Učinci uvarka Jianpi Bushen Yiqi na imunološku funkciju i neuromuskularne spojeve kod EAMG miševa

2.3 Histomorfološka usporedba timusa i limfnih čvorova u svakoj skupini miševa

Kao što je prikazano uSlika 1, timusni korteks i medula uprazna kontrolna grupamiševi su bili jasno razgraničeni, s uredno raspoređenim stanicama. Nasuprot tome,model kontrolne grupepokazuju nejasne kortikalno-medularne granice i oskudnu raspodjelu stanica. U usporedbi s modelskom skupinom, miševi uskupinu prednizonainiske, srednje i visoke doze skupine dekokcija Jianpi Bushen Yiqipokazao je relativno jasne kortikalno-medularne granice i guste, dobro organizirane stanice.

Slika 2pokazuje da su stanice limfnih čvorova u praznoj kontrolnoj skupini pokazivale potpunu strukturu i uredan raspored. U korteksu su bili vidljivi primarni limfoidni folikuli, bez sekundarnih folikula ili germinativnih centara. U modelnoj skupini stanična je struktura bila neorganizirana, s proliferiranim primarnim folikulima i vidljivim sekundarnim folikulima i germinativnim centrima. Grupe koje su primale prednizon i Jianpi Bushen Yiqi pokazale su smanjenu hiperplaziju limfoidnog folikula.

Tablica 3pokazuje da je, u usporedbi sa slijepom kontrolnom skupinom, modelna skupina imala smanjeni omjer površine korteksa i medule u timusu i povećana germinativna središta u limfnim čvorovima (P < 0,05 ili P < 0,01). U usporedbi s modelskom skupinom,prednizonivisoke doze Jianpi

 

 

 

Slika 1. Usporedba histopatološke morfologije tkiva timusa među različitim skupinama miševa (HE bojenje)

 

Tablica 3. Usporedba omjera kortikalno-medularnog područja timusa i broja germinativnih centara limfnih čvorova u svakoj skupini miševa

Jedinica: (x̄ ± s)

Skupina	n	Omjer površine korteksa timusa i medule	Broj germinalnog centra (po LN)
Prazna kontrola	3	3.62 ± 0.18	0.00 ± 0.00
Kontrola modela	3	1.74 ± 0.11 ᵃ	6.47 ± 1.51 ᵃ
Prednizon	3	4.62 ± 1.41 ᵇ ᶜ	3.52 ± 0.35 ᵇ ᶜ
Uvarak Niska doza	3	2.91 ± 0.42 ᶜ	5.77 ± 0.66 ᶜ
Uvarak Srednja doza	3	3.41 ± 1.05 ᶜ	4.12 ± 0.25 ᶜ
Uvarak Visoka doza	3	4.60 ± 0.55 ᵇ ᶜ	3.00 ± 0.71 ᶜ

Bilješke:

ᵃ: P <0,01 naspram slijepe kontrole

ᵇ: P <0,05 u odnosu na kontrolu modela

ᶜ: P <0,01 u odnosu na kontrolu modela

Bushen Yiqigrupe su pokazale veći omjer površine korteksa i medule. Sve intervencijske skupine, uključujući prednizon i sve tri dekokcijske doze, značajno su smanjile broj germinativnih centara (P <0,01). U usporedbi sa skupinom prednizona, dekocija jeskupine niske i srednje dozejoš uvijek pokazuju nešto više germinativnih centara, dok jeskupinu visoke dozenije imala značajne razlike.

Napomena: crne strelice pokazuju na limfne folikule, a crvene na germinativne centre.

Slika 2. Usporedba histopatološke morfologije tkiva limfnih čvorova među različitim skupinama miševa (HE bojenje)

 

 

 

 

2.4 Usporedba postotaka Th1, Th2, Th17, Treg i Tfh stanica u suspenziji stanica slezene

Kao što je prikazano uTablica 4, u usporedbi s praznom kontrolnom skupinom,skupina modelapokazao je povećane postotke Th1, Th2, Th17 i Tfh stanica i smanjeni postotak Treg (P < 0,05 ili P < 0,01). U usporedbi s modelskom skupinom,skupine dekocija srednje i visoke dozeimao smanjene postotke Th1 i povećane postotke Treg; sve tri skupine dekokcija pokazale su smanjene postotke Th17 i Tfh. Naime,skupinu prednizonasmanjene postotke Treg-a, što izaziva zabrinutost zbog njegovog potencijala da poremeti imunološku homeostazu.

