Razlike u sastavu i ljekovitoj učinkovitosti sirovih proizvoda i proizvoda od vina prerađenih parom od Cistanches Herba Ⅱ
Sep 10, 2024
2.3.3 Detekcija tjelesne težine i tjelesne temperature
Štakori su hranjeni prilagođeno 1 tjedan, bilježeno kao 0 dan, a bilježene su tjelesna težina i rektalna temperatura; nakon što je injekcija hidrokortizon natrij sukcinata kontinuirano primjenjivana tijekom 14 dana, zabilježeno je kao 14 dan, a zabilježene su tjelesna težina i rektalna temperatura; nakon uspješnog modeliranja, liječenje lijekom je provedeno prema shemi doziranja tijekom 30 dana, zabilježeno kao 44 dana, te su zabilježene tjelesna težina i rektalna temperatura.
2.3.4 Otkrivanje frekvencije spontane aktivnosti
Broj aktivnosti štakora unutar 5 minuta zabilježen je korištenjem multifunkcionalnog snimača spontane aktivnosti štakora. Štakori su stavljeni u instrument spontane aktivnosti, prve 3 minute bile su period prilagodbe, a broj spontanih aktivnosti štakora brojao je rekorder u zadnjih 5 minuta. Soba bi trebala biti tiha, sobna temperatura bi se trebala održavati na 18-22 stupnjeva, a vlaga bi se trebala održavati na 45%-65%. Zabilježen je broj spontanih aktivnosti 0, 14 i 44 dana.
2.3.5 Detekcija serumskog indeksa
Nakon što su štakori anestezirani, krv je sakupljena iz abdominalne aorte, stavljena u koagulacijsku epruvetu i centrifugirana na 2,000 o/min 15 minuta kako bi se otkrio sadržaj T, E2, CREA i BUN u serum.
VISOKOKVALITETNA CISTANKA ZA BUBREŽNE BOLESTI
Služba podrške Wecistanchea
E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/telefon:+86 15292862950
2.3.6 Izračun indeksa organa
Nakon što su štakori anestezirani i sakupljena krv, bubrezi, testisi, epididimis, sjemene mjehuriće i prostata su uklonjeni, osušeni filter papirom, a masa je odmah izvagana. Indeks organa izračunat je na temelju mase štakora.
Indeks organa=masa organa/tjelesna masa
2.3.7 Detekcija tkiva
Nakon što su štakorski testisi uklonjeni, masa je izvagana i odmah stavljena u hladnjak na -80 stupnjeva radi zamrzavanja. Prije mjerenja su izvađeni, odmrznuti i dodana je prethodno ohlađena fiziološka otopina kako bi se napravio homogenat tkiva u uvjetima ledene kupelji, te je pripremljen 10% homogenat tkiva. Homogenat je odmah centrifugiran na 5,000 okr/min 10 minuta, a supernatant je uzet za upotrebu. Sukladno zahtjevima kita, za određivanje sadržaja SOD u tkivu testisa korištena je hidroksilaminska metoda, a za određivanje sadržaja MDA u tkivu testisa TBA metoda.
Slika 2 Dijagram ukupne ionske struje Cistanches Herba i Cistanches Herba pirjane u vinu u modusu negativnih iona
3 Rezultati
3.1 Razlike u sastavu Cistanche deserticola prije i poslije obrade
3.1.1 Dijagram ukupnog toka iona
U ovoj studiji, detektor masenog spektrometra koristio je negativni ionski način izvora elektrosprej ionizacije (ESI−). Slika 2 prikazuje dijagram protoka ukupnih iona sirove Cistanche deserticole i proizvoda pirjanih od vina u načinu rada negativnih iona. Vidljivo je da je sastav uzoraka Cistanche deserticola vrlo složen, te postoje očite razlike između sirove Cistanche deserticole i proizvoda pirjanih u vinu. Osim toga, pretraživanjem postojeće baze podataka i konzultiranjem relevantne literature za elementarni sastav i podudaranje spojeva, identificirano je ukupno 45 spojeva, kao što je prikazano u tablici 3.
