Učinci poligona-polisaharoze na feroptozu kod štakora dijabetičke nefropatije

Ključne riječi:dijabetička nefropatija;poligona-polisaharoza; feroptoza; transferin; FTH1; GPX4

 

Dijabetička nefropatija(DN) je ozbiljna mikrovaskularna komplikacijašećerna bolest[1] DN je ozbiljanmikrovaskularna komplikacija dijabetesamellitus [1], obično se manifestira kao mikroalbuminurija u ranim stadijima, praćena progresivnim razvojem Rana faza se obično predstavlja mikroalbuminurijom, praćena progresivnim razvojem masivne proteinurije, progresivnim smanjenjem brzine glomerularne filtracije i progresivnim povećanjem kreatinina u krvi [2]. ]. progresivno povećanje kreatinina[2] . Ako se ne liječi, bolest može dovesti do kronične bolesti. Ako se ne liječi, može dovesti do kroničnog progresivnog oštećenja bubrega i konačno u završnom stadiju bolesti. Ako se ne liječi, može dovesti do kronične progresivne ozljede bubrega i na kraju do završnog stadija zatajenja bubrega[3]. Smrt željeza Smrt željeza je akumulacija nezasićenih masnih kiselina ovisna o željezu. Smrt željeza je akumulacija nezasićenih masnih kiselina ovisna o željezu. Oksidacija fosfolipida dovodi do stanične smrti, koja se uglavnom očituje. Glavna manifestacija smrti željeza je akumulacija o željezu ovisnih intracelularni lipidni peroksidi[4] . [4] . Studije Utvrđeno je da je ozljeda epitelnih stanica bubrežnih tubula usko povezana sa smrću željeza[5]. Wang i sur.

Wang i suradnici [6] otkrili su da je ekspresija glutation peroksidaze 4 (GPX4) u ekspresiji renalnog tubularnog intersticija (GPX4) usko povezana s težinom i napredovanjem DN bolesti. GPX4, kao važna meta za pokretanje programa smrti željeza, senzor je oksidativnog stresa i signalizacije stanične smrti, a smanjena ekspresija GPX4 dovodi do značajnog povećanja živog smanjenja ekspresije GPX4, što rezultira značajnim povećanjem živog kisika u tijelu [ 7] . . Stoga, inhibicija smrti epitelnih stanica bubrežnih tubula putem regulacije smrti željeza. Stoga, inhibicija smrti epitelnih stanica bubrežnih tubula putem regulacije smrti željeza za ublažavanje DN ozljede bubrega može biti učinkovita strategija za liječenje DN. Stoga, inhibicija bubrežnih tubula smrt epitelnih stanica kroz regulaciju smrti željeza može biti učinkovita strategija za liječenje DN.
ThepolisaharidodC. flavusje najobilnija i najvažnija farmakološka Jedna je od najobilnijih i najvažnijih farmakoloških komponenti C. flavus. Eksperimentalna studija pokazala je da igra važnu ulogu u poboljšanju bubrežne funkcije DN i ublažavanju upalnog odgovora. Li et al[8]. Li et al[9]. otkrili su da su Li i suradnici[9] otkrili da je intervencija polisaharida C. flavus značajno poboljšala poremećaje metabolizma glukolipida i toleranciju na inzulin kod dijabetičkih miševa. Li et al. Druga je studija otkrila da je tolerancija na glukozu, 24-satnu glukozu i inzulin kod miševa s dijabetičkom nefropatijom značajno poboljšana nakon intervencije žutim ekstraktom polisaharida. Druga je studija otkrila da su glukoza u krvi, 24-h mikroalbumin u mokraći, kreatinin u krvi (SCr) i dušik uree u krvi (BUN) kod miševa modela dijabetičke nefropatije značajno poboljšani nakon intervencije polisaharida Fructus flavus. i razine ureje u krvi (BUN) bile su značajno smanjene u modelu dijabetičke nefropatije[10]. Liječenje DN polisaharidom iz Flos Chrysanthemi Međutim, specifični mehanizam njegovog djelovanja nije jasan. Stoga je sadašnja U ovoj studiji, prehrana s visokim udjelom masti u kombinaciji s injekcijom streptozotocina (STZ) korištena je za uspostavljanje DN modela štakora.
Stoga smo u ovoj studiji uspostavili DN model štakora dijetom bogatom mastima u kombinaciji s injekcijom streptozotocina (STZ) i promatrali učinak polisaharida C. flavus na smrt željeza u štakora. Stoga je ova studija provedena kako bi se promatrao učinak polisaharida C. flavus na smrt željeza kod štakora hranjenih dijetom bogatom mastima u kombinaciji s injekcijom streptozotocina (STZ), te kako bi se pojasnio mehanizam djelovanja polisaharida C. flavus na DN.