U usporedbi sa skupinom koja je primala prednizon, sve skupine s dekokcijom pokazale su smanjenje Th2, Th17 i Tfh stanica. Theskupine srednje i visoke dozedodatno smanjen Th1 i povećan Treg stanica (P < 0,05 ili P < 0,01), što ukazuje na uravnoteženiju imunoregulaciju.

 

 

 

Napomena: NMJ, neuromuskularni spoj; AChR, acetilkolinski receptor.

Slika 3. Usporedba morfologije AChR-a na neuromuskularnim spojevima mišićnih skupina među različitim skupinama miševa
(imunofluorescentno bojenje, ×100)

 

Tablica 4. Usporedba postotaka Th1, Th2, Th17, Treg i Tfh stanica u suspenziji stanica slezene među različitim skupinama miševa

Jedinica: (% , x̄ ± s)

Skupina	n	Th1	Th2	Th17	Treg	Tfh
Prazna kontrola	6	0.05 ± 0.04	0.03 ± 0.02	0.11 ± 0.06	16.42 ± 2.59	9.45 ± 3.29
Kontrola modela	7	3.43 ± 1.11 ᵃ	0.82 ± 0.22 ᵃ	1.64 ± 0.65 ᵇ	7.99 ± 3.26 ᵃ	18.27 ± 4.21 ᵃ
Prednizon	7	1.84 ± 0.26	0.84 ± 0.47	1.03 ± 0.71	5.02 ± 1.58 ᵃ	15.32 ± 3.84
Uvarak Niska doza	7	1.42 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.60 ± 0.16 ᶜ ᶠ	0.73 ± 0.24 ᶜ ᶠ	14.97 ± 2.11 ᶠ	10.35 ± 3.72 ᶜ ᶠ
Uvarak Srednja doza	7	1.08 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.47 ± 0.14 ᶜ ᶠ	0.45 ± 0.20 ᶜ ᶠ	13.82 ± 2.21 ᶠ	9.87 ± 3.65 ᶜ ᶠ
Uvarak Visoka doza	7	1.23 ± 0.62 ᶜ ᵉ	0.32 ± 0.14 ᶠ	0.34 ± 0.22 ᶜ ᶠ	13.50 ± 2.47 ᶠ	7.97 ± 3.60 ᶜ ᶠ

Bilješke:

ᵃ: P <0,01 naspram slijepe kontrole

ᵇ: P <0,05 naspram slijepe kontrole

ᶜ: P <0,01 u odnosu na kontrolu modela

ᵈ: P < 0,05 u odnosu na kontrolu modela

ᵉ: P < 0,05 u odnosu na prednizon

ᶠ: P < 0,01 u odnosu na prednizon

 

 

2.5 Usporedba morfologije AChR na NMJ u svakoj mišićnoj skupini

Slika 3pokazuje da su NMJ AChR u slijepoj kontrolnoj skupini bili strukturno netaknuti i izgledali su kao kompaktne formacije poput pereca. U modelnoj skupini, NMJ u očnim, sternokleidomastoidnim, deltoidnim i prednjim tibijalnim mišićima činili su se fragmentiranim i deformiranim, dok su žvačni, interkostalni i dijafragmalni mišići imali ozbiljno poremećene strukture. Sve intervencijske skupine pokazale su različite stupnjeve poboljšanja u morfologiji AChR-a.

Kao što je prikazano uTablica 5, u usporedbi sa slijepom kontrolnom skupinom, modelna skupina imala je značajno smanjene omjere AChR površina u više mišića (P < 0,05 ili P < 0,01). U usporedbi s modelskom skupinom,prednizonidekocija srednje dozeskupine su pokazale povećano AChR područje u očnim mišićima. Theskupina dekocija niske dozepoboljšana AChR područja u deltoidu i tibialisu anterioru. Theskupinu visoke dozepoboljšana AChR područja u okularnom, sternocleidomastoidnom, deltoidnom i tibialis anterior mišiću.

U usporedbi s prednizonom,skupina niske dozepoboljšana AChR područja u očnim i žvačnim mišićima; theskupina srednje dozeu žvačnom mišiću; iskupinu visoke dozeu sternocleidomastoidu i tibialisu anterior (P < 0,05 ili P < 0,01).

