Eksperimentalna studija o zaštitnom učinku Cistanche Total Glycosides (CTG) na ishemijsku reperfuzijsku ozljedu bubrega
Mar 09, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com
ZHU Jun, ZHAO Xi
Sažetak:Cilj Uspostaviti štakorski model hemoragičnog šoka i reanimacije kako bi se promatrao zaštitni učinakcistanche ukupni glikozidi(CTG)na bubrežnomishemijsko-reperfuzijska ozljeda. Metode SD štakori su randomizirani u skupinu za lažnu operaciju, skupinu za šok i reanimaciju (eksperimentalna skupina) i CTG skupinu, s 10 štakora u svakoj. Nakon modeliranja, štakori u CTG skupini primili su intraperitonealnu injekciju CTG 400 mg/kg. Eksperimentalnoj skupini i skupini s lažnom operacijom ubrizgana je fiziološka otopina od 3 ml. Razine Cr, BUN i Cys － C određene su kako bi se otkrila funkcija bubrega u svakoj skupini. Protočna citometrija korištena je za određivanje brzine apoptoze bubrežnih stanica. ELISA je korištena za otkrivanje ekspresije XIAP u tkivu bubrega. Rezultati U usporedbi s eksperimentalnom skupinom, razine Cr, BUN i Cys － C očito su smanjene uCTGskupini (P ＜ {{0}}.01), a apoptoza bubrežnih stanica bila je smanjena (P ＜ 0,01). CTG je značajno poboljšao ekspresiju XIAP (P<0.05). conclusion="">CTGima zaštitni učinak naishemijska reperfuzijaozljeda bubrega u štakora, što je moguće povezano s poticanjem ekspresije XIAP.
【Ključne riječi】 Bubreg; Ishemijska reperfuzijska ozljeda; Cistanche Ukupni glikozidi; XIAP; Apoptoza stanica
Ishemijsko-reperfuzijska (I/R) ozljedaje čest patofiziološki fenomen oštećenja bubrega u procesu hemoragičnog šoka, teške traume, transplantacije bubrega i operacije tumora bubrega. Studije su pokazale da je apoptoza važna karika u oštećenju bubrežne funkcije uzrokovanom I/R ozljedom [1]. Inhibitor proteina apoptoze vezan za X-kromosom (XIAP) jedan je od najjačih dosad pronađenih endogenih inhibitora apoptoze [2]. Malo je studija o antiapoptotičkom učinku XIAP-a u bubrežnom tkivu nakon I/R ozljede.Cistanche ukupni glikozidi(CTG) su s popisa Phenylethanol glikozidnih spojeva ekstrahiranih izCistancheimaju različite biološke funkcije. Malo je studija o zaštiti bubrega nakon I/R ozljede. U ovom pokusu uspostavljen je štakorski model reanimacije hemoragičnog šoka i sistemski model I/R ozljede kako bi se istražio zaštitni učinak CTG predtretmana na bubreg od I/R ozljede i istražio njegov mogući mehanizam.
Učinci cistanche: spriječitiIshemijsko-reperfuzijska (I/R) ozljeda
1 Materijal i metode
1.1 Eksperimentalni materijali
1.1.1 Laboratorijske životinje 30 čistih zdravih muških štakora SD, osigurao Eksperimentalni centar Šangajskog sveučilišta tradicionalne kineske medicine, broj certifikata za životinje: SYXK (Šangaj) 2009-0069, tjelesna težina (320 ± 30) g.
1.1.2 Eksperimentalni reagensCTG(kupljeno od Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd., broj serije: 20081516); natrijev pentobarbital (broj serije: P3761), propidij jodid (PI), rodamin123 (oba kupljena (od Sigme, SAD); kit za određivanje XIAP štakora ELISA kit (kupljen od Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd., broj serije CSB-ELO26172MO) .
1.1.3 Laboratorijski instrument Čitač mikropločica (American Thermo Company); Višeparametarski fiziološki detektor (kupljen od NIHON KOHDEN Company, Japan); Protočni citometar (kupljen od Becton-Dickinson Company, SAD); 24 G troakar (Shandong Jierui Medical Equipment Company).
