Monoterpenski sastojci iz Cistanche Tubulosa—Kemijske strukture kankanozida A—E i Kankanola—

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA i Masayuki YOSHIKAWA

Sažetak

Izolirana su četiri nova iridoidna glikozida, kankanozidi A (1), B (2), C (3) i D (4), klorirani iridoid, kankanol (5) i aciklički monoterpenski glikozid, kankanozid E (6). iz metanolnog ekstrakta osušenih stabljika Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) zajedno sa 16 poznatih spojeva. Strukture ovih novih spojeva (1—6) utvrđene su na temelju kemijskih i fizikalno-kemijskih dokaza.

Ključne riječi:Cistanche tubulosa; kankanozid; kankanol; iridoid; monoterpen; Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)je višegodišnja parazitska biljka koja raste na korijenju vrste Salvadora ili Calotropis, a rasprostranjena je u sjevernoj Africi, Arabiji i azijskim zemljama.1) Stabljike ove biljke (kanka-nikujuyou na japanskom) tradicionalno se koriste za liječenje impotencije, steriliteta , lumbago i tjelesna slabost. 2) Prethodno je nekoliko iridoida, monoterpenoida, feniletanoida i lignana izolirano iz kineske i pakistanske C. tubulosa. 1,3–7) Tijekom naših serijskih studija o bioaktivnim sastojcima iz kineskih prirodnih lijekova, 8–18) četiri nova iridoidna glikozida, kankanozidi A (1), B (2), C (3) i D (4). ), klorirani iridoid, kankanol (5) i aciklički monoterpenski glikozid, kankanozid E (6), izolirani su iz metanolnog ekstrakta ovog biljnog lijeka zajedno sa 16 poznatih spojeva uključujući 12 monoterpena (7-18). Ovaj se rad bavi izolacijom i razjašnjavanjem strukture novih monoterpenskih sastojaka (1—6).

Cistanche tubulosa

Metanolni ekstrakt iz osušenih stabljikaCistanche tubulosa(26,8 posto iz ovog biljnog lijeka) podvrgnut je normalnoj fazi i kromatografiji na stupcu silikagela s reverznom fazom i ponovljenom HPLC-u kako bi se dobili kankanozidi A (1, 0.0{{10 }}54 posto ), B(2, 0.030 posto ), C (3, 0.00 27 posto ), i D (4, {{40}}.0015 posto ), kankanol (5, 0.0{ {66}}34 posto ), i kankanozid E (6, 0.027 posto ) zajedno s musaenozidnom kiselinom19) (7, 0.020 posto ) , genipozidna kiselina19) (8, 0,030 posto), 8-epiloganska kiselina7) (9, 0,033 posto), glurozid19) (10, 0,14 posto), antirhid20) (11, 0,0079 posto), ajugol19) (12, 0,011 postotak), bartsioside19) (13, 0,21 posto), 6-deoksikatalpol19) (14, 0,11 posto), argyol21) (15, 0,0030 posto), cistanin22,23) (16, 0,0040 posto), cis taklorin22) ( 17, 0,0035 posto ), (2E,6Z)-8-bD-glukopiranosiloksi-2,6-dimetil-2,6-oktadienska kiselina24) (18, 0,0028 posto ), D manitol25) (4,19 str ercent), uridin25) (0,0069 posto), (3R)-3-hidroksi-2- pirolidinon26,27) (0,0020 posto) i (3R)-3-hidroksi-1-metil{ {97}}pirolidinon27) (0,0059 posto).

