Razlika feniletanol glikozida u tablici Cistanches Herba iz 2 domaćina BaRazlika feniletanol glikozida u tablici Cistanches Herba iz 2 domaćina na temelju UPLC-QQQ-MS i PLS-DA analize analizirane na UPLC-QQQ-MS i PLS-DA analizi
May 30, 2025
Cistanche deserticolaje višegodišnja holoparazitska biljka iz obitelji Orobanchaceae. To je osušena mesnata stabljika prekrivena ljuskastim listovimaCistanche deserticola YC Ma[1-2]. Ova biljka je uglavnom rasprostranjena u unutarnjoj Mongoliji, Xinjiangu i Gansuu, gdje parazitiraHaloxylon ammodendron (CA Mey.) Bunge, kserofitna pustinjska biljka Chenopodiaceae [3-4]. Primarne aktivne komponenteCistanche deserticolauključuju feniletanoidne glikozide, iridoide i polisaharide [5-7], koji pokazuju svojstva kao što su zaštita reproduktivne funkcije, antioksidacija i zaštita jetre [8-10]. S više od 2000 godina upotrebe u Kini, zauzima prvo mjesto u receptima tradicionalne kineske medicine usmjerenih na jačanje vitalnosti i drugo mjesto u formulacijama protiv starenja [11]. Međutim, zbog prekomjerne žetve i uništavanja okoliša, divlji resursiCistanche deserticolasu na rubu izumiranja, što je dovelo do svrstavanja u nacionalno zaštićenu biljku (II. kategorija) i uvrštenja uMeđunarodni popis zaštite samoniklog bilja[12]. Kako bi se riješila neravnoteža između ponude i potražnje na tržištu lijekova, umjetna kultivacija postala je ključna za održivi razvojCistanche deserticolaindustrija.
Ekstrakt Cistanche deserticola na prodaju
Nedavne studije su izvijestile o uspješnoj inokulacijiCistanche deserticolanaAtriplex canescens[13], zimzeleni grm iz obitelji Chenopodiaceae. Obično se naziva "biološki desalinizator",Atriplex canescensje visokokvalitetna vrsta drveća za poboljšanje slano-alkalnog tla [14]. KultiviranjeCistanche deserticolanaAtriplex canescensnudi značajne prednosti, poput visokog prinosa i vrhunske kvalitete. Kao rezultat toga, ocjenjujući kvalitetuAtriplex canescens-Cistanche deserticolapostala žarište istraživanja [15-16]. Dosadašnja istraživanja uglavnom su bila usmjerena na ljekovita svojstva osušeneCistanche deserticola, dok su studije o aktivnim komponentama u svježem obliku i dalje rijetke. Osobito nakon uključivanjaCistanche deserticolakao hrana i ljekovita tvar pod sustavom upravljanja ispitivanjima (obavijest br. . 9 Nacionalne zdravstvene komisije, 2023.), njen razvoj i upotreba kao ljekovite biljke s dvostrukom namjenom privukli su značajnu pozornost u području tradicionalne kineske medicine [17]. svježeCistanche deserticolaje omiljen zbog svog izvrsnog okusa i praktičnosti, što ga čini vrlo obećavajućim za razvoj. Svježi ljekoviti materijali odnose se na neprerađene svježe biljne, životinjske ili gljivične tvari s terapeutskim ili zdravstvenim svojstvima. Među 2000 često korištenih kineskih ljekovitih biljaka, 486 su svježe vrste [18].
Metoda tekućinske kromatografije ultraučinkovitosti i trostruke kvadrupolne tandemske masene spektrometrije (UPLC-QQQ-MS) vrlo je osjetljiva, što je čini prikladnom za detekciju niskih koncentracija i složenih komponenti [19]. Za rješavanje problema visokog sadržaja vode uCistanche deserticola, gdje su feniletanoidni glikozidi skloni enzimatskoj hidrolizi što rezultira smanjenim sadržajem, metoda sušenja s inaktivacijom enzima učinkovito čuva sadržaj feniletanoidnog glikozida [20]. Ova studija koristi UPLC-QQQ-MS za procjenu 8 feniletanoidnih glikozida, uključujući ehinakozid i akteozid, kao ključne aktivne komponente u svježemCistanche deserticolaiz dvije biljke domaćina [21-22]. Studija ispituje razlike u sadržaju komponenti soka i taloga iz svježeg sokaCistanche deserticolauzgajana na dva hosta. Osim toga, ostatak je podvrgnut tretmanu inaktivacije enzima na 80 stupnjeva tijekom 5 minuta, nakon čega je uslijedilo sušenje, kako bi se dodatno usporedilo zadržavanje aktivnih komponenti uCistanche deserticola. Nalazi imaju za cilj pružiti znanstvene dokaze i tehničku podršku za dvostruku namjensku vrijednost svježegCistanche deserticolai optimizaciju njegovih tehnika obrade.
