Poboljšanje proizvodnje ehinakozida i akteozida dvostupanjskom elicitacijom u kulturi stanične suspenzije Cistanche Deserticola

za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Wen-Hao Chen i sur

Sažetak

U odgovarajućim koncentracijama, poliamini su pospješili rast kalusa iehinakozidsadržajCistanche deserticoladok je Ag plus povećao sadržajehinakozidiakteozid. U 20-dnevnom razdoblju kulture, kada su dodani putrescin (25 lM) i Ag plus (10 lM) 8. odnosno 16. dana,ehinakozidproizvodnja (1,7 gl–1) iakteozidproizvodnja (0.4 gl–1) dosegnula je maksimum, koji je bio 1.4-put i 1.5-put od onih u jednom tretmanu putrescinom, 1.6-put i 1.4- puta više od onih u jednom tretmanu Ag plus. Egzogeni putrescin značajno je povećao vitalnost stanica i antioksidacijsku enzimsku aktivnost, pa je tako povećana konačna biomasa. Dodatak Ag plus značajno je povećao sadržaj H2O2 i aktivnost fenilalanin-amonijak-liaze što je dovelo do većeehinakozidiakteozidsadržaj.

Ključne riječiakteozid,Cistanche deserticola, Ehinakozid, Elicitor, Suspenzijska kultura

Kratice

APOX askorbat peroksidaza

MAČKA Katalaza

H2O2 Vodikov peroksid

PAL Fenilalanin amonijak-liaza

PeGs Feniletanoidni glikozidi

ROS reaktivne vrste kisika

SOD superoksid dismutaza

Cistanche deserticola

Kliknite za Cistanche UK i proizvode s ekstraktom Cistanche

Uvod

Cistanche deserticolaYC Ma naširoko se koristi u tradicionalnoj kineskoj medicini. Feniletanoidni glikozidi (PeG) glavni su bioaktivni sastojci u ovoj biljci. Među PeG-ovima,ehinakozidiakteozidglavne su komponente za poboljšanje seksualne moći, regulaciju imunološke funkcije, uklanjanje slobodnih radikala i svojstva protiv starenja (Song et al. 2003). Zbog pretjeranog iskorištavanja, otežanog uzgoja i narušenog okoliša, divlja Cistanche deserticolabiljke su na rubu izumiranja. Kultura biljnih stanica može biti atraktivna alternativa za dobivanje ovih bioaktivnih komponenti. Glavni problemi s kojima se susreću in vitro kultureCistanche deserticolaimaju nisku biomasu i nizak sadržaj PeG. Zabilježeno je da mnogi elicitori stimuliraju PeGsintezu (Cheng et al. 2005, 2006; Lu i Mei 2003; Ouyang et al. 2003a; Xu et al. 2005), ali nažalost, većina elicitora smanjila je staničnu biomasu.

Posljednjih godina istražuje se kombinacija različitih elicitora u suspenzijskoj kulturi biljnih stanica. Zbog različitog djelovanja različitih elicitora, kombinacijom različitih elicitora može se postići sinergijski učinak. Elicitori se mogu dodati u isto vrijeme, na primjer, u suspenzijskoj kulturi Taxus spp. (Yuan et al. 2002) i ginseng (Bae et al. 2006). S druge strane, dodavanjem različitih elicitora u fazi rasta biomase i fazi proizvodnje sekundarnog metabolita dalo se maksimalno povećanje biomase i proizvodnje taksola u suspenzijskoj kulturi Taxus baccata ( Khosroushahiet al. 2006). Međutim, dostupno je nekoliko izvješća o korištenju kombiniranih elicitora u staničnoj kulturi Cistanche deserticola.