Struktura kankanozida A (1) Kankanozid A (1) dobiven je kao amorfni prah i pokazao je negativnu optičku rotaciju ([a]D 25 107,4 stupnja u MeOH). IR spektar 1 pokazao je apsorpcijsku vrpcu na 1647 cm 1 koja se može pripisati olefinskoj funkciji uz jake apsorpcijske vrpce na 3410 i 1076 cm 1 što ukazuje na glikozidnu skupinu. U bombardiranju pozitivnim i negativnim ionima brzim atomima (FAB)-MS od 1, pikovi kvazimolekularnih iona uočeni su na m/z 369 (M Na) i 345 (MH), a FAB-MS analiza visoke razlučivosti otkrila je molekularne formula 1 biti C16H26O8. Kiselom hidrolizom 1 s 1,0 M solnom kiselinom (HCl) oslobođena je D-glukoza, koja je identificirana HPLC analizom pomoću detektora optičke rotacije. 8,10—12,15—18) 1H-(CD3OD, tablica 1) i 13C-NMR (tablica 2) spektri 1, koji su pripisani različitim NMR eksperimentima,28) pokazali su signale koji se mogu pripisati dvama metilima [d 1,31 (s, 10-H3), 1,51 (br s, {{47} }H3)], dva metilena [d 1,49, 2,02 (oba m, 6a- i 6b-H), 1,64, 1,67 (oba m, 7b- i 7a-H)], dva metina [d 2,21 (dd, J 2,7) , 9,5 Hz, 9-H), 2,71 (m, 5-H)], i a,b-nezasićena acetalna skupina [d 5,33 (d, J 2,7 Hz, 1-H ), 5,95 (br s, 3-H)] zajedno s b-glukopiranozilnom ostatkom [d 4,62 (d, J 7,9 Hz, 1 -H)]. Kao što je prikazano na slici 1, eksperiment 1 H–1H korelacijske spektroskopije (1 H–1 H COSY) na 1 pokazao je prisutnost djelomičnih struktura napisanih podebljanim crtama. U eksperimentu heteronuklearne korelacije višestrukih veza (HMBC) na 1, uočene su korelacije dugog dometa između sljedećih protona i ugljika (3-H, 1 -H i 1-C; 11- H3 i 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 i 4- C ; 11-H3 i 5-C; 10-H3 i 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3, i 8-C; 10-H3 i 9-C; 7-H2 i 10-C) kao što je prikazano na slici 1. Enzimska hidroliza 1 s b-glukozidazom dala je aglikon, kankagenin a (1a) kao što je prikazano na slici 3. Usporedba 13C NMR spektra za 1 s onima za 1a otkrila je pomak glikozilacije oko položaja 1- u 1 [1: dC 94,1 (1-C), 134,6 (3-C), 53,3 (9-C); la: dC 92,9 (1-C), 135,3 (3-C), 54,7 (9-C)]. Stoga je također pojašnjeno da je povezanost bD-glukopiranozilnog dijela u 1 na 1-položaju 1a. Zatim je relativna stereostruktura 1 okarakterizirana pokusom nuklearne Overhauserove pojačane spektroskopije (NOESY), koji je pokazao korelacije NOE između sljedećih parova protona (1-H i 10-H3; 3-H i 11-H3; 5-H i 6b-H, 9-H; 6b-H i 7b-H; 7a-H i 10-H3; 7b-H i {{ 190}}H) kao što je prikazano na slici 2. Konačno, apsolutna konfiguracija 1-položaja u 1 određena je primjenom 13C NMR pravila pomaka glikozilacije 1,1-disaharida,29) koji je pronađen primijeniti na poluacetalne spojeve.30,31) Stereostruktura 1-položaja u 1 potvrđeno je da se održava u 1a usporedbom 1H-NMR analize uključujući NOESY eksperiment. Utvrđeno je da su vrijednosti pomaka glikozilacije [Dd 1,2 ppm (1 -C) i 0,9 ppm (1- C), u piridinu-d5] karakteristične za kombinaciju R, remiacetala, što odgovara apsolutnoj stereostrukturi 1 kao što je prikazano na slici 3. Posljedično, utvrđeno je da je apsolutna konfiguracija na 1-poziciji 1 S konfiguracija, a apsolutna stereostruktura 1 razjašnjena je kao što je prikazano.

Strukture kankanozida B (2) i C (3) Kankanozid B (2) također je izoliran kao amorfni prah s negativnom optičkom rotacijom ([a]D 26 118,7 stupnjeva u MeOH). IR spektar 2 pokazao je apsorpcijske trake na 3410, 1647 i 1{{5{{80}}}}85 cm 1 koje se mogu pripisati hidroksilnim, olefinskim i eterskim funkcijama. Molekulska formula C15H24O10 od 2 određena je kvazimolekularnim ionskim vrhovima u FAB-MS s pozitivnim ionima i FAB-MS visoke rezolucije. Kiselom hidrolizom 2 s 1,0 M HCl oslobođena je D-glukoza, koja je identificirana HPLC analizom pomoću detektora optičke rotacije. 8,10—12,15—18) 1H-(CD3OD, Tablica 1) i 13C-NMR ( Tablica 2) spektri28) od 2 pokazuju signale koji se mogu pripisati dvama metilenima [d 1,40 (DDD, J 5,2, 7,3, 13,5 Hz, 6a-H), 2,52 (DDD, J 7,0, 9,2, 13,5 Hz, 6b-H), 3,85 , 3,99 (oba d, J 11,9 Hz, 10-H2)], četiri metina [d 2,21 (dd, J 6,4, 8,6 Hz, 9-H), 2,83 (m, 5- H), 4,02 (dd, J 5,2, 7,0 Hz, 7-H), 5,49 (d, J 6,4 Hz, 1-H)], i par cisolefina [d 4,95 (dd, J 4,0) , 6,1 Hz, 4-H), 6,22 (dd, J 1,8, 6,1 Hz, 3-H)], zajedno s b-glukopiranozilnim dijelom [d 4,72 (d, J 7,9 Hz, 1 - H)]. Signali protona i ugljika u 1H- i 13C-NMR podacima 2 bili su slični onima za 6-deoksikatalpol (14), osim signala uzrokovanih 7- i 8- pozicije. Kao što je prikazano na slici 1, eksperiment 1 H–1 H COSY na 2 ukazao je na prisutnost parcijalnih struktura napisanih podebljanim crtama, a u eksperimentu HMBC uočene su korelacije dugog dometa između sljedećih parova protona i ugljika ({{ 122}}H, 1 -H i 1-C; 1-H i 3-C; 10-H2 i 7- C; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 i 8-C; 7-H, 10-H2 i 9-C ; 7-H i 10-C). Relativna stereostruktura 2 karakterizirana je eksperimentom NOESY, koji je pokazao korelacije NOE između sljedećih parova protona (1-H i 10-H2; 3- H i 4-H; 5-H i 6b-H, 9-H; 6b-H i 7-H; 7-H i 9-H) kao što je prikazano na slici 2. Konačno, alkalna obrada 14 s 5 postotnom vodenom otopinom kalijevog hidroksida (KOH) dala je 2 i 19, 32) tako da je stereostruktura 2 razjašnjena.

