Identifikacija EST-ova koji reagiraju na vodikov peroksid uključene u biosintezu feniletoidnog glikozida u kulturi stanica Cistanche Salsa

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN i dr.

Sažetak
Vodikov peroksid je učinkovit abiotički elicitor koji može izazvati sekundarnu biosintezu metabolita u biljkama. To pokazujemo u kulturi suspenzije stanica ljekovite biljke otporne na solCistancheSalsa, proizvodnja bioaktivnih komponentifeniletanoidGlikozidi(PeG) je povećan nakon liječenja H2O2. Identificirati gene povezane s Klinovima(feniletanoidglikozidi)biosinteza pod utjecajem H2O2, izgradili smo biblioteku subtraaktivne hibridizacije potiskivanja responzivnih gena H2O2 pomoćuCistancheSalsastanična linija i identificirana je 105 izraženih oznaka slijeda (EST) i 85 gena. Funkcionalna napomena est knjižnice i analize genske ontologije pokazale su gene povezane s različitim odgovorima na stres, biosintezom sekundarnih metabolita i transkripcijskom regulacijom. Među njima su pronađena dva gena povezana s Klinovima(feniletanoidglikozidi)put biosinteze (4-koumaratni koenzim A ligaza i cimet 4-hidroksilaza) i dva transkripcijska faktora tipa WRKY. Ekspresije odabranih gena nakon tretmana H2O2 analizirao je RT-qPCR. Rana povećana transkripcija PeG-a(feniletanoidglikozidi)Geni puta biosinteze nakon tretmana otkrili su da H2O2 induciraju PeG-ove(feniletanoidglikozidi)biosinteza kroz regulaciju ključnih gena.
Dodatne ključne riječi: cimet-4-hidroksilaza, 4-koumaratni koenzim A ligaza, supresivna subtraktivna hibridizacija.CistancheSalsa.feniletanoidGlikozidi.

Uvod

CistancheSalsaje višegodišnji biljni parazit na korijenu Haloxylos ammodendruna, a raste u pustinjskom području zapadne Kine. Stoljećima,Cistanchevrsta se koristi kao tradicionalna biljna medicina (Wang et al. 2012). Bioaktivne komponente sufeniletanoidGlikozidi(PeG)koji imaju izvanredan učinak na klirens reaktivnih vrsta kisika (ROS), zaštitu od zračenja, poboljšanje imuniteta i protiv starenja (Nan i sur. 2013). Klinova(feniletanoidglikozidi)biosinteza uCistanchepokreće se iz fenilalanina (sl. 1 Suppl.) i sintetizirana kofeinska kiselina se dalje glikozilira kako bi se stvorili različiti PeG-ovi(feniletanoidglikozidi)(Wang et al. 2012). Tri glavna klina(feniletanoidglikozidi), ehinakozid, akteozid i 2'-acetylacteoside, smatraju se najaktivnijim komponentama uCistanche(Kobayashi et al. 1984). Kako bi poboljšali svoj sadržaj uCistanchestanična kultura, različiti elicitori su testirani, uključujući kitozan, putrescin, Ag +, i osmotski stres (Ouyang i sur. 2005a,b, Cheng i sur. 2005, 2006, Liu i sur. 2007, Liu i Cheng 2008). Međutim, geni uključeni u PeG-ove(feniletanoidglikozidi)biosinteza uCistanche, uglavnom geni metabolizma fenilalanina, rijetko su identificirani. U Cistanche deserticola (Hu et al. 2011) nedavno je identificiran samo gen koji kodira fenilanin amonijak-liaza (PAL). Ostali geni koji kodiraju, na primjer, cimet-4-hidroksilazu (C4H), koji bi mogli katalizirati pretvorbu cimeta u cumarinsku kiselinu, i 4-koumaratni koenzim A ligaza (4CL), esencijalni gen za biosinteze lignina i flavanoida, nisu pronađeni uCistanche.
Koristili smo staničnu kulturu.CistancheSalsaza proučavanje PeG-ova(feniletanoidglikozidi)biosinteza i ekspresija srodnih gena. Također smo istražili učinak učinkovitog elicitora H2O2 na PeG-ove(feniletanoidglikozidi)biosinteza. Nadalje, pronaći rane responzivne gene uključene u Klinove(feniletanoidglikozidi)biosinteza, proveli smo supresivno subtraktnu hibridizaciju (SSH) kako bismo izgradili cDNA biblioteku gena koji reagiraju na H2O2.

