3.2. Učinak koncentracije medijatora na dekolorizaciju melanina pomoću LMS-a

Prema relevantnim studijama,cistancheje uobičajena biljka koja je poznata kao "čudotvorna biljka koja produžuje život". Njegova glavna komponenta je cistanozid, koji ima različite učinke kao nprantioksidans, protuupalno, ipromicanje imunološke funkcije. Mehanizam između cistanhe iizbjeljivanje koželeži u antioksidativnom učinku glikozida cistanhe. Melanin u ljudskoj koži nastaje oksidacijom tirozina koju katalizira tirozinaza, a reakcija oksidacije zahtijeva sudjelovanje kisika, pa radikali bez kisika u tijelu postaju važan čimbenik koji utječe na proizvodnju melanina. Cistanche sadržicistanozid, koji je antioksidans i može smanjiti stvaranje slobodnih radikala u tijelu, stogainhibiranje proizvodnje melanina.

Kliknite Gdje mogu kupiti Cistanche

Za više informacija:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Istraživan je učinak koncentracije medijatora na prinos dekolorizacije pomoću LMS (slika 3). LMS koji je koristio lacT i 100 µM acetosiringona pokazao je najveći prinos obezbojenja, koji je bio 44-puta veći od onog bez medijatora. LMS koji je koristio lacM i 100 µM acetosiringona pokazao je najveći prinos obezbojenja, koji je bio 6{6}}puta veći od onog bez medijatora. Kada je lacT korišten za LMS, prinosi obezbojenosti korištenjem acetosiringona, siringaldehida i acetovanilona porasli su s povećanjem koncentracije, a zatim su dosegli maksimum pri koncentracijama od 100, 50, odnosno 200 µM (Slika 3a). Acetosyringon i syringaldehid su učinkovitije poboljšali prinos obezbojenja pri nižoj koncentraciji od acetovanilona. Kada je lace korišten za LMS, učinak koncentracije medijatora bio je vrlo sličan rezultatu dobivenom s lacT. Prinosi obezbojenosti korištenjem acetosiringona, siringaldehida i acetovanilona dosegnuli su maksimum pri koncentracijama od 100, 50, odnosno 200 µM (Slika 3b). Koncentracija medijatora od preko 200 uM značajno je smanjila prinos obezbojenosti (podaci nisu prikazani). Stoga je medijator od 100 µM odabran kao optimalna koncentracija za sljedeće eksperimente. Lloret i sur. izvijestili su da treba koristiti optimalnu koncentraciju medijatora jer se lakaza može inaktivirati visokom koncentracijom medijatora [6], dok su Khammuang i Sarnthima izvijestili da na aktivnost dekolorizacije melanina LMS-a korištenjem vanilina i vanilijeve kiseline nisu značajno utjecale visoke koncentracije do 10 mM [28]. Optimalna koncentracija medijatora može ovisiti o vrsti medijatora i ciljnom spoju reakcije katalizirane lakazom [5,6]. Kada je LMS katalizirao razgradnju izoproturona, prinos razgradnje se povećavao s povećanjem koncentracije acetosiringona, dok koncentracije vanilina i siringaldehida nisu bile povezane s prinosom razgradnje [7].

3.3. Citotoksičnost prirodnih medijatora

Za korištenje prirodnih medijatora kao kozmetičkih sastojaka za izbjeljivanje kože, citotoksičnost medijatora (acetosiringona, siringaldehida i acetovanilona) ispitana je pomoću stanične linije melanoma B16F10. Prirodni medijatori su tretirani na kultiviranim stanicama i stanična održivost je mjerena NR testom. Kada su medijatori od preko 22 mM dodani kultiviranim stanicama, značajno su smanjili vitalnost stanica (Slika 4). Kada je koncentracija medijatora bila viša od 5 mM, vitalnost stanica se povećavala sljedećim redoslijedom: acetosiringon > siringaldehid > acetovanilon. Nadalje, medijatori manji od 1 mM nisu pokazali inhibicijski učinak na stanice melanoma B16F10. Ovi rezultati pokazuju da je optimalna koncentracija medijatora od 0,1 mM korištena u ovom radu pokazala zanemarivu citotoksičnost.

