Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Sažetak:Trsci grožđa su otpadna biomasa vinogradarstva koja sadrži bioaktivne polifenole vrijedne inkozmetike. Dok je nekoliko studija izvijestilo o kozmetičkom djelovanju E-resveratrola, samo je nekoliko opisalo potencijal E-ε-vinifera, drugog glavnog sastojka ekstrakata trske grožđa (GCE), a nijedna od njih nije istraživala GCE kao prirodnu mješavinu polifenola za kozmetičke primjene . U ovoj smo studiji razmotrili potencijal GCE-a iz sorti grožđa bogatih polifenolima kao multifunkcionalnih kozmetičkih sastojaka. HPLC analiza je provedena kako bi se kvantificirali glavni polifenoli u GCE-u, tj. katehin, epikatehin, E-resveratrol, E-picetanol, ampelopsin A, E-ε-vinifera, hopeaphenol, izohopeaphenol, E-miyabenol C i E-vitamin B iz odabranih kultivara . Kožaizbjeljivanjepotencijal kroztirozinazatest inhibicije i sposobnost aktivacije proteina stanične dugovječnosti (SIRT1) GCE-a uspoređeni su s čistim E-resveratrolom i E-ε-viniferom. Izračunata je sličnost GCE polifenola lijeku, što omogućuje predviđanje propusnosti kože i bioraspoloživosti. Konačno, sadašnji podaci omogućili su razmatranje GCE-a iz sorti bogatih polifenolima kao multifunkcionalnih kozmetičkih sastojaka u skladu s praksom zelene kemije.

Ključne riječi:ekstrakti trske grožđa; prirodni sastojci; polifenoli; E-resveratrol; E-ε-vinifera; sirtuinaktivacija;tirozinazainhibicija; sličnost drogi

cistanche je inhibitor tirozinaze

1. Uvod

Svjesno dizajniranje novih formulacija za njegu kože temeljenih na prirodnim sastojcima postalo je ključno pitanje u kozmetičkoj industriji, u skladu s odgovornošću prema okolišu. Botanički ekstrakti biraju se prema svom sastavu, biološkoj aktivnosti, stabilnosti i propusnosti kože. Ovi čimbenici određuju ukupnu učinkovitost sastojka i njegov kozmetički potencijal. U današnje vrijeme postoji sve veća potražnja za novim prirodnim resursima s učinkovitim komponentama za njegu kože koje štite od izvora stresa uključujući onečišćenje okoliša, štetno zračenje kao i nepravilnu prehranu i stresan način života [1]. Osim toga, kupci traže ekološki prihvatljivu prirodnu kozmetiku, a biomolekule reciklirane biljnim ostacima nude nove perspektive prema održivoj nabavi.

Vinogradarstvo (i vinski sektor) je jedna od najstarijih i najrazvijenijih industrija u svijetu, gdje se otprilike 80 posto grejpa koristi za proizvodnju vina [2]. Dobro je poznato da je grožđe bogat izvor vrijednih spojeva s blagotvornim djelovanjem na zdravlje kao što su antocijanini, fenolne kiseline, flavan-3-oli, flavonoli, proantocijanidini, stilbenoidi, melanin, masne kiseline, minerali i vitamini [2]. Proizvodnja vina stvara različite nusproizvode bogate biomolekulama, uključujući kominu (kožicu i sjemenke), talog, kao i drugi čvrsti otpad poput trske grožđa [3]. Među njima drvna biomasa vinove loze, koja se odbacuje nakon zimske rezidbe, predstavlja veliki potencijal za razvoj novih prirodnih kozmetičkih sastojaka zbog velike zastupljenosti i prisutnosti polifenola uključujući stilbenoide [2,4]. Prethodne studije su pokazale da je izbor sorte grožđa odlučujući kada se razvija GCE bogat polifenolima [4-6].

E-resveratrol, dobro poznati obrambeni spoj grožđa, pokazuje nekoliko bioloških aktivnosti uključujući antioksidativna [7], antikancerogena [8,9], antifungalna [10] i protuupalna svojstva [11]. Također pokazuje značajno djelovanje protiv kože proces starenja kroztirozinazainhibicija [12,13], što je ključni mehanizam za inhibiciju promjene boje kože. Proces pigmentacije kože povezan je s prisutnošću melanina i lipofuscina, čiji višak i abnormalna raspodjela u koži uzrokuje tamne mrlje. Neujednačen ton kože jedan je od glavnih simptoma ovog procesa starenja. Melanin se stvara pod utjecajemtirozinazatijekom melanogeneze, regulira biosintezu vitamina D3, te povećava otpornost kože na opekline od sunca i tumore [13,14]. Kada se pojavi lokalna hiperpigmentacija, osim estetskih problema, može povećati rizik od melanoma. Stoga inhibitori tirozinaze poput E-resveratrola mogu biti atraktivni u kozmetičkoj i medicinskoj industriji kao sredstva za depigmentaciju [15].

Dodatno, usporavanje procesa starenja kože također se može dogoditi kroz aktivaciju prirodnih mehanizama obnavljanja stanica. To se može postići primjenom spojeva koji aktiviraju sirtuin [1]. Za stimulaciju aktivnosti SIRT1, koja održava dugovječnost stanice, faktore transkripcije i druge proteine ​​za popravak DNK [16], navedeno je da je ključna u kontroli oksidativnog stresa i u regulacija procesa starenja [17]. Sirtuini su normalno regulirani na razini transkripcije, translacije, stabilnosti proteina i oksidacije pomoću prirodnih inhibitora kao što je nikotinamid. Sirtuini sisavaca poput SIRT1, djeluju kao regulatori transkripcije za odabrane receptore i proteine ​​za popravak DNA. Oni također kontroliraju energetski metabolizam, preživljavanje stanica, popravak DNK, regeneraciju tkiva, mehanizme upale kao i neuronsku signalizaciju [1].

Prisutnost E-resveratrola i njegovih derivata u trscima grožđa predstavlja izvrsnu priliku za korištenje ovog prirodnog kozmetičkog sastojka u kozmetičkoj industriji kao učinkovitog sredstva protiv starenja koji aktivira viasirtuin itirozinaza-inhibirajuće aktivnosti [1,16].

Zahtjevi suvremenih kozmetičkih sastojaka su njihova multifunkcionalnost, sigurnost i učinkovitost. Potvrđeni biološki učinak aktivne molekule obično nije dovoljan za dobivanje inovativne kozmetičke formulacije. Brojna fizikalno-kemijska svojstva biološki aktivnog spoja odlučujuća su za osiguranje ukupne korisnosti nakon lokalne primjene [18]. Bioraspoloživost i propusnost kože ograničavajući su čimbenici za kozmetičku upotrebu mnogih potencijalnih aktivnih tvari [19]. Primjena prirodnih spojeva kao kozmetičkih sastojaka dobiva novo značenje u slučaju prirodnih ekstrakata, koji sadrže mješavinu molekula s različitim fizikalno-kemijskim svojstvima. Uz ovu činjenicu, još uvijek postoji pitanje usporedbe kožne apsorpcije čistih spojeva poput E-resveratrola ili E-ε-vinifere sa smjesama bogatim stilbenoidima (npr. GCE). Fizikalno-kemijski karakter čiste tvari je presudan parametar koji može ograničiti njegovu propusnost. S druge točke gledišta, primjena takvih smjesa osigurala bi širok raspon bioloških aktivnosti od površine stratum corneuma, preko epidermisa do dubokih slojeva dermisa.

