Razlike u sastavu i ljekovitoj učinkovitosti sirovih proizvoda i proizvoda obrađenih parom od vina od Cistanches Herba

Sažetak:

CiljUsporediti promjene u kemijskom sastavu i ljekovitoj učinkovitosti Roucongronga (Cistanches Herba) prije i nakon obrade, kako bi se razjasnio princip pirjanja s vinom.

Metode LC-MS primijenjene su za identifikaciju tipova kemijskog sastava prije i nakon kuhanja Cistanches Herba, u kombinaciji s multivarijatnom statističkom analizom kako bi se pronašao nesrazmjer u komponentama prije i nakon pirjanja s vinom. Razlika u učinkovitosti dokazana je štakorskim modelom nedostatka hidrogeniranog kortizona u bubrežnom jangu.

RezultatiIdentificirano je ukupno 45 kemijskih komponentiUzorci Cistanches Herba; Spojevi koji su pridonijeli razlikama izmeđuCistanches Herba i Cistanches Herba pirjane u vinusuehinakozidverbaskozid, izoakteozid i tubulozid B; Ukupni ekstrakt feniletanoidnih glikozida iz Cistanches Herba ima bolji učinak na poboljšanje modela štakora s nedostatkom yang bubrega nego Cistanches Herba pirjane u vinu. Zaključak Sastav Cistanche se mijenja nakon pirjanja s vinom, a učinak na nedostatak yanga u bubrezima je pojačan. Sastojci preobrazbe Cistanches Herbato pirjane u vinu Cistanches Herba mogu biti aktivni sastojci koji jačaju bubrege i podržavaju yang.

Ključne riječi: Cistanches Herba; u vinu pirjane Cistanches Herba;nedostatak yanga bubrega;ehinakozid;verbaskozid; izoakteozid; tubulozid B

PRODAJE SE VISOKOKVALITETNA TRAKA CISTANCA

Služba podrške Wecistanchea

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/telefon:+86 15292862950

Poznat je kao "ginseng" i uglavnom je rasprostranjen u unutarnjoj Mongoliji, Ningxia (Azuqi), Gansu (Changma), Xinjiang i drugim regijama [1]. Cistanche je tople naravi, slatkog i slanog okusa, a ulazi u meridijane bubrega i debelog crijeva. Hrani jetru i bubrege, blagotvorno djeluje na esenciju i krv, vlaži crijeva i ublažava zatvor. Može se koristiti kod nedostatka yanga bubrega, impotencije i neplodnosti, bolova u struku i koljenima, slabosti mišića i kostiju, suhih crijeva i zatvora [2]. Suvremena istraživanja pokazuju da mesnate stabljike s ljuskastim listovima Cistanche uglavnom sadrže razne kemijske komponente kao što su feniletanol glikozidi, ciklopentan eter terpeni i njihovi glikozidi, lignani, šećeri itd. [3], te imaju višestruke farmakološke učinke kao što suprotiv starenja,antioksidans,protiv demencije,protiv umora, te vlaženje crijeva i ublažavanje zatvora [4].

Nakon pirjanja s vinom, pojačava se učinak Cistanche na tonificiranje bubrega i jačanje janga. Princip obrade nije jasno objašnjen. Fan Yanan i sur. [5-7] je proučavao učinke Cistanche na defekaciju štakora, imunološku funkciju, crijevne neurotransmitere i povezane ekspresije gena prije i nakon obrade. Da i sur. upotrijebio utjecaj feniletanol glikozida prije i poslije obrade kako bi objasnio njen princip obrade; Zhang Chao i sur. [8] su koristili promjene u sadržaju feniletanol glikozida prije i nakon obrade kako bi objasnili princip obrade; Zhang Shuyun i sur. [9] koristili su promjene u sadržaju betaina prije i nakon obrade kako bi objasnili učinak obrade na Cistanche. Postojeća literatura o preradi Cistanche uglavnom je usmjerena na farmakologiju, a istraživanja komponenti također su usmjerena na promjene u sadržaju pojedinih komponenti, nedostajući sustavno proučavanje razlika komponenti. U ovom eksperimentu korištena je tehnologija tekućinske kromatografije-masene spektrometrije (LC-MS) u kombinaciji s multivarijatnom statističkom analizom kako bi se identificirale kemijske komponente u Cistancheu, kako bi se pronašli markeri razlika između sirovog Cistanchea i proizvoda od vina te proučila razlika u učinkovitosti sirovi Cistanche i proizvodi pirjani od vina kroz štakorski model bubrežnog nedostatka yanga izazvanog hidrokortizonom, kako bi se objasnila materijalna osnovaCistanche u toniranju bubrega i promicanju yangai princip prerade cistanče pirjane u vinu.