3.4. Učinak pH na dekolorizaciju melanina pomoću LMS-a

Slika 5 prikazuje učinak pH na prinos LMS dekolorizacije. Nedostatak medijatora pokazao je najveći prinos obezbojenosti pri pH 4, a prinos obezbojenje se smanjivao s povećanjem pH (Slika 5a). Ovaj je profil sličan učinku pH na ABTS oksidaciju kataliziranu lakazom [37]. Općenito, lacT ima optimalnu aktivnost u kiselim uvjetima manjim od pH 5, a njegova aktivnost opada s porastom pH. Pri višem pH, hidroksidni anioni se spajaju s T2/T3 bakrom u lacT i ometaju prijenos elektrona i uzrokuju smanjenje katalitičke aktivnosti. Međutim, učinak pH na LMS je složeniji i na njega može utjecati aktivnost i stabilnost lakaze i oksidiranih medijatora [1,7]. Prinos obezbojenosti lacT-a s acetosiringonom porastao je s povećanjem pH do 7 (41 posto). Optimalni prinosi dekolorizacije lacT-a sa siringaldehidom i acetovanilonom bili su 32 posto, odnosno 42 posto, pri pH 6. Iako je nedostatak pokazao nižu katalitičku aktivnost pri višem pH, dekolorizacija melanina se povećavala s povećanjem pH. Ovi se rezultati mogu objasniti visokom aktivnošću i postojanošću oksidiranih oblika prirodnih medijatora pri visokom pH.

LacM bez medijatora pokazao je najveći učinak dekolorizacije pri pH 6, a lacM je pokazao manji učinak dekolorizacije u svim pH rasponima u usporedbi s prethodnim. Optimalni pH čipke bio je približno 6 za oksidaciju ABTS [38]. Stoga je optimalni pH lacM-a bez medijatora bio sličan pH lacM-a za ABTS oksidaciju. Kada su prirodni medijatori korišteni s lacM-om, prinosi dekolorizacije uvelike su ovisili o pH reakcije (Slika 5b). Prinos dekolorizacije lacM-a s prirodnim medijatorima povećavao se s povećanjem pH do pH 7. Maksimalni prinosi dekolorizacije lacM-a s acetosiringonom, siringaldehidom i acetovanilonom bili su 40 posto, 32 posto, odnosno 33 posto, pri pH 7. Visoki melanin aktivnost dekolorizacije pri neutralnom pH čini korištenje LMS-a s prirodnim medijatorima boljim za kožu jer je optimalan pH raspon sličan onom normalne kože (oko 5,5).

3.5. Kinetička studija dekolorizacije melanina pomoću LMS-a

Kvantitativno je istražena kinetička studija dekolorizacije melanina LMS-om s acetosiringonom kako bi se razumio pojačani učinak prirodnih medijatora (Tablica 1). Vrijednost Km za lacT bez medijatora bila je 106-puta veća od one za lacT s acetosyringonom. To znači da je afinitet prema melaninu bio jako pojačan upotrebom medijatora. Mačka vrijednost lacT-a s medijatorom bila je 22.6-puta veća od vrijednosti lacT-a bez medijatora. Ovo ukazuje da je stopa obezbojenosti značajno povećana pomoću medijatora. Konstanta specifičnosti (kcat/Km) lacT-a povećana je 247 puta korištenjem acetosyringona kao medijatora. Ovi rezultati jasno pokazuju da je ograničeni pristup melanina aktivnom mjestu lakaze prevladan acetosiringonom. Vrijednost Km za lacM bez medijatora bila je 24-puta veća od one za lacM s acetosyringonom. Afinitet melanina može se povećati upotrebom medijatora. Međutim, povećanje učinka lacM-a s acetosiringonom na afinitet melanina bilo je niže od onog za lacT s acetosiringonom. Mačka vrijednost čipke bila je otprilike 26 posto one u posljednje vrijeme. Čipka bez medijatora pokazala je vrlo nisku aktivnost za dekolorizaciju melanina. Međutim, vrijednost cat za lacM s medijatorom bila je 161-puta veća od one za lacM bez medijatora. Medijator je značajno povećao stopu dekolorizacije pomoću lacM-a. Stoga je konstanta specifičnosti čipke 334 puta povećana upotrebom acetosiringona kao medijatora. Ovi rezultati pokazuju korisnost acetosiringona kao posrednika lakaza za obezbojenje melanina.