Kankanozid C (3) izoliran je kao amorfni prah s negativnom optičkom rotacijom ([a]D 26 34.0 stupanj u MeOH). U FAB-MS negativnih iona od 3, par pikova izotopa kvazimolekularnih iona opažen je na m/z 399 i 401 (MH). FAB-MS mjerenjem visoke rezolucije utvrđeno je da je molekularna formula 3 C15H25ClO10. Kiselom hidrolizom 3 s 1,0 M HCl oslobođena je D-glukoza, koja je identificirana HPLC analizom pomoću detektora optičke rotacije. 8,10—12,15—18) 1H-(CD3OD, tablica 1) i 13C-NMR ( Tablica 2) spektri28) od 3 pokazuju signale koji se mogu pripisati trima metilenima [d 1,70 (br dd, J oko 3, 13 Hz, 4a-H), 2,70 (br dd, J oko 6, 13 Hz, 4b-H) , 1,68 (br d, J ca. 13 Hz, 6a H), 2,44 (m, 6b-H), 4,01, 4,04 (oba d, J 11,3 Hz, 10-H2)], pet metina [d 2,47 (dd, J 2,5, 7,9 Hz, 9-H), 2,61 (m, 5- H), 3,94 (br s, 7-H), 5,10 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5,48 (d, J 2,5 Hz, 1-H)], i b-glukopiranozilnu skupinu [d 4,60 (d, J 8,0 Hz, 1 -H)]. Signali protona i ugljika u 1H- i 13C-NMR spektrima 3 mogli su se preklopiti s onima od 2, osim signala zbog položaja 3- i 4-. Pozicije bD-glukopiranozila i klorne funkcije u 3 razjašnjene su iz H–H COSY i HMBC eksperimenata kao što je prikazano na slici 1. Posljedično, planarna struktura 3 konstruirana je da bude kao što je prikazano. Relativna stereostruktura 3 određena je NOESY eksperimentom, u kojem su uočene NOE korelacije između sljedećih parova protona (1-H i 3-H, 10-H2; 3- H i 4a-H; 4b-H i 5- H; 5-H i 6b-H, 9-H; 6b-H i 7-H; {{121} }H i 9-H) kao što je prikazano na slici 2.

Strukture Kankanosida D (4) i Kankanola (5) Kankanozid D (4) izoliran je kao amorfni prah s negativnom optičkom rotacijom ([a]D 25 30.6 stupnjeva u MeOH). IR spektar 4 pokazao je apsorpcijsku vrpcu na 1655 cm 1 koja se može pripisati olefinskoj funkciji i jake apsorpcijske vrpce na 3410 i 1078 cm 1 što ukazuje na njegovu glikozidnu strukturu. U FAB-MS s pozitivnim ionima od 4, kvazimolekularni ionski vrh opažen je pri m/z 341 (M Na). Molekularna formula C15H26O7 od 4 određena je FAB-MS mjerenjem visoke rezolucije. Kiselom hidrolizom 4 s 1,0 M HCl oslobođena je D-glukoza,8,10—12,15—18), dok je (R)-rotundnost (4a) 33,34) dobivena enzimatskom hidrolizom 4 s b-glukozidazom. 1H-NMR (tablica 3, CD3OD) i 13C-NMR (tablica 4) spektri28) od 4 pokazali su signale koji se mogu pripisati metilu [d 1,69 (s, 10-H3)], tri metilena [d 1,41, 2,06 (oba m, 4-H2), 1,51, 2,01 (oba m, 6a- i 6b-H), 2,23 (br dd, J oko 8, 15 Hz, 7a-H), 2,37 (br dd , J oko 8, 15 Hz, 7b-H)], metin [d 2,90 (m, 5-H)] i dva metilena s kisikovom funkcionalnom skupinom {d [3,56 (DDD, J 2,8, 7,4) , 13,2 Hz), 3,97 (DDD, J 4,9, 8,0, 13,2 Hz), 3-H2], 4,04, 4,18 (oba d, J 12,2 Hz, 1-H2)} zajedno s b- glukopiranozilni dio [d 4,25 (d, J 7,7 Hz, 1 -H)]. Položaj bD-glukopiranozilnog dijela u 4 razjašnjen je HMBC eksperimentom na 3-položaj (slika 1). Na temelju ovog dokaza utvrđeno je da je apsolutna stereostruktura 4 prikazana.