1.2 Eksperimentalne metode
1.2.1 Priprema životinjskog modela SD štakori su izgladnjivani 12 sati prije eksperimenta i anestezirani intraperitonealnom injekcijom natrijeva pentobarbitala (50 mg/kg). Štakori su fiksirani u ležećem položaju, te je napravljen rez od 3 cm u lijevom donjem dijelu abdomena i odvojen. U femoralnu arteriju umetne se troakar od 24 G, spoji višeparametarski fiziološki tester, heparinizira se štrcaljka od 20 ml i krvni tlak pada na 40 mm Hg. Krvni tlak pada na 40 mm Hg. Smatra se da je šok započeo, a tlak se održava 90 minuta. To je (13 ± 3) ml, a zatim se autologna krv u špricu polako vraća. Potrebno je oko 30 minuta da se krvni tlak vrati na više od 90 posto osnovne vrijednosti. Smatra se da je reanimacija uspješna [3]. Izvucite iglu troakara, povežite femoralnu arteriju i zašijte rez. Nakon što su se štakori probudili, vraćeni su u kavez na promatranje, te su imali slobodan pristup hrani i vodi. 24 sata nakon reanimacije, štakori su anestezirani pentobarbital natrijem (50 mg/kg) intraperitonealnom injekcijom, laparotomijom i 5 ml krvi je sakupljeno iz donje šuplje vene. Štakori su odmah ubijeni, a lijevi i desni bubreg izvađeni su za upotrebu.
1.2.2 Grupiranje životinja i primjena 30 štakora nasumično je podijeljeno u skupinu za lažnu operaciju, skupinu za reanimaciju šokom (eksperimentalna skupina) i CTG skupinu, s 10 štakora u svakoj skupini.
Pokusnoj skupini intraperitonealno je ubrizgano 3 ml fiziološke otopine 2 sata prije puštanja krvi. uCTGskupini, CTG je dan 2 sata prije puštanja krvi štakorima, a doza je ubrizgana u trbušnu šupljinu u dozi od 400 mg/kg. Grupa lažne operacije podvrgnuta je samo anesteziji, laparotomiji i odvajanju trokara femoralne arterije i rezovima šavova itd., puštanje krvi i reanimacija nisu provedeni, a ostalo je isto kao i eksperimentalna skupina.
1.3 Pokazatelji i metode ispitivanja
1.3.1 Određivanje kreatinina u krvi (Cr), dušika iz uree (BUN), cistatina C Cr, BUN i cistatina C određuju se u laboratoriju naše bolnice. Cistatin C je endogeni marker promjena u brzini glomerularne filtracije. Kada je bubrežna funkcija oštećena, brzina glomerularne filtracije se smanjuje, a koncentracija cistatina C u krvi može porasti više od 10 puta. Dijagnostička točnost cistatina C značajno je bolja od one serumskog kreatinina.
1.3.2 Određivanje stope apoptoze stanica Protočna citometrija korištena je za otkrivanje stope apoptoze bubrežnih stanica. Uzmite bubreg i usitnite ga oštricom, dodajte malo PBS-a i prebacite u epruvetu. Dodajte 0.3 posto tripsina za probavu u vodenoj kupelji od 37 stupnjeva i inkubirajte 20 min. Kada tvar u epruveti postane mutna, dodajte dvaput PBS da zaustavite probavu, filtrirajte najlonskom mrežicom od 300 mesh, odbacite nečistoće i upotrijebite centrifugu na niskoj temperaturi pri 1500 g/s za 5 min, odbacite supernatant, podesite koncentraciju stanica na 1 × 106 ~ 1,5 × 106 / ml, uzmite 0,4 ml gornje stanične suspenzije i dodajte 10 ul / ml Rhodamin123 0 ．4 ml, inkubirajte u Vodena kupelj na 37 stupnjeva zaštićena od svjetlosti, zatvorite epruvetu, isperite dva puta PBS-om nakon 30 minuta, zatim centrifugirajte na 1500 g/s 5 minuta, odbacite supernatant i ponovno isperite na isti način. Dodajte PI 0,4 ml, bojite 15 minuta i provjerite postotak normalnih, nekrotičnih i apoptotičnih stanica u bubregu. Prema afinitetu ove dvije boje u raznim vrstama stanica, poznato je da su samo stanice obojene PI mrtve stanice, samo stanice obojene Rhodamin123 žive stanice, a obje stanice obojene su apoptotične stanice.