U ovoj smo studiji procijenili kozmetički potencijal GCE-a iz prethodno odabranih kultivara bogatih polifenolima [20] kao multifunkcionalnih sredstava za pomlađivanje kroz dva različita mehanizma; (1) kožaizbjeljivanjeprekotirozinazainhibicija korištenjem enzimskih testova i podataka o spajanju, (2) odgađanje staničnog starenja korištenjem testova aktivacije sirtuina. Aktivnosti čistih sastojaka GCE-a kao što su E-resveratrol i E-ε-vinifera uspoređivane su s GCE-om, prirodnom mješavinom stilbenoida iz bioloških izvora. Konačno, procijenili smo dostupnost glavnih sastojaka GCE-a i njihovu sposobnost prodiranja kroz kožnu barijeru.

2. Rezultati i rasprava

2.1. Koncentracija polifenola u GCE

Koncentracija glavnih polifenola prisutnih u GCE iz pet prethodno odabranih kultivara kvantificirana je HPLC analizama (Tablica 1) [20]. Identificirano je deset glavnih spojeva: dva flavonoida (katehin, epikatehin) kao i osam stilbenoida (ampelopsin A, E-resveratrol, E-picetanol, hopeafenol, izohopeafenol, E-ε-vinifera, E-mijabenol C i E-vitamin B ). Kemijske strukture spojeva prikazane su na slici 1.

Osam polifenola identificirano je njihovom usporedbom s čistim standardima, tj. E-resveratrol, E-picetanol, katehin, epikatehin, E-ε-vinifera, hopeafenol, ampelopsin A i E-vitisin B. Dva spoja (izohopeafenol i E-mijabenol C) raspoređeni su prema redoslijedu eluiranja, UV spektrima i MS podacima iz literature [21]. HPLC analize pokazale su vrlo visoke koncentracije ukupnih polifenola u GCE-u iz pet odabranih kultivara u rasponu od 16,8 posto ± 7,4 posto za Sauvignon do 39,4 posto ± 3 posto za Villard Noir. Savagnin blanc GCE sadržavao je najveću koncentraciju E-resveratrola (12.0 posto ± 4,4 posto ), dok je Villard Noir GCE karakterizirao najveći sadržaj E-ε-vinifera (3,6 posto ± 0 .2 posto ) i E-vitisin B (17,2 posto ± 1 posto ). Ovi sastavi polifenola specifični za sortu mogu potaknuti različite razine kozmetičkih aktivnosti.

2.2. Aktivacija sirtuina

Kao prvi korak, procijenili smo djelovanje GCE-a protiv starenja kod pet kultivara (Villard Noir, Sauvignon, Savagnin, Riesling i Magdeleine Noire des Charentes). Slika 2A prikazuje rezultate aktivacije sirtuina s dva čista stilbenoida (E-resveratrol i E-ε-viniferin) u rasponu koncentracija od 1-100 µM u usporedbi s nikotinamidom kao negativnom kontrolom.

Kao što je prikazano na slici 2A, u usporedbi s kontrolnim uzorkom, učinkovita koncentracija oba sirtuinaktivatora (E-resveratrola i E-ε-viniferina) bila je najmanje 5 µM i dosegla je 3-struko povećanje pri 100 µM.E- resveratrol je imao blago veću aktivaciju SIRT1 (od 130 posto ± 13 posto za 5 µM do 307 posto ± 30 posto za 100 µM) u usporedbi s E-ε-viniferinom (95 posto ± 15 posto odnosno 280 posto ± 24 posto).

Već je poznato da E-resveratrol ispoljava blagotvorno djelovanje na ljudski organizam kroz aktivaciju SIRT1. Horwitz i sur., 2003. [16] izvijestili su da E-resveratrol snižava MichaelisMenten konstantu SIRT1 i povećava preživljavanje stanica stimuliranjem SIRT1-ovisne deacetilacije p53. U kvascu, E-resveratrol oponaša restrikciju kalorija stimulacijom SIR2, povećavajući stabilnost DNK i produžujući životni vijek za 70 posto. Stacchiotti i sur. (2016) [22] potvrdili su da je prva funkcija E-resveratrola smanjenje upale i ograničavanje oksidativnog oštećenja u tkivima. Svojstva E-resveratrola protiv starenja putem aktivacije SIRT1 također su povezana s poboljšanjem oksidativnog metabolizma u ključnim organima poput srca, krvnih žila, mišića i bubrega [22]. U drugim studijama, u prisutnosti inhibitora SIRT1 poput nikotinamida, E-resveratrol je stimulirao SIRT1 [16]. Štoviše, primijećeni su učinci ovisni o koncentraciji za njegovu aktivnost. Štoviše, stimulacijom SIRT1-ovisne deacetilacije p53, molekula E-resveratrola povećava preživljavanje stanica u nepovoljnim uvjetima [16]. Također je dokazano da E-resveratrol ima sposobnost zaštite ljudskih stanica od oštećenja lipida, što može biti značajno za prevenciju degradacije lipofilnih struktura kožne barijere. Iako potpuni mehanizam aktivnosti E-resveratrola tek treba u potpunosti objasniti daljnjim studijama, aktivacija sirtuina glavna je aktivnost E-resveratrola u utvrđivanju njegovih različitih zdravstvenih dobrobiti [23]. Unatoč dobro opisanoj aktivaciji sirtuina E-resveratrolom [1,16], još uvijek se vrlo malo zna o učinku E-ε-viniferina. Zaštitnu ulogu E-ε-viniferina opisali su Fu i sur. (2012) [24] u staničnim modelima Huntingtonove bolesti. Pokazalo se da E-ε-viniferin smanjuje razinu Reactive OxygenSpecies (ROS) i sprječava gubitak potencijala mitohondrijske membrane u stanicama koje eksprimiraju mutant Huntington protein. Ekspresija ovog proteina rezultira smanjenom aktivnošću deacetilaze SIRT3, i kao rezultat toga, dovodi do smanjenja staničnih razina NAD(plus) i mitohondrijske biogeneze u stanicama. Prema studijama, E-ε-viniferin aktivira kinazu aktiviranu AMP-om i pojačava mitohondrijsku biogenezu [24]. U našem smo istraživanju pokazali da je E-ε-viniferin aktivator sirtuina ekvivalentan E-resveratrolu. Dodatno smo testirali potencijal GCE prirodnog ekstrakta bogatog polifenolima da aktivira SIRT1. Većina GCE (Riesling, Magdeleine Noire, Villard Noir i Savagnin) pokazala je relativno visoku aktivaciju SIRT1 u usporedbi s kontrolnim uzorkom. Rizling je najperspektivnija sorta, sa 171 posto aktivacije SIRT1, a slijede je Magdeleine Noire (165 posto), Villard Noir (162 posto) i Savagnin (142 posto). Samo GCE iz Sauvignona nije pokazao učinak indukcije za SIRT1. Aktivacija SIRT1 pomoću GCE-a iz Magdeleine Noire, Villard Noir i Savagnin bila je najmanje ekvivalentna aktivaciji pomoću 5 µME-resveratrola. Prvi aktivatori sirtuina otkriveni su za SIRT1 2003. godine, a najjači je bio E-resveratrol [1]. Nekoliko je studija također opisalo aktivaciju SIRT1 pomoću botaničkih ekstrakata. Corbi i sur., (2018) izvijestili su o obećavajućim rezultatima za ekstrakte limuna (Lippia citriodora), rotkvice (Raphanus sativus) i rajčice (Solanum Lycopersicum) [25]. Wang i sur. također je izvijestio o indukciji sirtuina u tradicionalnim kineskim lijekovima. Prijavljeno je da mliječna trava (Astragalus membranaceus), kineski ginseng (Panax ginseng) i korijen tri-sedam (Panax notoginseng) imaju zaštitne učinke protiv oksidativnog stresa u mitohondrijima. Rezultati su pokazali da ti ekstrakti pojačavaju deacetiliranu aktivnost SIRT1 i inhibiraju stvaranje intracelularnih reaktivnih kisikovih vrsta [26]. Zatim, GCE predstavlja obećavajuće prirodne sastojke za pomlađivanje kože, posebno u usporedbi s jakim SIRT1 aktivatorima poput E-resveratrola i E-ε-viniferina. Pokazalo se da regulacija sirtuina pomoću E-resveratrola i njegovih derivata djeluje putem složenih izravnih interakcija na način specifičan za izoformu [27]. Resveratrol inhibira ljudski SIRT3 i stimulira SIRT5 i SIRT1 ovisno o složenom vezivanju s katalitičkim džepom.

