Neuroprotektivna svojstva 4-aminopiridina

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Michael Dietrich, PhD, Hans-Peter Hartung, MD, PhD, FRCP, i Philipp Albrecht, MD

Sažetak

Kao antagonist naponski upravljanih kalijevih (Kv) kanala, 4-aminopiridin (4-AP) se koristi kao simptomatska terapija u nekoliko neuroloških poremećaja. Poboljšanje vidne funkcije i motoričkih vještina te ublažavanje umora kod bolesnika s multiplom sklerozom pripisuje se 4-AP-u. Njegova formulacija s produljenim oslobađanjem (fampridin) odobrena je za simptomatsko liječenje poremećaja hodanja kod MS-a. Povoljni učinci objašnjeni su blokadom aksonskih Kv kanala, čime se pojačava provođenje duž demijeliniziranih aksona. Međutim, sve više dokaza ukazuje na to da 4-AP može imati dodatna svojstva osim simptomatskog načina djelovanja. U ovom pregledu sažimamo pretkliničke i kliničke podatke o mogućim neuroprotektivnim značajkama 4-AP.

4-Aminopiridin u neurološkim bolestima

Aminopiridini su skupina monoaminskih i diamino derivata piridina, koji inhibiraju naponski uvjetovane kalijeve (Kv) kanale. Posebno su 2 blokatora kalijevih kanala širokog spektra 4-aminopiridin (4-AP) i 3,4-aminopiridin (3,4- DAP) korišteni kao nove tvari u ispitivanju kod raznih neuroloških bolesti. Iako je 3,4-DAP snažniji antagonist kalijevih kanala, 4-AP lakše prolazi krvno-moždanu barijeru1 i bio je klinički superiorniji u bolesnika s multiplom sklerozom, osobito za poboljšanje vidne funkcije,2 umor ,3 kogniciju,4 i brzinu hoda.1 Osim toga, 4-zabilježeno je da AP olakšava neuralnu provodljivost kod neuroloških bolesti osim MS.5,6

Učinci cistanhe: Štiti neurone

U zdravim aksonima, kanali Kv1.1 i Kv1.2 su grupirani u blizini Ranvierovih čvorova.7 Ti kanali postaju izloženi nakon demijelinizacije i migriraju kroz demijelinizirani segment. U isto vrijeme, ekspresija ovih kanala se višestruko povećava.8 Ova pogrešno usmjerena preraspodjela Kv kanala otežava prijenos akcijskih potencijala, što dovodi do trajnog invaliditeta. 4-AP blokira ove izložene kalijeve kanale i stoga pojačava transdukciju signala.9,10Kanal Kv1.3 otkriven je u ljudskim T-stanicama,11 utvrđeno je da je jako izražen na upalnim infiltratima u MS mozgu,12 i eksprimirani na makrofazima, mikrogliji i efektorskim memorijskim T stanicama.13 Selektivni i neselektivni blokatori kanala Kv1.3 mogli bi stoga pružiti imunomodulacijska svojstva inhibicijom stanične proliferacije i izlučivanja proupalnih citokina.14 Studije prije 2009. nisu uspjele utvrditi 4-AP kao simptomatsko liječenje MS jer su razine lijeka u krvi u pacijenata bile nepredvidive, s prekomjernim dozama povezanim s rizikom od epileptičkih napadaja i poremećaja svijesti.15-18 Stoga je fampridin, formulacija 4-AP s produljenim oslobađanjem, razvijen i je naknadno odobren za simptomatsko liječenje poremećaja hodanja u MS.19-23 Zanimljivo je da u novije vrijeme sve više dokaza ukazuje na to da osim ovih dobro priznatih simptomatskih učinaka, 4-AP može imati dodatna zaštitna svojstva.