Kankanol (5) je dobiven kao amorfni prah s pozitivnom optičkom rotacijom ([a]D 25 11,1 stupanj). Kemijska ionizacija (CI)-MS od 5 pokazala je par pikova izotopskih iona na m/z 221 i 223 zbog kvazimolekularnog iona (MH). CI-MS mjerenje visoke rezolucije od 5 otkrilo je da je molekularna formula C9H13ClO4. 1H-NMR (tablica 1, CD3OD) i 13C-NMR (tablica 2) spektri28) od 5 pokazali su prisutnost sljedećih funkcija: tri metilena [d 1,60 (DDD, J 2,5, 5,5, 13,1 Hz, 4a-H), 1,80 (br dd, J približno 3, 13 Hz, 4b H), 1,83 (br d, J približno 12 Hz, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75 , 3,88 (oba d, J 9,2 Hz, 10-H2)], pet metina [d 2,76 (dd, J 4,3, 8,0 Hz, 9-H), 2,50 (m, 5- H), 3,80 (br s, 7-H), 5,17 (br d, J oko 3 Hz, 3-H), 5,26 (d, J 4,3 Hz, 1-H) ]. Planarna struktura 5 potvrđena je 1 H–1 H COSY i HMBC eksperimentima. Odnosno, eksperiment 1 H–1 H COSY na 5 ukazao je na prisutnost parcijalnih struktura napisanih podebljanim crtama, a u eksperimentu HMBC uočene su korelacije dugog dometa kao što je prikazano na slici 1. Relativna stereostruktura 5 bila je utvrđeno eksperimentom NOESY, u kojem su uočene NOE korelacije između sljedećih parova protona (1-H i 9-H; 3-H i 4a-H; 4b-H i {{ 93}} H; 5-H i 6b-H, 9-H; 6b-H i 7-H; 7-H i 9-H) kako je prikazano na slici 2. Usporedbom 1H- i 13C-NMR podataka za 5 s onima za 14a, koji je dobiven obradom 14 s 5 posto vodenom HCl kako je prikazano na grafikonu 1,35) položaj klora grupa u 5 podržana je kao 3-pozicija. Nadalje, acetilacija 5 s anhidridom octene kiseline (Ac2O) i piridinom dala je 3,7-oksid (5a), dok je 14a dala diacetat (14b) pod istim uvjetima acetilacije. Ovi dokazi također su nas naveli da potvrdimo da je funkcija klora 3b-položaj (Grafikon 3). Posljedično, utvrđeno je da je stereostruktura 5 kao što je prikazano.

Struktura Kankanosida E (6) Kankanozid E (6) izoliran je kao amorfni prah s negativnom optičkom rotacijom ([a]D 25 20.0 stupanj u MeOH). IR spektar 6 pokazao je apsorpcijske trake na 3410, 1647, 1085 cm 1 koje se mogu pripisati glikozidnim i karbonilnim funkcijama, dok je njegov UV spektar pokazao maksimum apsorpcije na 211 nm (log e 4,63), što ukazuje na prisutnost b-nezasićene karboksilne kiseline. Molekulska formula C16H28O8 od 6 karakterizirana je FAB-MS pozitivnim i negativnim ionima i MS mjerenjem visoke rezolucije. Kisela hidroliza 6 oslobađa D-glukozu,8,10—12,15—18) dok (2E,6R)-8-hidroksi-2,6-dimetil- 2-oktanska kiselina (6a) 36) dobiven je enzimatskom hidrolizom 6 s b-glukozidazom. 1H-NMR (tablica 3, CD3OD) i 13C-NMR (tablica 4) spektri28) od 6 ukazuju na prisutnost (2E,6R)-8-hidroksi-2,6- dio dimetil-2-oktanske kiseline [d 0,95 (d, J 6,4 Hz, 10-H3), 1,30, 1,48 (oba m, 5-H2), 1,45, 1,70 (oba m, { {70}}H2), 1,65 (m, 6-H), 1,81 (s, 9-H3), 2,22 (2H, m, 4-H2), 3,61, 3,94 (oba m, 8-H2), 6,78 (dd, J 1,2, 7,3 Hz, 3-H)] zajedno s bD-glukopiranozilnim dijelom [d 4,26 (d, J 7,6 Hz, 1 -H)] . Usporedbom signala ugljika u 13C-NMR spektru 6 s onima od 6a, primijećen je glikozilacijski pomak oko 8-položaja 6. Položaj glukozidne veze također je potvrđen HMBC eksperimentima kao što je prikazano u Slika 1. Posljedično, apsolutna stereostruktura 6 je pojašnjena kao (2E,6R)-8-b-D-glukopiranoziloksi-2,6-dimetil-2-oktanska kiselina.