Tablica 3 Identificirani spojevi u uzorcima Cistanches Herba
3.1.2 PCA rezultati
PCA dijagrami sirove Cistanche deserticole i proizvoda pirjanih od vina prikazani su na slici 3, koji se mogu odvojeno grupirati. Može se utvrditi da moraju postojati razlike u sastavu Cistanche deserticola prije i nakon prerade.
3.1.3 Rezultati OPLS-DA
Nakon OPLS-DA obrade, S-plot dijagram prikazan je na slici 4. Dva kraja krivulje u obliku slova S na slici predstavljaju karakteristične oznake s najvećim doprinosom u svakoj skupini. Analizom podataka o fragmentima iona s VIP vrijednostima većim od 1 na oba kraja krivulje u obliku slova S i usporedbom s kontrolom, identificirane su četiri diferencijalne komponente: ehinakozid (tR=8.39 min, m/z 785. 250 9), verbaskozid (tR=11.51 min, m/z
623.198 1), izoverbaskozid (tR=13.38 min, m/z623.198 1) i tubulozid B (tR=18.41 min, m/z 665. 208 7).
VISOKOKVALITETAN LIKER OD CISTANCHE ZA BUBREŽNE BOLESTI
3.2 Rezultati pokusa na životinjama
3.2.1 Promatranje općeg statusa
Nakon modeliranja, štakori su pokazali niz simptoma poput voljenja topline i straha od hladnoće, savijanja i izvijanja leđa, bezvoljnosti, dosadne i neuredne dlake, hladnih udova, smanjenog apetita, smanjene tjelesne težine i bistre mokraće. Nakon primjene, gore navedeni simptomi u svakoj skupini značajno su se poboljšali.
3.2.2 Promjene u prehrani i voljnoj aktivnosti štakora nakon modeliranja
Nakon kontinuiranog ubrizgavanja injekcije hidrokortizon natrijevog sukcinata tijekom 14 dana, mjerena je tjelesna težina, broj voljnih aktivnosti unutar 5 minuta te unos hrane, unos vode i izlučivanje urina štakora u svakoj skupini kako bi se utvrdilo je li model nedostatka hidrokortizona u bubregu yang je uspješno uspostavljena. Rezultati su prikazani u tablici 4. Kao što je prikazano u tablici 4, nakon 14 dana primjene hidrokortizona, u usporedbi s normalnom skupinom, sve su skupine pokazale smanjenje tjelesne težine, smanjenje unosa hrane, povećanje unosa vode, povećanje izlučivanja urina i smanjenje voljne aktivnosti, a postojale su značajne razlike (P < 0.05). Prema opisu nekih sindroma nedostatka yanga bubrega u terminologiji kliničke dijagnoze i liječenja tradicionalne kineske medicine: "strah od hladnoće i hladnih udova, osobito ispod struka i koljena, blijeda ili tamna put, bistra i duga mokraća, često mokrenje na noć, blijed jezik s bijelim krznom, slab puls, itd." U kombinaciji s promatranjem općeg stanja nakon modeliranja, simptomi nakon modeliranja bili su u skladu s opisom nedostatka yang bubrega, što ukazuje da je modeliranje bilo uspješno.