Procjena 4-AP pomoću in vitro modela

In vitro, neuroprotektivni učinci 4-AP primijećeni su u brojnim modelima. Kada su motorički neuroni (MN) diferencirani od induciranih pluripotentnih matičnih stanica pacijenata s amiotrofičnom lateralnom sklerozom koji nose mutacije gena FUS i SOD1 bili izloženi 4-AP, neravnoteže ionskih kanala su ispravljene, razina aktivnosti neurona podignuta, endoplazmatski retikulum stres se smanjio, a aktivacija kaspaze oslabila. Mutirani MN pokazali su niže struje natrija i omjere Na plus /K plus, što barem djelomično može biti razlog njihove hiperekscitabilnosti. To je poništeno nakon 4-liječenja AP-om, što je dovelo do smanjenih strujanja kalija i obnavljanja obrazaca spontane aktivnosti i sinaptičkog unosa u MN-ovima.24 4-Tiječenje AP-om smanjilo je oslobađanje proupalnih medijatora iz ljudske mikroglije izazvane amiloidom beta i zaštićeni uzgojeni hipokampalni neuroni štakora kupani u supernatantima iz mikroglije tretirane amiloidom beta.25 Derivat 4-AP navodno je smanjio nakupljanje sinukleina, oksidaciju, upalu i aktivaciju Rho kinaze u in vitro modelu Parkinsonove bolesti.26 Druge in vitro studije su izvijestile da je 4-AP povećao fosforilaciju proteina vezanja elementa cAMP odgovora zaštićenog od staničnog stresa pomoću glutamata, NMDA i 3-nitropropionske kiseline na neurone zrna malog malog mozga štakora. Glutamat dovodi do smanjene održivosti iu stanicama predkondicioniranim s 4-AP, ali bez značajne aktivacije kaspaze-3. Ova zapažanja sugeriraju da je 4-AP primarno učinkovit protiv nekrotične ekscitotoksičnosti.27 Također se pokazalo da štiti primarne neuronske kulture od nedostatka kisika i glukoze ili ouabain/DL-three- -benziloksiasparaginske kiseline toksičnosti.28

neuroprotektivni učinak Cistanche

Pretkliničke in vivo studije o 4-AP

Nekoliko je studija istraživalo zaštitne učinke 4-AP u različitim modelima bolesti (tablica 1). U modelima oštećenja perifernog živca slomljenog živca, profilaktički i rani 4-AP tretman potaknuo je oporavak brzine vodljivosti živaca, pospješio remijelinizaciju i povećao područje aksona. Potonja zapažanja objašnjena su učincima sličnim onima koji se pojavljuju nakon električne stimulacije, na primjer, povišenjem razina neurotrofnog čimbenika koji potiče iz neurona (BDNF).29 U modelu Alzheimerove bolesti, injekcija amiloida-beta u hipokampus Sprague Dawleyja štakori su izazvali oštećenje neurona i pojačanu aktivaciju mikroglije. Utvrđeno je da dnevna primjena 1 mg/kg 4-AP potiskuje mikroglijalnu aktivaciju i pruža neuroprotekciju. To se pripisuje 4-sposobnosti AP-a da blokira neinaktivirajuću struju K plus koja ispravlja prema van u aktiviranoj mikrogliji i smanji staničnu proizvodnju proupalnih citokina.25 Istraživanja koja su koristila in vivo model hipokampalne neurotoksičnosti izazvane kainatom otkrila su snažne neuroprotektivne učinke 4- {11}}AP koji bi se mogao poništiti nekompetitivnim antagonistom NMDA receptora MK-801 i antagonistom adenozina A1 8-ciklopentil teofilinom. Ova opažanja sugeriraju da su NMDA receptori relevantni za 4-zaštitu posredovanu AP-om u ovom modelu.30 U životinjskom modelu autoimune neuropatije u Lewis štakora, 4-AP je poboljšao kliničku ozbiljnost i patološke elektrofiziološke nalaze. Autori su sugerirali da je zaštita aksona osigurana blokiranjem ulaznih struja posredovanih natrijem u ranoj fazi jer visoki membranski potencijali u akutnoj fazi upale mogu biti neurotoksični. U kroničnoj fazi živčano provođenje je potencijalno poboljšano blokiranjem vanjske struje posredovane kalijem.1

U eksperimentalnom autoimunom encefalomijelitisu (EAE), modelu imunološki posredovane upale središnjeg živčanog sustava koja replicira kardinalne značajke MS-a, zabilježeno je da blokada Kv kanala inhibira aktivaciju T-stanica, potencijalno blokiranjem kanala podfamilije Kv1.3 i oslabljenom demijelinacijom aksona i degeneracija djelovanjem na K.3.1 kanal na astrogliji, potencijalno inducirajući BDNF signal. vrijesak. Kod EAE izazvanog proteolipidnim proteinom kod SJL miševa,4-liječenje AP-om značajno je poboljšalo digitalne rezultate koji su patološki potvrđeni. Uočeno je da je ekspresija glijalnih fibrilarnih kiselih proteina smanjena u 4-AP-tretiranih miševa, a aktivacija T-stanica i Th1/17 polarizacija su ublaženi. Međutim, u modelu kroničnog EAE izazvanog mijelinskim oligodendrocitnim glikoproteinom (MOG) u C57BL/6 miševa,4-AP nije promijenio tijek EAE.5 Druga studija također je istraživala učinke {{19} }AP u modelu MOG-EAE kod C57BL/6 miševa i prijavio simptomatske, ali ne i učinke na modificiranje bolesti. Niti profilaktički niti terapijski 4-tretman AP-om nije ublažio ozbiljnost tijeka digitalnog EAE-a, dok su 4-životinje liječene AP-om pokazale poboljšanu mobilnost procijenjenu analizom otiska stopala i rotarod analizom. Demijelinizacija leđne moždine, oštećenje neurona i MRI prikaz promjena volumena mozga ostali su nepromijenjeni. Proliferacija, IL17 ili IFN-y proizvodnja CD4* T-stanica također nisu bili pogođeni.3