Sl. 1. Relativna ekspresija gena određena RT-qPCR-om nakon liječenja H2O2. CsWRKY1 - WRKY transkripcijski faktor (Kontig07), CsC4H1 - cimet 4-hidroksilaza (Kontig09), Cs4CL1 - 4-koumarat: ligaza (kontig03), CsHSP1 - protein toplinskog šoka 70 kDa (Kontig 01) i CsSOD1 - superoksid dismutaza (kontig16). Stanice su tretirane s 80 μg dm-3 H2O2 u tekućem mediju za 2 h, a izrazi su uspoređeni s kontrolom tretiranom vodom. Znači +- SD od tri biološka ponavljanja; * - P< 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Materijali i metode

Cs2001 linija stanica uspostavljena je iz laticaCistancheSalsa(C.A. Mey.) Beck je sakupio u provinciji Neimenggu i subkulturan. Metoda kulture bila je slična prethodno objavljenom protokolu (Liu et al. 2007). Općenito, čvrsti Murashige i Skoog (1962.; MS) medij je korišten za subkulturu i tekući medij za PeG-ove(feniletanoidglikozidi)biosinteza (to je modificirani MS medij dopunjen s 30 g dm-3 glukoze i 2,0 mg dm-3 indol-3-octene kiseline). Za liječenje H2O2, 5,0 ± 0,2 g stanica u razdoblju brzog rasta, obično 20 do 30 d nakon što su subkulturne u čvrstom mediju, inokulirane su u tekući medij od 50 cm3 u tikvici Erlenmeyera od 250 cm3 i uzgojene u mraku sa ili bez različitih koncentracija H2O2. Klinovi(feniletanoidglikozidi)sadržaj nakon indukcije od 10 d od strane H2O2 analiziran je prema prethodno objavljenoj metodi (Liu et al. 2007) na temelju obrnute faze visokofazne tekuće kromatografije visokih performansi s elucijom metanolnog gradijenta.

Stanice 2 h nakon obrade H2O2 prikupljene su iz medija filtriranjem papira pomoću Büchnerovog lijevka, a zatim su zamrznute u tekućem dušiku i mljevene u prah. Svaka 2 g staničnog praha lizana je mješavinom od 1 cm3 2-merkaptoetanola, 1 cm3 od 200 g dm-3 sarkozila i 8 cm3 GTC pufera (5 M izotiocijana izotiocijana 5 M, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiourea i 10 mM ditiothreitol). Stanice su zatim inkubirane na ledu 15 minuta, zatim je dodan 1/3 volumena od 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, a stanice su inkubirane na ledu 15 minuta, a zatim centrifugirane na 15 000 g tijekom 15 minuta. Supernatant je dodan jednakom volumenu izopropanola kako bi se taložila ukupna RNA. Ukupna RRNA dodatno je pročišćena mini kompletom RNeasy (Qiagen, Hilden, SAD) prema uputama proizvođača. Messenger RNA izolirana je od ukupne RNA pomoću Oligotex mRNA midi kompleta (Qiagen).

feniletanoidGlikozidiuCistancheSalsa

SSH biblioteka generirana je iz kontrole i 30 % uzoraka stanica koje je izazvao H2O2 2 h nakon izmame pomoću kompleta za oduzimanje cDNA odabira PCR-a (Clontech, Mountain View, SAD). Za izgradnju knjižnice, proizvodi su pročišćeni odvojeno pomoću kompleta za pročišćavanje gela (Qiagen) i klonirani u pGEM vektor pomoću TA kompleta za kloniranje (Tiangen, Peking, Kina). Plazmidi iz neovisnih klonova izolirani su i sekvencirani pomoću T7 temeljnog premaza. Sve sekvence izraženih sekvenci oznaka slijeda (EST) iz biblioteke (s uklonjenim vektorskim sekvencama) korištene su za sklop kontiga s CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). EST-ovi su grupirani u kontigove i singletone; korišteni su za pretraživanje homologije pomoću programa BLASTx u NCBI -ju (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov). Sekvence su zatim označene, analizirane i klasificirane prema pojmovima genske ontologije (GO) pomoću Blast2GO (http://www. blast2go.com).
Kvantitativna lančana reakcija polimeraze u stvarnom vremenu (RT-qPCR) izvedena je prema Bustinu i sur. Uzorci cDNA sintetizirani su pomoću PrimeScript RT kompleta reagensa (Takara, Dalian, Kina) od 0,5 μg ukupne RNA. RT-qPCR proveden je pomoću kompleta SYBR Premix Ex Taq II i ROX plus (Takara) na PCR sustavu ABI 7300 u stvarnom vremenu (Applied Biosystems, Foster City, SAD) s tri tehnička replikacije. Primeri su dizajnirani pomoću internetskog softvera Primer3 prema uputama koje je dao Takara; temeljni premazi korišteni u ovoj studiji navedeni su u tablici 1 Suppl. Genske ekspresije normalizirane su na 18S RNA, čija je ekspresija bila stabilna u svim uzorcima.