dobrobit ekstrakta cistanche

Eksperimentalno

Za dobivanje fizikalnih podataka korišteni su sljedeći instrumenti: specifične rotacije, Horiba SEPA-300 digitalni polarimetar (l 5 cm); UV spektri, Shimadzu UV-1600 spektrometar; IR spektri, Shimadzu FTIR-8100 spektrometar; EI-MS, CI-MS i CI-MS visoke rezolucije, JEOL JMS-GCMATE maseni spektrometar; FAB-MS i MS visoke rezolucije, maseni spektrometar JEOL JMS-SX 102A; 'H-NMR spektar, JEOL EX-270 (270 MHz) i JNM-LA500 (500 MHz) spektrometri; 13C-NMR spektri, spektrometri JEOL EX-270 (68 MHz) i JNM-LA500 (125 MHz) s tetrametilsilanom kao internim standardom; i HPLC detektor, Shimadzu RID-6A indeks loma i SPD- 10Avp UV-VIS detektori. HPLC stupac, YMC-Pack ODS-A (250 4,6 mm id) i (250 20 mm id) stupci korišteni su za analitičke i preparativne svrhe.

Sljedeći eksperimentalni uvjeti korišteni su za kromatografiju: kromatografija na stupcu silika gela obične faze, silika gel BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 15{{10}}—35 0 mreža); kromatografija na stupcu silikagela reverzne faze, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 100-200 mesh); TLC, prethodno obložene TLC ploče sa silika gelom 60F254 (Merck, 0,25 mm) (obična faza) i silika gelom RP- 18 F254S (Merck, 0,25 mm) (reverzna faza); HPTLC reverzne faze, prethodno obložene TLC ploče sa silika gelom RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm); a detekcija je postignuta raspršivanjem s 1 posto Ce(SO4)2–10 posto vodene otopine H2SO4 nakon čega je slijedilo zagrijavanje.

Biljni materijal

Osušene stabljike Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT kupljene su u Urumqiju, provincija Xinjiang, Kina, u siječnju 2005. preko Eishin Trading Co., Ltd. Osaka, Japan, a botaničku identifikaciju izvršio je profesor Jia Xiaoguang na Institutu za tradicionalni kineski jezik Xinjiang i Etnološki lijekovi. Uzorak vaučera (2005.01. Xinjiang-01) ove biljke nalazi se u arhivi u našem laboratoriju.