Nedavno smo pokazali da osim njegovih simptomatskih učinaka na pojačavanje neuralne vodljivosti, 4-AP može spriječiti neurodegeneraciju retine tijekom eksperimentalnog optičkog neuritisa izazvanog MOG peptidom (EAEON) kod C5BL6 miševa. 'Upotrebom in vivo optičke koherentne tomografije( OCT), testiranjem vidne funkcije i histološkom procjenom, uočili smo smanjenje opsega degeneracije unutarnjih slojeva retine u modelima EAEON-a, kako za profilaktičku tako i za terapeutsku 4-administraciju AP. U ovom modelu, 4-AP je pojačao učinke imunomodulatornog liječenja modulatorom sfingozin-1-fosfatnog receptora fingolimodom, što ukazuje na neovisne načine djelovanja. Razumno je pretpostaviti da ovaj učinak nije ograničen samo na fingolimod i da je primjenjiv na 4-AP u kombinaciji s drugim imunomodulacijskim lijekovima za MS. U našoj studiji, histologija optičkog živca otkrila je da, za razliku od fingolimoda,4-AP nije imao značajan utjecaj na mikroglijalnu aktivaciju i/ili infiltraciju limfocita ili makrofaga, što sugerira da zaštitni učinci nisu bili povezani s protuupalnim načinom djelovanja. U skladu s tim, 4-liječenje AP-om nije ometalo indukciju EAE, potvrđeno testom restimulacije T-stanica. Nadalje, primijetili smo značajnu zaštitu od neurodegeneracije retine pod 4-liječenjem AP-om također u modelu neupalnog prignječenja vidnog živca, dok ovdje fingolimod nije imao učinka. Zanimljivo, in vitro, 4-liječenje AP-om nije uspjelo izravno zaštititi retinalne ganglijske stanice. Umjesto toga, histologija i in vitro pokusi ukazali su na 4-AP-posredovanu stabilizaciju stanica prekursora mijelina i oligodendrocita. Taj je učinak bio povezan s povećanim priljevom kalcija i nuklearnom translokacijom nuklearnog faktora aktiviranih T-stanica (NFAT). Prethodno je pokazano da 4-AP regulira homeostazu kalcija podizanjem razine inozitol trifosfata i time uzrokuje oslobađanje kalcija iz unutarstaničnih zaliha kalcija. Međutim, dodatne studije 4-AP-a u demijelinizirajućim modelima, na primjer, tretman kuprizonom ili transgeni mišji modeli s inducibilnom ablacijom oligodendrocita mogu biti od pomoći za potvrdu ovih stanja. Postojeće studije na životinjskim modelima demijelinizacije uglavnom su usmjerene na sposobnost 4-AP da obnovi akcijski potencijal, ali nedostaju daljnja istraživanja oligodendroglijalnih stanica (slika).

Važno je spomenuti da su doze potrebne za postizanje ovih učinaka in vitro približno 100-1,000xviše od koncentracija postignutih kod pacijenata. Stoga bi dodatni ili drugi mehanizmi mogli biti relevantni za opažanja in vivo i in vitro. To uključuje, ali nije ograničeno na smanjenu disipaciju energije demijeliniziranih aksona zbog blokade istjecanja kalija i jače zaštitne i reparativne sposobnosti u mozgu neizravno kao posljedica povećane pokretljivosti i veće vježbe.