2.3. Inhibicija tirozinaze

2.3.1. Enzimski test

Slika 3A prikazujetirozinazainhibiciju dvaju čistih stilbenoida (E-ε-viniferin i E-resveratrol), a slika 3B prikazuje inhibiciju tirozinaze pomoću GCE iz odabranih kultivara u usporedbi s kojičnom kiselinom, E-resveratrolom i E-ε-viniferinom kao pozitivnim referentnim spojevima.

Kao što je prikazano na slici 3B, svi testirani GCE, kao i E-resveratrol, E-ε-viniferin su relativno aktivni inhibitori tirozinaze. Najveći potencijal pokazan je za E-ε-viniferin (76 posto ±2 posto) i E-resveratrol (75 posto ± 4 posto). GCE je predstavio različite kapacitete inhibicijetirozinaza. Riesling i Villard Noir GCE bili su najaktivniji s razinama inhibicije od 62,5 posto, odnosno 58,5 posto. Magdeleine Noire des Charente GCE (42,5 posto) i Savagnin GCE (39,5 posto) također su pokazali relativno jaketirozinazaaktivnost inhibicije, dok je Sauvignon GCE bio manje učinkovit, ali s prilično učinkovitom razinom inhibicije (30.4 posto). Ekstrakti lišća Vitis vinifera L. već su spominjani u literaturi kao prirodni izvori inhibitora tirozinaze [28]. Pokazalo se da derivat E-resveratrola, oksiresveratrol, inhibira posmeđivanje zamućenih sokova od jabuke u koncentraciji niskoj od 0.01 posto. Utvrđeno je da je ovajstilbenoid oko 0,2 posto jači od kojične kiseline [29].

Iako je trska grožđa akumulirala mnogo više stilbenoida nego lišće grožđa, testovi inhibicije tirozinaze na trsci grožđa su bez presedana. Inhibicija tirozinaze GCE u usporedbi s referentnim spojevima s poznatimizbjeljivanjeaktivnost poput E-resveratrola i E-ε-viniferina potvrdila je potencijal GCE-a kao novih kozmetičkih aktivnih sastojaka. Ova studija je pokazala da su svi testirani GCE vrlo snažni inhibitori tirozinaze, što je ključno za razmatranje njihovog potencijala kao sredstava za izbjeljivanje kože.

2.3.2. IC50 određivanje

Kinetičko ponašanje gljivetirozinazatijekom inhibicije E-resveratrolom i E-ε-viniferinom. Kinetički parametri za tirozinazu gljiva dobiveni iz Lineweaver-Burkplota za inhibiciju E-resveratrolom (Slika 4A, linija 1) pokazuju da je Km bio jednak 1.02 (0 µM, kontrola) do 3,43 (100 µM) mM i Vmax bio je jednak 74,63 µM/min (0 µM, kontrola) u odnosu na srednju vrijednost jednaku 66,38 ± 6,44 µM/min za različite testirane E-resveratrol koncentracije. Lineweaver-Burk dijagram za inhibiciju E-ε-viniferinom (Slika 4B, linija 2) pokazuje da je Km bio jednak 1,02 (0 µM, kontrola) do 7,63 (100 µM) mM, a Vmax je bio jednak 74,63 µM/min (0 µM, kontrola) u odnosu na srednju vrijednost jednaku 73,01 ± 1,14 µM/min za različite testirane koncentracije E-resveratrola. Rezultati prikazani na slici 4 pokazali su da su i E-resveratrol i E-ε-viniferin kompetitivni inhibitori jer je povećanje koncentracije spojeva rezultiralo linijom sa zajedničkim presjekom na osi 1/v, ali s različitim nagibima. Konstante inhibicije svakog inhibitora, KI za vezanje na slobodni enzim (za formiranje EI kompleksa) i KIS za vezanje za kompleks enzim-supstrat (za stvaranje ESI kompleksa) određene su pomoću sekundarnog dijagrama i sekundarnog ponovnog dijagrama (Slika 4), odnosno. Sekundarni dijagrami koji predstavljaju nagibe (Km/Vmax) dvostrukih recipročnih dijagrama prema koncentraciji inhibitora omogućili su nam da izračunamo EI konstantu disocijacije (KI) od 46,25 odnosno 24,22 µM za E-resveratro i E-ε-viniferin. Sekundarni prikazi, koji predstavljaju presjeke dvostruke recipročne relacije prema koncentracijama inhibitora, omogućili su nam da izračunamo konstantu disocijacije ESI (KIS) od 36486 i 2355,73 µM za E-resveratrol i E-ε-viniferin, redom. Stoga, ako ovi izračuni predlažu pretpostavljeno vezanje koje bi se moglo dogoditi ili na slobodni enzim tirozinazu ili na enzim tirozinazu povezan s njegovim supstratom (sadašnji rezultati sa 7.9- i 97.3-puta višim vrijednostima KIS za E -resveratrol i E-ε-viniferin), ovi rezultati snažno upućuju na mnogo slabiji afinitet vezanja na kompleks enzim tirozinaza-supstrat, a ne na slobodni enzim tirozinaza, što ukazuje da je dominantni mehanizam inhibicije svakog inhibitora kompetitivan.