EhcinakoziduCistanche deserticola

Prethodni izvještaji oCistanche deserticolausmjereno na povećanje sadržaja PeG, ali stimulatori poput poliamina za promicanje biomase djelomično su zanemareni. Poliamini mogu potaknuti biomasu kalusa pojačavanjem stanične proliferacije i ublažavanjem starenja stanica (Bais i Ravishankar 2002). Nedavno je objavljeno da su poliamini bili uključeni u interakciju s etilenom i tolerancijom na abiotski stres, dok su etilen i reaktivne vrste kisika (ROS) iz abiotskog stresa rezultirali starenjem i smrću stanica (Cona et al. 2006). S druge strane, oksidativni stres uzrokovan pobuđivačima rezultirao je nakupljanjem ROS-a, uključujući vodikov peroksid (H2O2) i superoksidni anion (O2–), za koje se navodi da posreduju u programiranoj staničnoj smrti i sekundarnoj sintezi metabolita kao signalne molekule (Yuan et al. 2001. ; Xu i Dong 2005). Na primjer, H2O2 je inducirao gensku ekspresiju fenilalanin amonijak-liaze (EC 4.3.1.5), ključnog enzima za obrambeni odgovor i sekundarni metabolizam (Desikan et al. 1998), koji je regulirao proizvodnju PeG-a u staničnoj kulturiCistanche deserticola(Cheng i sur. 2005; Ouyanget sur. 2003a). S obzirom na oksidativni stres, neki metalni ioni, kao što su Ni2 plus, Co2 plus, Ag plus, učinkovito potiču sintezu sekundarnih metabolita u mnogim biljkama (Zhao et al. 2005). Možda mogu poboljšati aktivnost PAL i proizvodnju PeG. U ovoj studiji, poliamini i metalni ioni, kao i kombinacija tih pobuđivača, primijenjeni su za pospješivanje rasta kalusa,ehinakozid, iakteozidsadržaj Cistanche deserticola. Osim toga, istraživan je odnos između elicitora i sadržaja H2O2, kao i njihov učinak na aktivnosti PAL i antioksidativnih enzima.

Materijali i metode

Biljni materijali

Cistanche deserticolastanične linije su inducirane iz stabljike. Nakon sterilizacije, stabljika je izrezana na komade veličine oko 1 cm3 i uzgojena na mediju B5 (Gamborg et al. 1968.) koji je sadržavao 5 lM naftalenoctene kiseline (NAA), 9 lM 6-benzil adenina (6-BA), 4 lM 1M 2,4-diklorfenoksioctene kiseline (2,4-D) i 30 g saharoze 1–1. Nakon 30 dana, svijetložuti kalus je izvađen i subkultiviran na B5 mediju s 5 lMNAA, 9 lM 6-BA i 1 lM 2,4-D, te je uspostavljena stanična suspenzijska kultura prema metodama of Ouyang et al. (2003b).

Kultura kalusa

Oko 1,5 g svježeg kalusa (0.125 g DW) iz 20-dan stare suspenzijske kultureCistanche deserticolaje inokuliran u 250-ml Erlenmeyerovu tikvicu koja sadrži 50 ml B5 medija. B5 medij je nadopunjen s 5 lM NAA, 9 lM 6-BA, 1 lM 2,4-D i 30 g saharoze l–1 pri pH 5,6 prije autoklaviranja. Svi pokusi izvedeni su u tri ponavljanja na 25 stupnjeva u mraku na rotacijskoj tresilici (110 okretaja u minuti) tijekom 20 dana.

ActedosieuCistanche deserticola

Elicitorski tretmani

U jednom eksperimentu izazivanja, filtrom sterilizirane otopine putrescina (Put), spermina (Spm), spermidina (Spd), srebrnitrata i kobalt klorida dodane su u medij u predviđenim koncentracijama kako bi se istražio njihov učinak na rast kalusa i sadržaj PeG. Uz optimalnu vrstu i koncentraciju elicitora, ispitivan je učinak vremena hranjenja. Zatim je, na temelju optimalne koncentracije i vremena hranjenja, osmišljena kombinacija različitih elicitora za povećanje proizvodnje PeG u dvostupanjskom eksperimentu elicitacije. Kultura kalusa bez elicitora služila je kao kontrola. Kako bi se istražio mehanizam djelovanja elicitora, kalus je izvađen u predviđenom vremenu nakon dodavanja elicitora za daljnju analizu u eksperimentu dvostupanjske elicitacije.

Biokemijske analize

U predviđenom vremenu nakon dodavanja elicitora, stanice su filtrirane i nježno isprane destiliranom vodom. Zatim je sposobnost preživljavanja stanica određena bojanjem 2,3,5-trifenil tetrazolij kloridom prema metodi Verleysenet al. (2004), Indeks održivosti definiran je kao apsorbancija izmjerena po gramu svježeg tkiva. Sadržaj H2O2 u svježim stanicama određen je prema metodi Velikove i sur. (2000). Određivanje aktivnosti fenilalanin amonijak-liaze (PAL) (EC 4.3.1.5) temeljilo se na metodi Koukol i Conn (1961). Metode korištene za ekstrakciju i određivanje superoksid dismutaze (SOD) (EC1.15.1.1), katalaze (CAT) (EC 1.11.1.6), askorbat peroksidaze (APOX) bile su iste kao one Jebara et al. (2005).