Štoviše, imunomodulatorni mehanizmi 4-AP ne mogu se isključiti, posebno zato što su smanjena aktivacija T-stanica i Th1/17 polarizacija dokazani u PLP-induciranom EAE u SJL miševa.3 Osim toga, pretkliničke studije drugih modela bolesti oslabljena aktivacija i smanjeno otpuštanje proupalnih medijatora mikroglije. Ovi kontroverzni rezultati naglašavaju različite patološke mehanizme različitih životinjskih modela, gdje su imunološke stanice više ili manje osjetljive na strategije liječenja. Razlike između naših rezultata i prethodnih izvješća o samo simptomatskim učincima u EAE izazvanoj MOG peptidom u C57BL6 miševa mogu se barem djelomično objasniti (1) razlikama u doziranju jer su drugi koristili doze od 100 ug i 600 ug/miš/dan, budući da smo primijenili 250 ug/miš/dan; (2) trajanje liječenja (40, 60 i 90 dana prema Göbelu i sur.,* Moriguchi i sur.,3 i Dietrich i sur., "respektivno); i (3) količinu MOG koja se koristi za imunizaciju jer smo mi koristili 200 ug MOG po mišu, dok su drugi koristili samo 100 ug MOG po mišu. Najnovija istraživanja usmjerena su na ulogu crijevne mikrobiote u utjecaju na indukciju i težinu EAE mijenjanjem ravnoteže efektorskih i regulatornih T i B stanica. Mikrobiom glodavaca može se razlikovati između životinjskih objekata što rezultira razlikama u težini EAE, tijeku i mogućem čak i odgovoru na terapiju. Uzeti zajedno, ovi čimbenici mogli bi objasniti heterogenost u rezultatima istraživanja.

neuroprotektivni učinak Cistanche

Klinički pristup 4-AP-u kod pacijenata s multiplom sklerozom

Nekoliko kliničkih ispitivanja od 1980-ih već je sugeriralo korisne učinke 4-AP-a kod osoba s multiplom sklerozom. Među ostalim, identificirali su poboljšanje motoričkih40-2 i vidnih funkcija-44 te umor.5-7 Međutim, ograničenja studije, nepostojanje homogenog dizajna studije i mali broj pacijenata zabranili su odobrenje {{ 5}}AP od strane redovitih vlasti i dovelo je do neoznačene upotrebe više od 3 desetljeća.4 S druge strane, neke od ovih studija olakšale su razvoj formulacije s produljenim otpuštanjem (SR-4-AP ili fampridin) jer otkrili su da su razine izvornog spoja s trenutnim oslobađanjem u plazmi nedosljedne i nepredvidive. Prvu kliničku studiju sa SR-4-AP proveli su 1997. Schwid i sur.,49 pokazujući značajno poboljšanje brzine hodanja i trend prema poboljšanju mišićne snage.

Tehnološki sustav s produljenim otpuštanjem razvio je Elan Pharmaceuticals. Koristio je takozvani matrični sustav apsorpcije lijeka, koji se sastoji od vlasničke polimerne matrice koja kontrolira otpuštanje difuzijom i erozijom gastrointestinalnih enzima. To je rezultiralo nižim vršnim razinama lijeka u plazmi i duljim trajanjem djelovanja.1 U početku je SR-4-AP testiran u 4 ispitivanja. Godine 2007. Goodman i suradnici1 izveli su dozu u rasponu od 5 mg povećavajući od 10 do 40 mg dva puta dnevno s 36 pacijenata s multiplom sklerozom. U testu hodanja na vrijeme od 25 stopa (T25FW) nije primijećena značajna promjena, dok je post hoc analiza koja pretvara podatke u brzinu hodanja (ft/s) postigla značajnost. Osim toga, primijećeno je poboljšanje umora koji su sami prijavili. U ispitivanju usporedbe doza 2008. godine (randomizirano, dvostruko slijepo, placebom kontrolirano), Goodman i suradnici2 regrutirali su 206 pacijenata koji su primali placebo ili doze od 10, 15 ili 20 mg dva puta dnevno. Opet, post hoc analiza koja je uspoređivala poboljšanje brzine hodanja pronašla je značajno bolje rezultate za sve terapijske skupine pojedinačno i za sve pacijente liječene SR-4-AP-om zajedno u usporedbi s placebom. Snaga muze je poboljšana za grupe koje su primale 10-mg- i 15-mg, ali ne i za grupe koje su primale 20 mg u usporedbi s placebo subjektima. U 2 naknadna faza 3 klinička ispitivanja (21-tjedno dvostruko slijepo placebom kontrolirano randomizirano ispitivanje, 301 pacijent i 14-tjedno dvostruko slijepo placebom kontrolirano ispitivanje, 239 pacijenata) s 10 mg dva puta dnevno, pacijenti su podijeljeni u skupinu koja je odgovorila i skupinu koja nije odgovorila, definiranu dosljednim poboljšanjem na T25FW. U obje studije, povećanje brzine hoda bilo je značajno u usporedbi sa skupinom koja nije odgovorila ili placebo skupinom. Nadalje, došlo je do poboljšanja rezultata 12-Stavka MS Walking Scale (MSWS-12) za osobe koje su odgovorile.2122