Materijali i metode
1.1 Životinje
Pedeset zdravih muških štakora SD s tjelesnom masom od (200±20) g smješteno je na Institutu za radiologiju Kineske akademije medicinskih znanosti u Pekingu, Kina, pod ciklusom 12-h svjetlo-tama na temperaturi od (25±2) stupnja i relativne vlažnosti od (50±15) posto, i hranjena ad libitum. Prehrana s visokim udjelom šećera i masti (10 posto svinjske masti, 20 posto saharoze, 2,5 posto kolesterola, 67,5 posto konvencionalne stočne hrane), (4,8 posto masti, 20 posto proteina i 59,4 posto ukupnog šećera), Beijing Huafukang Biotechnology Co. Ovaj je eksperiment odobrio bolnica integrativne medicine Cangzhou (CZX2022-KY-023).

1.2 Lijek i pripravak
PolisaharidodFlos Astragalus(čistoća 70 posto, broj šarže S27804), Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. Ltd. pripremljen je s fiziološkom otopinom u koncentraciji od 200, odnosno 800 mg/mL. 800 mg/mL otopina. Irbesartan tablete (lot 8A411), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. pripremljene su u slanoj otopini od 30 mg/mL. riješenje.

 

1.3 Glavni reagensi i instrumenti
Protein u urinu (broj serije C035-2-1), SCr (broj serije C011-2-1), BUN (broj serije C013-2-1) BUN (broj serije C013-2-1), malondialdehid ( MDA, broj serije C003-1- 2), glutation (GSH, partija C006-2-1), ukupni sadržaj iona željeza (broj serije A039-2-1), Nanjing Jiancheng Biological Engineering Research Institute Institute of Biological Engineering , Nanjing, Kina; Transferin (broj serije ab278498), feritin Transferrin (lot ab278498), teški lanac feritina (FTH1, lot ab75973), GPX4 (lot ab252833) i -feritin (lot ab252833). ab252833), -aktin (lot ab179467), Abcam, UK. iMark680 multifunkcionalni enzimski marker, Bio-Rad, SAD. centrifuga Fresco17, Thermo, SAD; 5810 stolna smrznuta centrifuga, Eppndorf, Njemačka; ABI Prism® 7500 kvantifikacija fluorescencije Applied Biosystems, SAD; DYCZ-24DN vertikalni spremnik za elektroforezu, Beijing Liuyi Instrument Factory, Peking, Kina; SH-523 chemiluminescence imaging Ltd, Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Modeliranje, grupiranje i primjena lijekova
Nakon 1 tjedna prilagođenog hranjenja, 10 štakora je nasumično odabrano kao normalni. Preostalih 40 štakora je upućeno na literaturnu metodu [11] kako bi se uspostavio DN model štakora. Štakori su hranjeni hranom s visokim udjelom šećera i masti tijekom 7 tjedana, a zatim su gladovali 12 sati bez vode. Štakori su 7 tjedana hranjeni hranom s visokim udjelom šećera i masnoća, a zatim su 12 sati gladovali hranom i vodom. STZ je injiciran intraperitonealno u dozi od 30 mg/kg. Nakon 72 sata krv je sakupljena iz repne vene kako bi se otkrila nasumična glukoza u krvi, a glukoza u krvi veća od ili jednaka 16,7 mmol/L smatrala se uspješnim modeliranjem dijabetesa. Štakori su hranjeni hranom s visokim udjelom šećera i masnoća tijekom 1 tjedna, a 24-h urina je skupljen iz metaboličkog kaveza.