Ekstrakcija i izolacija

Osušene stabljike C. tubulosa (5.0 kg) su usitnjene u prah i ekstrahirane tri puta s metanolom pod refluksom tijekom 3 sata. Uparavanjem otapala pod smanjenim tlakom dobiven je metanolni ekstrakt (1340 g, 26,8 posto iz ovog biljnog lijeka). Metanolni ekstrakt (160 g) podvrgnut je normalnoj fazi kromatografiji na stupcu silikagela [3,2 kg, CHCl3–MeOH–H2O (10 : 3 : 1→7 : 3 : 1, niži sloj→6 : 4 : 1)MeOH] da se dobije šest frakcija [Fr. 1 (5.{04 g), Fr. 2 (9,84 g), Fr. 3 (7,80 g), Fr. 4 (13,28 g), fr. 5 (113,6{{104}} g), i Fr. 6 (7,61 g)]. Frakcija 1 (5.00 g) odvojena je kromatografijom na stupcu silikagela reverzne faze [150 g, MeOH–H2O (40 6: 60→ 5{{ 162}} : 50→60 : 40, v/v)→MeOH] da se dobije pet frakcija [Fr. {{50}} (83{{201}} mg), Fr. 1-2 (590 mg), Fr. 1-3 (180 mg), Fr. 1-4 (124 mg), i Fr. 1-5 (3200 mg)]. Fr. {{60}} (830 mg) dalje je odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] da se dobije kankanol (5, 20 mg, 0,0034 posto), argyol (15, 18 mg, 0,0030 posto), cistanin (16, 24 mg, 0,0040 posto) i Fr. 1-1-2 (62 mg), koji je dalje odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (2 : 98, v/v)] da se dobije (3R)-3-hidroksi-2-pirolidinon (0,0020 posto ) i (3R)-3-hidroksi-1-metil-2-pirolidinon (0,0059 posto). Fr. 1-2 (590 mg) je pročišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (35 : 65, v/v) i CH3CN– H2O (20 : 80, v/v)] da se dobije cistanklorin (17, 21 mg, 0,0035) postotak). Frakcija 2 (9,72 g) podvrgnuta je reverzno-faznoj kromatografiji na stupcu silikagela [290 g, MeOH–H2O (20 : 80→30 : 70→40 : 60→60 : 40, v/v)→MeOH] do željenog sedam razlomaka [Fr. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6 (460 mg), i Fr. 2-7 (336 mg)]. Fr. 2-1 (466 mg) je odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (5 : 95, v/v)] da se dobije uridin (0,0069 posto). Fr. 2-2 (535 mg) je odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] da se dobije antirhid (11, 15 mg, 0,0079 posto) i 6-deoksikatalpol (14, 214 mg, 0,11 posto). Fr. 2-3 (535 mg) odvojen je pomoću HPLC [MeOH–H2O (20 : 80, v/v)] kako bi se dobio glurozid (10, 110 mg, 0,14 posto) i barciozid (13, 164 mg, 0,21 posto) . Fr. 2-4 (375 mg) je odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (30 : 70, v/v)] da bi se dobili kankanozidi A (1, 32 mg, 0,0054 posto) i D (4, 9 mg, 0,0015 posto) ). Fr. 2-6 (460 mg) dalje je odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (45 : 55, v/v)] kako bi se dobio kankanozid E (6, 161 mg, 0,027 posto) i (2E, 6Z){{192 }}bD-glukopiranosiloksi-2,6-dimetil-2,6-oktadienska kiselina (18, 17 mg, 0,0028 posto). Frakcija 3 (7,60 g) podvrgnuta je reverzno-faznoj kromatografiji na stupcu silikagela [230 g, MeOH–H2O (20 : 80→40 : 60→50 : 50→ 60 : 40, v/v)→MeOH] da se dobije pet frakcija [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4 (190 mg), i Fr. 3-5 (336 mg)]. Fr. 3-1 (480 mg) je pročišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] da se dobije kankanozid B (2, 19 mg, 0,018 posto), genipozidna kiselina (8, 32 mg, 0,030 postotak), i ajugol (12, 12 mg, 0,011 posto). Frakcija 4 (13,10 g) podvrgnuta je reverzno-faznoj kromatografiji na stupcu silikagela [390 g, MeOH–H2O (10 : 90→20 : 80→30 : 70→40 : 60→50 : 50, v/v)→ MeOH] da se dobije sedam frakcija [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6 (1635 mg), i Fr. 4-7 (1064 mg)]. Fr. 4-2 (430 mg) dalje je odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (5:95, v/v)] da se dobije 2 (70 mg, 0,012 posto) i kankanozid C (3, 16 mg, 0,0027 posto) . Fr. 4-6 (1058 mg) također je odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (15 : 85, v/v)] da bi se dobila musaenozidna kiselina (7, 116 mg, 0,020 posto) i 8-epiloganska kiselina (9, 193 mg, 0,033 posto). Frakcija 5 (15,15 g) podvrgnuta je reverzno-faznoj kromatografiji na stupcu silikagela [455 g, MeOH–H2O (0 : 100→10 : 90→ 20 : 80→40 : 60→50 : 50, v/v)→MeOH ] dati sedam razlomaka [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6 (1453 mg), i Fr. 5-7 (1106 mg)]. Fr. 5-1 (9311 mg) kristalizira se iz MeOH da se dobije D-manitol (3337 mg, 4,19 posto).

Poznati spojevi (7-18) identificirani su usporedbom njihovih fizičkih podataka ([a]D, IR, 1H-NMR, 13C-NMR, MS) s prijavljenim vrijednostima 1,7,19-24,26,27) ili onih komercijalnih uzoraka. 25) Kankanozid A (1): amorfni prah, [a]D 25 107,4 stupnja (c 1,50, MeOH). FAB-MS s pozitivnim ionom visoke rezolucije: izračunato za C16H26O8Na (M Na) 369,1525; Nađeno 369.1522. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD i piridin-d5) d: dano u tablici 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD i piridin-d5) d C: dano u tablici 2. FAB-MS s pozitivnim ionima: m /z 369 (M Na). FAB-MS s negativnim ionima: m/z 345 (MH).

Kankanozid B (2): amorfni prah, [a]D 26 118,7 stupnjeva (c 0.10, MeOH). FAB-MS s pozitivnim ionom visoke rezolucije: izračunato za C15H24O10Na (M Na) 387,1267; Nađeno 387.1261. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u Tablici 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dano u Tablici 2. FAB-MS pozitivnih iona: m/z 387 (M Na). FAB-MS s negativnim ionima: m/z 363 (MH).

Kankanozid C (3): amorfni prah, [a]D 26 34.0 stupanj (c 1.00, MeOH). FAB-MS s negativnim ionom visoke rezolucije: izračunato za C15H24ClO10 (MH) 399,1058; Nađeno 399.1077. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u tablici 1. 13C NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dano u tablici 2. FAB-MS s negativnim ionima: m/z 399, 401 (MH).