Izračunali smo IC50 vrijednosti od 52,93 µM za E-ε-viniferin i 60,75 µM za E-resveratrol. Ove vrijednosti IC50 bile su unutar raspona onih navedenih u literaturi [13].

Ovo istraživanje je pokazalo da E-resveratrol i E-ε-viniferin vrlo učinkovito inhibiraju enzim. GCE je također izlagaotirozinazainhibicija na relativno visokoj razini. Prethodna izvješća pokazala su da je E-ε-viniferin najaktivniji inhibitor tirozinaze, s IC50=4.1 µM. Četiri puta je snažniji od kojične kiseline (IC50=16.9 µM) i 62-puta aktivniji od askorbinske kiseline (IC50=255 µM) u inhibiciji tirozinaze. E-resveratrol ima umjerenu inhibitornu aktivnost (IC50=52.8 µM), prilično sličnu arbutinu (IC50=55.1 µM) [12].

2.4. Molekularno spajanje za vezanje E-resveratrola i E-ε-viniferina s tirozinazom 2.4. Molekularno spajanje za vezanje E-resveratrola i E-ε-viniferina s tirozinazom

Slika 5 prikazuje podatke spajanja napravljene za E-resveratrol i E-ε-viniferin. Rezultati docking podataka jasno pokazuju da E-resveratrol i E-ε-viniferin pokazuju potencijal inhibicije tirozinaze. Međutim, afinitet za E-ε-viniferin nešto je viši s izračunatim afinitetom od -7,73 naspram -5,95 kcal/mol kao posljedica interakcija s His85 i His244 kroz vodikove veze i π-π slaganje naspram samo jedne interakcije vezane za vodik s Met280 za E-ε-vinifer u odnosu na E-resveratrol, respektivno. Oba su afiniteta bila jača za ova dva stilbenoida od onog primijećenog za kojičnu kiselinu (-5,7 kcal/mol [30]), kao i za glabridin (-7,15 kcal/mol [31]) korištenjem sličnog pristupa spajanja. U usporedbi s l-DOPA-om, ova se dva stilbenoida vežu natirozinazana istom mjestu, potvrđujući tako njihov kompetitivni mehanizam inhibicije [31]. Afiniteti za ova dva stilbenoida bili su u rasponu onih uočenih za l-DOPA (tj. -6,98 kcal/mol [31]).

Rezultati su potvrdili prethodne rezultate enzimskog testa, gdje je E-ε-viniferin bio snažniji inhibitor tirozinaze od E-resveratrola.

Tirozinazadisfunkcije napreduju starenjem i mogu dovesti do malignog melanoma, kao i aspigmentarnih poremećaja poput pjega ili melizme [17]. E-resveratrol i GCE bogati E-ε-viniferinom dobra su alternativa kao prirodni izvor ovih stilbenoida za prevenciju nekih pigmentacijskih bolesti.

2.5. Bioraspoloživost i potencijal propusnosti kože

Slika 6 prikazuje ključna fizikalno-kemijska svojstva glavnih sastojaka GCE-a koji određuju njihovu ukupnu bioraspoloživost i propusnost kože.

Procjena propusnosti procjenjuje na prvi pogled sposobnost prodiranja molekule kroz kožu. Ružičaste središnje zone na radarskim kartama na slici 6 predstavljaju optimalni raspon za svako imanje. Logaritam koeficijenta raspodjele logP (lipofilnost) trebao bi dobiti vrijednosti između −0.7 i plus 5.0, molekularna težina (veličina molekule) trebala bi biti između 150 i 500 g/M , polaritet (topološka polarna površina, TPSA) treba biti u rasponu između 20 i 130 Å2, topljivost (log S) ne smije biti veća od 6, zasićenje (udio ugljika u sp3 hibridizaciji) ne smije biti manje od 0,25, a fleksibilnost ne više nego 9rotirajućih veza [32]. Na temelju ovih izračuna procijenjeno je da su GCE molekule koje će najvjerojatnije biti apsorbirane u tijelu katehin i epikatehin (s istim fizičko-kemijskim karakteristikama), E-resveratrol, E-piceatanol kao i ampelopsin A. Ove molekule su karakterizirane odgovarajućom molekularnom veličinom , distribucija elektrona, polaritet i karakter molekule. Molekule karakterizirane većom molekularnom težinom poput E-miyabenola C, E-vitisina B, kao i hopeafenola i izohopeafenola (s istim fizikalno-kemijskim karakteristikama), s fizikalno-kemijskog gledišta, vidljivo je da se asimiliraju jer teško prevladavaju fizičke barijere poput membrane, kao i dermis. E-ε-vinifera ispunjava većinu pravila potrebnih za dobru propusnost kožice. Polaritet, lipofilnost, netopljivost, fleksibilnost i veličina molekula procijenjeni su matematičkim jednadžbama. Vrijedno je istaknuti činjenicu da su izračuni samo metode procjene ukupne propusnosti kože, a za potvrdu predviđanja bit će potrebni testovi dermalne penetracije.

Tijekom proteklih desetljeća uspostavljeni su različiti skupovi pravila koji su pomogli u definiranju prikladnih predviđanja apsorpcije lijeka. Najpopularniji kriteriji su Lipinskijevo pravilo pet [33], no dostupno je i nekoliko drugih pristupa [34–37]. Tablica 2 prikazuje informacije o usklađenosti GCE polifenola s uobičajenim poznatim pravilima bioraspoloživosti: Lipinski (MW < 500,="" logp="">< 4,15,="" broj="" nor="" o="" atoma="">< 10,="" broj="" n="" ili="" oh="" skupina="">< 5)="" [="" 33],="" ghose="" (160="">< mw="">< 480,="" −0,4="">< logp="">< 5,6,40="">< mw="">< 130,="" 20="">< broj="" atoma="">< 70)="" [34],="" veber="" (broj="" rotirajućih="" veza="">< 10,="">< 140)="" [35],="" egan="" (logp="" <="" 5.88,="" tpsa="" <="" 131.6)="" [36]="" and="" muegge="" (200="" <="" mw="" <="" 600,="" −2="" <="" logp="" <="" 5,="" tpsa="">< 150,="" numbers="" of="" rings="" <="" 7,="" number="" of="" carbons="" >="" 4,="" number="" of="" heteroatoms="" >="" 1,="" number="" of="" rotatable="" bonds="" <="" 15,="" nha="" <="" 10,="" nhd="" <="" 5)="">

