MikroRNA-2478 izvedena iz egzosoma mlijeka potiskuje melanogenezu kroz Akt-GSK3 put

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

In-Seon Bae i Sang Hoon Kim

Sažetak:Egzosomi sudjeluju u međustaničnoj komunikaciji prijenosom molekula od donora do stanica primatelja. Egzosomi se nalaze u raznim tjelesnim tekućinama, uključujući krv, urin, cerebrospinalnu tekućinu i mlijeko. Egzosomi mlijeka sadrže mnoge endogene molekule mikroRNA. MikroRNK su male nekodirajuće RNK i imaju važnu ulogu u biološkim procesima. Specifične biološke funkcije egzosoma mlijeka nisu dobro shvaćene. U ovoj studiji istraživali smo učinkemliječni egzosomina proizvodnju melanina u stanicama melanoma i melanocitima. To smo pronašliegzosomi mlijeka smanjenisadržaj melanina, aktivnost tirozinaze i ekspresija gena povezanih s melanogenezom u stanicama melanoma i melanocitima. MiR-2478 specifičan za goveda u egzosomima inhibira proizvodnju melanina. Otkrili smo da je Rap1a izravni ciljni gen miR-2478 u stanicama melanoma i melanocitima. Pretjerana ekspresija MiR-2478 smanjila je ekspresiju Rap1a, što je dovelo do smanjene proizvodnje melanina i ekspresije gena povezanih s melanogenezom. Inhibicija ekspresije Rap1a se smanjilamelanogenezakroz Akt-GSK3 signalni put. Ovi rezultati podupiru ulogu miR-2478 izvedenog iz egzosoma mlijeka kao regulatoramelanogenezakroz izravno ciljanje Rap1a. Ovi rezultati pokazuju da bi egzosomi mlijeka mogli biti korisni kozmeceutski sastojci za poboljšanjeizbjeljivanje.

Ključne riječi: melanogeneza;egzosom mlijeka; miR-2478; Rap1a

herba cistanchesje sastojak koji inhibira melanin

1. Uvod

Cosmeceutical je složenica koja kombinira kozmetičko i farmaceutsko i odnosi se na kozmetiku s funkcionalnim sastojcima koji imaju medicinski učinak [1]. U prošlosti se koža poboljšavala dermatološkim postupcima, no nedavno je interes za kozmeceutike porastao zbog želje potrošača da te učinke dobiju putem kozmetike. Kozmetička industrija također je posljednjih godina pokazala povećani interes za korištenje novih kozmeceutskih sastojaka [ 2]. Funkcionalna kozmetika uključuje proizvode koji pomažu u izbjeljivanju kože sprječavajući taloženje melanina na koži.

Melanin, važan element koji određuje boju kože i kose, štiti kožu od ultraljubičastih zraka [3]. Međutim, prekomjerno stvaranje melanina uzrokuje neujednačen ton kože, npr. mrlje i pjege [4]. Transkripcijski faktor mikroftalmije (MITF) glavni je regulator razvoja melanocita. Tirozinaza (TYR) je najvažniji enzim sinteze melanina. Proces sinteze melanina inducira aktivacija TYR-a putem MITF-a, koji je važan enzim uključen u početnu fazu procesa sinteze melanina i koristi L-oblik tirozina ili DOPA kao supstrat za stvaranje melanina [5].

MikroRNK (miR) su kratke nekodirajuće RNK koje sudjeluju u mnogim biološkim procesima kontrolirajući ekspresiju gena nakon transkripcije [6]. Studije su također otkrile kontrolu biosinteze melanina pomoću mikroRNA. Na primjer, objavljeno je da miR-143-5p cilja na Tak1 gen i smanjuje MITF ekspresiju, čime inhibira sintezu melanina [7]. MiR-125b, negativni regulatormelanogeneza, pokazalo se da regulira pigmentacijski gen SH3BP4 [8], a miR-675 u egzosomima izlučenim iz keratinocita inhibiramelanogenezaciljanjem na MITF [9].