PRODAJE SE VISOKOKVALITETNA TRAKA CISTANCA

1 Materijali

1.1 Instrumenti

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL elektrostatsko polje tandem ion trap maseni spektrometar visoke rezolucije (Thermo Fisher Scientific, SAD), Theraio Xcaliber radna stanica; BT125D 1/100000 elektronička vaga (Sartorius Instrument System, Njemačka); KQ500DE CNC ultrazvučni čistač (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); XHF-D raspršivač velike brzine (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Multiskan FC čitač mikropločica (Thermo Scientific); HC-3518 centrifuga velike brzine (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B višenamjenski snimač dobrovoljnih aktivnosti štakora (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Lijekovi

Metanol čistoće masene spektrometrije (Fisher); mravlja kiselina za masenu spektrometriju (maseni udio 99%, Sigma Aldrich); voda (Watsons destilirana voda); Jinkui Shenqi pilule (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd. Pharmaceutical Factory, serijski broj 1701653); hidrokortizon sukcinat natrijeva sol (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., serija broj 011705067); pribor za superoksid dismutazu (SOD) (broj serije 20170115) i komplet za malondialdehid (MDA) (broj serije 20170117) kupljeni su od Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Testosteron (T) i estradiol (E2) određeni su u Qingdao Kechuang Quality Inspection Center, a kreatinin (CREA) i dušik uree u krvi (BUN) određeni su u Analysis and Testing Center of Inner Mongolia Medical University.

1.3 Životinje

100 muških SD štakora, težine 180-200 g, kupljeno je od eksperimentalne životinjske farme Xinglong u okrugu Haidian, Peking, broj licence: SCXK (Peking) 2016-0003. Ovaj eksperiment na životinjama odobrio je Etički odbor Pekinškog sveučilišta kineske medicine, etički broj: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Uzorci

Šest serija Cistanche deserticola identificirao je kao autentične profesor Li Xiangri sa Škole kineske medicine Pekinškog sveučilišta kineske medicine, a izvedene su iz osušenih mesnatih stabljika s ljuskastim listovima Cistanche deserticola YC Ma, biljke iz obitelji Orobanchaceae. Detaljni podaci o uzorcima prikazani su u tablici 1.

Tablica 1. Informacijski list uzoraka Cistanches Herba

2 Metode

2.1 Priprema uzorka

2.1.1 Priprema sirovina Uzmite čistu Cistanche deserticola, omekšajte je, narežite na deblje ploške i osušite.

2.1.2 Priprema proizvoda od vina

Uzmite 100 g ploški Cistanche deserticola, dodajte 30 ml rižinog vina, dobro promiješajte i pirjajte dok se vino ne upije. Dinstati u vodi 12 h, izvaditi i malo ohladiti te osušiti. Pogledajte sliku 1 za uzorke sirove Cistanche deserticole i Cistanche deserticole pirjane u vinu.

2.2 Istraživanje razlike sastojaka Cistanche deserticola prije i nakon pirjanja u vinu

2.2.1 Priprema otopine

Uzmite oko {{0}}.2 g praha suhog uzorka (propuštenog kroz 65-mrežasto sito), točno izvažite, stavite u smeđu odmjernu tikvicu od 50 mL, dodajte 25 mL 50% metanola vodena otopina, čvrsto zatvoriti, izvagati masu, namakati 30 minuta, ultrazvučno tretirati 40 minuta (snaga 250 W, frekvencija 35 kHz), ohladiti, ponovno izvagati, dodati 50% vodenu otopinu metanola da nadoknadi izgubljenu masu, protresti dobro, ostavite stajati, filtrirajte supernatant kroz mikroporoznu filtarsku membranu od 0,22 μm i stavite filtrat u smeđu bocu s tekućom fazom kako biste dobili otopinu.

PRODAJE SE VISOKOKVALITETNA TRAKA CISTANCA

2.2.2 Kromatografski uvjeti

Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 kromatografska kolona (100 mm×2,1 mm, 1,7 μm), temperatura kolone od 35 stupnjeva; temperatura komore za uzorak od 10 stupnjeva, volumen ubrizgavanja uzorka od 3 μL, metanol (A)-0.1% vodena otopina mravlje kiseline (B) kao mobilna faza, gradijent eluacije: 0-4 min, 10%{ {13}}% metanola; 4-18 min, 26%-40% metanola; 18-24 min, 40%-100% metanola; 24-28 min, 100% metanol. Volumni protok bio je 0,3 mL/min, a valna duljina detekcije bila je 330 nm.

2.2.3 Uvjeti masene spektrometrije

Korišten je ionizacijski izvor elektrospreja (ESI), skeniranje u modu negativnih iona, temperatura kapilare bila je 350 stupnjeva, volumenski protok plina u omotaču bio je 30 arb, volumenski protok pomoćnog plina bio je 10 arb, napon spreja bio je 3

KV, kapilarni napon bio je -35 V, napon leće cijevi bio je -110 V, raspon skeniranja bio je m/z 100-1 000, sustav prikupljanja podataka bio je Xcalibur 2.1.