Na temelju ovih izračuna, može se s relativno velikom vjerojatnošću naznačiti koje će strukture najvjerojatnije probiti kožnu barijeru. GCE polifenoli karakterizirani MW iznad 500 g/mol (hopeafenol, izohopeafenol, E-miyabenol C i E-vitisin B) su istovremeno previše lipofilni (logP > 5) i karakterizirani nepravilnom distribucijom elektrona (TPSA > 140) kao i karakteristikama hidrogenskih veza (NHD > 5 ili NHA > 10). Štoviše, molekularni volumeni ovih molekula mogu ograničiti njihovu apsorpciju kožom i, s prostorne točke gledišta, njihove povrede molekularne veze dodatno bi ograničile njihovu sposobnost da budu aktivni unutar struktura kože. Takvi spojevi, nakon lokalne primjene, ostaju kao talog na površini ili, ovisno o stanju kože, prodiru samo u vanjske slojeve hidrofobnog stratum corneuma. Svojstva kožne barijere temelje se na lipidnim dvoslojevima. Uspješni transdermalni lijekovi ograničeni su pragovima parametara koji su restriktivniji od pravila pet [19]. Stoga novi dostupni statistički izračuni objašnjavaju vrlo precizna pravila za transdermalne puteve aktivnih tvari. Temelj se uglavnom temelji na njihovim fizikalno-kemijskim parametrima. Novi pragovi za trenutne transdermalne lijekove su MW <335, nhd="" manji="" ili="" jednak="" 2,="" nha="" manji="" ili="" jednak="" 5="" i="" logp=""><5>

Unatoč njihovoj nesposobnosti da prevladaju barijeru stratum corneuma, visokomolekularni stilbenoidi (trimeri i tetrameri resveratrola) i dalje su od velikog interesa zbog svog blagotvornog djelovanja na kožu. Kao što je već pokazano u mnogim studijama, ovi metaboliti pokazuju jaka antioksidativna svojstva [38], a paralelno, zbog svog karaktera, odlikuju se visokom odjeljkom međustaničnim cementnim komponentama i lipofilnom zaštitnom barijerom kože. U slučajevima štetnih stanja i preisušene kože, ovi polifenoli mogu igrati važnu ulogu kao aktivni emolijensi s regenerativnom i antioksidativnom sposobnošću na površini kože [39].

Uzimajući u obzir gore navedena pravila za prodiranje kroz kožu, najsnažniji kandidati za kozmetičke aktivne sastojke su zatim katehin, epikatehin, E-picetanol, E-resveratrol i E-ε-vinifera. Naši izračuni predviđaju da ti polifenoli mogu nadvladati kožne barijere i djelovati unutar strukture dermisa, što je osobito važno s obzirom na njihovu aktivnost za enzimske funkcije kože. Potvrđena sposobnost modulacijetirozinazaaktivnost sirtuina i njihovo dobro predviđanje prodiranja u kožu omogućuje niskomolekularnim stilbenoidima (monomeri i dimeri resveratrola) poput E-resveratrola i E-ε-vinifera da djeluju kao pomlađivači iizbjeljivanjeagenti. Osim toga, njihova visoka antioksidativna aktivnost osigurava višestruke učinke na stanice kože. GCE su mješavine polifenola koji pokazuju različite biološke aktivnosti i karakteriziraju ih različita fizikalno-kemijska svojstva. Stoga ekstrakti osiguravaju višesmjerne terapeutske učinke kao i učinkovitu zaštitu ljudske kože.

Stoga se može tvrditi da bi GCE bogat polifenolima bio korisniji u tretmanima za njegu kože od inkapsuliranih čistih stilbenoida [22]. Potrebni su daljnji eksperimenti na modelima kože kako bi se potvrdio potencijal GCE-a kao prirodnog višenamjenskog sastojka za ekološki prihvatljivu dermo-kozmetiku.

3. Materijali i metode

3.1. Kemikalije i reagensi

E-resveratrol i drugi standardi nabavljeni su od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAD). E-ε-vinifera je pročišćena iz trske grožđa kako je prethodno opisano [40]. Gljivatirozinazaotopina i L-DOPA dobiveni su od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAD). Ultra čista voda dobivena je iz Millipore Milli-Q sustava za pročišćavanje vode (Merck Millipore, grad, Njemačka).

3.2. Biljni materijal

Plodovi grožđa od pet odabranih sorti (Villard Noir, Sauvignon, Savagnin, Riesling i Magdeleine Noire des Charentes) ubrani su u siječnju 2016. u INRA skladištu grožđa u "Domaine de Vassal" (34340 Marseillan-Plage, Francuska: http://www .1.montpellier.inra.fr/vassal). Dvadeset i pet stabljika grožđa ubrano je za svaku sortu nakon rezidbe pet stabljika s pet različitih trsova. Stabljike grožđa izrezane su na 10 cm duge dijelove i pohranjene 10 tjedana na 20 ◦C u mraku, što je omogućilo nakupljanje E-resveratrola i E-picetanola nakon žetve. Zatim su stabljike grožđa mljevene najprije s ohlađenim analitičkim mlinom (Ika-Werke, Staufen, Njemačka) i dodatno s mlinom za rezanje (Polymic PX-MFC 90 D, Kinematica AG, Luzern, Švicarska) kako bi se dobile čestice veličine 1 mm. Prah je liofiliziran i pohranjen na -20 ◦C do ekstrakcije [41]. Ukupno je 20 g osušenog praha ekstrahirano s 500 mL smjese etanol/voda (60/40; v/v). Uzorci su ekstrahirani 45 minuta u refluksu na 83 ◦C i filtrirani. Zatim su supernatanti ispareni korištenjem Heidolph 94200rotavapora (Bio block, Schwabach, Njemačka) spojenog s vakuumskom pumpom (Vacuubrand PC500 serija, Wertheim, Njemačka). Dobiveni ekstrakti su liofilizirani, dajući osušeni GCE dostupan za daljnja in vitro ispitivanja.

3.3. HPLC analize

HPLC sustav je napravljen od Waters 717 plus Autosampler, Waters 996 photodiode arraydetector i Waters 600 Controller pumpe (Waters, Milford, MA, SAD) i njime je upravljao softver Empower 2 (Waters , Milford, MA, SAD). Postigli smo odvajanje analita ubrizgavanjem 20 µL ekstrakata na kolonu napunjenu česticama od 3 µm (250 × 4 mm, Multospher 120 RP18HP; CS-Service, Langerwehe, Njemačka) na 24 ◦C. Mobilna faza je napravljena od 0,1 posto fosforne kiseline (otapalo A) i acetonitrila (otapalo B) pumpanih pri 0,5 mL min-1. Koristili smo linearni gradijent koji je započeo s 5 posto B i povećao se na 72,5 posto u 60 minuta. Kvantifikacija je učinjena korištenjem čistog standarda korištenjem kalibracijske krivulje u pet točaka (0-100 ppm) u načinu detekcije Maxplot. Izohopeafenol je kvantificiran pomoću kalibracijske krivulje nadeafenola.

3.4. Aktivacija sirtuina

Procjena aktivacije sirtuina (SIRT1) provedena je pomoću GCE pri 50 µg/mL u usporedbi s 10 µM čistog E-resveratrola i E-ε-viniferina (kao aktivatora) i nikotinamida (kao inhibitora). Aktivnost SIRT1 određena je pomoću SIRT1 Komplet za analizu (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD) prema uputama proizvođača i korištenjem fluorescentnog spektrometra (Biorad VersaFluor, Marnes-la-Coquette, Francuska) postavljenog s valnim duljinama pobude od 340 nm i emisije od 430 nm. Relativna SIRT1 aktivnost otkrivena je kao relativni postotak u odnosu na odgovarajuću kontrolu (dodavanjem istog volumena ekstrakcijskog otapala) za svaki ekstrakt.