3.6. Dekolorizacija melanin/celuloznog filma pomoću LMS-a

Pripremljen je melanin/celulozni kompozitni hidrogel film koji oponaša melanin u koži. Hidrogel film melanina/celuloze može se pripremiti zajedničkim otapanjem melanina i celuloze u [Emim][Ac], nakon čega slijedi regeneracija vodom. Dobiveni film pokazao je prozirnu tamnosmeđu boju. Dekolorizacija melanin/celuloznog hidrogel filma izvedena je pomoću lacM s acetosiringonom u 0.1 M fosfatnom puferu limunske kiseline (pH 5,5). Boja melanin/celuloznog filma promijenila se iz tamno smeđe u blijedo smeđu nakon reakcije katalizirane LMS-om (Slika 6a). Kad je apsorpcija filma melanin/celuloza izmjerena nakon reakcije dekolorizacije u rasponu od 400–700 nm, apsorbancija filma melanin/celuloza značajno se smanjila u cijelom rasponu valnih duljina (Slika 6b). Dekolorizacija melanina također je potvrđena mjerenjem vrijednosti boje (L*, a* i b*) melanin/celuloznog filma pomoću kolorimetra. Vrijednosti ∆L, ∆E, YI i WI izračunate su iz parametara boje (tablica 2). Nakon reakcije dekolorizacije melanina pomoću LMS-a, vrijednost L* (svjetloća) melanin/celuloznog filma znatno je povećana, dok su se vrijednosti a* (crvenilo) i b* (žutilo) blago smanjile. Vrijednost ∆E koja predstavlja razliku u boji između uzoraka bila je 31,1. Vrijednost ∆E veća od 12 ukazuje na to da se boje filma prije i poslije reakcije dosta razlikuju jedna od druge [31]. Žutilo (YI) filma smanjilo se s 209 na 92 ​​nakon reakcije dekolorizacije, dok se bjelina (WI) povećalo sa 16 na 43. Łopusiewicz et al. izvijestili su da se YI poli(mliječne kiseline)/melaninskog filma povećavao s povećanjem sadržaja melanina, dok se WI filma smanjivao [32]. Stoga promjene u svojstvima boje kvantitativno objašnjavaju obezbojenje melanina u melanin/celuloznom hidrogelnom filmu. Ovi rezultati pokazuju da LMS može učinkovito obezbojiti melanin u okolini celuloznog hidrogela.

3.7. Dekolorizacija prirodnog melanina koji proizvode stanice melanoma

Prirodni melanin u ljudskoj koži dijeli se na eumelanin (crni do smeđi) i feomelanin (žuti do crveni), dok je sintetski melanin dobiven oksidacijom tirozina vodikovim peroksidom analog eumelanina. Stoga je u ovom radu također istraživana dekolorizacija prirodnog melanina koju proizvode stanice melanoma. Dekolorizacija sintetičkog i prirodnog melanina LMS-om s čipkom i acetosiringonom uspoređena je mjerenjem apsorbancije u rasponu od 400-700 nm (Slika 7). Apsorpcija sintetskog melanina brzo se smanjivala s povećanjem vremena reakcije na svim valnim duljinama. Međutim, apsorpcija obezbojenog prirodnog melanina pokazala je drugačiji uzorak u usporedbi s onom obezbojenog sintetičkog melanina. Apsorpcija obezbojenog prirodnog melanina smanjila se na valnim duljinama većim od 450 nm, dok se apsorbancija povećala na valnim duljinama manjim od 450 nm. Potrebna su dodatna istraživanja kako bi se razumjelo povećanje apsorbancije obezbojenog prirodnog melanina.

