hrJezik
Dom / Znanje / Sadržaj

Znanje

Ekstrakt korejskog crvenog ginsenga poboljšava melanogenezu kod ljudi i izaziva učinke protiv fotostarenja kod miševa bez dlake zračenih ultraljubičastim zračenjem 1. dio

May 16, 2023

sažetak

Pozadina: Panax ginseng je izvanredan biljni lijek za sve tjelesne bolesti. Možda se zato i zove Panax, što znači "lijek za sve". Melanin je pigment koji daje boju našoj koži; međutim, povećana proizvodnja melanina može dovesti do stvaranja tumora. Izloženost ljudi ultraljubičastom B zračenju znatno je porasla zbog povećane sunčeve svjetlosti uslijed globalnog zatopljenja. Posljedično, fenomen koji se naziva fotostarenje uočen je za sve boje i tipove kože. Kao rezultat ovog fenomena, skup enzima koji se nazivaju matriks metaloproteinaze, koji služe kao enzimi za razgradnju proteina izvanstaničnog matriksa, uglavnom kolagena, povećava se, uzrokujući iscrpljivanje kolagena i rezultirajući ranim stvaranjem bora.

Prema relevantnim studijama, cistanča je uobičajena biljka koja je poznata kao "čudotvorna biljka koja produžuje život". Njegova glavna komponenta je cistanozid, koji ima različite učinke poput antioksidansa, protuupalnih i poticanja imunoloških funkcija. Mehanizam između cistanche i izbjeljivanja kože leži u antioksidativnom učinku cistanche glikozida. Melanin u ljudskoj koži nastaje oksidacijom tirozina koju katalizira tirozinaza, a reakcija oksidacije zahtijeva sudjelovanje kisika, pa radikali bez kisika u tijelu postaju važan čimbenik koji utječe na proizvodnju melanina. Cistanche sadrži cistanozid, koji je antioksidans i može smanjiti stvaranje slobodnih radikala u tijelu, čime inhibira proizvodnju melanina.

rou cong rong benefits

Kliknite na Cistanche Chemist Warehouse za izbjeljivanje

Za više informacija:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Metode: Stoga smo u našem istraživanju upotrijebili staničnu liniju mišjeg melanoma B16/F10 za proučavanje inhibicije melanogeneze pomoću ekstrakta korejskog crvenog ginsenga (KRG) in vitro i HRM-2 miševa bez dlake izloženih umjetnom ultraljubičastom zračenju B kako bismo ispitali učinkovitost KRG in vivo. Pripremili smo kremu s 3 posto ekstrakta crvenog ginsenga i procijenili njezino djelovanje na ljudsku kožu.

Rezultati: Naši rezultati su pokazali da je KRG inducirao snažnu supresiju aktivnosti tirozinaze i proizvodnje melanina u stanicama B16/F10; štoviše, smanjio je transkripciju i translaciju komponenti uključenih u put proizvodnje melanina. U in vivo eksperimentima, KRG je snažno potisnuo ekspresiju matričnih metaloproteinaza, smanjio stvaranje bora i inhibirao razgradnju kolagena. Na ljudskoj koži krema od ginsenga povećala je otpornost kože i vlažnost kože te poboljšala tonus kože.

Zaključak: Stoga zaključujemo da je KRG izvrstan proizvod za izbjeljivanje i usporavanje starenja kože.

·2019. Korejsko društvo ginsenga. Izdavačke usluge Elsevier BV Ovo je članak otvorenog pristupa