3.5. Inhibicija tirozinaze

3.5.1. Enzimski test

Test inhibicije tirozinaze mjeren je kako su opisali Neely et al. (2009) [42]. Svaki test od 1 m sadržavao je konačnu koncentraciju od 100 mM natrijevog fosfata (pH 6,5) i 2 mM L-DOPA. Konačno, u smjesu je dodano 0,2 mg/mL otopine tirozinaze gljive (Sigma-Aldrich). Kontrola, s jednakom količinom ekstrakcijskog otapala koje zamjenjuje ekstrakt, rutinski je provedeno. Reakcijski procesi su praćeni korištenjem čitača mikropločica (BioTek ELX800; BioTek Instruments Inc., Winooski, VT, SAD) na valnoj duljini od 475 nm. ThetirozinazaInhibicijski učinak je izražen kao postotak inhibicije u odnosu na odgovarajuću kontrolu za svaki ekstrakt. Standardne koncentracije spojeva primijenjene u studiji bile su 100 µM, a koncentracija testiranih ekstrakata bila je 50 µg/mL. Eksperimenti su ponovljeni tri puta, a prosječni rezultati s vrijednostima standardne devijacije prikazani su na slici 3B.

Cistanche inhibiraju ekspresiju tirozinaze

3.5.2. IC50 određivanje

Kako bi se pretpostavio raspon količina inhibitora potrebnih za izračun vrijednosti IC50, korištene su različite koncentracije E-resveratrola i E-ε-viniferina. Testovi korišteni za proračune pripremljeni su unutar raspona inhibitora od 1 do 100 uM. U slučaju značajne promjene u obliku krivulje aktivnost-vrijeme, stope su izračunate na temelju područja stabilne stope. Koncentracija inhibitora koja uzrokuje 50-postotnu inhibiciju aktivnosti tirozinaze ekstrapolirana je iz krivulja postotak aktivnosti-inhibitor [42]. Eksperimenti su ponovljeni tri puta, a prosjek IC50 vrijednosti dat je na slikama 4A i 4B.

3.6. Docking podaci za vezanje E-resveratrola i E-ε-viniferina s tirozinazom

Simulacija molekularnog spajanja E-resveratrola i E-ε-viniferina provedena je pomoću softvera Ligplot plus (Europski institut za bioinformatiku, Cambridge, UK), autodock Vina (The Scripps ResearchInstitute, La Jolla, CA, SAD) i Pymol v2.1.1 ( Schrodinger, New York, NY, SAD) za predviđanje konformacije ovih molekulskih liganada unutar odgovarajućeg ciljanog veznog mjestatirozinaza(PDB: 2Y9X).

3.7. Bioraspoloživost i potencijal propusnosti kože

Potencijal sličnosti lijeku kao i propusnost kože, kao ključni čimbenici za učinkovitost aktivne molekule, mogu se definirati kao složena ravnoteža različitih fizikalno-kemijskih svojstava i strukturnih značajki koje određuju je li molekula slična poznatim lijekovima. Ova svojstva, uglavnom hidrofobnost, elektronska distribucija, karakteristike vodikovih veza, veličina molekule, fleksibilnost i prisutnost raznih farmakoforskih svojstava, utječu na ponašanje molekula u živom organizmu, uključujući bioraspoloživost, transportna svojstva, afinitet prema proteinima, reaktivnost, toksičnost, metabolizam stabilnost i mnogi drugi [43]. Jednostavni kriteriji brojanja (poput granica za molekularnu težinu, logP ili broja donora ili akceptora vodikove veze) također imaju relativno ograničenu primjenjivost i korisni su samo za odbacivanje nekih od potencijalno aktivnih molekula iz daljnjih istraživanja [19]. Vrijednosti Molecular PolarSurface Area (TPSA) za sve strukture izračunate su na temelju metodologije koju su objavili Ertl et al. [44] kao zbroj doprinosa fragmenata u cijeloj molekuli. Također su uzeti u obzir polarni fragmenti s O- i N-centrom. Metoda za izračun volumena molekule kao i vrijednosti logaritma (log) koeficijenta raspodjele razvijeni su pomoću SwissADME [32]. 3D molekularne geometrije za set za obuku u potpunosti su optimizirane poluempirijskom AM1 metodom [45,46]. Lipinskijevo "Pravilo pet" navodi da većina molekula "nalik lijekovima" ima logP manji od ili jednak 5, molekulsku masu manju ili jednaku 500, broj akceptora vodikove veze manji ili jednak 10, a broj donora vodikove veze manji od ili jednako 5. Molekule koje krše više od jednog od ovih pravila mogu imati vrlo nisku ili nikakvu bioraspoloživost [33]. Izračuni predviđanja biološke aktivnosti temelje se na Bayesovoj statistici za usporedbu struktura reprezentativnih liganda aktivnih na određenoj meti sa strukturama neaktivnih molekula i za identificiranje substrukturnih značajki (koje zauzvrat određuju fizikalno-kemijska svojstva) tipičnih za aktivne molekule [47].

4. Zaključci

GCE obogaćen polifenolom uspio je aktivirati SIRT1 na sličnim razinama kao 5 µM E-resveratrol ili E-ε-viniferin. Kožaizbjeljivanjepotencijal putemtirozinazatest inhibicije pokazao je da su GCE kapaciteti usporedivi s čistim E-resveratrolom i E-ε-viniferinom. Osobito, Villard Noir i Riesling GCE mogu biti korisni kao agensi za posvjetljivanje kože i mogu se koristiti protiv tamnih mrlja u dermo-kozmetici. Osim toga, sličnost komponenti GCE-a s lijekovima pokazala je različite mogućnosti prodiranja u kožu, pružajući dovoljnu učinkovitost u različitim strukturama dermisa. Fiziološki procesi kože podržani ovim aktivnim spojevima osiguravaju ispravne funkcije kožne barijere kao i učinkovit oporavak kožnog tkiva. Zaključno, potencijalna primjena GCE-a je od ogromnog interesa ne samo za industriju, već i za potrošače koji sve više traže prirodne sastojke, koji su potrebni u takozvanoj "eko kozmetici".

Reference

1. Bonkowski, MS; Sinclair, DA Dizajnirano usporavanje starenja: Porast NAD plus i spojeva koji aktiviraju sirtuin. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2016, 17, 679–690. [CrossRef]

2. Nunes, MA; Rodrigues, F.; Oliveira, MBPP Nusproizvodi prerade grožđa kao aktivni sastojci za CosmeticProposes. U Priručniku nusproizvoda prerade grožđa: Održiva rješenja; Elsevier Inc.: Beč, Austrija, 2017.; str. 267–292 (prikaz, stručni). ISBN 9780128098714.