1.3.3 Enzimski imunotest (ELISA) korišten je za otkrivanje ekspresije XI-AP u tkivima bubrega štakora. Uzeti su bubrezi svake skupine, a svježe tkivo bubrega tretirano je tkivnim lizatom. Centrifugirajte na 1500 g/s u centrifugi na niskoj temperaturi 5 minuta. Uzmite supernatant i postupite prema uputama kompleta XI-AP ELISA. Za testiranje je odgovoran Shanghai Jiaoda Fenghe Technology Co., Ltd.
1.4 Statistička obrada
Svi podaci su statistički analizirani pomoću softvera SPSS17.0, a podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (x ± s) i P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
cistanche ukupni glikozidi
2 rezultata
2.1 Indeksi bubrežne funkcije Cr, BUN, Cystatin C Usporedba Cr, BUN, Cystatin C u eksperimentalnoj skupini bili su značajno viši od onih u skupini lažne operacije (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">
U usporedbi s eksperimentalnom skupinom, vrijednosti Cr, BUN i Cystatin C uCTGskupini bili značajno smanjeni, a razlika je bila statistički značajna (P<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Tablica 1. Usporedba indeksa bubrežne funkcije Cr, BUN i cistatin C štakora u svakoj skupini (x ± s)
Napomena: U usporedbi s lažnom operacijskom grupom, P＜{{0}}.01; u usporedbi s eksperimentalnom skupinom, bP<>
2.2 Stopa apoptoze bubrežnih stanica i ekspresija XIAP u bubrežnom tkivu. Samo nekoliko stanica u bubrežnom tkivu skupine lažne operacije prolazi kroz apoptozu.
Broj apoptoza u eksperimentalnoj skupini bio je značajno povećan, a razlika je bila statistički značajna u usporedbi sa skupinom lažne operacije (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>
Skupina lažne operacije imala je samo slabu ekspresiju XIAP, dok je eksperimentalna skupina imala značajan porast ekspresije XIAP (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Tablica 2. Usporedba stope apoptoze i ekspresije XIAP stanica bubrega štakora u svakoj skupini (x± s)
Napomena: U usporedbi s lažnom operativnom grupom, aP＜{{0}}. 01; U usporedbi s eksperimentalnom skupinom, b P<0. 05,=""><0.>
3 Rasprava
Mehanizam oštećenja I/R bubrega vrlo je kompliciran. To je patološki proces koji se odvija kroz mnoge putove pod djelovanjem različitih čimbenika, kao što su preopterećenje ionima kalcija, oštećenje peroksidacijom lipida, apoptoza i nekroza, među kojima su endogene kaspaze Apoptoza ovisna o kaspazama jedan je od glavnih oblika epitela bubrežnih tubula. oštećenje stanica izazvano I/R ozljedom bubrega [4]. Familija inhibitora proteina apoptoze (IAP) jedini je dosad pronađeni inhibitor kaspaze u stanicama sisavaca, koji može učinkovito spriječiti pojavu apoptoze. XIAP je najjači inhibitor kaspaze iz obitelji IAP, koji može inhibirati staničnu apoptozu uzrokovanu nizom patoloških podražaja i imati zaštitni učinak na oštećene organe [5].
Trenutačna metoda utvrđivanja životinjskih modela ozljede I/R bubrega uglavnom je uklanjanje jedne strane bubrega i stezanje druge strane bubrežne peteljke ili bubrežne arterije [6] kako bi se simuliralo stanje transplantacije bubrega. Autor je u ovoj studiji koristio model hemoragijskog šoka/reanimacije koji je bliži patofiziološkom procesu sistemske ishemije-reperfuzije koji se javlja u kliničkom traumatskom šoku. U ovom pokusu, BUN, Cr i cistatin u krvi SD štakora značajno su povećani, a bubrežna funkcija je ozbiljno oštećena. To je idealan životinjski model za proučavanje I/R oštećenja bubrega.