1 Instrumenti i materijali
1.1 Instrumenti
1290-6460 tekućinska kromatografija ultraučinkovitosti - trostruki kvadrupolni tandem maseni spektrometar (Agilent Technologies, SAD).
Elektronska analitička vaga AL104 (Mettler-Toledo, Švicarska).
H-2050R centrifuga (Changsha Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd.).
SB25-12DTD ultrazvučni čistač (Ningbo Xinzhi Biological Technology Co., Ltd.).
1.2 Materijali
TheAtriplex canescens-Cistanche deserticolaiHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolauzorci su prikupljeni u ožujku, travnju i svibnju 2024Cistanche deserticolabaza za uzgoj u gradu Xiquan, okrug Jingtai, provincija Gansu. Uzorke je identificirao profesor Sun Xuegang s Poljoprivrednog sveučilišta Gansu kao mesnate stabljikeCistanche deserticola YC Mas listićima ljestvice.
Referentni standardi:
Echinacoside (broj serije: 23031605; čistoća: 99,74%).
Akteozid (broj serije: 21102103; čistoća: 98,83%).
Cistanosid A (broj serije: 23041703; čistoća: 98,30%).
Izoakteozid (broj serije: 23052508; čistoća: 99,90%).
2'-acetilakteozid (broj serije: 210053102; čistoća: 97,12%).
Salidrozid (broj serije: 22051208; čistoća: 98,43%).
Cistanosid B (broj serije: 20120903; čistoća: 98,57%).
Tubulozid A (broj serije: 21060302; čistoća: 93,24%).
Svi su kupljeni od Chengdu Pfeide Biotechnology Co., Ltd.
Reagensi:
Metanol (broj serije: O1140576, kromatografski čist).
Acetonitril (broj serije: S3641440, kromatografski čist). Oba su kupljena od Shanghai Anpu Experimental Technology Co., Ltd.
Mravlja kiselina (broj serije: 20230710, kromatografski čista) kupljena je od Tianjin Kermio Chemical Reagent Co., Ltd.
Pročišćena voda (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.).
2 Metode i rezultati
2.1 Metode
2.1.1 Priprema uzorka
Tri serije odAtriplex canescens-Cistanche deserticola(brojevi serija: 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) i tri serijeHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticola(brojevi serija: 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), ukupno šest serija, s pet biljaka po šarži. Biljke su isprane vodom.
Obrada:
Uzorci su zdrobljeni i iscijeđeni sok, što je rezultiralo sokom i ostatkom iz dvaju domaćinaCistanche deserticola.
Ostaci su sušeni pod dva uvjeta:
Bez inaktivacije enzima.
Uz inaktivaciju enzima (5 minuta na 80 stupnjeva u pećnici).
Osušeni ostaci su pohranjeni za daljnju analizu. Svaka serija medicinskog materijala podijeljena je u četiri skupine, kao što je prikazano u tablici 1.
Kartica. 1 Uzorak informacija o grupiranju
| Skupina | Tip | Atriplex canescens-Cistanche deserticola | Haloxylon ammodendron-Cistanche deserticola |
|---|---|---|---|
| ① | Talog | C1 | S1 |
| ② | Sok | C2 | S2 |
| ③ | Enzimom inaktivirani ostatak (5 min sušenja, usitnjen) | C3 | S3 |
| ④ | Ostatak koji nije inaktiviran enzimima (osušen i zdrobljen) | C4 | S4 |
2.1.2 Kromatografski uvjeti
stupac: kolona Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 (2,1 mm × 150 mm, 1,8 μm).
Brzina protoka: 0,3 mL/min.
Volumen injekcije: 1 μL.
Temperatura kolone: 35 stupnjeva.
Mobilna faza: 0,1% mravlja kiselina u vodi (A) i acetonitrilu (B).
Vrijeme analize: 12 minuta.
Gradijent eluacije:
0–1,5 min: 10% → 20% B.
1,5–3 min: 20% → 30% B.
3–5 min: 30% → 32% B.
5–8 min: 32% → 38% B.
8–9,6 min: 38% → 10% B.
9,6–12 min: 10% B.
Kromatogrami miješanih referentnih standarda i ispitnih uzoraka prikazani su na slici 1.(Molimo potvrdite je li mobilna faza 0,01% mravlja kiselina u vodi (A) i acetonitrilu (B).)
Slika. 1 Kromatogrami referentnih tvari (A) i uzorka (B) 1−salidrozid; 2−ehinakozid; 3-cistanozidA; 4−tubulozidA; 5-akteozid; 6-izoakteozid; 7-2'-acetilakteozid; 8-tubulozid B.