Egzosomi su membranski omeđene vezikule veličine 30-200 nm i sadrže DNA, RNA i peptide [10]. Unutarnje komponente egzosoma mogu sigurno prenositi informacije susjednim ili udaljenim stanicama bez da ih razgrade enzimi u biološkim tekućinama, utječući tako na mikrookruženje oko različitih stanica [11].Egzozomi mlijekasu ekstracelularne vezikule dobivene iz mlijeka koje su stabilne u ljudskim probavnim procesima [12]. Egzosomi ekstrahirani iz goveđeg mlijeka ne sadrže samo nekoliko proteina kao što su kazein i laktoglobulin, već i mikroRNA, koje djeluju kao teret [13-15]. Goveđe mlijeko sadrži mikroRNA povezane s imunološkim sustavom kao što su miR-15b, miR-27b, miR-34a i miR-10. Ovih mikroRNK ima posebno u izobilju u kolostrumu [16].

Neka su istraživanja pokazala da komponente mlijeka inhibirajumelanogenezau melanocitima; na primjer, proteini kao što su -laktoglobulin i κ-kazein u mlijeku reguliraju melanogenezu [17,18]. Utvrđeno je da supernatant fermentiranog mlijeka Lactobacillus helveticus NS8- inhibira UV oštećenje i hiperpigmentaciju na koži [19]. Međutim, još nema izvješća o tome jesu li mikroRNK u goveđem mlijeku uključene u kožuizbjeljivanje, iako postoji 79 mikroRNAegzosomi mlijeka[13]. Stoga smo u ovoj studiji istražili inhibiraju li egzosomi mlijeka koji sadrže mikroRNA sintezu melanina u mišjim i ljudskim stanicama melanoma i melanocitima.

2. Materijali i metode

2.1. Kultura stanica

Stanice mišjeg melanoma B16F10 uzgajane su u Dulbeccovom modificiranom Eagle mediju (DMEM, Hyclone, Logan, UT, USA). Stanice ljudskog melanoma MNT-1 uzgajane su u minimalnom esencijalnom mediju (MEM, Hyclone). Sve podloge su dopunjene s 10 posto fetalbovine seruma (FBS, Hyclone, SAD) i 1 posto otopine penicilin-streptomicina. Normalni ljudski epidermalni melanociti (NHEM, PromoCell, Heidelberg, Njemačka) na prolazu broj 5 ili 6 održavani su u mediju za rast melanocita (PromoCell). Ove su stanice inkubirane na 37 ◦C u uvjetima vlažne atmosfere koja sadrži 5 posto CO2.

2.2. Pročišćavanje egzosoma

Komercijalno mlijeko (1 mL) centrifugirano je na 2000× g 10 min, zatim je supernatant centrifugiran na 10,000× g 10 min. Supernatant mlijeka je propušten kroz filter od 0,45 µm, a zatim kroz filter od 0,2 µm. Dobivena otopina (300 µL) pomiješana je s fosfatno puferiranom fiziološkom otopinom (PBS) i 300 µL Exoquick otopine za taloženje egzosoma (Systems Biosciences, Palo Alto, CA, SAD) i inkubirana 30 minuta. Smjesa je centrifugirana na 10 000 x g tijekom 30 minuta kako bi se dobio talog egzosoma, koji je zatim resuspendiran u PBS-u. Raspodjela veličine egzosoma određena je na Zetasizer Nano ZS 90 (Malvern Instruments, Almelo, Francuska). Egzozomi su pohranjeni na -80 ◦C za daljnju upotrebu.