CTG je važna ljekovita komponenta tradicionalne kineske medicineCistanche. Cistanche, koji je po prirodi topao, sladak i slan, pripada meridijanu bubrega i debelog crijeva i izvorno je sadržan u Shennongovoj Materia Medici. "Ben Jing", kaže: "Održava pet trudova i sedam ozljeda, hrani sredinu, hrani pet unutarnjih organa, jača yin i hrani esenciju i qi." Također."Cistanchekoristi se u mojoj zemlji dvije tisuće godina. U prošlosti je bio na prvom mjestu u formulama za povećanje snage, au hranjivim formulama odmah iza ginsenga.Cistanchelimenkapoboljšati seksualnu funkciju, regulirati neuroendokrine i poboljšati imunološku funkciju tijela. Antioksidansi, potiču metabolizam materijala, štite ishemijski miokard i druge funkcije. Kao glavni ljekoviti sastojakCistanche, CTG ima mnogo funkcija. Istraživanje cerebralneishemija-reperfuzijamodel
Studije su otkrile daCTGmože smanjiti ekscitatorne aminokiseline u tkivu mozga nakon ishemije-reperfuzije i zaštititi tkivo mozga SD štakora [7]. CTG ima antioksidativni učinak na mišja tkiva i ima određeni zaštitni učinak na akutnu cerebralnu hipoksiju u miševa i oštećenje srčanog mišića u miševa [8]. CTG može značajno poboljšati neuroponašanje miševa modela Parkinsonove bolesti i inhibirati smanjenje broja dopaminskih neurona u substanti nigra [9]. Povećanjem aktivnosti enzima za hvatanje slobodnih radikala, sprječavanjem peroksidacije lipida, inhibicijom taloženja -amiloidnog peptida u mozgu i inhibicijom apoptoze moždanih stanica, CTG je značajno povećao sposobnost učenja i pamćenja kod miševa Alzheimerove bolesti izazvane -amiloidnim peptidom [10]. Ova je studija pokazala da se nakon primjene CTG predtretmana, sadržaj BUN, Cr i cistatina C u krvi SD štakora značajno smanjio, a smanjeno je i oštećenje bubrežne funkcije. CTG je povećao protein XIAP koji inhibira apoptozu u bubrežnom tkivu I/R ozljede i blokirao je stanice. Pojava apoptoze ima zaštitnu ulogu u oštećenju bubrega.
reference
[1] Cassis P, Azzollini N, Solini S, et al. I darbepoetin alfa i karbamilirani eritropoetin sprječavaju disfunkciju presatka bubrega zbog ishemije/reperfuzije u štakora［J］． Transplantacija, 2011., 92 (3): 271-279.
[2] West T, Stump M, Lodygensky G, et al. Nedostatak X-vezanog inhibitora proteina apoptoze dovodi do povećane apoptoze i gubitka tkiva nakon neonatalne ozljede mozga［J］． ASN Neuro, 2009, 1 (1). PII: e00004. doi:10. 10421AN20090005.
[3] Fu X, Tian H, Wang D, et al. Višestruke ozljede i zatajenja organa uzrokovana šokom i reperfuzijom nakon prostrijelnih rana［J］． J Trauma, 1996, 40 (3 Suppl): S135-139.
[4] Padanilam BJ. Smrt stanica izazvana akutnim oštećenjem bubrega: perspektiva doprinosa apoptoze i nekroze［J］． Am J Physiol Renal Physiol, 2003, 284 (4): F608-F627.
[5] Galbán S, Hwang C, Rumble JM, et al. Citoprotektivni učinci IAP otkriveni antagonistom malih molekula［J］． Biochem J, 2009, 417 (3): 765-771.
[6] Wu Jianguo, Zhang Dan, Wu Xinsheng, itd., Uspostavljanje i iskustvo modela akutne ishemijsko-reperfuzijske ozljede bubrega u miševa [J]. Medicinske informacije: Handbook of Surgery, 2007., 20 (12): 1103-1105.
[7] Zhu Zheng. Učinci cistanche glikozida na ekscitatorne aminokiseline u moždanom tkivu štakora nakon cerebralne ishemije i reperfuzije [J]. Anhui Medicine, 2010., 14 (12): 1393 -1394.
[8] Julia Y, Wang XW, Wubuli AS, et al. Zaštitni učinak ukupnih glikozida cistanche deserticola na nedostatak kisika ［J］． Rep Chin Pharm, 2003, 20 (1): 73-76.
[9] Li Wenwei, Yang Ru, Cai Dongfang, et al. Zaštitni učinak ukupnih glikozida cistanhe na dopaminergičke neurone u substanti nigra MPTP miševa modela Parkinsonove bolesti
[10] Liu Fengxia, Wang Xiaowen, Luo Lan, itd. Učinak i mehanizam ukupnih glikozida cistanhe na učenje i pamćenje mišjeg modela Alzheimerove bolesti induciranog -amiloidnim peptidom [J]. Kineski farmakološki bilten, 2006., 22 (5): 595-599.