1. Uvod

Melanin je spoj odgovoran za pigmentaciju kože, a raznolikost boja kože u ljudskoj rasi može se pripisati količini stanica koje proizvode melanin prisutnih u koži [1]. Proces odgovoran za stvaranje melanina naziva se melanogeneza. U tom procesu, hormon koji stimulira a-melanocite (a-MSH) veže se za svoj receptor (tj. receptor za melanokortin 1) uzrokujući povišene razine cAMP-a, koji zauzvrat aktivira faktor povezan s mikroftalmijom (MITF) kroz različite putove, kao što je ciklički Adenozin monofosfat (cAMP) odgovorni element vezujućeg proteina, izvanstanično regulirane kinaze i protein kinaze B (AKT), uzrokujući njegovu razgradnju. Zbog ove razgradnje, ograničavajući korak u procesu melanogeneze (tj. djelovanje enzima tirozinaze, TYR) je pogođen i aktivira se. TYR je odgovoran za pretvorbu tirozina u L-3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA), koji tvori melanin. Protein 1 (TRP-1) povezan s tirozinazom (TRP-2) i protein 2 (TRP-2) povezani su s tirozinazom su daljnji nizvodni čimbenici TYR i MITF koji se aktiviraju i uključeni su u stvaranje melanina. Posljedično, kroz cijeli proces, TYR je najvažnija komponenta regulacije proizvodnje melanina u stanicama kože [2-4].

cistanche herb

Panax ginseng je čudesna biljka koja se široko konzumira u istočnoj Aziji više od 1,000 godine jer ima mnoge blagotvorne učinke na zdravlje. Dostupan je u različitim oblicima, uključujući napitke, kapsule i tablete [5,6]. Prijašnje studije otkrile su značajne učinke ginsenga kada se koristi za smanjenje učestalosti raznih vrsta tumora, mnogih mentalnih anomalija, dijabetesa, hipertenzije, hiperlipidemije i upala [7-13]. Konkretno, na Korejskom poluotoku dodaci ginsenga čine dio normalne prehrane. Komercijalno, ginseng je dostupan u obliku cijelog ekstrakta korijena ginsenga, pojedinačnih ekstrakata ginsenozida ili kapsula. Ginsenozidi su sastavni aktivni spojevi prisutni u cijelom korijenu ginsenga koji su odgovorni za učinkovita svojstva ginsenga za poboljšanje zdravlja [14].

Provedeno je mnogo studija o učincima pojedinačnog ginsenozida na proizvodnju melanina i melazmu [15]. Međutim, trenutno niti jedna studija nije izvijestila o antimelanogenim učincima ekstrakta korejskog crvenog ginsenga (KRG) na proizvodnju melanina i ispitala njegove učinke na izbjeljivanje kože i usporavanje starenja, osobito kod ljudi. Stoga smo istražili inhibiciju TYR-a i inhibiciju proizvodnje melanina pomoću KRG-a in vitro u staničnoj liniji B16/F10 melanoma putem mehaničke studije putova uključenih u ovaj proces. Naši rezultati su pokazali da je KRG izrazito inhibirao aktivnost TYR i smanjio sadržaj melanina putem razgradnog puta MITF. Štoviše, naša in vivo studija koja je koristila model fotostarenja i hiperpigmentacije bezdlakih miševa (HRM-2) ozračenih ultraljubičastim B (UVB) otkrila je da je proizvodnja melanina u HRM-2 miševa značajno i izrazito smanjena primjena KRG (150 i 300mg/kg). Nadalje, krema s 3 posto ekstrakta crvenog ginsenga pokazala je izvrsna svojstva protiv bora i izbjeljivanja kože kod ljudi. Stoga smo zaključili da bi KRG i formulacije KRG-a kao krema trebale biti korisne u kozmetičkoj industriji kao sredstva za izbjeljivanje kože i usporavanje starenja.

2. Materijali i metode

2.1. Kemikalije i reagensi

Dulbeccov modificirani Eagleov medij (WelGene Co, Koreja); fetalni goveđi serum (WelGene Co., Koreja); streptomicin i penicilin (Lonza, MD, SAD); TRIzol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, SAD); oligodT, MITF, TYR, TRP-1, TRP-2 i početnice b-aktina dobivene su od (Bioneer, Daejeon, Koreja). 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolijbromid je kupljen od Sigma-Aldrich. Dobivena su antitijela za MITF, TYR, TRP-1 i TRP-2 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, Inc., TX, SAD). Gljive TYR i L-DOPA kupljene su od Sigme (St. Louis, MO, SAD). Svi ostali reagensi bili su lokalne analitičke čistoće.

