Učinak ehinakozida na štakore s cerebralnom ishemijom

Sažetak: Cilj Proučiti učinakEhinozid(ECH) na monoaminske neurotransmitere u izvanstaničnoj tekućini striatuma u štakora s fokalnom cerebralnom ishemijom, te istražiti mogući mehanizam neuroprotektivnog učinka ECH-a na mozak. Metode SD štakori su nasumično podijeljeni u kontrolnu skupinu, modelnu skupinu, ECH skupine s visokim i niskim dozama i skupinu ligustrazina (CXQ). Štakori u svakoj skupini dobivali su odgovarajuće lijekove ili fiziološku otopinu intraperitonealno jednom dnevno tijekom 7 dana. Trećeg dana primjene, navlaka sonde je ugrađena u striatum mozga. Jedan sat nakon zadnje primjene, napravljen je štakorski model fokalne cerebralne ishemije (MCAO). Nakon izrade modela odmah je učinjena mikrodijaliza. Dijalizat je ubrizgan u tekućinsku kromatografiju visoke učinkovitosti-elektrokemijski detektor (HPLC-ECD) kako bi se odredio sadržaj norepinefrina (NE), dopamina (DA), 5-hidroksitriptamina (5-HT), 3 ,4-dihidroksifeniloctena kiselina (DOPAC), homovanilna kiselina (HVA), 5-hidroksi indol octena kiselina (HIAA) u izvanstaničnoj tekućini striatuma svake skupine. Rezultati U usporedbi s kontrolnom skupinom, razine NE, DA i 5-HT u modelnoj skupini su porasle, a porasli su i kiseli metaboliti DOPAC, HVA i HIAA. U usporedbi s modelnom skupinom, smanjio se sadržaj šest tvari u skupinama s visokim i niskim dozama ECH (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) i CXQ skupinama. Zaključak Neuroprotektivni učinak ECH može biti povezan s povećanjem monoaminskih neurotransmitera nakon cerebralne ishemije.

Cistanche prah

Ključne riječi: Ehinozid; Cerebralna ishemija; striatum; HPLC-ECD; Monoaminski neurotransmiteri i metaboliti

Ehinaceozid(ECH) je učinkovita komponenta feniletanoidnih glikozida izoliranih i pročišćenih izCistanche deserticola, poseban pogon u Xinjiangu. Studije su pokazale da ECH ima neuroprotektivne učinke kao što su antioksidacija [1-2], zaštita živaca [3-4], usporava starenje [5] i poboljšava učenje i pamćenje [6-8]. Rezultati Chen Honga i sur. potvrdio je da ECH ima zaštitni učinak na DA neurone u Parkinsonovoj bolesti [9]. Monoaminski neurotransmiteri su vrsta važnih tvari koje reguliraju fiziološke aktivnosti tijela.Sadržaj u tkivu može odražavati procese biosinteze neurotransmitera, otpuštanja, unosa i inaktivacije [10-11]. Trenutačno ne postoji relevantno izvješće o učinku ECH na monoaminske transmitere u mozgu štakora s cerebralnom ishemijom. U ovoj studiji je pomoću tehnologije mikrodijalize mozga ispitivan učinak ECH na sadržaj monoaminskih neurotransmitera u izvanstaničnoj tekućini striatuma štakora s cerebralnom ishemijom, te je preliminarno istražen mogući mehanizam ECH na neuroprotekciju mozga.

Prašak ekstrakta Cistanche tubulosa

1.Materijal

1.1 Pokusne životinje

SD štakori, ♂, tjelesna masa 250~300 g (kupljeno od Xinjiang Experimental Animal Center, licencni broj: 2009-0053).