Kankanozid D (4): amorfni prah, [a]D 25 30.6 stupnjeva (c 0,50, MeOH). FAB-MS s pozitivnim ionom visoke rezolucije: izračunato za C15H26O7Na (M Na) 341,1204; Pronađeno 341.1210. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u Tablici 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dano u Tablici 4. FAB-MS pozitivnih iona: m/z 341 (M Na). FAB-MS s negativnim ionima: m/z 317 (MH).

Kankanol (5): amorfni prah, [a]D 25 11,1 stupanj (c 1,40, MeOH). CI-MS visoke rezolucije: Izračunato za C9H14ClO4 (MH) 221,0580; Pronađeno 221.0582. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u tablici 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dano u tablici 2. CI-MS m/z (postotak): 221 (MH) (5 ), 223 (MH) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71) i 57 (49).

Kankanozid E (6): amorfni prah, [a]D 25 20.0 stupnjeva (c 2.00, MeOH). FAB-MS s pozitivnim ionom visoke rezolucije: izračunato za C16H28O8Na (M Na) 371,1682; Nađeno 371.1690. UV [MeOH, nm (log e)]: 215 (4,16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u Tablici 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dano u Tablici 4. FAB-MS s pozitivnim ionima: m/z 371 (M Na). FAB-MS s negativnim ionima: m/z 347 (MH).

dobrobit ekstrakta cistanche

Kisela hidroliza 1—4 i 6 s 1 M HCl

Otopina 1—4 ili 6 (svaki 1,5 mg) u 1 M HCl (0,5 ml) zagrijavana je pod refluksom 3 sata. Nakon hlađenja, reakcijska smjesa je izlivena u ledenu vodu i neutralizirana s Amberlite IRA-400 (OH oblik), a smola je uklonjena filtracijom. Zatim je filtrat ekstrahiran s EtOAc. Vodeni sloj je podvrgnut HPLC analizi pod sljedećim uvjetima: HPLC stupac, Ka senzor LC NH{{10}}, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Japan); detekcija, optička rotacija [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokio, Japan)]; mobilna faza, CH3CN–H2O (75:25, v/v); brzina povrata 0,8 ml/min; temperatura kolone, sobna temperatura. Identifikacija D-glukoze prisutne u vodenom sloju provedena je usporedbom vremena zadržavanja i optičke rotacije s onima autentičnog uzorka: tR 12,3 min (pozitivna optička rotacija)

Enzimska hidroliza 1, 4 i 6 s b-glukozidazom

Otopina 1 (7,7 mg) u H2O (1,5 ml) tretirana je s b-glukozidazom (50 mg, iz badema, Oriental Yeast Co., Tokyo, Japan) i otopina je miješana na 37 stupnjeva za 3 d. Nakon što je EtOH dodan u reakcijsku smjesu, otapalo je uklonjeno pod sniženim tlakom, a ostatak je pročišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (55: 45, v/v)] kako bi se dobio kankagenin a (1a, 2,3 mg, 56 posto) . Sličnim postupkom, (R)-rotundiol33,34) (4a, 1,2 mg, 69 posto) i (2E,6R)-8-hidroksi-2,6-dimetil{{30} }oktanska kiselina36) (6a, 6,8 mg, 62 posto) dobiveni su iz 4 (3,5 mg) odnosno 6 (20,4 mg).

Kankagenin a (1a): bijeli prah, [a]D 25 18,4 stupnja (c 0.20, MeOH). EI-MS visoke rezolucije: Izračunato za C10H16O3 (M) 184.1099; Nađeno 184.1106. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u tablici 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dano u tablici 2. EI MS: m/z (postotak): 184 (M, 37) , 95 (100).

Alkalna obrada 14 s 5 posto vodene otopine KOH

Otopina 14 (23.0 mg) u 5 posto vodenoj otopini KOH (1.0 ml) miješana je na 80 stupnjeva 2 sata. Reakcijska smjesa je neutralizirana s Amberlite HCR-W2 (H oblik). Uklanjanje otapala iz filtrata pod sniženim tlakom dalo je ostatak, koji je pročišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (5:95, v/v)] kako bi se dobilo 2 (4,0 mg, 16 posto) i 1932) (10,5 mg , 43 posto ).

Kiselinska obrada 14 s 5 postotnom vodenom otopinom HCl

Otopina 14 (25.0 mg) u 5 posto vodenoj HCl (2.0 ml) miješana je na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakcijska smjesa je izlivena u ledenu vodu i cijela reakcijska smjesa je ekstrahirana s EtOAc. Ekstrakt EtOAc je uzastopno ispran zasićenom vodenom otopinom NaHC03 i slanom otopinom, zatim osušen iznad bezvodnog MgS04 praha i filtriran. Uklanjanje otapala iz filtrata pod sniženim tlakom dalo je talog, koji je odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (20: 80, v/v)] da se dobije 14a (4,0 mg, 25 posto).