 

 

1.5.5 Western blot test
Prikupiti bubrežno tkivo, dodati 150 μL pufera za lizu RIPA, homogenizirati Supernatant proteina je zadržan nakon centrifugiranja. Ukupna koncentracija proteina određena je korištenjem kompleta za analizu proteina BCA. Ukupna koncentracija proteina je određena korištenjem BCA kompleta za analizu proteina, a koncentracija proteina je homogenizirana. Jednake količine proteina od 20 ug, 8 posto -12 posto SDS-PAGE korištene su za odvajanje proteina, a protein je prenesen. Membrane su zatvorene s 5 posto obranog mlijeka u prahu na sobnoj temperaturi tijekom 2 sata. Dodana su zečja primarna antitijela protiv štakora Transferin (1:2 000), FTH1 (1:3 000) i GPX4 (1:3 000). 3,000), GPX4 (1:3,000), -aktin (razrijeđen 1:5,000), i inkubiran preko noći na 4 stupnja. Inkubirajte preko noći na 4 stupnja. Membrana je isprana, dodano je sekundarno antitijelo (1:9 000) i inkubirano 2 sata na sobnoj temperaturi. Membrane su isprane s TBST, razvijene ECL kemiluminiscencijom i detektirane korištenjem
Softver Image J korišten je za analizu sivih tonova vrijednosti traka.

 

1.6 Statističke metode
Za analizu je korišten statistički softver SPSS Statistics25.0. Eksperiment Rezultati su izraženi kao xˉ±s, a svi podaci testirani su na normalnost i hi-kvadrat. Svi su podaci testirani na normalnost i hi-kvadrat, te su korišteni t-testovi ako su bili zadovoljavajući, a neparametarski testovi korišteni su ako nisu bili zadovoljavajući. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 rezultata
2.1 Učinci polisaharida flavopiridija na tjelesnu masu i glukozu u krvi natašte modelnih štakora U usporedbi s normalnom skupinom, tjelesna masa štakora u modelnoj skupini bila je značajno smanjena (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Pogledajte tablicu 2.

2.2 Učinci polisaharida flavopiridija na indekse bubrežne funkcije modelnih štakora
U usporedbi s normalnom skupinom, SCr, razina BUN i sadržaj proteina u 24-satnom urinu štakora u modelnoj skupini bili su značajno viši (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 Učinci polisaharida žutog ekstrakta na histopatološku morfologiju bubrega modelnih štakora
Glomerul i tubularna struktura normalne skupine štakora nisu pokazivali nikakve abnormalnosti, a tilakoidna membrana i tilakoidna stroma nisu proliferirane, i nije bilo infiltracije upalnih stanica, itd.; model U modelnim štakorima primijećena je žarišna tubularna degeneracija i atrofija, a glomerularna bazalna membrana bila je blago. Štakori u modelnoj skupini pokazali su žarišnu tubularnu degeneraciju i atrofiju, blago zadebljanu glomerularnu bazalnu membranu, tilakoidnu hiperplaziju i masnu degeneraciju glomerula i tubule. Štakori u svakoj skupini koja je primala lijek pokazali su smanjene lezije, a poboljšanje je bilo očitije u skupini s pozitivnim lijekom i visokom dozom flavopiridium polisaharida. Poboljšanje je bilo očitije u skupini pozitivnih lijekova i visokoj dozi polisaharida Flavopiridium. Pogledajte sliku 1.