4. Zaključci

U ovom istraživanju dekolorizacija melanina postignuta je korištenjem sustava "O2/lakaza/medijator", budući da je lakaza pokazala nisku katalitičku aktivnost za izravnu oksidaciju melanina zbog niskog redoks potencijala i ograničenog pristupa melanina u aktivno mjesto lakaze. Sedam vrsta prirodnih medijatora uspješno je korišteno za zamjenu sintetičkih medijatora (HOBt) za dekoloraciju melanina pomoću LMS-a pomoću lacT-a i čipke. Među testiranim prirodnim medijatorima, acetosiringon i siringaldehid, koji sadrže dvije metoksi skupine, pokazali su visoke stope obezbojavanja i prinose. Acetovanilon koji sadrži jednu metoksi skupinu i jednu ketonsku skupinu također je pokazao visok prinos dekolorizacije u ravnotežnom stanju. LMS s prirodnim medijatorima pokazao je visoku aktivnost dekolorizacije pri pH normalne kože, a citotoksičnost prirodnih medijatora bila je vrlo niska. Kinetička studija LMS-a koja je koristila acetosiringon za dekolorizaciju melanina pokazala je da je acetosiringon učinkovito prevladao ograničenja lacT i lacM povećanjem afiniteta prema melaninu i aktivnosti dekolorizacije. LMS s acetosiringonom obezbojio je melanin prisutan u celuloznom hidrogelnom filmu, koji oponaša kožu. Nadalje, LMS s acetosiringonom mogao bi obezbojiti ne samo sintetske analoge eumelanina pripremljene oksidacijom tirozina, već i prirodni melanin proizveden od stanica melanoma. Stoga se LMS koji koristi prirodne medijatore može koristiti kao učinkovito sredstvo za izbjeljivanje kože u kozmetičkoj industriji.

Dopunski materijali:Sljedeće je dostupno na internetu, Slika S1: Dekolorizacija melanina pomoću LMS-a pomoću lakaze iz T. versicolor i M. thermophila, Slika S2: Početna brzina reakcije dekolorizacije melanina pomoću lakaze iz T. versicolor i M. thermophila.

Doprinosi autora:Konceptualizacija, SP, DJ i SHL; Kuriranje podataka, SHL; Formalna analiza, SP; Pribavljanje sredstava, SHL; Istraga, SP, DJ i HD; Metodika, SP, DJ i HD; Administracija projekta, SHL; Resursi, SHL; Softver, JY, DL i SH; Nadzor, SHL; Validacija, JY, DL, SH i SHL; Vizualizacija, JY, DL i SH; Pisanje—izvorni nacrt, SP i DJ; Pisanje—recenzija i uređivanje, SHL Svi su autori pročitali i složili se s objavljenom verzijom rukopisa.

Financiranje:Ovaj je rad podržalo Sveučilište Konkuk 2018.

Izjava institucionalnog odbora za reviziju:Nije primjenjivo.

Izjava o informiranom pristanku:Nije primjenjivo.

Izjava o dostupnosti podataka:Nije primjenjivo.

Sukob interesa:Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.

Reference

1. Jaki, PJ; Claus, H. Laccase: Osvrt na njegovu prošlost i budućnost u bioremedijaciji. krit. vlč. okoliš. Sci. Technol. 2011, 41, 373–434. [CrossRef]

2. Mayer, AM; Staples, RC Laccase: Nove funkcije za stari enzim. Fitokemija 2002, 60, 551–565. [CrossRef]

3. Camarero, S.; Ibarra, D.; Martínez, MJ; Martínez, AT Spojevi izvedeni iz lignina kao učinkoviti medijatori lakaze za dekolorizaciju različitih vrsta otpornih boja. Appl. Okolina. Microbiol. 2005., 71, 1775–1784. [CrossRef] [PubMed]

4. Campos, R.; Cavaco-Paulo, A.; Kandelbauer, A.; Robra, KH; Gübitz, GM Indigo degradacija s pročišćenim lakkazama iz Trametes hirsuta i Sclerotium rolfsii. J. Biotechnol. 2001., 89, 131–139. [CrossRef]

5. Ostadhadi-Dehkordi, S.; Tabatabaei-Sameni, M.; Forootanfar, H.; Kolahdouz, S.; Ghazi-Khansari, M.; Faramarzi, MA Razgradnja nekih benzodiazepina sustavom posredovanim lakazom u vodenoj otopini. Bioresour. Technol. 2012., 125, 344–347. [CrossRef]

6. Lloret, L.; Eibes, G.; Lú-Chau, TA; Moreira, MT; Feijoo, G.; Lema, JM Laccase katalizirana degradacija protuupalnih sredstava i estrogena. Biochem. inž. J. 2010, 51, 124–131. [CrossRef]

7. Zeng, S.; Qin, X.; Xia, L. Degradacija herbicida izoproturona sustavima lakaza-medijator. Biochem. inž. J. 2017, 119, 92–100. [CrossRef]

9. Ibarra, D.; Romero, J.; Martínez, MJ; Martínez, AT; Camarero, S. Istraživanje enzimskih parametara za optimalnu delignifikaciju pulpe eukaliptusa lakazom-medijatorom. Enzim Microb. Technol. 2006., 39, 1319–1327.