3. Piñeiro, Z.; Guerrero, RF; Fernández-Marin, MI; Cantos-Villar, E.; Palma, M. Ekstrakcija stilbenoida potpomognuta ultrazvukom iz peteljki grožđa. J. Agric. Food Chem. 2013, 61, 12549–12556. [CrossRef]

4. Houillé, B.; Besseau, S.; Delanoue, G.; Oudin, A.; Papon, N.; Clastre, M.; Simkin, AJ; Guérin, L.; Courdavault, V.; Giglioli-Guivarc'H, N.; et al. Pritisak peronospore u vinogradu utječe na sastav i tkivno specifičnu distribuciju stilbenoida u trscima grožđa. J. Agric. Food Chem. 2015, 63.[CrossRef]

5. Lambert, C.; Richard, T.; Renouf, E.; Bisson, J.; Waffo-Téguo, P.; Bordenave, L.; Ollat, N.; Mérillon, J.-M.; Cluzet, S. Komparativne analize stilbenoida u trscima sorti Major Vitis vinifera L. J. Agric. Food Chem.2013, 61, 11392–11399. [CrossRef] [PubMed]

6. Çetin, ES; Altinöz, D.; Tarçan, E.; Göktürk Baydar, N. Kemijski sastav trske grožđa. Ind. Crops Prod.2011, 34, 994–998. [CrossRef]

7. Torres, P.; Avila, JG; De Vivar, AR; García, AM; Marin, JC; Aranda, E.; Céspedes, CL Antioksidans i regulatorne aktivnosti rasta insekata stilbena i ekstrakata iz Yucca periculosa. Phytochemistry 2003,64, 463–473. [CrossRef]

8. Xue, YQ; Di, JM; Luo, Y.; Cheng, KJ; Wei, X.; Shi, Z. Resveratrol oligomeri za prevenciju i liječenje raka. Oksid. Med. Ćelija. Longev. 2014., 2014. [CrossRef]

9. Jang, M.; Cai, L.; Udeani, GO; Usporavanje, KV; Thomas, CF; Beecher, CWW; Fong, HHS; Farnsworth, NR; Kinghorn, AD; Mehta, RG; et al. Kemopreventivno djelovanje resveratrola na rak, prirodnog proizvoda dobivenog iz grožđa. Znanost 1997, 275, 218–220. [CrossRef]

10. Adrian, M.; Jeandet, P.; Veneau, J.; Weston, LA; Bessis, R. Biološka aktivnost resveratrola, stilbenskog spoja iz vinove loze, protiv Botrytis cinerea, uzročnika sive plijesni. J. Chem. Ecol. 1997, 23, 1689–1702. [CrossRef]

11. Liu, F.; Tsai, Y.; Tsai, H.; Yu, H. Protuupalni i zaštitni učinci resveratrola na organe kod trauma-hemoragijske ozljede. Medijatori Upala 2015., 2015., 38–42. [CrossRef]

12. Morel-Salmi, C.; Julija, A.; Vigor, C.; Vercauteren, J. Velika razlika u adsorpciji PVDF-a između resveratrola i ε-vinifere omogućuje njihovo kvantitativno pročišćavanje i procjenu njihovih svojstava protiv tirozinaze. Chromatographia 2014, 77, 957–961. [CrossRef] [PubMed]

13. Honisch, C.; Otto, A.; de Matos, AD; Vincenzi, S.; Ruzza, P. Izolacija inhibitora tirozinaze iz soka nezrelog grožđa: spektrofotometrijska studija. Food Chem. 2019, 305, 125506. [CrossRef] [PubMed]

14. Skoczy ´nska, A.; Budzisz, E.; Trznadel-Grodzka, E.; Rotsztejn, H. Melanin i lipofuscin kao obilježja skidanja kože. Postep. Dermatologija i Alergol. 2017, 34, 97–103. [CrossRef] [PubMed]

15. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Hassan Khan, MT; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AAA sveobuhvatan pregled inhibitora tirozinaze. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [CrossRef]

16. Howitz, KT; Bitterman, KJ; Cohen, HY; Lamming, DW; Lavu, S.; Wood, JG; Zipkin, RE; Chung, P.; Kisielewski, A.; Zhang, LL; et al. Aktivatori sirtuina malih molekula produljuju životni vijek Saccharomyces cerevisiaeli. Nature 2003, 425, 191–196. [CrossRef]

17. Abbasi, BH; Siddiquah, A.; Tungmunnithum, D.; Bose, S.; Younas, M.; Garros, L.; Drouet, S.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Hano, C. Isodon rugosus (Wall. ex Benth.) kulture bakalara in vitro: Uspostava, fitokemijska karakterizacija i in vitro antioksidativne aktivnosti i aktivnosti protiv starenja. Int. J. Mol. Sci. 2019., 20.[CrossRef]

19. Malinowska, M.; Miroslaw, B.; Sikora, E.; Ogonowski, J.; Wojtkiewicz, AM; Szaleniec, M.; Pasikowska-Piwko, M.; Eris, I. Novi esteri lupeola kao djelatne tvari u liječenju oštećenja kože.PLoS ONE 2019, 14, 1–15. [CrossRef]

19. Choy, YB; Prausnitz, MR Pravilo pet za neoralne puteve isporuke lijeka: oftalmološki, inhalacijski i transdermalni. Pharm. Res. 2011, 28, 943–948. [CrossRef]

20. Billet, K.; Dugé de Bernonville, T.; Oudin, A.; Courdavault, V.; Brousseau, S.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Lanoue, A. Obrada drvne biomase nakon žetve iz velike zbirke europskih sorti grožđa: Utjecaj na odabir nusproizvoda bogatih polifenolima. ACS Sustain. Chem. inž.. podnesen.

21. Billet, K.; Houillé, B.; Dugé de Bernonville, T.; Besseau, S.; Oudin, A.; Courdavault, V.; Delanoue, G.; Guérin, L.; Clastre, M.; Giglioli-Guivarc'h, N.; et al. Terenska metabolomika stabljika Vitis vinifera L. pruža nove uvide u diskriminaciju genotipa i strukturiranje metabolizma polifenola. Ispred. Plant Sci.2018, 9, 1–15. [CrossRef]

23. Stacchiotti, A.; Favero, G.; Rezzani, R. Resveratrol i SIRT1 aktivatori za liječenje starenja i bolesti povezanih sa starenjem. U resveratrolu – dodavanje života godinama, a ne dodavanje godina životu; IntechOpen: London, UK, 2019. [CrossRef]

24. Malik, S.; Mohar, D. Sirtuinski sustav: Sveti gral resveratrola? J. Clin. Exp. Kardiologija. 2012, 3, 216-219.[CrossRef]

24. Fu, J.; Jin, J.; Cichewicz, RH; Hageman, SA; Ellis, TK; Xiang, L.; Peng, Q.; Jiang, M.; Arbez, N.; Hotaling, K.; et al. Trans-(-)-ε-vinifera povećava mitohondrijski sirtuin 3 (SIRT3), aktivira AMP-aktiviranu protein kinazu (AMPK) i štiti stanice u modelima Huntingtonove bolesti. J. Biol. Chem. 2012, 287, 24460–24472. [CrossRef] [PubMed]