| Ne. | Spoj | t/min | Način ionizacije | Molekularna formula | Teorijska vrijednost (m/z) | Eksperimentalna vrijednost (m/z) | Pogreška (×10⁻⁶) | Podaci o fragmentu (m/z) |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Grožđani šećer | 0.79 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 179.055 | 179.055 | 0.20 | 97, 89 |
| 2 | Tanin od grožđa | 0.81 | [M–H] | C₁₅H₁₄O₈ | 331.139 | 331.139 | 1.53 | 295, 313, 311 |
| 3 | sorbitol | 0.88 | [M–H] | C₁₂H₂₂O₁₁ | 341.108 | 341.108 | 1.50 | 179, 161, 143, 131 |
| 4 | Pola mliječnog šećera | 1.10 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 181.071 | 181.071 | 2.68 | 163, 101 |
| 5 | Biljna hranjiva tvar C | 1.20 | [M–H] | C₂₈H₄₃O₁₂ | 561.197 | 561.197 | -0.01 | 543, 461, 399 |
| 6 | Borovi šećer | 1.21 | [M–H] | C₁₆H₂₀O₈ | 341.123 | 341.124 | 1.63 | 179, 161, 143, 131, 119 |
| 7 | Sukcinska kiselina | 1.52 | [M–H] | C₄H₄O₄ | 117.018 | 117.019 | 3.40 | 99, 73 |
| 8 | Biljna hranjiva tvar B | 2.04 | [M–H] | C₂₈H₃₃O₁₃ | 577.192 | 577.192 | -0.03 | 297, 208, 183, 178, 171, 153 |
| 9 | Flavonoidi čaja | 2.20 | [M–H] | C₇H₆O₆N₂ | 164.071 | 164.072 | 1.00 | 103 |
| 10 | Ekstrakt pekinške kruške | 3.73 | [M–H] | C₁₄H₁₂O₁₁ | 373.113 | 373.115 | 5.48 | 355, 327, 297 |
| 11 | Ekstrakt goji bobica | 4.28 | [M–H] | C₂₀H₂₄O₁₈ | 461.169 | 461.169 | 0.00 | 485, 293, 215, 197, 167 |
| 12 | Ekstrakt lišća ananasa | 4.74 | [M–H] | C₁₁H₁₂O₇ | 487.145 | 487.146 | 0.88 | 389, 179 |
| 13 | Ekstrakt cvijeta hibiskusa | 4.63 | [M–H] | C₂₄H₂₈O₁₀ | 537.197 | 537.197 | 0.00 | 501, 415, 375, 357 |
| 14 | 8- -Hidroksilakton | 5.27 | [M–H] | C₁₂H₂₀O₈ | 241.096 | 241.097 | 0.04 | 213, 189 |
| 15 | Rhizoma Dioscoreae | 6.10 | [M–H] | C₁₈H₂₄O₈ | 361.115 | 361.113 | 2.20 | 309, 163, 137 |
| 16 | Ekstrakt slame | 6.82 | [M–H] | C₁₅H₂₁O₁₀ | 327.108 | 327.109 | 1.00 | 307, 195 |
| 17 | Pčelinji pelud | 7.20 | [M–H] | C₁₄H₂₈O₈ | 437.472 | 437.472 | 0.00 | 393, 373, 355 |
| 18 | -Karoten | 7.53 | [M–H] | C₂₉H₄₆O₁₆ | 629.192 | 629.192 | 0.00 | 617, 479, 459, 315, 221 |
| 19 | Ljubičasti slatki krumpir | 7.70 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 20 | Ekstrakt pekinške kruške | 8.02 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 21 | Ekstrakt cvijeta breskve | 8.09 | [M–H] | C₂₈H₄₀O₁₂ | 561.197 | 561.197 | 0.00 | 543, 461, 399 |
| 22 | Ekstrakt ginsenga | 10.39 | [M–H] | C₈H₁₈O₈ | 799.266 | 799.266 | 0.03 | 417, 439, 543, 561 |
| 23 | Ekstrakt oolong čaja | 10.63 | [M–H] | C₂₄H₃₄O₁₆ | 539.149 | 539.149 | 0.10 | 637, 621, 471, 473 |
| 24 | Ekstrakt lišća lotosa | 11.51 | [M–H] | C₂₇H₃₄O₁₂ | 549.197 | 549.197 | 0.00 | 197, 153, 135 |
| 25 | Ekstrakt dlakavog cvijeta | 11.51 | [M–H] | C₂₉H₄₈O₁₆ | 623.197 | 623.196 | -0.21 | 387, 531 |
| 26 | Ekstrakt izdanaka bambusa | 11.51 | [M–H] | C₃₇H₄₈O₂₁ | 827.261 | 827.259 | -1.92 | 461, 315, 135, 297, 161 |
| 27 | Ekstrakt krizanteme | 11.60 | [M–H] | C₂₁H₃₀O₉ | 429.118 | 429.118 | 0.00 | 663, 625, 413 |
| 28 | 6-Acetil flavon | 12.32 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₆ | 345.118 | 345.119 | 0.02 | 301, 281 |