1.2 Lijekovi i reagensi

ECH je donirao profesor Tu Pengfei, Fakultet farmacije, Sveučilište u Pekingu (čistoća iznad 95%); Norepinefrin (NE), dopamin (DA), 5-hidroksitriptamin (5-HT), 3,4-dihidroksifeniloctena kiselina (DOPAC), homovanilna kiselina (HVA)

5-hidroksi indol octena kiselina (HIAA) je Sigma; Tetrametilpirazin hidroklorid za injekciju (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Cink fosfatni cement (proizvod Shanghai Medical Instruments Co., Ltd., sastavljen od tekućine i praha, pomiješanih s vremenom); Natrijev 1-alkil sulfat (DIKMA); Hidrat limunske kiseline (Tianjin Jinke Fine Chemical Research Institute); Trinatrijev citrat (Acros); Dinatrijeva etilendiamin tetraoctena kiselina (JTTakerChemicalco); metanol (DIKMA); Acetonitril (DIKMA); Perfuzijska tekućina za cerebralnu mikrodijalizu je injekcija natrijevog klorida (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); Sva voda koja se koristi je voda za ponovnu paru.

1.3 Instrument

Američki BAS4100 aparat za stereotaksiju mozga štakora; CMA/12 sonda i navlaka sonde; CMA/120 uređaj za svjesne životinje; CMA/402 mikro pumpa; CMA/150 automatski sakupljač uzoraka za niske temperature. Infuzijska pumpa Esa 5600A; Infuzijska pumpa Esa 5600A; Esa 542 automatski uređaj za ubrizgavanje uzorka; Esin elektrokemijski detektor CoulArray; Radna elektroda od staklenog ugljika i referentna elektroda Ag/AgCl; C18 kolona (DIKMA, ODS5 μm, 150 mm × 4,6 mm); radna stanica za kromatografiju CoulArraywin (tvrtka Esa); Vrtložna miješalica (tip QL-861); Stolni tester kiselosti (HANNA-211); Stolna centrifuga velike brzine (tip XYJ-2).

2.metoda

Cistanche dodatak u mojoj blizini—imdokazati pamćenje

Kliknite ovdje za pregled proizvoda Cistanche Improve Memory

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.1 Grupiranje i administracija životinja

Trideset štakora nasumično je podijeljeno u pet skupina: ① Kontrolna skupina: 1 ml · kg-1 · d-1 normalne fiziološke otopine; ② Skupina modela: fiziološka otopina 1 ml · kg-1 · d-1; ③ Model+ligustrazin (CXQ) 30 mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Model+ECH skupine visoke i niske doze (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; Sve životinje u svakoj skupini su injicirane intraperitonealno tijekom 7 dana.

2.2 Metoda modeliranja i mikrodijaliza

Svaki štakor je zakopan s kanilom trećeg dana primjene: štakori su anestezirani s 10% kloral hidratom (3,5 ml · kg-1), fiksiranim na BAS4100 aparatu za stereotaksiju mozga, i kateter sonde implantiran je u lijevi striatum (koordinate AP: +0.2 mm; ML: - 3.0 mm; DV: - 3.5 mm) u vezi s "Stereotaktičkom kartom štakorskog mozga" Georgea Paxinosa. Nakon zadnje primjene, štakori su anestezirani 1 sat kasnije, a štakorima je napravljen model žarišne cerebralne ishemije (MCAO model) pomoću Yang Zanzhang [12] poboljšane Longa metode šavova. Riblji konac u kontrolnoj skupini bio je umetnut samo 10 mm, a ostali koraci bili su isti kao iu operativnoj skupini. Nakon modeliranja, umetnite sondu za mikrodijalizu u stanju svjesnosti i slobodnog kretanja i upotrijebite Ringerovu otopinu za μ. Cerebralni mikrodijalizat je sakupljen na 4 stupnja, a epruveta s dijalizatom je sakupljena nakon 20 minuta. Nakon što se prikupi svaka epruveta dijalizata, treba je odmah pohraniti u hladnjak na - 20 stupnjeva i prenijeti u hladnjak na - 70 stupnjeva nakon dijalize. Stopa oporavka sonde izmjerena je prije upotrebe, što je korišteno za pretvorbu koncentracije monoaminskih neurotransmitera u dijalizatu.

što radi cistanche tubulosa—Poboljšava pamćenje

2.3 HPLC-ECD analiza

Konfiguracija mobilne faze: mobilna faza sadrži 829 ml 0.15mol · L-1 pufera limunske kiseline i natrijevog citrata po litri; 0.1mol · L-1 dinatrij EDTA 1ml; Metanol 150ml; Natrijev {{10}}alkil sulfat 0.283g. Postavite brzinu protoka mobilne faze na 0.7ml · min-1, a temperaturu peći na stupcu na 28 stupnjeva. Radni napon elektrokemijskog detektora je 200mV, 400mV i 600mV, s 2, 3, odnosno 4 kanala; Dobitak je 2nA. Volumen injekcije je 25 μl. Standardna krivulja nacrtana je s 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 mg · L-1 gradijentnom miješanom standardnom otopinom.