Rezultati su analizirani pomoću R verzije 3.1.1, a značaj razlika provjeren je Studentovim t-testom.

Rezultati

Biosinteza izazvana vodikovim peroksidom sva tri glavna PeG-a(feniletanoidglikozidi)uCistancheSalsastanice suspenzije (tablica 1.), ali bez očitog učinka na rast stanica (slika. S2). Sadržaj ehinakozida povećao se već nakon tretmana od 10 μg dm-3 H2O2 (P< 0.05),="" a="" higher="" increase="" was="" recorded="" after="" the="" 20="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment="" (p="">< 0.01),="" and="" the="" highest="" increase="" was="" after="" the="" 40,="" 80,="" and="" 160="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatments.="" similar="" results="" are="" shown="" for="" acteoside,="" but="" its="" content="" peaked="" after="" the="" 80="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment.="" the="" biosynthesis="" of="" 2'-acetylacteoside="" was="" less="" sensitive="" to="" h2o2="" treatment;="" a="" significant="" increase="" of="" its="" content="" (p="">< 0.05)="" was="" at="" h2o2="" concentrations="" over="" 40="" μg="" dm-3.="" after="" the="" 80="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment,="" the="" amount="" of="" all="" the="" three="" main="" pegs="">(feniletanoidglikozidi)značajno povećano (P< 0.01)="" over="" the="" control.="" therefore,="" this="" concentration="" was="" used="" in="" further="">
Da bismo generirali knjižnicu obogaćenu za rane responzivne gene koje je regulirao H2O2, koristili smo cDNA izCistancheSalsastanice suspenzije tretirane s 80 μg dm-3 H2O2 za 2 h. Sekvenciranje s jednim prolazom 129 rekombinantnih klonova u knjižnici SSH dalo je 105 čistih EST-ova nakon isključenja vektorske sekvence. Cap3 je upotrijebio te jasne EST-ove za sastavljanje, a generirano je 18 kontigova i 67 singletona (tablica 2.). Tako je u ovoj knjižnici izolirano 85 gena. Srednja duljina čistih 105 EST-ova iznosila je 527 baznih bodova, što je prikladno za funkcionalnu klasifikaciju temeljenu na sekvencijskoj sličnosti.

feniletanoidGlikozidiuCistancheSalsa

Svih 85 gena dobivenih u knjižnici BLASTx je preuzeo u odnosu na GenBank ne-suvišnu bazu podataka proteina za sličnost sekvence (E-vrijednost ≤ 0,001). 21 gen nije pokazao nijedan pogodak u bazi podataka, možda su specifični zaCistancheSalsa. Rezultati s TVRTKOM BLASThits uvezeni su u softver Blast2GO radi daljnjih analiza obogaćivanja GO i KEGG puta. Od 64 gena s HIT-ovima, 50 ih je označeno prema opisu homolognih gena drugih vrsta. Geni s primjedbama nazvani su prema opisu BLAST hitova. Go analiza (Sl. 3 Suppl.) pokazuje da je među tih 50 gena bilo 14 gena uključenih u odgovore na podražaje i preko 30 gena povezanih s metaboličkim procesima (tablice 1 i 2). Među tim genima izolirana su dva homologa gena PeG biosinteze prema očekivanjima: 4-koumarat koenzim A ligaza (nazvana Cs4CL1: Contig03) i cimet 4-hidroksilaza (nazvana CsC4H1: Kontig14). Nadalje, RT-qPCR je proveden kako bi se potvrdili inducirani izrazi gena iz knjižnice nakon tretmana H2O2.