| 29 | Ekstrakt voća Longan | 13.41 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₈ | 417.154 | 417.159 | -0.11 | 165, 119, 327, 129, 27 |
Slika 3 Dijagram analize glavnih komponenti Cistanches Herba (1) i Cistanches Herba pirjane u vinu (2)
Slika 4 S-grafikon Cistanches Herba i Cistanches Herba pirjane u vinu
Tablica 4 Promjene u prehrani i autonomnoj aktivnosti štakora nakon modeliranja (xs ±, n=10)
| Skupina | Tjelesna težina (g) | Unos hrane za 24 sata (g) | 24 h unos vode (mL) | 24 h izlučenog urina (mL) | 5 min Spontano brojanje aktivnosti |
|---|---|---|---|---|---|
| Normalan | 285.14 ± 9.26 | 15.81 ± 2.19 | 20.86 ± 3.59 | 11.09 ± 2.57 | 100.4 ± 14.7 |
| Model | 226.67 ± 12.14* | 11.92 ± 3.69* | 32.53 ± 4.65* | 15.58 ± 6.38* | 72.7 ± 11.6* |
| PR | 222.89 ± 9.87* | 10.65 ± 4.20* | 31.54 ± 3.55* | 19.36 ± 5.20* | 68.9 ± 18.0* |
| PW | 219.16 ± 10.75* | 12.37 ± 3.42* | 29.11 ± 4.78* | 16.01 ± 3.96* | 62.8 ± 14.9* |
| JK | 230.02 ± 7.95* | 10.22 ± 2.26* | 34.57 ± 5.36* | 19.13 ± 7.57* | 69.3 ± 11.3* |
Bilješke:
Usporedba s normalnom grupom: *P < 0.05.
*P < 0.05 u odnosu na normalnu grupu.
Tablica 5 Promjene tjelesne težine štakora tijekom ciklusa doziranja (xs ±, n=10)
| Skupina | Tjelesna težina (g) | 0 d | 14 d | 44 d |
|---|---|---|---|---|
| Normalan | 192.12 ± 5.48 | 285.14 ± 9.26 | 430.02 ± 6.14 | |
| Model | 187.24 ± 4.56* | 226.67 ± 12.14* | 328.33 ± 14.77* | |
| PR | 185.07 ± 5.11 | 222.89 ± 9.87* | 345.25 ± 8.22*# | |
| PW | 183.48 ± 6.44 | 219.16 ± 10.75* | 362.17 ± 7.82*#Δ | |
| JK | 194.13 ± 5.90 | 230.02 ± 7.95* | 356.94 ± 7.47*# |
Bilješke:
*P < 0.05 u odnosu na normalnu grupu.
*P＜{{0}}.05 u odnosu na normalnu grupu; #P<0,05 u odnosu na skupinu modela; △P<0,05 naspram PR grupe. Isto kao ispod.
3.2.3 Promjene tjelesne težine štakora
Na temelju promjena tjelesne težine tri puta 0, 14 i 44 dana, analiziran je učinak injekcije im hidrokortizon natrij sukcinata na tjelesnu težinu štakora i oporavak tjelesne težine štakora nakon intervencijskog tretmana lijekovima. Rezultati su prikazani u tablici 5.
Iz tablice 5 može se vidjeti da je nakon 1 tjedna adaptiranog hranjenja tjelesna težina štakora porasla i bila relativno uravnotežena. Tjelesne težine svih štakora bile su (200±20) g. Nije bilo značajne razlike između skupina, što ukazuje da su okolina hranjenja i prehrambeni uvjeti pogodni za preživljavanje štakora. Nakon 14 dana primjene hidrokortizona, u usporedbi s normalnom skupinom, povećanje tjelesne težine štakora u modelnoj skupini i svakoj skupini lijekova je smanjeno, a postojala je značajna razlika (P<0.05). The body weight of the rats in the normal group was
3.2.4 Promjene tjelesne temperature štakora
Na temelju promjena tjelesne temperature tri puta 0, 14 i 44 dana, analiziran je učinak intramuskularne injekcije injekcije hidrokortizon natrij sukcinata na tjelesnu temperaturu štakora i oporavak tjelesne temperature štakora nakon intervencije lijekom. . Rezultati su prikazani u tablici 6.