2.3. Krioelektronska mikroskopija

Alikvot od 3 µL suspenzije svježih egzosoma adsorbirano je na žarno pražnjenu, perforiranu rešetku obloženu ugljikom (2/2-3 C C-flat; Protochips, Morrisville, NC, SAD), koja je zatim upijana 3 s na 4 ◦C i duboko zamrznut pomoću Vitrobota Mark IV (Thermo FisherScientific, Lafayette, CO, SAD). Rešetke su pohranjene u tekućem dušiku, zatim prebačene u Gatan 626 krio držač uzoraka (Gatan, Pleasanton, CA, SAD). Uzorci su slikani s nominalnim povećanjem od 29,000× u krioelektronskom mikroskopu (FEI Tecnai F20 TEM,FEI, Hillsboro, OR, SAD), opremljenom standardnim pištoljem za emisiju polja (s-FEG) i kamera K2Summit (Gatan) na ubrzavajućem naponu od 200 kV.

2.4. Test održivosti stanica (WST test)

Stanice melanoma (B16F10, MNT-1) i ljudski melanociti (NHEM) nasađeni su u količini od 4 × 103 stanica/jažici u 96-pločice s jažicama i tretirani segzosomi mlijeka(20 i 50 µg/mL) ili mikroRNK mimik (RNK dvolančani oligonukleotidi) za svaki eksperiment. U naznačenim vremenskim točkama, vijabilnost stanica mjerena je pomoću kompleta za ispitivanje vijabilnosti stanica EZ-CyTox (Daeil Lab Service, Seoul, Koreja) prema uputama proizvođača. Apsorbancija je mjerena na 450 nm na Vmax spektrofotometru za mikroploču (Molecular Devices, San Jose, CA, SAD).

2.5. Mjerenje sadržaja melanina

Stanice melanoma i melanociti tretirani su segzosomi mlijeka(20 i 50 µg/mL) tijekom 48 h. Nakon dva puta ispiranja s ledeno hladnim PBS-om, stanice su centrifugirane na 2500 x g tijekom 10 minuta. Stanične pelete su resuspendirane na 90 ◦C tijekom 30 minuta u 1 N NaOH koji sadrži 10 posto dimetil sulfoksida. Ukupni sadržaj melanina izmjeren je na mikroploči spektrofotometru Vmax (Molecular Devices) na 405 nm.

2.6. Određivanje aktivnosti tirozinaze

Stanice melanoma i melanociti su inkubirani saegzosomi mlijekatijekom 48 h. Stanice su dvaput isprane s PBS-om i lizirane s PBS-om koji sadrži 1 posto Tritona X-100 i 0.1 mMfenilmetansulfonil fluorida. Nakon centrifugiranja, supernatant je sakupljen i prebačen na 96-ploču s jažicama. Nakon dodatka 0.1 ML-3,4-dihidroksifenilalanina, uzorci su inkubirani na 37 ◦C 1 h. Aktivnost tirozinaze mjerena je na temelju apsorbancije na 475 nm korištenjem mikropločnog spektrofotometra (Molecular Devices).

herba cistanches

2.7. Tkiva ljudske kože

Epidermalni ekvivalenti koji sadrže melanocite (MelanoDerm, MEL-300B) dobiveni su od MatTeka (Ashland, MA, SAD) i održavani su u mediju EPI-100-NMM-113-.Egzozomi mlijekaprimijenjeni su na MelanoDerm tkiva 1., 3., 7., 9. i 12. dana. PBS je korišten kao negativna kontrola. Tkiva su fotografirana 3., 7., 9., 12. i 14. dana. Pigmentacija je mjerena usporedbom promjena vrijednosti L (Adobe PhotoshopCC 2015.). Sadržaj melanina u tkivu ljudske kože mjeren je 14. dana testom Solvablemelanin. Ukratko, tkiva MelanoDerm solubilizirana su pomoću Solvable (PerkinElmer, Waltham, MA, SAD) i inkubirana preko noći na 60 ◦C. Uzorci su vorteksirani, a zatim centrifugirani na 16,500 x g tijekom 5 minuta. Supernatant je prenesen u jažice 96-ploče s jažicama i očitan na 490 nm spektrofotometrom.

