tablicu 2. FAB-MS: 679 ([M-H]-), 533 [M-H-Rha]-). HR-ESI-MS: 679.2228 ([M-H]- , C32H39O-16; calc.

SalsasideF(=2-(3,4-Dihydroxyphenyl)etil2-O-Acetil-6-O-[(E)-3-(4-hidroksifenil)prop-2-enoyl]-3-O-a-L-rhamnopyranosyl-b-D-glukopiraranozid; 6). Amorfni prah. UV (MeoH): 315(3.28). [a]20D = 38,5 (c=0,1, MeOH). IR (KBr): 3416, 1725, 1690, 1630, 1600, 1510. 1H- i 13C-NMR:vidi tablicu 2. FAB-MS: 649 ([M-H]-). HR-ESI-MS: 668.2543 ([M+NH4]+, C31H42NO+15 ; calc. 668.2554).

Hidroliza kiseline i određivanje apsolutne konfiguracije šećera. Spoj (3 mg) stavljen je u zatvorenu cijev i hidroliziran s 2N aq. Nakon hlađenja smjesa je razrijeđena s H2O (15 ml) i ekstrahirana CHCl2 (3 M 5 ml). Sloj aq. je više puta ispario do suhoće s MeOH-om, sve dok nije bio neutralan. Šećeri su identificirani ko-TLC-om s autentičnim uzorcima, koji su elutirali s BuOH/AcOH/H2O 4 : 2: 1, a otkriveni su prskanjem anisaldehidom/H2SO4, nakon čega je uslijedilo zagrijavanje. Rf vrijednosti glukoze (Glc) i rhamnoze (Rha) bile su 0,54 i 0,69, resp.

Konfiguracije šećera u trbušnjacima određene su na sljedeći način. u soln. od ostataka šećera u piridinu(60 ml), dobivenih hidrolizom, dodani su L-cisteine metil ester hidroklorid i heksametildisilazan/Me3SiCl 3: 1. Smjesa se miješala na 608 tijekom 30 minuta. Nastali talog uklonjen je centrifugiranjem, a supernatant je koncentriran i podijeljen između heksana i H2O. GC je zatim analizirao sloj org. U usporedbi sa standardnim monosaharidima, D-Glc (tR 12.45 min) i L-Rha (5.32 min) identificirani su 1–6.

Cistanche salsa extract