Kako bi se potvrdilo da su bitni geni identificirani iz knjižnice SSH reagirali na liječenje H2O2, izrazi dvaju PeG-ova(feniletanoidglikozidi)geni povezani s biosintezom (Cs4CL1, CsC4H1), dva gena izazvana ROS-om (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) i jedan gen sličan faktoru transkripcije WRKY obitelji (CsWRKY1: Contig 07) mjereni su RT-qPCR-om nakon tretmana H2O2 (sl. 1). CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 i CsWRKY1 izrazi bili su regulirani više od 15 puta, 3 puta, 45 puta i 4 puta, odnosno 2 sata nakon tretmana H2O2. Izraz CsHSP1 promijenjen je samo 1,8 puta nakon tretmana H2O2.
Rt-qPCR (Sl. 2) dodatno je analizirao vremenski tijek izraza CsWRKY1, CsC4H1 i Cs4CL1 nakon tretmana H2O2. Izrazi CsC4H1 i Cs4CL1 visoko su povećani (više od 80 puta, odnosno 50 puta) nakon tretmana od 16 sati, a zatim dolje regulirani nakon 32 sata. Izraz CsWRKY1 bio je reguliran više od 20 puta na 4 h, a zatim se smanjio s 8 h nakon toga (slika 2).

Sl. 2. Relativni izraz CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) i Cs4CL1 (C) u različito vrijeme nakon tretmana s 80 μg dm-3 H2O2. Izrazi su normalizirani u kontrolu; (tretiran vodom). Znači +- SD od tri biološka ponavljanja; * - P< 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Diskusija

Vodikov peroksid je poznati biljni elicitor koji pokazuje različite učinke na biljke. Kao i ROS, može izazvati ROS sustav čišćenja koji se sastoji od superoksidne dismutaze, katalaze, peroksidaza itd., I služi kao nizvodni signal soli, osmotike i dehidracije

naprezanja (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Predloženo je da je proizvodnja H2O2 u biljkama popraćena induciranom biosintezom sekundarnog metabolita uCistancheSalsastanična kultura. Kao što se i očekivalo, naši rezultati otkrivaju da su PeG-ovi(feniletanoidglikozidi)biosinteza uCistanche salsakultura stanica inducirana je nakon tretmana H2O2 (tablica 1). Sadržaj tri glavna PeG-a(feniletanoidglikozidi)povećao se nakon tretmana H2O2 što ukazuje na njegovu ključnu ulogu u biosintezi PeG-ova. Geni obogaćeni u knjižnici SSH dodatno su sugerirali njegov učinak na Klinove(feniletanoidglikozidi)indukcija biosinteze uCistanche salsa.

Mnogi poznati geni koji reagiraju na H2O2, kao što su askorbat peroksidaza (CISTH069, Karyotou i Donaldson 2005), h-quinone oxidoreductase (CISTH125, Bello i dr. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah i sur. 2014) i geni za odgovor na bolesti (Contig10, Nanda i dr. 2010), obogaćeni su u knjižnici SSH (tablica 3, tablica 2 Suppl.). Neki od ovih tipičnih ROS responzivnih gena s induciranom ekspresijom nakon tretmana H2O2 dodatno su potvrđeni RT-qPCR-om (slike 1 i 2) što ukazuje na to da je ovdje izgrađena kvalificirana SSH knjižnica. U ovoj knjižnici pronađena su i dva gena puta biosinteze PeG, CsC4H1 i Cs4CL1, a ove dvije ekspresije gena potaknute su liječenjem H2O2 na vremenski ovisan način (Sl. 2). To sugerira da je liječenje H2O2 inducirano PeG-ovi(feniletanoidglikozidi)biosinteza na genetskoj razini regulacijom gena PAL puta. Međutim, PAL i drugi silazni geni biosinteze PeG-ova (Wang i sur. 2012.) nisu identificirani u knjižnici SSH; to može biti zato što knjižnica nije dovoljno sekvencirana. Daljnjom analizom trebalo bi pojasniti odnos između izraza izazvanih csc4H1 i cs4CL1 i povećane biosinteze PeG-ova nakon tretmana H2O2.