Mjerenje biomase, ehinakozida i akteozida

Za određivanje suhe težine (DW), kalus je filtriran i ispran destiliranom vodom, a zatim osušen zamrzavanjem do konstantne težine kako bi se zabilježila suha težina.

Suhe stanice (20 mg) ekstrahirane su s 10 ml 50 posto (v/v) metanola na sobnoj temperaturi uz ultrazvučnu obradu (40 kHz, 160 W) tijekom 15 minuta. Nakon filtracije kroz filter od 0,22 lm, 20 ul uzoraka je ubrizgano u HPLC sustav (Waters 2695) opremljen C18 kolonom (Diamonsil, 250 mm · 4,6 mm, veličina čestica 5 µm). Mobilna faza sastojala se od metanola i 0,05 postotne otopine octene kiseline i vode (v/v) u omjeru 35:65 (v/v). Brzina protoka bila je 1,0 ml min^–1, temperatura stupca bila je 30 stupnjeva, a valna duljina UV detekcije (Waters 2996) bila je 334 nm.

Kalibracijske krivuljeehinakozidiakteozidbili su u dobroj linearnosti u rasponu od {{0}}.2–6.4 lg(r=0.9997) i 0.16–4.6 lg (r {{1{{ 24}}}}.9995). Prosječno iskorištenje ehinakozida i akteozida (n=5) bilo je 98,7 posto (RSD=1.5 posto ) i 98,2 posto (RSD=1 ,28 posto ), odnosno. Eksperimenti preciznosti i točnosti pokazali su dobre rezultate, relativno standardno odstupanje bilo je manje od 2 posto. Granice kvantifikacije bile su 0,04 i 0,06 lg za ehinakozid i akteozid, redom. Standardi ehinakozida i akteozida kupljeni su od NICPBP (Nacionalni institut za kontrolu farmaceutskih i bioloških proizvoda, Peking, Kina). Proizvodnja ehinakozida/akteozida=sadržaj ehinakozida/akteozida (mg g–1 DW) x Biomasa (g DW l^–1).

Statističke analize

Svi eksperimenti i određivanja ponovljeni su tri puta i sve su vrijednosti bile srednje vrijednosti triplikata ± SE. Podaci su podvrgnuti analizi varijance (jednosmjerna ANOVA, Tukeyjev test) kako bi se otkrile značajne razlike pomoću PROC ANOVA SAS verzije 6.12.

Rezultati

Učinci poliamina na rast kalusa,ehinakozid, iakteozidsadržaj.

Tablica 1 prikazuje učinke poliamina na rast kalusa,ehinakozid, iakteozidsadržajCistanche deserticola. Put i Spm značajno su pospješili rast kalusa u odgovarajućoj koncentraciji. Oko 25 lM Put bilo je najučinkovitije, a biomasa (11,2 g DW l–1) bila je 1.3-puta od kontrole. Istovremeno pojačani poliaminiehinakozidsadržaja znatno. Kada je dodano 25 lM Put,ehinakozidsadržaj je povećan za 46 posto u usporedbi s kontrolom, dok nije pronađeno značajno povećanje sadržaja akteozida.

Učinci Ag plus i Co2 plus na rast kalusa, sadržaj ehinakozida i akteozida

Učinci metalnih iona na rast kalusa,ehinakozid, iakteozidSadržaji su ilustrirani u Tablici 2. Sadržaj ehinakozida i akteozida uvelike je pospješio Ag plus dok je rast kalusa bio neznatno inhibiran. Kada je dodano 10 lM Ag plus,ehinakozidsadržaj iakteozidSadržaj je povećan za 73 posto, odnosno 62 posto u usporedbi s kontrolom. Istodobno nije bilo značajne razlike u biomasi između tretmana Ag plus i kontrole. Co2 plus jedva da je pokazao pozitivne učinke na rast kalusa i PeG sadržaj.