cistanche for sale

2.2. Priprema uzorka

KRG je ljubazno osigurao Korea Ginseng Cooperation koji se sastojao od sljedećih 11 sastava ginsenozida (mg/g): Rb1 6.67, Rb2 2.79, Rc 1.01 , Rd 1,01, Rg3s 2,22, Rg3r 0,79, Re 1,97, Rf 1,40, Rg1 1.67, Rg2s 1.23 i Rh1 0.77 kako je analizirano analizom tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti (HPLC). Dok je 3-postotna krema od crvenog ginsenga (sastav ginsenozida bio isti kao što je prethodno opisano) pripremila Sveučilište Kyungnam, Changwon, Republika Koreja. Ukratko, mješavina od 80 mL pročišćene vode i 30 mL ulja slatkog badema ili ulja sjemenki suncokreta zagrijana je na 80°C. Nakon toga, ponovno je dodana pročišćena voda i emulgirana pomoću mješalice. Naknadno je dodan tokoferol kao antioksidans, a 3-postotni ekstrakt crvenog ginsenga dodan je kao aktivni sastojak; smjesa je nazvana krema od crvenog ginsenga.

2.3. Procjena stabilnosti kreme od crvenog ginsenga

Provedeni su sljedeći testovi za procjenu stabilnosti 3 postotne kreme od crvenog ginsenga:

cistanche amazon

(1) pH test

pH kreme od crvenog ginsenga mjeren je 1., 7., 15. i 30. dana 30--dnevnog eksperimenta. pH kreme od crvenog ginsenga bio je blago kiseo i gotovo se nije mijenjao tijekom 30 dana (Tablica 2).

(2) Ispitivanje promjene boje

Stupanj promjene boje kreme od crvenog ginsenga mjeren je 1., 7., 15. i 30. dana. Tijekom 30--dnevnog eksperimentalnog razdoblja nije primijećena promjena boje (dodatna slika 1).

(3) Patch test

Kako bi se provjerio postoji li alergijski odgovor na kremu od ginsenga, 1 mL kreme od crvenog ginsenga naneseno je na dorzalno središnje područje leđa (1 cm × 1 cm) dobrovoljaca, a reakcija kože procijenjena je nakon 24 sata. Procijenjene su različite vrste kožnih reakcija, kao što je prikazano u Dodatnoj tablici. 3A-B, i nije primijećen nikakav eritem, edem ili neželjena reakcija. Stoga je ova krema dodatno testirana i na druge parametre na koži. Nadalje, procijenjen je stupanj iritacije kože, kao što je prikazano u Dodatnoj tablici. 4, kako bi se dobio primarni indeks iritacije kože.

2.4. Režim liječenja kremom od crvenog ginsenga i procjena učinaka na masnoću i sadržaj vlage, elastičnost i izbjeljivanje kože

Za procjenu učinaka kreme od crvenog ginsenga na sadržaj ulja, sadržaj vlage, elastičnost i izbjeljivanje kože, 10 žena (otprilike 40 godina, nepušačice, bez povijesti kožnih bolesti ili tretmana lica) podijeljeni su u dvije skupine od po pet osoba: kontrolnu skupinu u kojoj je primijenjena krema bez ekstrakta crvenog ginsenga (non-KRG) i eksperimentalnu skupinu u kojoj je primijenjena krema s ekstraktom crvenog ginsenga (skupina tretirana KRG-om). Broj jedinki izračunat je korištenjem statističkog softvera G*Power 3.1 omicX; koeficijent značajnosti bio je 0,05, snaga 80, broj grupa 2, a broj ponovljenih mjerenja 6.

how to take cistanche

Deset pojedinaca (pet u eksperimentalnoj skupini i petnaest u kontrolnoj skupini) odabrano je za obračun stope odustajanja od 20 posto. Pokuse na ljudima dopustio je Institucionalni revizijski odbor Sveučilišta Kyungnam (IRB # 1040460-A-2017-040).
Svaki dan tijekom 1 mjeseca krema je nanošena na kožu 1 h nakon čišćenja. Nakon toga, gore spomenuti parametri izmjereni su na koži u tjednima 0, 2 i 4.

Krema je nanesena na područje T-zone (1) lica, koja se nalazi 1 cm iznad gornjeg dijela sredine T na čelu između obrva te s desne i lijeve strane u trajanju od 3-5 sekundi. U-zona (2) nacrtana je vodoravno od nosa i okomito prema dolje od repa oka, kao što je prikazano na Dodatnoj slici 2. Kako bi se standardizirali uvjeti mjerenja, istraživanje je provedeno na 24 C ±1 C i 55 posto ± 10 posto relativne vlažnosti.