Tablica 5. Usporedba područja AChR na neuromuskularnom spoju u svakoj skupini mišićnih skupina miševa

Jedinica: (% , x̄ ± s)

Skupina	n	Očni mišić	Žvačni mišić	Sternokleidomastoidni	Deltoidni mišić	Interkostalni mišić	Dijafragma	Tibialis Anterior
Prazna kontrola	3	3.83 ± 0.28	4.28 ± 0.29	4.48 ± 0.77	3.79 ± 0.12	3.78 ± 0.22	4.80 ± 0.26	3.60 ± 0.32
Kontrola modela	3	2.58 ± 0.34 ᵃ	2.55 ± 0.45 ᵃ	2.15 ± 0.31 ᵇ	2.33 ± 0.15	2.55 ± 0.33	2.98 ± 0.34ᵇ	2.95 ± 0.49
Prednizon	3	3.33 ± 0.49ᶜ	2.67 ± 0.55	3.83 ± 0.54	3.49 ± 0.38	3.60 ± 0.16	3.45 ± 0.67	3.02 ± 0.40
Uvarak Niska doza	3	2.76 ± 0.49ᵉ	3.05 ± 0.37ᵉ	3.77 ± 0.64	2.77 ± 0.44ᶜ	3.03 ± 0.25	3.33 ± 0.33	3.44 ± 0.71ᶜ
Uvarak Srednja doza	3	3.32 ± 0.40ᶜ	3.27 ± 0.75ᵉ	3.98 ± 0.43	3.27 ± 0.65	3.50 ± 0.28	3.85 ± 0.42	3.56 ± 0.52
Uvarak Visoka doza	3	3.46 ± 0.37ᶜ	3.34 ± 0.23ᵉ	4.54 ± 0.67ᶜ	3.69 ± 0.39	3.75 ± 0.36	3.75 ± 0.35	3.84 ± 0.52ᶜ

Bilješke:

ᵃ: P <0,05 naspram slijepe kontrole

ᵇ: P <0,01 naspram slijepe kontrole

ᶜ: P <0,05 u odnosu na kontrolu modela

ᵈ: P < 0,01 u odnosu na kontrolu modela

ᵉ: P < 0,05 u odnosu na prednizon

 

Tablica 6. Usporedba serumskih razina AChR-Ab, IL-6 i TNF- među različitim skupinama miševa

Jedinica: (x̄ ± s)

Skupina	n	AChR-Ab (P⁻¹)	IL-6 (pg·ml⁻¹)	TNF- (pg·ml⁻¹)
Prazna kontrola	12	1.00 ± 0.13	110.66 ± 30.75	25.84 ± 9.71
Kontrola modela	12	3.13 ± 0.97 ᵃ	327.91 ± 38.71 ᵃ	124.15 ± 37.61 ᵃ
Prednizon	11	2.05 ± 0.29 ᵇ ᶜ	487.21 ± 124.09 ᵇ	78.76 ± 22.35 ᵇ ᶜ
Uvarak Niska doza	13	2.50 ± 0.49ᵉ	306.42 ± 93.91ᶜ	89.14 ± 25.90 ᶜ
Uvarak Srednja doza	13	1.98 ± 0.34 ᶜ	278.60 ± 63.97ᶜ	80.36 ± 21.95ᶜ
Uvarak Visoka doza	13	1.42 ± 0.33 ᶜ	224.43 ± 49.03ᶜ	84.26 ± 36.60ᶜ

Bilješke:

ᵃ: P <0,01 naspram slijepe kontrole

ᵇ: P < 0,01 u odnosu na kontrolu modela

ᶜ: P <0,01 u odnosu na kontrolu modela

ᵈ: P < 0,05 u odnosu na prednizon

ᵉ: P < 0,01 naspram prednizona

2.6 Usporedba serumskih razina AChR-Ab, IL-6 i TNF-

Tablica 6ilustrira da, u usporedbi s praznom kontrolnom skupinom,skupina modelaimali značajno povišene razine AChR-Ab, IL-6 i TNF- (P <0,01). U usporedbi s modelskom skupinom,prednizoniskupine dekocija srednje i visoke dozeznačajno smanjen AChR-Ab. Međutim,povećan prednizon IL-6, dok jesmanjena grupa dekocija visoke doze IL-6. I prednizon iskupine srednje i visoke dozesmanjen TNF- (P < 0,05 ili P < 0,01).

U usporedbi s prednizonom,skupina dekocija niske dozeimao višu razinu AChR-Ab, alisve skupine dekocijasnižen IL-6, izbjegavajući proupalne učinke prednizona.

3. Rasprava

Klinički, MG se kategorizira u očnu miasteniju gravis (oMG) i generaliziranu MG (gMG). oMG se prvenstveno očituje kao ptoza i diplopija, a može napredovati do gMG, karakteriziran sistemskom slabošću skeletnih mišića [1]. Teorija tradicionalne kineske medicine (TCM) pripisuje patogenezu MG-a disfunkcijama uslezene i bubrega. Slezena upravlja mišićima i udovima, kao postnatalni korijen i izvor Qi-ja i krvi. Bubrezi pohranjuju esenciju i upravljaju kostima i srži. Nedostatak oba dovodi do slabosti mišića, kao što se vidi u MG [15-16].