U otvorenom produžetku ispitivanja ovih studija pokazano je da je kliničko poboljšanje izgubljeno nakon povlačenja lijeka, ali se vratilo 2 tjedna nakon ponovnog početka terapije SR-4-AP. Ampyra/Fampyra, formulacija tableta SR{ {3}}AP je dobio potpuno odobrenje Uprave za hranu i lijekove u siječnju 2010. za poboljšanje hodanja kod pacijenata s multiplom sklerozom, ali samo uvjetno odobrenje za stavljanje u promet 2011. od Europske agencije za lijekove (EMA). Na temelju spomenutih ispitivanja, odobrenje je bilo podložno odredbi da se osigura više dugoročnih podataka o učinkovitosti i sigurnosti. Stoga su pokrenute istraživačka faza II (MOBILE) i potvrdna studija faze I (ENHANCE).

U eksplorativnoj MOBLE studiji sa 132 sudionika, utvrđeno je poboljšanje Globalne dojmove promjene pacijenta (PGIC), MSWS-12 i Timed Up and Go (TUG) brzine23 Za procjenu dugoročne učinkovitosti i sigurnosti SR-4-AP, provedena je potvrdna studija ENHANCE (10 mg dva puta dnevno u 646 MS pacijenata). Osim poboljšanja prijavljenih u ispitivanju MOBILE, autori su pronašli značajno poboljšanje pacijenata liječenih SR-4-AP-om na 29-Item MS Impact Scale.5 EMA je nakon toga dala bezuvjetno odobrenje SR{ {11}}AP za liječenje bolesnika s multiplom sklerozom s poteškoćama u hodu. Opservacijska studija faze ENABLE s 901 pacijentom pokazala je da je liječenje SR-4-AP-om korisno za pacijente s multiplom sklerozom putem samopercipiranog fizičkog funkcioniranja i psihičkog zdravlja u stvarnom okruženju2 (tablica 2).

Na temelju obećavajućih pretkliničkih podataka o zaštiti od retinalne neurodegeneracije opisanih gore, naša je grupa provela retrospektivnu, multicentričnu OCT studiju za longitudinalnu usporedbu retinalne neurodegeneracije između 52 pacijenta na kontinuiranoj 4-AP terapiji i 51 kontrolne skupine koji su bili usklađeni za sve relevantne kovarijable pomoću unaprijed definiranog algoritma podudaranja. U skladu s eksperimentalnim podacima, tijekom istodobne 4-AP terapije, degeneracija sloja makularnih živčanih vlakana retine smanjena je tijekom 2 godine. Međutim, ove nalaze treba potvrditi u neovisnim i idealno prospektivnim kohortnim studijama, posebno zato što je veličina učinka bila niska i stope stanjivanja sloja peripapilarnih retinalnih živčanih vlakana i ganglijskih stanica makule/unutarnjeg pleksiformnog sloja nisu se značajno razlikovale između skupina . Ova odstupanja zaštitnog učinka 4AP samo na mRNFL, ali ni u pRNFL ni u McGillu, nije lako objasniti. Važno je spomenuti da, budući da je 4AP licenciran samo za poboljšanje nesposobnosti hodanja kod pacijenata s EDSS 3.5-5, analizirane stope promjena su ispitane u kasnijim fazama bolesti i bez akutnog optičkog neuritisa. U takvom okruženju događaju se samo vrlo suptilne promjene mrežnice, a za otkrivanje učinaka liječenja bile bi potrebne velike kohorte. Stoga retrospektivna studija na pacijentima sigurno nije bila dovoljno snažna da pouzdano otkrije zaštitne učinke liječenja, te ne čudi da je samo jedan od ishoda bio pozitivan. Vjerojatno je mRNFL bio najosjetljiviji sloj za detekciju učinaka liječenja.5"

Ukratko, sve veći broj in vivo dokaza sugerira da 4-AP, uz svoje dobro poznate simptomatske učinke, sprječavanjem neurodegeneracije može modificirati tijek bolesti EAEON-a, a možda čak i pacijenata s MS-om. Preliminarni in vitro dokazi upućuju na uključenost staničnih razina kalcija i NFAT puta, no potrebna su daljnja istraživanja kako bi se razjasnili točni molekularni mehanizmi na kojima se temelji neuroprotektivni učinak 4-AP-a u imunološki posredovanoj upalnoj demijelinizaciji. Ovi nalazi mogu imati značajan utjecaj na strategije liječenja MS-a ako budu potvrđeni u prospektivnom randomiziranom kontroliranom kliničkom ispitivanju.

učinak Cistanche

Reference

1. Leussink VI, Montalban X, Hartung HP. Obnavljanje funkcije aksona 4-aminopiridinom: klinička učinkovitost kod multiple skleroze i izvan nje. Lijekovi za CNS 2018;32:637–651.