Učinci vremena hranjenja na rast kalusa, sadržaj ehinakozida i akteozida

Put (25 uM) i Ag plus (10 uM) odabrani su za daljnje pokuse. Učinci vremena hranjenja na rast kalusa,ehinakozid, iakteozidsadržaj prikazan je u tablici 3. Kada je Put (25 lM) dodan 8. dana, dobivena je maksimalna biomasa (11,8 g DW l–1). U međuvremenu,ehinakozidsadržaj je podignut na 107,2 mg g–1 DW dok jeakteozidsadržaj je bio gotovo isti kao onaj kontrole.

Ag plus dodavanje ranije dovelo je do manje biomase. Dodavanjem Ag plus (10 lM) 16. dana, obaehinakozidsadržaj (127,9 mg g–1 DW) iakteozidsadržaj (34,2 mg g–1 DW) dosegao je maksimum, koji je bio 22-puta i 14-puta od onih u kontroli.

Učinci kombinacije Put i Ag plus na rast kalusa, proizvodnju ehinakozida i akteozida

Kao što je prikazano u rezultatima pojedinačnih elicitora, dodavanje Puta u ranoj fazi povećalo je biomasu, a dodavanje Ag plus u kasnoj fazi pospješilo je sadržaj ehinakozida i akteozida bez značajnog smanjenja biomase. Tako je dizajniran dvostupanjski protokol za otkrivanje. Put (25 uM) i Ag plus (10 uM) dodani su u odgovarajućim optimalnim fazama.

Slika 1 prikazuje učinke kombinacije dodavanja Puta i Ag plusa na rast kalusa,ehinakozid, iakteozidproizvodnja za razliku od kontrole. Kada je Put (25 lM) dodan 8. dan i Ag plus (10 lM) dodan 16. dan, optimalna biomasa (11,4 g DW l–1), sadržaj ehinakozida (152,4 mg g–1 DW) i sadržaj akteozida (36,1 mg g–1 DW) postignuti su 20. dana (slika 1). Theehinakozidproizvodnja (1,7 gl–1) iakteozidproizvodnja (0.4 gl–1) iznosila je 3.3-puta i 2.1-puta u odnosu na one u kontroli, redom, što je bilo više od onih u pojedinačnoj elicitaciji (Tablica 3). . U usporedbi s tretmanom jednim elicitorom,ehinakozidiakteozidproizvodnja kombiniranjem elicitora bila je 1.4-put i 1.5-put od onih u jednom tretmanu Put, 1.6-put i 1.4-put od onih u jednom Ag plus tretmanu , odnosno. Produljena kultura smanjila je biomasu, proizvodnju ehinakozida i proizvodnju akteozida (Slika 1)

Slika 1. Profili biomase (A),ehinakozid, iakteozidproizvodnja (B) sa/bez kombiniranja elicitora u suspenzijskoj kulturiCistanche deserticola. Okomite trake predstavljaju standardnu ​​pogrešku tri ponavljanja. Kalus, 0.125 g DW, inokuliran je u 250- ml Erlenmeyerove tikvice koje sadrže 50 ml B5 medija. Put (25 uM) i Ag plus (10 uM) dodani su 8. i 16. dana. Eksperimenti su izvedeni na 25 stupnjeva u mraku na rotacijskoj tresilici (110 okretaja u minuti) tijekom 20 dana

Učinak Put i Ag plus na vitalnost stanica, sadržaj H2O2 i aktivnosti PAL i antioksidativnih enzima

Razumjeti mehanizam djelovanja elicitora na rast stanica i sekundarni metabolizamCistanche deserticola, promjene vitalnosti stanica, sadržaja H2O2 i aktivnosti PAL i antioksidativnih enzima nakon dodatka Put i Ag plus ispitane su u dvostupanjskoj elicitacijskoj kulturi. Kada je Put dodan 8. dan (0 h na slici 2), sadržaj H2O2 brzo se smanjio, što je bilo samo 48,9 posto kontrole u 6. satu, odnosno, oporavio se na razinu kontrole postupno nakon 24 sata (slika 2A). Stanična sposobnost preživljavanja povećavala se do 12 sati, a zatim je stalno opadala, što je bilo 26,9 posto i 16,7 posto više od kontrole nakon 24 sata, odnosno 48 sati (slika 2B). Aktivnosti SOD-a i APOX-a značajno su porasle nakon 6 h, a aktivnost SOD-a se smanjila na sličnu razinu kontrole nakon 24 h, dok je aktivnost APOX-a još uvijek bila 1.3- puta veća od kontrole (Sl. 2C, D). Putaddition nije pokazao značajan utjecaj na CAT aktivnost (slika 2E). Smanjenje sadržaja H2O2 i porast aktivnosti antioksidativnih enzima značilo je manje oksidativno oštećenje i održalo više stanica sposobnim za život od kontrole.