Na temelju TCM načela "liječenja korijena",toniziranje slezene i bubregapostaje središnji. TheUvarak Jianpi Bushen Yiqiutjelovljuje ovaj pristup. Njegov glavni sastojak,Astragalus membranaceus, pojačava Qi slezene i podiže Yang.Ljepilo za kornjačin oklopiljepilo za jelenje rogoveobogaćuju esenciju bubrega i jang, jačajući mišiće i kosti.Codonopsis, Angelica sinensis, Bupleurum, Cimicifuga, iu medu prženi sladićdjeluju sinergistički kako bi nahranili krv, podigli Yang i uskladili formulu.

Ključni dodatak ovoj formulaciji jeCistanche deserticola, poznata biljka zatonizira yang bubrega i obnavlja vitalnu esenciju. Pokazalo se da Cistanche pojačava imunološku modulaciju i poboljšava otpornost na umor, što ga čini idealnim za stanja kao što je MG. Prema XJCistanche, ekstrakt Cistanche podržavavitalnost živaca i mišića, promoviraravnoteže neurotransmitera, i poboljšavaimunološka homeostaza-mehanizmi izravno relevantni za patofiziologiju MG.

U ovoj studiji korišten je EAMG mišji model za procjenu učinaka dekokcije na bihevioralne, imunološke i strukturne dimenzije NMJ-a. Rezultati su to pokazaliprednizonpoboljšana snaga stiska i Lennonovi rezultati, ali je uzrokovao značajnemršavljenje, u skladu s poznatim nuspojavama glukokortikoida [19]. Nasuprot tome, sve doze dekocijepovećana tjelesna težina, što ukazuje na bolju sigurnost.

Terapijska učinkovitost bila jeovisno o dozi, sskupinu visoke dozepostižući usporedivo poboljšanje u snazi ​​stiska i Lennonovom rezultatu u odnosu na prednizon - nudeći obojeučinkovitost i sigurnost.

Indeksi imunoloških organa otkrili su da je prednizon smanjio indeks timusa i uzrokovao kortikalno-medularnu atrofiju, narušavajući središnju toleranciju [20]. Uvarak je, međutim, sačuvao ili poboljšao strukturu timusa, osobito pri visokim dozama. Indeksi slezene slijede advofazni regulacijski obrazac, s niskim i srednjim dozama koje potiskuju abnormalnu imunološku proliferaciju, dok visoke doze održavaju ravnotežu.

Sve skupine dekokcija smanjile su hiperplaziju folikula limfnih čvorova, iako je samo visoka doza odgovarala prednizonu u supresiji germinativnog centra, što ukazuje na bolju regulaciju visoke doze i središnjeg i perifernog imuniteta.

Budući da je neravnoteža CD4⁺ T-stanica u osnovi EAMG [4], sposobnost dekokcije darebalans Th1/Th2/Th17/Tfh i Tregstanica je ključna. Za razliku od prednizona, koji je smanjio Treg, dekokcija (osobito srednje i visoke doze)poboljšani Tregi potisnute proupalne podskupine. Ovajimunološka modulacija, umjesto supresije imuniteta, bolje se usklađuje s potrebama autoimunih bolesti kao što je MG.

Za integritet NMJ-a, dekokcija je pokazalavišemišićni AChR popravak, nadmašujući prednizon u nekoliko mišićnih skupina. Štoviše, učinkovito je smanjenAChR-Ab, IL-6 i TNF-, s visokom dozom koja pokazuje najopsežniji protuupalni učinak - bez povećanja prednizona IL-6.

 

Zaključak

TheUvarak Jianpi Bushen Yiqi, obogaćen saCistanche deserticola, ispoljava višeciljane terapeutske učinke kod EAMG miševa. To:

Ponovno uspostavlja ravnotežu Th/Treg osi i potiskuje Tfh-posredovanu aktivaciju B stanica

Smanjuje patogena antitijela i upalne citokine

Popravlja NMZ strukture i obnavlja funkciju mišića

U usporedbi s prednizonom, nudi superiornostsigurnost, imunološka obnova, ivišemišićno ciljanje, ističući njegov potencijal kaoklinička alternativailidopunska terapijaza MG.

Buduće studije trebale bi to istražitibioaktivni spojevi, metabolički putevi, imolekularne mete, eventualno krozmrežna farmakologijaiproteomika, kako bi se ubrzao njegov razvoj kao novog terapeutika temeljenog na TKM-u.