3. Rezultati

3.1. Karakterizacija egzosoma izoliranih iz mlijeka

Kako bismo istražili karakteristike egzosoma ekstrahiranih iz kravljeg mlijeka, prvo smo izmjerili veličinu egzosoma dinamičkim raspršenjem svjetlosti. Kao rezultat toga, utvrđeno je da egzosomi ekstrahirani iz mlijeka imaju promjer od 80-190 nm (Slika 1A). Zamliječni egzosompročišćavanjem, smjesa Exoquick-mliječni supernatant centrifugirana je da se dobije talog egzosoma mlijeka. Ekspresija CD9, TSG101 i HSP70 kao egzosomskih markera otkrivena je u peletama, ali ti proteini nisu bili prisutni u supernatantu (Slika 1A). Osim toga, sferična morfologija i veličina egzosoma potvrđeni su krioelektronskom mikroskopijom (Slika 1B). Utvrđeno je da egzosomi imaju okrugli oblik promjera do 200 nm. Zatim smo istražili jesu li egzosome ekstrahirane iz mlijeka preuzele stanice. Mišje B16F10 stanice su inkubirane saegzosomi mlijekaobilježen lipofilnom fluorescentnom bojom PKH26. Kao rezultat toga, primijetili smo da su označeni egzosomi prisutni unutar stanica (Slika S1).

3.2. Aktivnost tirozinaze i proizvodnja melanina potisnuti egzosomima mlijeka u stanicama B16F10

Zatim smo ispitali učinak ekstrahiranih egzosoma na vitalnost stanica. Kao što je prikazano na slici 2A, otkrili smo da nije bilo značajne razlike u održivosti stanica, bez obzira na koncentraciju egzosoma.

Istražiti moguće stanice kože-izbjeljivanjeučinak odegzosomi mlijeka, stanice su tretirane egzosomima mlijeka. Otkrili smo da se aktivnost tirozinaze u stanicama izloženim egzosomima mlijeka u koncentracijama od 20 ili 50 µg/mL smanjila za 43 posto, odnosno 59 posto (Slika 2B). Budući da smanjenje aktivnosti enzima tirozinaze može inhibirati biosintezu melanina, sadržaj melanina mjeren je nakon tretmana egzosomima mlijeka. Primijetili smo inhibiciju sinteze melanina u stanicama izloženimegzosomi mlijeka(20 ili 50 µg/mL) za 45 posto, odnosno 55 posto (Slika 2C). Nadalje, ekspresija MITF mRNA se smanjila kako se povećala koncentracija egzosoma mlijeka. Razina MITF mRNA smanjila se za 59 posto u stanicama tretiranim s 20 µg/mL egzosoma odnosno za 84 posto u stanicama tretiranim s 50 µg/mL egzosoma (Slika 2D). Ekspresija mRNA tirozinaze (TYR) također je smanjena za 49 posto i 76 posto u stanicama izloženim ovim koncentracijama egzosoma (Slika 2D). MITF i razine proteina tirozinaze također su se smanjivale s koncentracijom u mlijekuegzosomipovećana (Slika 2E). Ovi rezultati sugeriraju da egzosomi mlijeka inhibiraju melanogenezu u mišjim B16F10 stanicama.

3.3. MiR-2478 specifičan za goveda iz egzosoma mlijeka potiskuje melanogenezu

Kako bi se utvrdilo je li miR-2478 izveden izegzosomi mlijekaizravno utječu na melanogenezu, miR-2478 inhibitor je transfektiran u stanice izložene egzosomima mlijeka (50 µg/mL). U prisutnosti mliječnih egzosoma, stanice B16F10 transficirane themiR-2478 inhibitorom pokazale su značajno višu aktivnost tirozinaze u usporedbi s onom u kontroli (Slika 4A). Sadržaj melanina također je bio veći u stanicama tretiranim inhibitorom miR-2478 nego u kontrolnim stanicama (Slika 4B). Ekspresija MITF mRNA bila je –5-puta veća u stanicama tretiranim inhibitorom miR 2478 nego u kontrolnim stanicama, a ekspresija TYR mRNA bila je –2-puta veća kada je miR-2478 bio inhibiran (Slika 4C ). Razine MITF i TYR proteina također su se oporavile u stanicama koje su bile izloženeegzosomi mlijekanakon što su te stanice transficirane inhibitorom miR-2478 (Slika 4D). Ovi rezultati sugeriraju da miR-2478 izveden iz egzosoma mlijeka izravno potiskuje melanogenezu u mišjim stanicama melanoma.