Sadržaj ulja, sadržaj vode, elastičnost i sadržaj melanina mjeren je sebumetrom SM815 (CK electronics, Njemačka), kronometrom CM825 (CK electronics, Njemačka), heksametrom MX18 (CK electronics, Njemačka) i kutometrom (CK electronics). , Njemačka), odnosno, dodirivanjem kože ovih instrumenata na 3-5 sekundi.
Sadržaj vlage i ulja te tonovi kože analizirani su T-testom. Smatra se da empirijska analiza rezultata studije ukazuje na statistički značajne promjene za p-vrijednosti<0.05. After the end of the application period, the satisfaction of the product assessed through a questionnaire was converted into a score for each response.

2.5. Kultura stanica

Stanična linija mišjeg melanoma B16/F10 dobivena je iz American Type Culture Collection i uzgojena u Dulbeccovom modificiranom Eagleovom mediju s dodatkom 8 posto fetalnog goveđeg seruma (WelGene Co, Daejeon), 100 IU/mL penicilina i 100 mg/mL streptomicin sulfat (Lonza, MD, SAD). Stanice su držane u vlažnom inkubatoru s 5 posto CO2 na 37 stupnjeva C.

2.6. Test inhibicije TYR bez stanica

Ispitivanje je provedeno pomoću blago modificiranog protokola kao što je prethodno opisano [3]. Ukratko, 10 mL KRG-a stavljeno je u triplikatu u 96-ploču s jažicama i pomiješano sa 60 mL 50 mmol/L fosfatnog pufera na ledu (pH 6,8). Zatim je u svaku jažicu dodano 20 mL 0,9 mg/mL L-DOPA. Na kraju je u svaku jažicu dodano 10 mL gljive TYR, a ploča je inkubirana na 27 stupnjeva C 10 minuta. Nakon inkubacije, proizvodnja dopakroma mjerena je spektrofotometrijski na 450 nm pomoću čitača mikropločica (Versamax; Molecular Devices, LLC, CA, SAD); u ovom eksperimentu, kojična kiselina je korištena kao pozitivna kontrola [16].

cistanche side effects reddit

2.7. Test inhibicije melanina

Stanice B16/F10 nasađene su u 6-pločice za kulture s jažicama u gustoći od 2,5 × 103 stanica/jažici i inkubirane 5 dana. Nakon što su stanice postigle željenu konfluentnost, primijenjen je KRG tretman i stanice su stimulirane s a-MSH. Stanice su zatim inkubirane 3 dana, sakupljene korištenjem 0,25 postotne otopine tripsina etilendiamintetraoctene kiseline i prebačene u mikrocentrifugalne epruvete od 1.5-mL. Epruvete su zatim centrifugirane na 10,000rpm 10 minuta, a talog je otopljen u 2mol/L NaOH 15 minuta na 60 stupnjeva C. Smjesa je zatim prebačena u 96-pločice s jažicama i apsorbancija svake jažice na 450 nm izmjerena je korištenjem čitača mikropločica (Versamax; Molecular Devices, LLC, CA, USA). Apsorpcija je uspoređena s onom standardnih krivulja proizvedenih od sintetičkog melanina (Sigma).

2.8. Pokusi na životinjama i grupiranje

Šest tjedana stari muški miševi bez dlake HRM-2 koji posjeduju melanin dobiveni su od Central Lab Animal Inc. (Seul, Južna Koreja) i smješteni su u kontroliranu prostoriju (23 stupnja ±1 stupanj, 55 posto ±5 posto relativna vlažnost, 12-satni ciklus svjetlo/tama) i davanje ad libitum pristupa vodi i hrani. Sve pokuse na životinjama izvodio je strogo Institucionalni odbor za skrb i korištenje životinja Sveučilišta Daejeon (Daejeon, Koreja) (broj dopuštenja: DJUARB2017-033). Nakon razdoblja privikavanja od 1 tjedna, miševi su nasumično podijeljeni u pet skupina, od kojih je svaka sadržavala petnaest životinja: normalna skupina, koja nije primila nikakav tretman; kontrolna skupina ozračena UVB; pozitivna kontrolna skupina, koja je primila 0.01 posto kreme za sunčanje i UVB zračenje; skupina s nižom dozom KRG-a, koja je primila KRG 150 mg/kg peroralno uz UVB zračenje; i skupina s višom dozom KRG-a, koja je primila KRG od 300 mg/kg peroralno uz UVB zračenje.