2.2.4 Analiza glavnih komponenti (PCA)

Nakon dobivanja dvodimenzionalne matrice točnih parova podataka o masi i vremenu zadržavanja, instrumentna ploča će prikazati sve automatski uvezene točne informacije o vremenu zadržavanja, a za analizu će se koristiti PCA metoda proširenog statističkog modula.

2.2.5 Ortogonalna parcijalna diskriminantna analiza najmanjih kvadrata (OPLS-DA) LCMS kombinira visoku separaciju tekućinske kromatografije s visokom osjetljivošću masene spektrometrije. Prikupljeni podaci su prilično veliki, a za obradu podataka potrebna je multivarijatna statistička analiza. OPLS-DA dijeli podatke u dvije skupine i koristi nadzirani statistički model za dobivanje velikog broja ortogonaliziranih spektara, koji jasno pokazuju razlike između dvije skupine uzoraka. U formatu S-plota dodatne slike, svaka točka predstavlja točan par podataka o vremenu zadržavanja mase, X-os predstavlja varijablu, što je podatkovna točka dalje od nulte točke, veći je doprinos točke razlici uzorka ; Y-os predstavlja korelaciju između uzoraka u istoj skupini uzoraka, što je točniji par podataka o masi i vremenu zadržavanja udaljeniji od nulte točke, to je korelacija jača. Stoga parovi podataka o vremenu zadržavanja točne mase na oba kraja krivulje u obliku slova S predstavljaju najpouzdanije karakteristične ione iz svake skupine uzoraka.

PRODAJE SE VISOKOKVALITETNA TRAKA CISTANCA

2.2.6 Analiza strukture masenom spektrometrijom

Nakon dobivanja karakterističnih iona, elementarni sastav i usklađivanje spojeva izvršeni su izračunavanjem precizne relativne molekularne mase i kombiniranjem postojeće baze podataka i relevantne literature za identifikaciju diferencijalnih komponenti.

2.3 Studija o razlici u učinkovitosti prije i nakon pirjanja s vinom

2.3.1 Priprema ekstrakta Cistanche deserticola

Cistanche deserticola (broj serije 160901) i odgovarajući prah Cistanche deserticola pirjan u vinu ekstrahirani su u skladu s uvjetima pod "2.2.1", filtrirani nakon ultrazvučne obrade, ponovljeni dvaput, filtrat je kombiniran, koncentriran vakuumskom destilacijom i zamrznut- osušen.

2.3.2 Grupiranje pokusa na životinjama i primjena lijeka

Slika 1 Cistanches Herba A i Cistanches Herba B pirjane u vinu

(1) Grupiranje: Štakori su imali slobodan pristup vodi i prehrani. Nakon 1 tjedna adaptiranog hranjenja, nasumično su podijeljeni u 5 skupina (Tablica 2), s 10 štakora u svakoj skupini, i to normalna skupina, skupina modela, skupina sirove Cistanche deserticola (PR), skupina Cistanche deserticola pirjana u vinu (PW). , i pozitivna kontrola Jinkui Shenqi Pill group (JK). (2) Modeliranje: Osim normalne skupine, sve ostale četiri skupine dobile su injekciju hidrokortizon natrij sukcinata im, s dozom od 20 mg/kg, tijekom 14 uzastopnih dana. Normalnoj skupini ubrizgana je ista doza fiziološke otopine. Promatrano je opće stanje štakora u svakoj skupini kako bi se utvrdilo pokazuju li simptome poput straha od hladnoće, sklonosti toplini, hladnih udova, bistre i duge mokraće, sklupčanih i zakrivljenih leđa, dosadne i neuredne dlake i mentalne depresije. Istodobno je mjerena tjelesna težina, broj spontanih aktivnosti, unos hrane, unos vode, izlučivanje urina i drugi pokazatelji štakora u svakoj skupini.

(3) Primjena: Doza za štakore izračunata je na temelju kliničke doze Jinkui Shenqi pilula i Cistanche deserticola. Doziranje svake skupine Cistanche deserticola bilo je 1,80 g/kg u smislu sirove količine lijeka. Specifična doza prikazana je u tablici 2. Svaki ekstrakt Cistanche deserticola i Jinkui Shenqi pilule pripremljen je u otopine određene koncentracije s deioniziranom vodom. Otopina je primjenjivana intragastrično svaki dan s intragastričnim volumenom od 10 mL/kg tijekom 30 uzastopnih dana. Normalnoj skupini i modelnoj skupini primijenjene su intragastrično jednaki volumen deionizirane vode svaki dan. Tjelesna težina je mjerena tjedno, a intragastrični volumen je prilagođen prema tjelesnoj težini štakora. Nakon primjene, štakori su izgladnjivani 12 sati. Nakon pentobarbitalne anestezije, krv je sakupljena iz abdominalne aorte za detekciju serumskog indeksa. Bubrezi, testisi, epididimis, sjemene mjehuriće i prostata uklonjeni su za relevantnu detekciju indeksa.