3.4. Egzosomi mlijeka suzbijaju melanogenezu kroz Akt-GSK3 put

Zatim smo ispitali kakoegzosomi mlijekareguliratimelanogenezaidentificirati relevantni zahvaćeni put u stanicama melanoma. Iako nije poznato kontrolira li Rap1a izravno melanogenezu, objavljeno je da Rap1a inhibira Akt fosforilaciju stanica raka [20]. Na temelju ovih informacija, istražili smo modulira li Rap1a Akt put za promociju.

U vezi s Aktmelanogenezaput, aktivirani Akt inducira fosforilaciju Gsk3 na Ser9 i tako ga inaktivira; ova promjena inhibira transkripcijsku aktivnost MITF-a i smanjuje tirozinazu [21,22]. U ovoj studiji procijenili smo ekspresiju Akt i GSK3 u stanicama tretiranim Rap1a siRNA. U tim se stanicama povećala aktivacija Akt fosforilacije, a također se povećala i količina pGSK3 (Slika 7A). GSK3 je inaktiviran aktivacijom Akt na način ovisan o koncentraciji u stanicama tretiranim s 20 ili 50 µg/mLegzosomi mlijeka(Slika 7B). Razine proteina Akt i GSK3 u stanicama tretiranim miR-2478mimikom bile su u skladu s gornjim rezultatima (Slika 7C). Zatim smo testirali utječe li miR-2478iz egzosoma mlijeka na put Akt-GSK3. U prisutnosti egzosoma mlijeka, fosforilacija proteina Akt i GSK3 bila je niža u stanicama tretiranim inhibitorom miR-2478 (Slika 7D). Osim toga, liječenje inhibitorom AKT GSK690693 povećalo je ekspresiju gena povezanih smelanogenezau stanicama tretiranim egzosomima mlijeka. (Slika 7E). Ovi nalazi su značili da miR-2478 inegzosomi mlijekasmanjuje Rap1a i potiskuje melanogenezu kroz Akt-GSK3 put.