Osim gena PAL puta izazvanih liječenjem H2O2, u knjižnici SSH pronađena su dva faktora transkripcije obitelji WRKY (CsWRKY1, CsWRKY2) (tablica 3 i tablica 2 Suppl.), a RT-qPCR je potvrdio izraz izazvan CsWRKY1. Njegov ekspresija reagirala je na liječenje H2O2 ranije od ekspresije dvaju gena PAL puta, Cs4CL1 i CsC4H1 (Sl. 2). Iz prethodnih studija u riži je uočena suprezentativna ekspresija nekih WRKY transkripcijskih čimbenika i gena PAL puta (Gupta i sur. 2012). Nadalje, ekspresija GENA PAL regulirana je u mutantu prekomjerne ekspresije OsWRKY03 (Liu et al. 2005). Gore navedena dva faktora transkripcije obitelji WRKY također bi mogla biti uključena u Klinove(feniletanoidglikozidi)biosinteza uCistancheSalsa. Zanimljivo je da su EST-ovi povezani s dehidracijom (CISTH067, CISTH064) pronađeni u knjižnici SSH, što može sugerirati da je liječenje H2O2 povezano s ekspresijom gena koji reagiraju na dehidraciju uCistancheSalsakao što je primijećeno u drugim biljkama (Schmidt i sur. 2013, Zhou et al. 2013). Jedan gen povezan s signalizacijom giberelina (GA), giberellinski receptor gid1b sličan (CISTH092), identificiran je u knjižnici SSH koji podrazumijeva vezu GA signalizacije i liječenje H2O2 uCistancheSalsa, koja je također prijavljena u ječmu (Bahin i sur. 2011.). Međutim, potrebno je više studija kako bi se potvrdilo jesu li ti geni povezani s Klinovima(feniletanoidglikozidi)biosinteza. Osim gore spomenutih gena, ovdje izgrađena SSH biblioteka također predstavlja gene sa ili bez HIT pogodaka BLAST-a. Poboljšava naše razumijevanje učinka H2O2 na C. salsu i prvo daje informacije o svojim genima uključenim u biosintezu PeGs.

Zaključno, Sud je procijenio učinak H2O2 na peG-ove(feniletanoidglikozidi)indukcija uCistancheSalsastanična kultura. Knjižnica SSH izgrađena je nakon tretmana H2O2, a ekspresiju odabranih gena potvrdio je RT-qPCR. Identificirana su dva gena povezana s putom biosinteze PeG i drugi geni koji reagiraju na H2O2. Ovi nalazi proširit će naše razumijevanje Klinova izazvanih H2O2(feniletanoidglikozidi)biosinteza uCistancheSalsado molekularne razine, pružajući informacije za manipulaciju genimaCistancheSalsastanične kulture za poboljšanje klinova(feniletanoidglikozidi)proizvodnja.

Iz: "Identifikacija EST-ova koji reagiraju na vodikov peroksid uključenih u biosintezu feniletoida glikozida u kulturi stanica cistanche salse"J. CHEN i dr.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN i dr. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-y