Slika 2 Promjene sadržaja H2O2, vitalnosti stanica, aktivnosti APOX, SOD, CAT i PAL nakon dodavanja na dan 8 u suspenzijskoj kulturiCistanche deserticola. Okomite crte predstavljaju standardnu ​​pogrešku tri ponavljanja

Istovremeno je aktivnost PAL-a dosegla maksimum u 12. satu, a zatim se postupno smanjivala na razinu sličnu kontroli nakon 48 sati (slika 2F).

Stanice su kontinuirano uzgajane nakon dodatka Put, a Ag plus je dodan u medij 16. dana (0 h na slici 3). Sadržaj H2O2 se brzo povećao i zadržao značajno višu razinu od kontrole do 48 h (Slika 3A). Međutim, vitalnost stanica je značajno inhibirana i postala je manja (Slika 3B). Aktivnost APOX-a zadržala se na konstantnoj razini i smanjila se nakon 24 sata (slika 3C). Aktivnosti SOD i CAT naglo su porasle nakon 3 h i dosegle svoje maksimume u 12 h, odnosno 6 h, koji su bili 1.6-put i 1.{16}}put više od kontrola, a zatim su polako opadale (Sl. 3D , E). Aktivnost PAL-a porasla je 21-puta od kontrole nakon 24 sata, što je još uvijek bilo 22,5 posto više od kontrole nakon 48 sati (Slika 3F).

Slika 3 Promjene sadržaja H2O2, vitalnosti stanica, aktivnosti APOX, SOD, CAT i PAL nakon dodatka Ag plus 16. dana u suspenzijskoj kulturiCistanche deserticolas dodatkom Put onday 8. Okomite crte predstavljaju standardnu ​​pogrešku tri ponavljanja.

Rasprava

Poliamini i metalni ioni pokazali su različite utjecaje na rast kalusa i proizvodnju PeG-aCistanche deserticola. U odgovarajućim koncentracijama, poliamini uglavnom pospješuju rast kalusa, dok Ag plus pospješuje proizvodnjuehinakozidiakteozidznačajno. Kada su i Put i Ag plus u optimalnoj koncentraciji dodani u različito vrijeme, došlo je do nekih sinergijskih učinaka.

Za rast kalusa, učinak promicanja ovisio je o vrsti poliamina, koncentraciji i vremenu hranjenja. 25 lMPut je bio najučinkovitiji za rast kalusa kada je dodan 8. dana. Elicitor je pokazao optimalni učinak poticanja u ranoj fazi rasta. Iako je utvrđeno da Ag plus i Co2 plus pojačavaju sekundarne metabolite u različitim biljkama (Zhaoet al. 2005), samo je Ag plus pokazao pozitivan učinak na sadržajehinakozidiakteozid. Budući da Ag plus može inhibirati vitalnost stanica i proliferaciju stanica, dodavanje Ag plus onday 16 pojačalo je proizvodnjuehinakozidiakteozidbez značajnog smanjenja biomase.

Kada su biljne stanice izložene tretmanu elicitorom, elicitor inicira transdukciju signala s površine plazma membrane i proizvodnju ROS-a, inducira obrambeni odgovor biljke i pojačava sekundarni metabolizam biljke reguliranjem ključnih enzima koji kataliziraju biosintezu ciljanih sekundarnih metabolita (Zhao et al. 2005). Oksidativni stres zbog tretmana elicitorom rezultira akumulacijom ROS i može se ublažiti antioksidativnim enzimima, uključujući SOD, APX, CAT i POD. Kada oksidativno oštećenje nadilazi funkcije antioksidativnih enzima, biljne stanice mogu umrijeti jer se smanjuje vitalnost stanica.

Smatra se da H2O2, vrsta ROS-a, posreduje u programiranoj staničnoj smrti i regulira sintezu sekundarnih metabolita inducirajući ekspresiju mnogih obrambenih gena i biosintetskih gena sekundarnih metabolita, kao što je PAL. Smatra se da H2O2, vrsta ROS-a, posreduje u programiranoj staničnoj smrti i regulira sintezu sekundarnih metabolita inducirajući ekspresiju mnogih obrambenih gena i biosintetskih gena sekundarnih metabolita, kao što je PAL.