14a

Bijeli prah, [a]D 20 21,5 stupnjeva (c 0,30, MeOH). CI-MS visoke rezolucije: Izračunato za C9H14ClO4 (MH) 221,0580; Pronađeno 221.0587. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u tablici 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dano u tablici 2. CI-MS: m/z (postotak): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H2O) (97), 205 (M H2O) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121 (27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56) i 57 (65).

Acetilacija 5 i 14a

Otopina 5 (2,5 mg) u piridinu (0.5 ml) je obrađena s octenim anhidridom (Ac2O, 0.4 ml) i smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 12 h. Reakcijska smjesa je izlivena u ledenu vodu i cijela reakcijska smjesa je ekstrahirana s EtOAc. EtOAc ekstrakt je uzastopno ispran s 5 posto vodenom otopinom HCl, zasićenom vodenom otopinom NaHC03 i slanom vodom, zatim je osušen preko bezvodnog MgS04 praha i filtriran. Uklanjanje otapala iz filtrata pod smanjenim tlakom dalo je ostatak, koji je pročišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (35:65, v/v)] da se dobije 5a (2,3 mg, 77 posto). Sličnim postupkom, 14b (2,7 mg, 87 posto) također je pripravljen i pročišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (55: 45, v/v)] iz 14a (2,1 mg).

5a

Bijeli prah, [a]D 20 1,8 stupnjeva (c 0,18, MeOH). CI MS visoke rezolucije: Izračunato za C11H15O5 (MH) 227,0919; Pronađeno 227.0925. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u tablici 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dano u tablici 2. CI-MS m/z (postotak): 227 (MH) (28 ), 209 (M H2O) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100) i 57 (34 ).

14b

Bijeli prah, [a]D 20 23,7 stupnjeva (c 0,06, MeOH). CI-MS visoke rezolucije: Izračunato za C13H18ClO6 (MH) 305,0792; Pronađeno 305.0790. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm'. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u tablici 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dano u tablici 2. CI-MS: m/z (postotak): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H3O) (6), 265 (MH C2H3O) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37) i 57 (93).

Priznanja

Ovo istraživanje poduprlo je 21. COE program, Academic Frontier Project i Grant-in-Aid za znanstvena istraživanja Ministarstva obrazovanja, kulture, sporta, znanosti i tehnologije Japana. Autori zahvaljuju profesoru Xiaoguang Jia u Xinjiang Institutu za tradicionalnu kinesku i etnološku medicinu u Urumqiju, Kina, za identifikaciju biljnog materijala.

cistanche korist

Literatura i bilješke

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309-3314 (1987).

2) Xinjiang Science and Technology Press, "Tehnike kulture Xinjiang Staple Medicinal Plants," Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines Ed., 2004., str. 84-88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46—48 (1993.).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170—171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728—730 (2000.).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808—810 (2000.).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 38, 1927—1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 50, 208—215 (2002).

9) Morikawa T., Matsuda H., Toguchida I., Ueda K., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 65, 1468—1474 (2002).

10) Tao J., Morikawa T., Toguchida I., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Bioorg. Med. Chem., 10, 4005-4012 (2002).

11) Morikawa T., Tao J., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 66, 638-645 (2003).

12) Tao J., Morikawa T., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 51, 654—662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847-855 (2004).

14) Sun B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464-1469 (2004).

15) Morikawa T., Sun B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 52, 1194—1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Pharm. Bull., 53, 1416—1422 (2005).

17) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 69 (2006) u tisku.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 54, 506—513 (2006).

19) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 33, 3645-3650 (1985).

20) Otsuka H., Phytochemistry, 33, 617-622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553-1555 (1996).

22) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729—1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244—246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Chin. Chem. Lett., 12, 343—344 (2001).

25) Ti poznati spojevi identificirani su usporedbom njihovih fizičkih podataka s komercijalno dobivenim uzorcima.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213-9218 (1997).

27) Kamal A., Ramana KV, Ramana AV, Babu AH, Tetrahedron: Asymmetry, 14, 2587—2594 (2003).

28) 1H- i 13C-NMR spektri 1-6 i srodnih spojeva (19, 1a, 5a, 14a, 14b) dodijeljeni su uz pomoć poboljšanja bez izobličenja polarizacijskim prijenosom (DEPT), korelacijske spektroskopije s dvostrukim kvantnim filtrom ( DQF COSY), eksperimenti heteronuklearne višestruke kvantne koherencije (HMQC) i heteronuklearne višestruke veze (HMBC).

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Pharm. Bull., 42, 982—984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Pharm. Bull., 42, 1691—1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 47, 1753-1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281-2283 (1985).

33) Watanabe K., Takada Y., Matsuo N., Nishimura H., Biosci. Biotehnologija. Biochem., 59, 1979-1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Chem., 229-232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 39, 1171-1176 (1991).

36) Yamaguchi K., Shinohara C., Kojima S., Sodeoka M., Tsuji T., Biosci. Biotehnologija. Biochem., 63, 731-735 (1999).