cistanche herbaučinak izbjeljivanja na kožu do antioksidacije

3.8. Egzosomi mlijeka inhibirali su melanogenezu u ljudskim stanicama melanoma, melanocitima i melanodermnom tkivu

S obzirom na toegzosomi mlijekainhibiranmelanogenezau mišjim stanicama, zatim smo utvrdili jesu li egzosomi mlijeka jednako učinkoviti u ljudskim stanicama. Prvo je ispitana održivost MNT-1 stanica ljudskog melanoma i NHEM ljudskih melanocita nakon inkubacije s 20 ili 50 ug/mL egzosoma mlijeka. Kao što je prikazano na slici 8A, nije bilo razlike u održivosti. Aktivnost tirozinaze bila je inhibirana za 43 posto, odnosno 85 posto, u MNT-1 stanicama izloženim 20 ug/mL ili 50 ug/mL egzosoma mlijeka (Slika 8B). NHEM je također smanjen za 34 posto, odnosno 66 posto, kroz tretman s 20 ug/mL ili 50 ug/mL egzosoma mlijeka (Slika 8B). Nadalje, mjeren je sadržaj melanina u MNT-1 stanicama i NHEM izloženim egzosomima mlijeka. Kao rezultat toga, sinteza melanina u MNT-1 stanicama izloženim 20 ug/mL ili 50 ug/mLegzosomi mlijekabio je inhibiran za 37 posto, odnosno 58 posto, au NHEM stanicama, tretman egzosomom mlijeka spriječio je sintezu melanina za 36 posto, odnosno 62 posto (Slika 8C). Osim toga, učinak posvjetljivanja kožeegzosomi mlijekadodatno je potvrđeno korištenjem tkiva ljudske kože. Nakon tretmana egzosomima mlijeka u ljudskim tkivima, relativnaizbjeljivanje učinci su primijećeni 3., 9., 12. i 14. dana. Kao rezultat, otkrili smo da je boja kože u tkivima izloženim egzosomima mlijeka izgledala svjetlije od one u kontrolnim tkivima (Slika 8D). Stupanj pigmentacije izračunat je kao L vrijednost, što je vrijednost koja predstavlja svjetlinu. Pigmentacija je napredovala sporije u kožnim tkivima tretiranim mliječnim egzosomima nego u kontrolnim kožnim tkivima (Slika 8D). Eksperimentalna skupina liječena saegzosomi mlijekapokazali su manju veličinu čestica melanina i nisku količinu pigmenta melanina u usporedbi s kontrolnom skupinom (Slika 8E). Kao rezultat mjerenja sadržaja melanina nakon 14 dana egzosomi mlijeka su inhibirali sintezu melanina u ljudskim tkivima (Slika 8F). Stoga smo zaključili da egzosomi mlijeka inhibirajumelanogenezau ljudskim stanicama i tkivima.

4. Rasprava

Studije o regulaciji egzosomamelanogenezaizvijestili su da egzosomi izvedeni iz keratinocita imaju učinak izbjeljivanja. Melanociti i okolni keratinociti funkcionalno su povezani i tvore jedinice melanina u epidermisu kože [23,24]. Topljivi čimbenici koji potječu iz keratinocita reguliraju melanogenezu susjednih melanocita. Egzozomi izlučeni iz normalnih keratinocita potiču melanogenezu reguliranjem ekspresijemelanogeneza-srodni proteini [23-25]. Osim toga, u aizbjeljivanjeU studiji koja je koristila egzosome ekstrahirane iz stanica, nedavno je objavljeno da su egzosomi ekstrahirani iz matičnih/stromalnih stanica dobivenih iz ljudskog adipoznog tkiva pokazali učinkovitost posvjetljivanja kože u stanicama mišjeg melanoma [26]. Također je bilo izvješće da egzosomi ekstrahirani iz biljaka imaju učinak izbjeljivanja. Izvanstanične vezikule ekstrahirane iz lišća i stabljike biljke D. morbifera pokazale su antimelanogene učinke na stanice mišjeg melanoma i zdravu ljudsku kožu [27]. U našem istraživanju ispitivan je učinak izbjeljivanja egzosoma dobivenih iz mlijeka.

U usporedbi s egzosomima ekstrahiranima iz krvne plazme ili tekućine iz kulture, egzosomi dobiveni iz mlijeka imaju prednosti ne samo što imaju velike količine egzosoma koji se mogu ekstrahirati po jedinici volumena, već imaju i nisku cijenu [26,27]. Jeregzosomi mlijekaimaju kemijski sastav sličan onom staničnih membrana, pokazuju nižu imunogenost i citotoksičnost te imaju visoku biokompatibilnost [28,29]. Nedavno, kada su mliječni egzosomi hranjeni DSS (dekstran sulfat natrijeva sol) modelom kolitisa izazvanim miševima, ekspresija proupalnih citokina IL-6 i TNF smanjena je u usporedbi s kontrolnom skupinom, čime se smanjuje upala i poboljšava nekrotizirajući enteritis [30, 31]. Uz to, uzimanje egzosoma mlijeka u mišjem modelu bolesti osteoporoze poboljšalo je artritis povećanjem gustoće kostiju i smanjenjem proupalnih citokina [32,33]. Do sada su učinci mliječnih egzosoma bili usmjereni na imunološke fenomene koji smanjuju proupalne citokine i na razvoj kostiju, kao što je ublažavanje enteritisa i poboljšanje osteoporoze. U ovom istraživanju osim načina uzimanjaegzosomi mlijeka, potvrđeno je da je djelotvoran kada se nanese na kožuizbjeljivanje. To ukazuje da se može primijeniti za liječenje raznih bolesti povećanjem fiziološke aktivnosti pomoću egzosoma mlijeka u budućnosti.