2. Horton L, Conger A, Conger D, et al. Učinak 4-aminopiridina na vid kod pacijenata s multiplom sklerozom i optičkom neuropatijom. Neurologija 2013;80:1862–1866.

3. Morrow SA, Rosehart H, Johnson AM. Učinak fampridina-SR na kognitivni umor u randomiziranom dvostruko slijepom unakrsnom ispitivanju u bolesnika s multiplom sklerozom. Multi Scler Relat Disord 2017;11:4–9.

4. Brother SD, Filli L, Geissler O, et al. Pozitivni učinci fampridina na kogniciju, umor i depresiju u bolesnika s multiplom sklerozom tijekom 2 godine. J Neurol 2018; 265:1016-1025.

5. Hayes KC, Blight AR, Potter PJ, et al. Predkliničko ispitivanje 4-aminopiridina u bolesnika s kroničnom ozljedom leđne moždine. Paraplegija 1993;31:216–224.

6. Iaci JF, Parry TJ, Huang Z, et al. Dalfampridin poboljšava senzomotoričku funkciju u štakora s kroničnim nedostatkom nakon okluzije srednje moždane arterije. Moždani udar 2013;44: 1942–1950.

7. Trimmer JS, Rhodes KJ. Lokalizacija naponskih ionskih kanala u mozgu sisavaca. Annu Rev Physiol 2004;66:477–519.

8. Rodr´ ıguez-Rangel S, Bravin AD, Ramos-Torres KM, Brugarolas P, S´anchez Rodr´ ıguez JE. Studije odnosa strukture i aktivnosti četiriju novih blokatora 4-aminopiridin K(plus) kanala. Sci Rep 2020; 10:52.

9. Bostock H, Sears TA, Sherratt RM. Učinci 4-aminopiridina i tetraetilamonijevih iona na normalna i demijelinizirana živčana vlakna sisavaca. J Physiol 1981;313:301-315.

10. Huynh W, Pickering H, Howells J, et al. Učinak fampridina na ekscitabilnost aksona kod multiple skleroze. Clin Neurophysiol 2016;127:2636–2642.

11. DeCoursey TE, Chandy KG, Gupta S, Cahalan MD. Naponski kontrolirani K plus kanali u ljudskim T limfocitima: uloga u mitogenezi? Nature 1984;307:465-468.

12. Rus H, Pardo CA, Hu L, et al. Naponski kontrolirani kalijev kanal Kv1.3 jako je izražen na upalnim infiltratima u mozgu oboljelom od multiple skleroze. Proc Natl Acad Sci USA 2005;102:11094–11099.

13. Wang X, Li G, Guo J, et al. Kv1.3 kanal kao ključna terapijska meta za neuroupalne bolesti: najsuvremenije i šire. Front Neurosci 2019;13:1393.

14. Wulffff H, Calabresi PA, Allie R, et al. Naponski kontrolirani Kv1.3 K(plus) kanal u efektorskim memorijskim T stanicama kao nova meta za MS. J Clin Invest 2003;111:1703–1713.

15. Burton JM, Bell CM, Walker SE, O'Connor PW. 4-toksičnost aminopiridina s nenamjernim predoziranjem u četiri pacijenta s multiplom sklerozom. Neurologija 2008;71: 1833–1834.

16. Johnson NC, Morgan MW. Neobičan slučaj 4-toksičnosti aminopiridina. J Emerg Med 2006;30:175-177.

17. Schwam E. Ozbiljno slučajno predoziranje 4-aminopiridina zbog pogreške u farmaciji. J Emerg Med 2011;41:51-54.

18. Etemadifar M, Saboori M, Chitsaz A, et al. Učinak fampridina na rizik od napadaja u bolesnika s multiplom sklerozom. Multi Scler Relat Disord 2020;43:102188.