3.2.5 Promjene u spontanim aktivnostima štakora
Na temelju promjena u broju spontanih aktivnosti u 3 dana 0, 14 i 44 dana, učinak im injekcije hidrokortizon natrijevog sukcinata na broj spontanih aktivnosti u štakora i oporavak broja spontanih analizirane su aktivnosti u štakora nakon intervencije lijekovima. Rezultati Vidi tablicu 7.
Iz tablice 7 može se vidjeti da se 14 dana nakon injekcije hidrokortizona, u usporedbi s normalnom skupinom, broj spontanih aktivnosti unutar 5 minuta od svake druge skupine značajno smanjio, a postojala je značajna razlika (P<0.05). One month after administration, compared with the model group, the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group increased (P<0.05); compared with the normal group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group; Compared with the JK group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities among the Cistanche deserticola administration groups. It shows that Cistanche deserticola extract can increase the number of spontaneous activities in rats with kidney-yang deficiency, and after 30 days of treatment, the number of spontaneous activities is close to that of normal rats.
3.2.6 Indeks organa
Nakon 30 dana kontinuirane primjene, štakori su izgladnjivani 12 sati i žrtvovani. Mjerena je kvaliteta organa. Učinci hidrokortizonom induciranog modela bubrežne yang deficijencije na organe štakora i primjene različitih ekstrakata Cistanche deserticola promatrani su s razine organa. Oporavak organa štakora nakon uzimanja lijeka. Nakon primjene hidrokortizona tjelesna težina štakora jako je varirala, a značajno se promijenila i masa organa. U ovom eksperimentu korišten je indeks organa kao pokazatelj za razmatranje
Učinci na organe uočeni su prije i nakon primjene. Rezultati su prikazani u tablici 8.
Iz tablice 8 može se vidjeti da su se u usporedbi s normalnom skupinom, nakon intramuskularne injekcije hidrokortizon natrijevog sukcinata u štakora, indeksi organa bubrega, testisa, epididimisa i prostate u modelnoj skupini smanjili (P<0.05), indicating that hydrocortisone-induced The kidney-yang deficiency model in rats will cause changes in the indexes of the kidneys, testicles, epididymis and prostate, but has little effect on the seminal vesicles.
Sveukupno, u usporedbi s modelnom skupinom, indeksi organa za svaku skupinu davanja su poboljšani, što ukazuje da bi sirova Cistanche deserticola, vino Cistanche deserticola i Jingui Shenqi pilule mogli ublažiti pad indeksa organa u modelu nedostatka bubrega-yang.
Iz perspektive svakog organa, u usporedbi s modelnom skupinom, skupina vina Cistanche deserticola može značajno povećati organski indeks bubrega (P<0.05). Comparing different drug administration groups, the wine Cistanche deserticola group is better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). ; From the perspective of testicular index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the testis (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group has a significant advantage over the raw Cistanche deserticola group. (P < 0.05); from the perspective of epididymal index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the epididymis (P < 0.05); from the perspective of seminal vesicle index, compared with the model group , the wine Cistanche deserticola group can significantly improve the organ index of the seminal vesicles (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group is significantly better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05); from the perspective of the prostate, compared with the model group In comparison, the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group could significantly increase the prostate organ index (P<0.05).
3.2.7 Detekcija pokazatelja bubrežne funkcije
BUN i CREA odražavaju funkciju bubrega. CREA u serumu krajnji je produkt organske tvari koja sadrži dušik, a BUN u serumu glavni je krajnji produkt metabolizma proteina. Oba se uglavnom izlučuju glomerularnom filtracijom [10-11]. Kada je bubrežna funkcija oštećena, funkcija glomerularne filtracije se smanjuje, a koncentracije obaju se povećavaju. Razine BUN i CREA u krvi odražavaju status funkcije bubrega: što su njihove razine više, to je ozbiljnije oštećenje funkcije bubrega. U ovom eksperimentu, detektiran je sadržaj BUN i CREA u serumu štakora kako bi se procijenili učinci svake skupine davanja na bubrežnu funkciju kod štakora s nedostatkom bubrežnog janga izazvanog hidrokortizonom.
Kao što se može vidjeti iz tablice 9, u usporedbi s normalnom skupinom, sadržaji BUN i CREA u modelnoj skupini bili su povećani, a postojala je značajna razlika (P<0.05), indicating that hydrocortisone caused kidney damage to rats. Compared with the model group, the wine Cistanche deserticola and raw Cistanche deserticola groups can reduce the content of CREA (P<0.05), thereby alleviating kidney damage to a certain extent.