Iako je ova studija sugerirala daegzosomi mlijekainhibiratimelanogeneza, već je poznato da proteini sirutke poput kazeina, -laktoglobulina i -laktalbumina imaju učinak izbjeljivanja. -laktoglobulin smanjuje aktivnost tirozinaze u ljudskim melanocitima [18], a k-kazein inhibira melanogenezu u mišjim stanicama melanoma B16 [17]. Zanimljivo je da su mnoge od ovih komponenti također prisutne u egzosomima mlijeka. Prema rezultatima proteomera egzosoma mlijeka, kazein, -laktoglobulin i -laktalbumin raspoređeni su u egzosomima [15,34,35]. Egzosomi mlijeka sadrže mikroRNA kao i proteine. Kao rezultat mikroniza miRNA koji koristi egzosome mlijeka Izumija i kolega, miR-2478, miR-1777b, miR-1777a, let-7b i miR{{16 }} bili su visoko raspoređeni u egzosomima mlijeka [13]. U ovoj studiji, s izuzetkom miR-2478, među ovim mikroRNA, miR-1777b, miR-1777a,let-7b i miR-1224 pokazali su nema razlike u aktivnosti tirozinaze u odnosu na kontrolnu skupinu (Slika S2). miR-2478 je bio najzastupljeniji uegzosomi mlijekai smanjena aktivnost tirozina. Međutim, ekspresija MITF i TYR gena povezanih s izbjeljivanjem više se smanjila u stanicama tretiranimegzosomi mlijekanego u stanicama tretiranim samo miR{0}}mimikom. Ovi rezultati pokazuju da je nekoliko komponenti, uključujući mikroRNA u egzosomima mlijeka, uključeno uizbjeljivanjeakcijski.

Većina mikroRNK u egzosomima mlijeka vrši biološke funkcije inhibicijom ekspresije ciljnih gena u stanicama primateljima. U ovoj je studiji miR-2478 također inhibirao sintezu melanina ciljanjem Rap1a kao ciljnog gena. Iako nisu mikroRNA dobivene iz mlijeka, mikroRNA koje kontroliraju ekspresiju gena povezanih s izbjeljivanjem već su zabilježene. Kada je ljudski miR-27a-3p mimik primijenjen na mišje melanocite, on je inhibirao ekspresiju Wnt3a i time inhibirao sintezu melanina [36], a ektopični miR-218 je inhibirao aktivnost TYR smanjenjem ekspresije MITF u melanocitima mišjeg melanoma [37]. miR-203 promoviramelanogenezakroz put CREB1/MITF/Rab27a ciljajući Kif5b u melanomu [38]. Postoji 79 mikroRNK u egzosomima mlijeka

mikroRNA uegzosomi mlijekadobivenih od krava [13]. Stoga su potrebna daljnja istraživanja fiziološke aktivnosti egzosoma mlijeka.

5. Zaključci

Naši nalazi sugeriraju daegzosomi mlijekakandidati su za antimelanogene agense koji smanjuju pigmentaciju inhibicijom ekspresije gena povezanih s melaninom (Slika 10). U stanicama melanoma i melanocitima egzosomi mlijeka pokazali su inhibiciju TYR i smanjenje sadržaja melanina u usporedbi s negativnom kontrolom. Osim toga, ti su učinci posredovani miR-2478 izegzosomi mlijeka. Stoga egzosomi mlijeka mogu biti korisni za razvoj funkcionalnihizbjeljivanjekozmetika s niskom citotoksičnošću.

cistancheučinak izbjeljivanja na kožu do antioksidacije