2.4 Statistička obrada

Eksperimentalni podaci izraženi su u x polju ± s, a ponovljeni podaci mjerenja analizirani su pomoću statističkog softvera SPSS13.0.

Slika 1-6 prikazuje promjene u razinama NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA i 5-HT u izvanstaničnoj tekućini striatuma štakora. Sa slike je vidljivo da nakon cerebralne ishemije dolazi do metaboličkog poremećaja monoaminskih neurotransmitera u izvanstaničnoj tekućini striatuma, te je povećan sadržaj svakog neurotransmitera. Unutar određenog raspona povećanje je očitije s produljenjem vremena ishemije. Nakon 90 minuta ishemije, koncentracija DA i NE u izvanstaničnoj tekućini striatuma bila je više od tri puta veća od razine kontrolne skupine. Razine NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA i 5-HT u kontrolnoj skupini smanjile su se s visokih na niske, što može biti povezano s privremenom ishemijom lijevog mozga nakon podvezivanja lijeve zajedničke karotidne arterije te oštećenja nastala umetanjem sonde. Iz krivulje promjene, ECH i CXQ mogu smanjiti vršnu koncentraciju DA, DOPAC, HIAA, HVA i 5-HT nakon cerebralne ishemije, a CXQ i visoka doza ECH su očitiji. Pomak krivulje vremenskog tijeka svakog neurotransmitera prema dolje ukazuje da ECH može inhibirati povećanje neurotransmitera i njihovih metabolita u mozgu štakora s cerebralnom ishemijom.

                                                                           Slika 2. Učinak ehinozida na izvanstaničnu razinu DA u striatumu štakora

Slika 3 Učinak ehinozida na izvanstaničnu razinu DOPAC-a u striatumu štakora Slika 4 Učinak ehinozida na izvanstaničnu razinu HIVV-a u striatumu štakora

Slika 5 Učinak ehinozida na izvanstaničnu razinu HVA u striatumu štakora Slika 6 Učinak ehinozida na izvanstaničnu razinu 5-HT instriatuma štakora

4.Rasprava

Superman cistanchebiljka—Improve memorije

【Tražite više】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Mehanizam ozljede mozga uzrokovane cerebralnom ishemijom je složen. U slučaju cerebralne ishemije, monoaminski neurotransmiteri u mozgu su poremećeni, a sadržaj NE, DA i 5-HT značajno smanjen. Što je cerebralna ishemija teža, to su niži sadržaji NE, DA i 5-HT u moždanom tkivu [13]. Metodom intracerebralne mikrodijalize dokazano je da se sadržaj monoaminskih neurotransmitera povećavao u izvanstaničnoj tekućini tijekom cerebralne ishemije, trajao je tijekom cijelog ishemijskog razdoblja, te se dalje povećavao s produljenjem ishemijskog vremena. Eksperimentalni rezultati bili su u skladu s izvješćem [14].Ehinozidje učinkovita komponenta feniletanoidnih glikozida izoliranih i pročišćenih iz Cistanche deserticola, posebne biljke u Xinjiangu. Ima mnogo neuroprotektivnih učinaka kao što su usporavanje starenja, poboljšanje učenja i pamćenja te anti-neuronska apoptoza. U ovoj studiji, domaća napredna mikrodijaliza mozga u kombinaciji s HPLC-ECD tehnologijom detekcije korištena je za preliminarno istraživanje učinkaEhinozidna monoaminske neurotransmitere i njihove metabolite u izvanstaničnoj tekućini striatuma pokusnih štakora s cerebralnom ishemijom. Rezultati su pokazali da ECH može smanjiti povećanje monoaminskih neurotransmitera u izvanstaničnoj tekućini striatuma uzrokovano cerebralnom ishemijom, te ima bolji učinak na poboljšanje oštećenja cerebralno ishemijskog tkiva.