9. Fillat, A.; Colom, JF; Vidal, T. Novi pristup biobijeljenju lanene pulpe lakazom pomoću prirodnih medijatora. Bioresour. Technol. 2010, 101, 4104–4110. [CrossRef] [PubMed]

10. Camarero, S.; Ibarra, D.; Martínez, AT; Romero, J.; Gutiérrez, A.; del Río, JC Delignifikacija papirne mase korištenjem lakaze i prirodnih medijatora. Enzim Microb. Technol. 2007., 40, 1264–1271. [CrossRef]

11. Žerva, A.; Šimić, S.; Topakas, E.; Nikodinović-Runić, J. Primjena mikrobnih lakaza: Pregled patenata prošlog desetljeća (2009. – 2019.). Catalysts 2019, 9, 1023. [CrossRef]

12. Cañas, AI; Camarero, S. Laccases i njihovi prirodni medijatori: Biotehnološki alati za održive ekološki prihvatljive procese. biotehnologija. Adv. 2010, 28, 694–705. [CrossRef] [PubMed]

13. Shleev, S.; Tkač, J.; Christenson, A.; Ruzgas, T.; Yaropolov, AI; Whittaker, JW; Gorton, L. Izravni prijenos elektrona između proteina koji sadrže bakar i elektroda. Biosens. Bioelektron. 2005, 20, 2517–2554. [CrossRef] [PubMed]

14. Christopher, LP; Yao, B.; Ji, Y. Biorazgradnja lignina sa sustavima lakaza-medijator. Ispred. Energy Res. 2014, 2, 1–13. [CrossRef]

15. Bourbonnais, R.; Paice, MG Oksidacija nefenolnih supstrata: Proširena uloga laktaze u biorazgradnji lignina. FEBS Lett. 1990., 267, 99–102. [CrossRef]

17. Srebotnik, E.; Hammel, KE Razgradnja nefenolnog lignina sustavom lakaza/1-hidroksi benzotriazol. J. Biotechnol. 2000., 81, 179–188. [CrossRef]

17. Baiocco, P.; Barreca, AM; Fabbrini, M.; Galli, C.; Gentili, P. Promicanje aktivnosti lakaze prema nefenolnim supstratima: mehaničko istraživanje s nekim sustavima lakaza-medijator. Org. Biomol. Chem. 2003., 1, 191–197. [CrossRef]

19. Fabbrini, M.; Galli, C.; Gentili, P. Usporedba katalitičke učinkovitosti nekih medijatora lakaze. J. Mol. Katal. B-enzim. 2002., 16, 231–240. [CrossRef]

19. González, dr. med.; Vidal, T.; Tzanov, T. Elektrokemijska studija fenolnih spojeva kao pojačivača u oksidativnim reakcijama kataliziranim lakazom. Elektroanaliza 2009, 21, 2249–2257. [CrossRef]

20. Yang, L.; Guo, X.; Jin, Z.; Guo, W.; Duan, G.; Liu, X.; Li, Y. Pojava superkondenzatora inspiriranih melaninom. Nano Today 2021, 37, 101075. [CrossRef]

21. Caldas, M.; Santos, AC; Veiga, F.; Rebelo, R.; Reis, RL; Correlo, VM Nanočestice melanina kao obećavajući alat za biomedicinske primjene—Pregled. Acta Biomater. 2020., 105, 26–43. [CrossRef]

22. Woo, SH; Cho, JS; Lee, BS; Kim, EK Dekolorizacija melanina lignin peroksidazom iz Phanerochaete chrysosporium. biotehnologija. Bioproces Eng. 2004, 9, 256–260. [CrossRef]

24. Kaneko, S.; Cheng, M.; Murai, H.; Takenaka, S.; Murakami, S.; Aoki, K. Pročišćavanje i karakterizacija ekstracelularne lakaze iz soja Phlebia radiata BP-11-2 koja obezbojuje gljivični melanin. Biosci. biotehnologija. Biochem. 2009, 73, 939–942. [CrossRef]

25. Mohorčić, M.; Friedrich, J.; Renimel, I.; André, P.; Mandin, D.; Chaumont, J.-P. Proizvodnja enzima za izbjeljivanje melanina gljivičnog podrijetla i njegova primjena u kozmetici. biotehnologija. Bioproces Eng. 2007., 12, 200–206. [CrossRef]