2.1.3 Uvjeti masene spektrometrije
Vrsta izvora iona: Ionizacija elektrosprejom (ESI).
Način rada: Praćenje višestrukih reakcija (MRM) u načinu rada negativnih iona.
Temperatura izvora iona: 350 stupnjeva.
Tlak nebulizatora: 35 psi.
Kolizijski plin: Dušik, postavljen na srednju razinu.
Parametri masene spektrometrije za komponente koje se analiziraju prikazani su u tablici 2.
2.1.4 Priprema miješane standardne otopine
Točno izvažite odgovarajuće količine referentnih standardaehinakozid, akteozid, cistanozid A, izoakteozid, 2'-acetilakteozid, salidrozid, cistanozid B, itubulozid A, i stavite ih u jantarne boce reagensa od 10 mL. Dodajte 50% metanola kako biste pripremili miješanu standardnu otopinu s koncentracijom od 0,2 mg·mL⁻¹ i pohranite je za kasniju upotrebu.
2.1.5 Priprema ispitnih otopina
Točno odvažite 0,2 g svježegAtriplex canescens-Cistanche deserticolaostatak (C1), svježiHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolaostatak (S1), osušenAtriplex canescens-Cistanche deserticolaostataka (C3, C4), i sušiHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolaostaci (S3, S4). Stavite uzorke u jantarne odmjerne tikvice od 10 mL, dodajte 50% metanola, dovedite do oznake i zabilježite masu. Namačite 0,5 sati, ultrazvukom 40 minuta (250 W, 35 kHz), ohladite na sobnu temperaturu i ponovno zabilježite masu. Upotrijebite 50% metanola da nadoknadite gubitak težine, dobro promiješajte, centrifugirajte i ostavite otopinu da se slegne. Filtrirajte supernatant kroz mikroporoznu membranu od 0,22 μm kako biste dobili filtrat.
Za svježeAtriplex canescens-Cistanche deserticolasok (C2) i svježiHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolasoka (S2), uzmite 10 mL od svakog, točno izvažite, dobro promiješajte, centrifugirajte i ostavite otopinu da se slegne. Filtrirajte supernatant kroz mikroporoznu membranu od 0,22 μm kako biste dobili filtrat.
2.1.6 Studija linearnosti
Odgovarajuće količine miješane standardne otopine pripremljene u odjeljku 2.1.4 razrijeđene su kako bi se stvorio koncentracijski gradijent51,2, 128,0, 320,0, 800,0, 4000,0 i 20000,0 ug·L⁻¹. Uzorci su ubrizgavani sekvencijalno od niske do visoke koncentracije prema uvjetima opisanim u odjeljcima 2.1.2 i 2.1.3. Provedena je linearna regresija, korištenjem koncentracije injekcije kao X-osi i površine vrha kao Y-osi. Linearni odnosi osam komponenti prikazani su u tablici 3.
Tab. 3 Rezultati ispitivanja linearnog odnosa 8 komponenti u tablici Cistanches Herba
| komponenta | Regresijska jednadžba | r | Linearni raspon (ug·L⁻¹) |
|---|---|---|---|
| Ehinakozid | Y = 16.410 × X − 0.804 | 0.9996 | 51.2–20,000.0 |
| Akteozid | Y = 102.794 × X − 55.793 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Izoakteozid | Y = 31.007 × X − 45.169 | 0.9999 | 51.2–20,000.0 |
| 2'-acetilakteozid | Y = 110.235 × X − 8.953 | 0.9992 | 51.2–20,000.0 |
| salidrozid | Y = 19.678 × X − 0.557 | 0.9993 | 51.2–20,000.0 |
| Tubulozid A | Y = 26.785 × X − 13.630 | 0.9997 | 51.2–20,000.0 |
| Tubulozid B | Y = 71.810 × X − 0.993 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| cistanozid A | Y = 0.578 × X + 1.531 | 0.9994 | 51.2–20,000.0 |
2.1.7 Ispitivanje preciznosti
Mješovita standardna otopina pripremljena prema uvjetima u odjeljku 2.1.4 razrijeđena je s 50% metanola i ubrizgana šest uzastopnih puta pod uvjetima iz odjeljaka 2.1.2 i 2.1.3. Relativne standardne devijacije (RSD) područja vrha zaehinakozid, akteozid, izoakteozid, 2'-acetilakteozid, salidrozid, cistanozid B, tubulozid A, icistanozid Abile su 0,95%, 1,47%, 0,56%, 1,05%, 0,93%, 1,08%, 1,19%, odnosno 0,91%, što ukazuje na dobru preciznost.