3.2.8 Detekcija pokazatelja spolnih hormona
Bubrezi su temelj urođenosti i igraju važnu ulogu u ljudskom rastu, razvoju i životnim procesima. Tradicionalna kineska medicina vjeruje da bubrezi upravljaju reprodukcijom, a odnos između bubrega i reproduktivnog sustava vrlo je blizak. Sve više i više istraživača otkriva da pacijenti s nedostatkom bubrežnog janga imaju značajne promjene u osovini hipotalamus-hipofiza-gonada, često praćene simptomima smanjenih spolnih hormona kao što su T i E2 [12]. U ovom eksperimentu, mjeren je sadržaj T i E2 u serumu kako bi se odredili učinci svake skupine davanja na spolne hormone kod štakora s nedostatkom bubrežnog janga izazvanog hidrokortizonom.
Kao što se može vidjeti iz tablice 10, u usporedbi s normalnom skupinom, sadržaj T i E2 u modelnoj skupini smanjio se (P<0.05), indicating that hydrocortisone can cause a decrease in rat sex hormone levels. Compared with the model group, each administration group was able to significantly increase the levels of T and E2 in serum (P<0.05) and improve the decrease in sex hormones induced by hydrocortisone. Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group was better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). Generally speaking, wine Cistanche deserticola has obvious performance in increasing T and E2 in the serum of rats with kidney yang deficiency, which is consistent with literature reports that phenylethanol glycosides, the main components of wine Cistanche deserticola, have hormone-like effects [13].
3.2.9 Detekcija indeksa antioksidansa
SOD je antioksidans koji odražava sposobnost tijela da hvata slobodne radikale, dok je MDA krajnji proizvod reakcije oksidativnog stresa i može odražavati stupanj oksidativnog oštećenja tijela. U ovom eksperimentu, mjeren je sadržaj SOD i MDA u testisima kako bi se odredila antioksidacijska aktivnost svake skupine koja je davala lijek protiv modela bubrežnog yang nedostatka izazvanog hidrokortizonom.
Kao što se može vidjeti iz Tablice 11, u usporedbi s normalnom skupinom, sadržaj SOD u modelnoj skupini se smanjio (P<0.05). After 1 month of administration, compared with the model group, the SOD content in the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group increased. Compared with the normal group, the MDA content in the model group increased (P<0.05), indicating that the testicular tissue of rats with kidney-yang deficiency induced by hydrocortisone was oxidatively damaged. After being given Cistanche deserticola extract or Jingui Shenqi Pill positive medicine, each administration group was able to significantly reduce the content of MDA in testicular tissue and alleviate the oxidative damage caused by hydrocortisone. Taken together, both raw Cistanche deserticola and wine Cistanche deserticola can improve the body's ability to resist oxidative damage and alleviate oxidative damage caused by hydrocortisone.
(1) Grupiranje: Štakori su imali slobodan pristup vodi i prehrani. Nakon 1 tjedna adaptiranog hranjenja, nasumično su podijeljeni u 5 skupina (Tablica 2), s 10 štakora u svakoj skupini, i to normalna skupina, skupina modela, skupina sirove Cistanche deserticola (PR), skupina Cistanche deserticola pirjana u vinu (PW). , i pozitivna kontrola Jinkui Shenqi Pill group (JK). (2) Modeliranje: Osim normalne skupine, sve ostale četiri skupine dobile su injekciju hidrokortizon natrij sukcinata im, s dozom od 20 mg/kg, tijekom 14 uzastopnih dana. Normalnoj skupini ubrizgana je ista doza fiziološke otopine. Promatrano je opće stanje štakora u svakoj skupini kako bi se utvrdilo pokazuju li simptome poput straha od hladnoće, sklonosti toplini, hladnih udova, bistre i duge mokraće, sklupčanih i zakrivljenih leđa, dosadne i neuredne dlake i mentalne depresije. Istodobno je mjerena tjelesna težina, broj spontanih aktivnosti, unos hrane, unos vode, izlučivanje urina i drugi pokazatelji štakora u svakoj skupini.