Reference

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Crosstalk između reaktivnih vrsta kisika i hormonskih signalnih putova regulira mirovanje zrna u ječmu. - Biljna stanica Environ. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: Reaktivne vrste kisika koje nastaju proizvodom koji izaziva protein toplinskog šoka (Hsp) doprinosi proizvodnji Hsp70 i zaštitnom imunitetu posredovanom Hsp70 u franjeci Artemije protiv patogenih vibrioza. - Dev. Comp. Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, R.I., Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, F.J., Villalba, J.M.: Ekspresija NAD(P)H: quinone oxidoreductase 1 u HeLa stanicama  uloga vodikovog peroksida i faze rasta. - J. biol. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, S.A., Vandesompele, J., Pfaffl, M.W.: Standardizacija qPCR-a i RT-qPCR-a. Biotehnol. Vijesti 29: 40-43, 2009.
Cheng, X.Y., Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, C.Z.:Cistanchekulture suspenzije stanica deserticola:feniletanoidGlikozidibiosinteza i antioksidativno djelovanje. - Proces biokemije. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, X.Y., Zhou, H.Y., Cui, X., Ni, W., Liu, C.Z. PoboljšanjefeniletanoidGlikozidibiosinteza uCistanchedeserticola stanica suspenzije kulture od kitozan elicitor. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Apscisic kiselina posreduje proizvodnju vodikovog peroksida u kikirikiju izazvanom stresom vode. - Biol. Biljka. 57: 555-558, 2013.
Gupta, S.K., Ra,i A.K., Kanwar, S.S., Chand, D., Singh, N.K., Sharma, T.R.: Jedan funkcionalni gen otpornosti na eksplozije Pi54 aktivira složen obrambeni mehanizam u riži. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, G.S., Jia, J.M., Hur, Y.J., Chung, Y.S., Lee, J.H., Yun, D.J., Chung, W.S., Yi, G.H., Kim, T.H., Kim, D.H.: Molekularna karakterizacija gena fenilalanin amonijak-liaza izCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Biljni odgovori na vodeni stres: uloga reaktivnih vrsta kisika. - Ponašanje biljnog signala 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, R.P.: Ascorbate peroksidaza, čistač vodikovog peroksida u glioksisomskim membranama. - Arc h. Biochem. Biofiziju. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Studije o sastojcimacistancheje herba. 4. Izolacija i strukture 2 nova fenilpropanoidna glikozida, cistanozida-C i cistanozida-D. - Chem. Pharm. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, C.Z., Cheng, X.Y.: PoboljšanjefeniletanoidGlikozidibiosinteza u staničnim kulturamaCistanchedeserticola zbog osmotskog stresa. - 27: 357-362, 2008.
Liu, J.Y., Guo, Z.G., Zeng, Z.L.: Poboljšana akumulacijafeniletanoidGlikozidiprekursorskim hranjenjem kulture suspenzijeCistancheSalsa. - Biokemija. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, X.Q., Bai, X.Q., Q., Q., Wang, X.J., Chen, M.S., Chu, C.C.: OsWRKY03, transkripcijski aktivator riže koji funkcionira u obrambenom signalnom putu uzvodno od OsNPR1. - Stanica Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Revidirani medij za brzi rast i bioasays s kulturama duhanskog tkiva. - Fiziol biljka. 15: 473-497, 1962.
Nan, Z.D., Zeng, K.W., Shi, S.P., Zhao, M.B., Jiang, Y., Tu, P.F.:FeniletanoidGlikozidis protuupalnim aktivnostima iz stabljikaCistanchedeserticola uzgojena u pustinji Tarim. - Fitoterapija 89: 167-174, 2013.
Nanda, A.K., Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktivne vrste kisika tijekom biljnih mikroorganizamskih ranih interakcija. - J. Integr. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, X.D., Zhao, B., Wang, Y.C.: Poboljšana proizvodnjafeniletanoid Glikozidiprekursorom koji se hrani staničnom kulturomCistanchedeserticola. - Proces biokemije. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, X.D., Zhao, B., Wang, Y.C.: Poboljšana proizvodnjafeniletanoidGlikozidiporedCistanchedeserticola stanice kultivirane u unutarnjoj petlji bioreaktor zračnog mosta s usponom prosijavača. - Enzim mikrobiol. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, A.R., Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatomska i histokemijska karakterizacija in vitro haustorija iz korijena Castilleja tenuiflora. - Biol. Biljka. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, Y.J., Lee, O.R., Parvin, S., Balusamy, S.R., Khorolragchaa, A., Yang, DC: Aklimacija vodikovog peroksida povećava toleranciju na sol aktiviranjem proteina povezanih s obranom u Panax ginseng C.A. Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, H.M., Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, A.R., Fisahn, J., Segundo, B.S., Guiderdoni, E., Schippers, J.H.M., Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 regulira signalizaciju ovisnu o reaktivnim vrstama kisika tijekom početnog odgovora na stres soli
u riži. - Biljna ćelija 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, X.Y., Xie, W.Y.:Cistanchedeserticola Y.C. Ma, "Desert Ginseng": recenzija. - Amer. J. brada. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, S.G., Chung, B.Y., Kim, J.H., Lee, K.S., Kim, J.S. Uzorak taloženja vodikovog peroksida u lisnim omotačima riže pod solju. - Biol. Biljka. 50: 469-472, 2006.
Zhou, X.F., Jin, Y.H., Yoo, C.Y., Lin, X.L., Kim, W.Y., Yun, D.J., Bressan, R.A., Hasegawa, P.M., Jin, J.B.: CYCLIN H1 regulira reakcije na stres od suše i otvaranje stomatalnog otvaranja izazvanog plavim svjetlom inhibiranjem nakupljanja reaktivnih vrsta kisika u Arabidopsisu. - 162: 1030-1041, 2013.