19. Goodman AD, Cohen JA, Cross A, et al. Fampridin-SR u multiploj sklerozi: randomizirano, dvostruko slijepo, placebom kontrolirano ispitivanje raspona doza. Mult Scler 2007; 13: 357-368.

20. Goodman AD, Brown TR, Cohen JA, et al. Ispitivanje usporedbe doza fampridina s produljenim oslobađanjem kod multiple skleroze. Neurologija 2008;71:1134-1141.

21. Goodman AD, Brown TR, Krupp LB, et al. Oralni fampridin s produljenim oslobađanjem kod multiple skleroze: randomizirano, dvostruko slijepo, kontrolirano ispitivanje. Lancet 2009; 373: 732–738.

22. Goodman AD, Brown TR, Edwards KR, et al. Faza 3 ispitivanja oralnog dalfampridina s produljenim oslobađanjem kod multiple skleroze. Ann Neurol 2010;68:494–502.

23. Hupperts R, Lycke J, Short C, et al. Fampridin s produljenim oslobađanjem i hodanje i ravnoteža u MS-u: randomizirano kontrolirano MOBILE ispitivanje. Mult Scler 2016;22:212–221.

24. Naujock M, Stanslowsky N, Buflfler S, et al. 4-Aktivnost inducirana aminopiridinom spašava hipoekscitabilne motoričke neurone od pluripotentnih matičnih stanica koje potječu od bolesnika s amiotrofičnom lateralnom sklerozom. Matične stanice 2016;34:1563–1575.

25. Franciosi S, Ryu JK, Choi HB, Radov L, Kim SU, McLarnon JG. Učinci širokog spektra 4-aminopiridina na modulaciju stanične signalizacije izazvane amiloidom beta1-42-i funkcionalnih odgovora u ljudskoj mikrogliji. J Neurosci 2006;26:11652-11664.

26. Li S, Wei D, Mao Z, et al. Dizajn, sinteza, imunocitokemijska evaluacija i istraživanje molekularnog spajanja nekoliko 4-aminopiridinskih derivata kao potencijalnih neuroprotektivnih sredstava za liječenje Parkinsonove bolesti. Bioorg Chem 2017;73:63–75.

27. Smith AJ, Tauskela JS, Stone TW, Smith RA. Prekondicioniranje s 4-aminopiridinom štiti neurone cerebelarnih zrnaca od ekscitotoksičnosti. Brain Res 2009; 1294: 165–175.

28. Tauskela JS, Aylsworth A, Hewitt M, Brunette E, Blondeau N. Neuspjeh i spašavanje neuroprotekcije inducirane predkondicioniranjem kod teških inzulta sličnih moždanom udaru. Neurophar mycology 2016;105:533–542.

29. Tseng KC, Li H, Clark A, et al. 4-Aminopiridin potiče funkcionalni oporavak i remijelinizaciju kod akutne ozljede perifernog živca. EMBO Mol Med 2016;8:1409-1420.

30. Ogita K, Okuda H, Watanabe M, Nagashima R, Sugiyama C, Yoneda Y. In vivo tretman s blokatorom K plus kanala 4-aminopiridinom štiti od smrti živčanih stanica izazvane kainatom putem aktivacije NMDA receptora kod miševa hipokampus. Neuropharmacology 2005;48:810–821.

31. Moriguchi K, Miyamoto K, Kusunoki S. 4-Aminopiridin ublažava eksperimentalni autoimuni neuritis kod Lewis štakora. J Neuroimmunol 2017;305:72-74.

32. Schmalhofer WA, Bao J, McManus OB, et al. Identifikacija nove klase inhibitora naponski upravljanog kalijevog kanala, Kv1.3, s imunosupresivnim svojstvima. Biokemija 2002;41:7781-7794.

33. Varga Z, Company T, Papp F, et al. Ekspresija kalijevog kanala u ljudskim CD4 plus regulatornim i naivnim T stanicama zdravih subjekata i pacijenata s multiplom sklerozom. Immunol Let 2009;124:95-101.

34. Jukkola P, Gu Y, Lovett-Racke AE, Gu C. Suzbijanje upalne demijelinizacije i degeneracije aksona putem inhibicije Kv3 kanala. Front Mol Neurosci 2017;10:344.

35. Moriguchi K, Miyamoto K, Fukumoto Y, Kusunoki S. 4-Aminopiridin ublažava relapsno-remitentni eksperimentalni autoimuni encefalomijelitis kod SJL/J miševa. J Neuroimmunol 2018;323:131-135.