2.9. UVB zračenje i indukcija fotostarenja

Dorzalna koža HRM{{0}} miševa ozračena je UVB lampom (15 W; maksimalna valna duljina, 312 nm; UV intenzitet, 100 mW cmˉ 2; IedaBoeki Co., Tokio, Japan). Za procjenu učinaka pozitivne kontrole (0,01 posto kreme za sunčanje) i KRG-a na stvaranje bora i pigmentaciju, HRM-2 miševi ozračeni su sa 100 mJ/cm2 UVB (1 minimalna eritematska doza =100 mJ/cm 2 ) dnevno tijekom 1. tjedna, a zatim 200 mJ/cm2 UVB od tjedana 2-5. Miševi su praćeni tri puta tjedno. Unos ishrane i tjelesna težina mjereni su svaki tjedan tijekom 12 tjedana.

cistanche para que serve

2.10. Učinak na proizvodnju melanina u HRM-2 miševa

Kako bi se procijenila proizvodnja melanina koja je rezultat izlaganja miševa UVB zračenju, dorzalno područje miševa podijeljeno je na desnu i lijevu stranu. U svim skupinama osim normalne skupine, lijeva je strana primala UVB (kontrola), kremu za sunčanje ili KRG i UVB zračenje tijekom 5 tjedana. Desna strana je ostala neobrađena. UVB zračenje primjenjivano je tri puta tjedno tijekom 5 tjedana (kako je gore opisano), a status pigmentacije kože analiziran je u 1., 3. i 5. tjednu pomoću digitalne kamere (model D70; Nikon, Tokio, Japan) nakon miševi su anestezirani eterom. Analiza slike dorzalne kože provedena je pomoću softvera (Bio-Rad, SAD) na fotografijama digitalnog fotoaparata. Stupanj taloženja melanina analiziran je iz razlike između pigmentiranog, UVB izloženog i uzorkom tretiranog područja na lijevoj strani u usporedbi s netretiranim i nepigmentiranim područjem na desnoj strani.

2.11. Mjerenje bora na koži 

Stupanj starenja kože izazvan UVB zračenjem mjeren je promatranjem stvaranja bora. Za procjenu stvaranja bora, miševi HRM{{0}} anestezirani su intraperitonealnom injekcijom kloral hidrata (0.1 mL 7 posto kloral hidrata/25 g miša) u 5. tjednu Izlaganje UVB zračenju i obrada uzorka opisani su u prethodnom odjeljku. Nabori kože procijenjeni su u 3., 4. i 5. tjednu korištenjem DETAX sustava II (MIXPAC) i Double-Stick diska (3M Healthcare, Njemačka) nakon UVB zračenja. Double-Stick Disc (pošprican DETAX System II) pričvršćen je na kožu miša i uklonjen nakon 2-3 minute. Bore diska ocjenjivane su sustavom bodovanja Bissetta [17]: stupanj 0, odsutnost bora; stupanj 1, nekoliko plitkih bora; stupanj 2, neke bore; i stupanj 3, neke duboke bore. Nakon što je disk uklonjen i koža očišćena 70-postotnim etanolom, koža je fotografirana USB digitalnim mikroskopom (× 400; CE FOROHS, Kina) te je učinjena vizualna analiza kožnih bora.

2.12. Imunoenzimski test

Kako bi se istražio učinak gena povezanih s borama izazvanim UVB zračenjem (tj. matrične metaloproteinaze; MMP-2), koža svih tretiranih skupina je prikupljena, a proteini su analizirani korištenjem enzimski vezanog imunosorbentnog testa (ELISA). kit prema uputama proizvođača (MMP-2 ELISA kit; R&D Systems, SAD).