25. Kim, BS; Blaghen, M.; Hong, H.; Lee, K. Pročišćavanje i karakterizacija enzima biorazgradnje melanina iz Geotrichum sp. Int. J. Cosmetic Sci. 2016, 38, 622–626. [CrossRef] [PubMed]

26. Sung, HJ; Khan, MF; Kim, YH Dekolorizacija melanina katalizirana rekombinantnom lignin peroksidazom pomoću in situ generiranog H2O2 za primjenu u kozmetici za izbjeljivanje. Int. J. Biol. Macromol. 2019, 136, 20–26. [CrossRef]

27. Shin, SK; Hyeon, JE; Joo, Y.; Jeong, DW; Vi, SK; Han, SO Učinkovita razgradnja melanina sinergističkim kompleksom enzima lakaza-peroksidaza za izbjeljivanje kože i druge praktične primjene. Int. J. Biol. Macromol. 2019, 129, 181–186. [CrossRef]

28. Khammuang, S.; Sarnthima, R. Dekolorizacija sintetičkih melanina pomoću sirovih lakaza Lentinus polycarpous Lév. Folia Microbiol. 2013, 58, 1–7. [CrossRef] [PubMed]

30. Repetto, G.; del Peso, A.; Zurita, J. Test apsorbiranja neutralnog crvenog za procjenu stanične viabilnosti/citotoksičnosti. Nat. Protoc. 2008, 3, 1125–1131. [CrossRef] [PubMed]

30. Castellar, MR; Obón, JM; Fernández-López, JA Izolacija i svojstva koncentriranog crveno-ljubičastog betacijaninskog bojila za hranu iz plodova Opuntia stricta. J. Sci. Food Agric. 2006, 86, 122–128. [CrossRef]

32. Cserhalmi, Z.; Sass-Kiss, Á.; Tóth-Markus, M.; Lechner, N. Studija sokova citrusa tretiranih pulsirajućim električnim poljem. Innov. Food Sci. Emerg. Technol. 2006, 7, 49–54. [CrossRef]

33. Łopusiewicz, L.; J˛edra, F.; Mizieli ´ska, M. Nova poli(mliječna kiselina) aktivna kompozitna folija za pakiranje inkorporirana s gljivičnim melaninom. Polymers 2018, 10, 386. [CrossRef] [PubMed]

33. Pralea, IE; Moldovan, RC; Petrache, AM; Ilies, M.; Heghes, , SC; Ielciu, I.; Nicoară, R.; Moldovan, M.; Ene, M.; Radu, M.; et al. Od ekstrakcije do naprednih analitičkih metoda: Izazovi analize melanina. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3943. [CrossRef] [PubMed]

34. Tran-Ly, AN; Reyes, C.; Schwarze, FWMR; Ribera, J. Mikrobna proizvodnja melanina i njegove različite primjene. World J. Microbiol. biotehnologija. 2020., 36, 1–9. [CrossRef] [PubMed]

36. Medina, F.; Aguila, S.; Baratto, MC; Martorana, A.; Basosi, R.; Alderete, JB; Vazquez-Duhalt, R. Model predviđanja temeljen na analizi stabla odlučivanja za lakazne medijatore. Enzim Microb. Technol. 2013, 52, 68–76. [CrossRef]

36. Fillat, U.; Prieto, A.; Camarero, S.; Martínez, AT; Martínez, MJ Biodeinking fleksografskih tinti pomoću gljivičnih lakaza uz korištenje sintetičkih i prirodnih medijatora. Biochem. inž. J. 2012, 67, 97–103. [CrossRef]

37. Hong, J.; Jung, D.; Park, S.; Oh, Y.; Oh, KK; Lee, SH Imobilizacija lakaze preko umreženih enzimskih agregata pripremljenih upotrebom genipina kao prirodnog unakrsnog povezivača. Int. J. Biol. Macromol. 2021, 169, 541–550. [CrossRef]

39. Berka, RM; Schneider, P.; Golightly, EJ; Brown, SH; Madden, M.; Brown, KM; Halkier, T.; Mondorf, K.; Xu, F. Karakterizacija gena koji kodira ekstracelularnu lakazu Myceliophthora thermophila i analiza rekombinantnog enzima izraženog u Aspergillus oryzae. Appl. Okolina. Microbiol. 1997., 63, 3151–3157. [CrossRef]

Za više informacija: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501