36. Gobel K, Wedell JH, Herrmann AM, et al. 4-Aminopiridin poboljšava pokretljivost, ali ne i tijek bolesti u životinjskom modelu multiple skleroze. Exp Neurol 2013; 248: 62–71.

37. Dietrich M, Koska V, Hecker C, et al. Zaštitni učinci 4-aminopiridina u eksperimentalnom optičkom neuritisu i multiploj sklerozi. Brain 2020;143:1127-1142.

38. Grimaldi M, Atzori M, Ray P, Alkon DL. Mobilizacija kalcija iz unutarstaničnih zaliha, potenciranje neurotransmiterima induciranih kalcijevih prijelaza i kapacitivni unos kalcija putem 4-aminopiridina. J Neurosci 2001;21:3135-3143.

39. van Diemen HA, Polman CH, Koetsier JC, van Loenen AC, Nauta JJ, Bertelsmann FW. 4-Aminopiridin u bolesnika s multiplom sklerozom: doziranje i razina u serumu povezana s učinkovitošću i sigurnošću. Clin Neuropharmacol 1993;16:195-204.

40. Davis FA, Stefoski D, Rush J. Oralno primijenjen 4-aminopiridin poboljšava kliničke znakove kod multiple skleroze. Ann Neurol 1990;27:186-192.

41. Stefoski D, Davis FA, Faut M, Schauf CL. 4-Aminopiridin poboljšava kliničke znakove kod multiple skleroze. Ann Neurol 1987;21:71–77.

42. Stefoski D, Davis FA, Fitzsimmons WE, Luskin SS, Rush J, Parkhurst GW. 4- Aminopiridin u multiploj sklerozi: produljena primjena. Neurologija 1991;41: 1344–1348.

43. Jones RE, Heron JR, Foster DH, Snelgar RS, Mason RJ. Učinci 4-aminopiridina u bolesnika s multiplom sklerozom. J Neurol Sci 1983;60:353-362.

44. van Diemen HA, Polman CH, van Dongen TM, et al. Učinci 4-aminopiridina na kliničke znakove kod multiple skleroze: randomizirana, placebom kontrolirana, dvostruko slijepa, unakrsna studija. Ann Neurol 1992;32:123-130.

45. Polman CH, Bertelsmann FW, van Loenen AC, Koetsier JC. 4-aminopiridin u liječenju pacijenata s multiplom sklerozom. Dugoročna učinkovitost i sigurnost. Arch Neurol 1994;51:292–296.

46. ​​Romani A, Bergamaschi R, Candeloro E, Alfonsi E, Callieco R, Cosi V. Umor kod multiple skleroze: višedimenzionalna procjena i odgovor na simptomatsko liječenje. Mult Scler 2004;10:462–468.

47. Rossini PM, Pasqualetti P, Pozzilli C, et al. Umor kod progresivne multiple skleroze: rezultati randomiziranog, dvostruko slijepog, placebom kontroliranog unakrsnog ispitivanja oralnog4-aminopiridina. Mult Scler 2001;7:354–358.

48. Hauser SL, Johnston SC. 4-aminopiridin: novi život za stari lijek. Ann Neurol 2010; 68:A8-A9.

49. Schwid SR, Petrie MD, McDermott MP, Tierney DS, Mason DH, Goodman AD. Kvantitativna procjena 4-aminopiridina s produljenim oslobađanjem za simptomatsko liječenje multiple skleroze. Neurologija 1997;48:817–821.

50. Goodman AD, Bethoux F, Brown TR, et al. Dugoročna sigurnost i učinkovitost dalfampridina za oštećenje hodanja u bolesnika s multiplom sklerozom: rezultati otvorenih proširenja dva klinička ispitivanja faze 3. Mult Scler 2015;21:1322–1331.

51. Hobart J, Ziemssen T, Feys P, et al. Procjena klinički značajnih poboljšanja u samoprijavljenoj sposobnosti hodanja kod sudionika s multiplom sklerozom: rezultati randomiziranog, dvostruko slijepog ispitivanja faze III ENHANCE fampridina s produljenim oslobađanjem. Lijekovi za CNS 2019;33:61–79.

52. Macdonell R, Nagels G, Lapland DA, et al. Poboljšan učinak multiple skleroze na zdravlje prema izvještajima pacijenata: ENABLE studija PR-fampridina. Mult Scler 2016; 22: 944–954.

53. Noble M, Tseng K-CC, Li H, Elfar JC. 4-Aminopiridin kao samostalna dijagnostika i liječenje ozbiljne ozljede prignječenjem živca. Mil Med 2019;184(dodatak 1):379–385.