Poliamini su poboljšali toleranciju na abiotski stres učinkovitim uklanjanjem ROS-a, zaštitom nukleinske kiseline i membrane (Alca´zar et al. 2006) i povećanjem aktivnosti antioksidantnih enzima (Tang i Newton 2005). Prema izvješću Papadakisa i Roubelakis-Angelakisa (2005.), Put je pokazao bolji blokirajući učinak na akumulaciju ROS-a nego Spd i Spm. Kao što je prikazano u našim rezultatima, konačni inPut tretman biomase bio je veći od onih u Spd i Spm tretmanima. Egzogeni Put smanjio je sadržaj H2O2, povećao aktivnosti antioksidativnih enzima i učinkovito preživljavanje stanica. Vjerojatno je veća preživljavanje stanica pridonijela većoj proliferaciji i većoj biomasi. Tada bi se moglo objasniti zašto je Ag plus dodatak u ranijem razdoblju doveo do manje biomase za Ag plus povećano nakupljanje H2O2 i značajno smanjenu sposobnost preživljavanja stanica. Aktivnosti antioksidativnih enzima su pojačane kako bi se ublažio oksidativni stres bez utjecaja na vitalnost stanica. Dodatak Ag plus također je promovirao PALactivity kao i proizvodnjuehinakozidiakteozidznatno. Mehanizam bi mogao biti u skladu s rezultatima Desikena i sur. (1998) i Yuan et al. (2001). H2O2 bi mogao igrati ključnu ulogu u staničnoj proliferaciji i proizvodnji PeG. Stavite povećanu PAL aktivnost iehinakozidsadržaj u stupnju, po mogućnosti na neki drugi način za smanjenje sadržaja H2O2.

Posljednjih godina većina se izvješća usredotočila na učinak jednog elicitora na rast kalusa i sadržaj PeG-aCistanche deserticola. Međutim, mnogi pobuđivači nisu pospješili rast kalusa pri optimalnoj koncentraciji, poput askitozana, pobuđivača funala (Fusarium solani), metil jasmonata i salicilne kiseline (Cheng i sur. 2006; Lu i Mei 2003; Xu i sur. 2005). Mješavina elemenata rijetke zemlje poboljšala je rast stanica i proizvodnju PeG-a, 26 posto odnosno 167 posto više u odnosu na kontrolu (Ouyanget al. 2003b). Ponovljena elicitacija s jednim elicitorom također je znatno povećala proizvodnju PeG (Cheng et al. 2005, 2006). To je dobra alternativa za dobivanje optimalne biomase i PeG proizvodnje dodavanjem različitih elicitora u različitim fazama. Kada je 25 lM Put i 10 lM Ag plus dodano 8. odnosno 16. dana,ehinakozidproizvodnja (1,7 gl–1) i proizvodnja akteozida (0,4 gl–1) dosegle su maksimum, koji su bili viši od onih iz pojedinačnog Put ili Ag plus elicitacije, kao i od prethodnih izvješća.

Od: ' Poboljšanje odehinakozidiakteozidproizvodnja dvostupanjskom elicitacijom u kulturi stanične suspenzijeCistanche deserticola' od straneWen-Hao Chen i sur

---World J Microbiol Biotechnol (2007) 23:1451–1458 / Springer Science plus Business Media BV 2007.