2.13. Histološko promatranje kože

Tkiva kože ekstrahirana iz svake pokusne skupine fiksirana su u 10-postotnoj otopini formalina 48 sati, a zatim su obojena hematoksilinom i eozinom metodom Cardiff [18] kako bi se odredila debljina epiderme. Za vizualizaciju kolagena, Massonovo bojanje trihoma provedeno je prema utvrđenim protokolima [19].

2.14. Ekstrakcija RNA i lančana reakcija polimerazom u stvarnom vremenu

Ukupna RNA ekstrahirana je iz B16/F10 stanica i UVB-ira-dilatirane kože miša nakon što su tretirani s KRG i stimulirani s a-MSH korištenjem TRIzola prema uputama proizvođača. RNA (2 mg) je žarena s oligodT (Bioneer Co., Daejeon) 10 minuta na 70 stupnjeva C i ohlađena 5 minuta na ledu, obrnuto transkribirana upotrebom premiksa reverzne transkriptaze (Bioneer Co., Daejeon) u 20 mL reakcijske smjese , i izvoditi 90 minuta na 42,5 stupnjeva u termocikleru. Reakcija je prekinuta na 95 stupnjeva tijekom 5 minuta da se inaktivira reverzna transkriptaza. Lančana reakcija polimeraze reverzne transkripcije (PCR) izvedena je na alikvotima cDNA dobivenih reakcijom reverzne transkriptaze (RT) u PCR premiksu (Bioneer Co, Daejeon). PCR produkti su potom podvrgnuti elektroforezi na 1 postotnom agaroznom gelu, obojeni etidijevim bromidom i vizualizirani pomoću ImageQuant LAS 500 (GE Healthcare Life Sciences, Seul, Južna Koreja). Intenzitet gustoće vrpci normaliziran je na intenzitet gliceraldehid 3- fosfat dehidrogenaze (GAPDH), a nizovi početnica navedeni su u dodatnoj tablici. 1. Ekspresija MMP-2, MMP-9 i interleukina (IL)-1b analizirana je upotrebom kvantitativnog PCR-a u stvarnom vremenu pomoću sustava Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR ( Applied Biosystems, SAD).

cistanche tubulosa supplement

2.15. Western blot analiza

B16/F10 stanice su tretirane s KRG u prisutnosti a-MSH (10 mM). Ukupni proteini iz stanica i UVB-ozračene kože miša ekstrahirani su prema uputama pufera za lizu PRO-PREP (iNtRON Biotechnology, Koreja). Koncentracija proteina je zatim izmjerena korištenjem PRO-MEASURE kompleta za ispitivanje (PRO-PREP; iNtRON Biotechnology, Koreja), a jednake količine proteina su odvojene pomoću 10-postotnih poliakrilamidnih gelova pomoću elektroforeze natrijevog dodecil sulfata i poliakrilamidnog gela (SDS-PAGE) i prenijeti na membrane od poliviniliden difluorida (PVDF) (Immobilon-P; Millipore, Billerica MA, SAD). Nespecifično vezanje na PVDF membrane minimizirano je inkubacijom membrane u blokirajućem puferu koji sadrži 5 posto nemasnog suhog mlijeka i 0,1 posto Tween-20 u Tris puferiranoj fiziološkoj otopini (TBS). Membrane su zatim inkubirane preko noći na 4 stupnja sa specifičnim primarnim protutijelima, nakon čega je uslijedila inkubacija tijekom 1 sata s antitijelima konjugiranim s peroksidazom hrena (1:3000 razrjeđenje). Vezana protutijela vizualizirana su primjenom otopine za pojačanu kemiluminiscenciju (Supex, Daegu, Koreja), a slike su analizirane pomoću softvera ImageJ. b-Aktin je korišten kao interna kontrola.

2.16. Statistička analiza

Podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost±standardna pogreška srednje vrijednosti (SEM). Jednosmjerna analiza varijance (ANOVA), Dunnettov test i neupareni Studentov t-test primijenjeni su za statističku procjenu podataka ili gdje je drugačije naznačeno. Rezultati statističke analize ***p < 0.001, **p < 0,05 i *p < 0,01 smatraju se značajnima.

Za više informacija: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Mogli biste i voljeti