25. Corbi, G.; Conti, V.; Komići, K.; Manzo, V.; Filippelli, A.; Palazzo, M.; Vizzari, F.; Davinelli, S.; Di Costanzo, A.; Scapagnini, G.; et al. Fenolni biljni ekstrakti potiču aktivnost sirta i povećavaju razinu antioksidansa u srcu i jetri kunića. Oksid. Med. Ćelija. Longev. 2018., 2018. [CrossRef] [PubMed]

26. Wang, Y.; Liang, X.; Chen, Y.; Zhao, X. Probir aktivatora SIRT1 iz ljekovitih biljaka kao bioaktivnih spojeva protiv oksidativnog oštećenja mitohondrijske funkcije. Oksid. Med. Ćelija. Longev. 2016, 2016, 1-10.[CrossRef]

28. Gertz, M.; Nguyen, GTT; Fischer, F.; Suenkel, B.; Schlicker, C.; Fränzel, B.; Tomaschewski, J.; Aladini, F.; Becker, C.; Wolters, D.; et al. Molekularni mehanizam za izravnu aktivaciju sirtuina resveratrolom. PLoS ONE2012, 7, 1–12. [CrossRef]

28. Lin, YS; Chen, HJ; Huang, JP; Lee, PC; Tsai, CR; Hsu, TF; Huang, WY Kinetika inhibitorne aktivnosti tirozinaze korištenjem ekstrakata lišća vinifere Viti. Biomed Res. Int. 2017., 2017. [CrossRef]

29. Likhitwitayawuid, K. Stilbeni s inhibicijskim djelovanjem na tirozinazu. Curr. Sci. 2008, 94, 44–52.

30. Ullah, S.; Park, Y.; Ikram, M.; Lee, S.; Park, C.; Kang, D.; Yang, J.; Akter, J.; Yoon, S.; Chun, P.; et al. Dizajn, sinteza i antimelanogeni učinak derivata cinamata. Bioorganic Med. Chem. 2018, 26, 5672-5681.[CrossRef]

31. Chen, J.; Yu, X.; Huang, Y. Inhibicijski mehanizmi glabridina na tirozinazu. Spectrochim. Acta-dio A Mol.Biomol. Spectrosc. 2016, 168, 111–117. [CrossRef]

33. Daina, A.; Michielin, O.; Zoete, V. SwissADME: Besplatan web alat za procjenu farmakokinetike, sličnosti lijeku i prikladnosti malih molekula za medicinsku kemiju. Sci. Rep. 2017, 7, 1–13. [CrossRef]

33. Lipinski, CA; Lombardo, F.; Dominy, BW; Feeney, PJ Eksperimentalni i računalni pristupi za procjenu topljivosti i propusnosti u uvjetima otkrivanja i razvoja lijekova. Adv. Lijek Deliv. Rev.2012, 64, 4–17. [CrossRef]

34. Ghose, AK; Viswanathan, VN; Wendoloski, JJ Pristup temeljen na znanju u dizajniranju kombinatornih ili medicinskih kemijskih knjižnica za otkrivanje lijekova. 1. Kvalitativna i kvantitativna karakterizacija baza podataka poznatih lijekova. J. Comb. Chem. 1999, 1, 55–68. [CrossRef] [PubMed]

36. Veber, DF; Johnson, SR; Cheng, HY; Smith, BR; Ward, KW; Kopple, KD Molekularna svojstva koja utječu na oralnu bioraspoloživost kandidata za lijekove. J. Med. Chem. 2002., 45, 2615–2623. [CrossRef] [PubMed]

36. Egan, WJ; Merz, KM; Baldwin, JJ Predviđanje apsorpcije lijeka pomoću multivarijatne statistike. J. Med. Chem. 2000, 43, 3867-3877. [CrossRef]

38. Muegge, I.; Heald, SL; Brittelli, D. Jednostavni kriteriji odabira za kemijsku tvar nalik drogi. J. Med. Chem. 2001, 44, 1841-1846. [CrossRef]

38. Soural, I.; Vrchotová, N.; Tˇríska, J.; Balík, J.; Horník, Š.; Cuˇrínová, P.; Sýkora, J. Različite metode ekstrakcije za dobivanje stilbena iz trske grožđa Vitis vinifera L. Molecules 2015, 20, 6093–6112. [CrossRef]

39. Chen, CP; Chen, CC; Huang, CW; Chang, YC Procjena molekularnih svojstava uključenih u transport malih molekula u stratum corneum: kvantitativni odnos strukture i aktivnosti za propusnost kože. Molecules 2018, 23. [CrossRef]

40. Houillé, B.; Papon, N.; Boudesocque, L.; Bourdeaud, E.; Besseau, S.; Courdavault, V.; Enguehard-Gueiffier, C.; Delanoue, G.; Guérin, L.; Bouchara, J.-P.; et al. Antifungalna aktivnost derivata resveratrola protiv candidaspecies. J. Nat. proizvod 2014., 77, 1658–1662. [CrossRef]

41. Billet, K.; Houillé, B.; Brousseau, S.; Mélin, C.; Oudin, A.; Papon, N.; Courdavault, V.; Castro, M.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Lanoue, A. Mehanički stres brzo inducira E-resveratrol i E-piceatannolbiosintezu u trscima grožđa pohranjenim kao svježe orezani nusprodukt. Food Chem. 2018, 240, 1022-1027.[CrossRef]

42. Neeley, E.; Fritch, G.; Fuller, A.; Wolfe, J.; Wright, J.; Flurkey, W. Varijacije u IC50 vrijednostima s čistoćom tirozinaze gljive. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 3811–3823. [CrossRef]

44. Mignani, S.; Rodrigues, J.; Tomaš, H.; Jalal, R.; Singh, PP; Majoral, JP; Vishwakarma, RA Sadašnji filtri sličnosti lijeku u medicinskoj kemiji tijekom procesa optimizacije rezultata i rezultata: Koliko se mogu pojednostaviti? Drug Discov. Danas 2018, 23, 605–615. [CrossRef] [PubMed]

44. Ertl, P.; Rohde, B.; Selzer, P. Brzi izračun molekularne polarne površine kao zbroj doprinosa na temelju fragmenata i njegova primjena na predviđanje svojstava transporta lijeka. J. Med. Chem. 2000, 43, 3714–3717. [CrossRef][PubMed]

45. Dewar, MJS; Zoebisch, EG; Healy, EF; Stewart, JJP AM1: Novi kvantno-mehanički molekularni model opće namjene1. J. Am. Chem. Soc. 1985, 107, 3902–3909. [CrossRef]

46. ​​Rocha, GB; Freire, RO; Simas, AM; Stewart, JJP RM1: Reparametrizacija AM1 za H, C, N, O, P, S, F, Cl, Br i IJ Comput. Chem. 2006, 27, 1101–1111. [CrossRef]

48. Rocchetti, G.; Gatti, M.; Bavaresco, L.; Lucini, L. Neciljana metabolomika za istraživanje fenolnog sastava vina Chardonnay različitog podrijetla. J. Food Compos. analno 2018, 71, 87–93. [CrossRef]