Reference

Alca´zar R, Marco F, Cuevas JC, Patron M, Ferrando A, Carrasco P, Tiburcio AF, Altabella T (2006) Učešće poliamina u odgovoru biljaka na abiotički stres. Biotechnol Lett 28:1867-1876
Bae KH, Choi YE, Shin CG, Kim YY, Kim YS (2006.) Poboljšana produktivnost ginsenozida kombinacijom etefona i metil jasmonata u kulturama slučajnog korijena ginsenga (Panax ginseng CA Meyer). Biotechnol Lett 28:1163-1166
Bais HP, Ravishankar GA (2002.) Uloga poliamina u ontogenezi biljaka i njihove biotehnološke primjene. Kult organa biljnih stanica tkiva 69:1–34
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005.) Ponovljena elicitacija pojačava akumulaciju feniletanoidnih glikozida u kulturama stanične suspenzijeCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203-207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Poboljšanje biosinteze feniletanoidnih glikozida uCistanche deserticolakulture stanične suspenzije kitozanskim elicitorom. J Biotechnol 121:253-260
Cona A, Rea G, Angelini R, Federico R, Tavladoraki P (2006) Funkcije aminoksidaza u razvoju i obrani biljaka. Trends Plant Sci 11:80–88
Desikan R, Reynolds A, Hancock JT, Neill SJ (1998) Harpin i vodikov peroksid pokreću programiranu staničnu smrt, ali imaju različite učinke na ekspresiju obrambenog gena u suspenzijskim kulturama Arabidopsis. Biochem J 330:115-120
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Potrebe za hranjivim tvarima suspenzijskih kultura stanica korijena soje. Exp Cell Res 50:151–158 Jebara S, Jebara M, Limam F, Aouani ME (2005) Promjene u
aktivnosti askorbat peroksidaze, katalaze, gvajakol peroksidaze i superoksid dismutaze u kvržicama graha (Phaseolus vulgaris) pod stresom soli. J Plant Physiol 162:929-936
Khosroushahi AY, Valizadeh M, Ghasempour A, Khosrowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omid Y (2006.) Poboljšana proizvodnja taksola kombinacijom čimbenika indukcije u suspenzijskoj kulturi stanica Taxus baccata. Cell Biol Int 30:262-269
Koukol J, Conn EE (1961.) Metabolizam aromata i svojstva fenilalanin deaminaze Hordeum vulgare. J Biol Chem 236:2692-2698
Lu CT, Mei XG (2003.) Poboljšanje proizvodnje feniletanoidnih glikozida gljivičnim elicitorom u kulturi stanične suspenzijeCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437-1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003a) Stvaranje feniletanoidnih glikozidaCistanche deserticolakalus izrastao na čvrstim podlogama. Biotechnol Lett 25:223-225
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003b) Učinci elemenata rijetkih zemalja na rastCistanche deserticolastanica i stvaranje feniletanoidnih glikozida. J Biotechnol 102:129-134
Papadakis AK, Roubelakis-Angelakis KA (2005) Poliamini inhibiraju stvaranje superoksida posredovano NADPH oksidazom, a putrescin sprječava programiranu staničnu smrt izazvanu vodikovim peroksidom generiranim poliaminooksidazom. Planta 220:826-837
Song ZH, Lei L, Tu PF (2003) Napredak u istraživanju farmakološke aktivnosti u biljkamaCistancheHoffing et Link. Chin Tradit Herbal Drugs 34:16–18
Tang W, Newton RJ (2005.) Poliamini smanjuju oksidacijska oštećenja izazvana solju povećanjem aktivnosti antioksidativnih enzima i smanjenjem peroksidacije lipida u virginijskom boru. Plant Growth Regul 46:31–43
Velikova V, Yordanov I, Edreva A (2000) Oksidativni stres i neki antioksidativni sustavi u zaštitnoj ulozi egzogenih poliamina biljaka tretiranih kiselom kišom. Plant Sci 151:59-66
Verleysen H, Samyn G, Van Bockstaele E, Debergh P (2004.) Procjena analitičkih tehnika za predviđanje održivosti nakon krioprezervacije. Kult organa biljnih stanica tkiva 77:11–21
Xu MJ, Dong JF (2005.) O2– iz oksidativnog praska izazvanog elicitorom neophodan je za pokretanje aktivacije fenilalanin amonijak-liaze i sinteze katarantina u kulturama stanica Catharanthus roseus. Enzyme Microb Technol 36:280-284
Xu LS, Xue XF, Fu CX, Jin ZP, Chen YQ, Zhao DX (2005) Učinci metil jasmonata i salicilne kiseline na sintezu feniletanoidnih glikozida u suspenzijskim kulturamaCistanche deserticola. Chin J Biotechnol 21:402-406
Yuan YJ, Li C, Hu ZD, Wu JC (2001.) Put prijenosa signala za oksidativni prasak i proizvodnju taksola u suspenzijskim kulturama Taxus Chinensis var. mairei induciran oligosaharidima iz Fusarium oxysprum. Enzyme Microb Technol 29:372-379
Yuan YJ, Wei ZJ, Miao ZQ, Wu JC (2002) Putevi djelovanja elicitora na putu biosinteze taksola i njihov sinergistički učinak. Biochem Eng J 10:77-83
Zhao J, Davis LC, Verpoorte R (2005.) Transdukcija signala pobuđivača dovodi do proizvodnje sekundarnih metabolita biljaka. Biotechnol Adv 23:283-333