2.1.8 Test stabilnosti
Jedan uzorak odCistanche deserticola(S4) pripremljen je pod uvjetima opisanim u odjeljku 2.1.5. Ispitna otopina je ubrizgana i analizirana nakon 0, 2, 4, 8, 12 i 24 sata pod uvjetima opisanim u odjeljcima 2.1.2 i 2.1.3. RSDs vršnih područja zaehinakozid, akteozid, izoakteozid, 2'-acetilakteozid, salidrozid, cistanozid B, tubulozid A, icistanozid Abile su 1,46%, 0,79%, 0,95%, 1,29%, 1,22%, 0,56%, 0,49%, odnosno 1,18%, što ukazuje da je otopina uzorka bila stabilna unutar 24 sata.
2.1.9 Test ponovljivosti
Jedna serija odCistanche deserticola(S4) uzorak (broj serije: 20240420-2) pripremljen je u šest paralelnih ispitnih otopina pod uvjetima opisanim u odjeljku 2.1.5. Uzorci su ubrizgani i analizirani pod uvjetima opisanim u odjeljcima 2.1.2 i 2.1.3. RSD sadržaja zaehinakozid, akteozid, izoakteozid, 2'-acetilakteozid, salidrozid, cistanozid B, tubulozid A, icistanozid Abile su 1,26%, 0,98%, 1,55%, 1,06%, 1,33%, 0,99%, 1,65%, odnosno 0,95%, pokazujući dobru ponovljivost.
2.1.10 Test oporavka
Devet uzoraka iz iste serijeCistanche deserticola(S4, serija broj: 20240420-2) pripremljeni su s 0,1 g po uzorku. Uzorci su podijeljeni u tri skupine, s tri ponavljanja po skupini. Svakoj skupini dodano je 80%, 100% i 120% referentnog standardnog sadržaja uCistanche deserticolauzorak. Ispitne otopine pripremljene su prema metodi opisanoj u odjeljku 2.1.5 i analizirane pod uvjetima u odjeljcima 2.1.2 i 2.1.3. Izračunati su povrati osam feniletanoidnih glikozida, a rezultati su prikazani u tablici 4.
Tab. 4 Stope oporavka 8 testiranih komponenti u Cistanches Herba
| komponenta | Sadržaj uzorka (mg) | Šiljasti (mg) | Izmjereno (mg) | Prosječni oporavak (%) | RSD (%) |
|---|---|---|---|---|---|
| Ehinakozid | 0.513 8 | 0.410 1 | 0.911 2 | 99.85 | 1.37 |
| Ehinakozid | 0.513 8 | 0.513 8 | 1.015 2 | 99.88 | 0.95 |
| Ehinakozid | 0.513 8 | 0.616 5 | 1.129 4 | 99.85 | 1.06 |
| Akteozid | 0.421 5 | 0.337 2 | 0.759 6 | 99.90 | 1.02 |
| Akteozid | 0.421 5 | 0.421 5 | 0.843 5 | 99.87 | 1.18 |
| Akteozid | 0.421 5 | 0.505 8 | 0.926 7 | 99.84 | 1.24 |
| Izoakteozid | 0.327 1 | 0.261 7 | 0.588 6 | 99.85 | 0.86 |
| Izoakteozid | 0.327 1 | 0.327 1 | 0.654 2 | 99.86 | 1.05 |
| Izoakteozid | 0.327 1 | 0.392 5 | 0.719 1 | 99.84 | 1.13 |
| 2'-acetilakteozid | 0.110 2 | 0.088 2 | 0.198 3 | 99.87 | 1.15 |
| 2'-acetilakteozid | 0.110 2 | 0.110 2 | 0.220 1 | 99.86 | 1.09 |
| 2'-acetilakteozid | 0.110 2 | 0.132 2 | 0.242 4 | 99.85 | 1.21 |
| salidrozid | 0.081 6 | 0.065 3 | 0.146 7 | 99.84 | 1.18 |
| salidrozid | 0.081 6 | 0.081 6 | 0.163 1 | 99.85 | 1.02 |
| salidrozid | 0.081 6 | 0.097 9 | 0.179 7 | 99.84 | 1.17 |
| Tubulozid B | 0.072 3 | 0.057 9 | 0.130 0 | 99.86 | 1.09 |
| Tubulozid B | 0.072 3 | 0.072 3 | 0.144 1 | 99.86 | 1.05 |
| Tubulozid B | 0.072 3 | 0.086 8 | 0.159 2 | 99.84 | 1.24 |
| Tubulozid A | 0.043 8 | 0.035 0 | 0.078 5 | 99.86 | 1.16 |
| Tubulozid A | 0.043 8 | 0.043 8 | 0.087 5 | 99.86 | 1.02 |
| Tubulozid A | 0.043 8 | 0.052 5 | 0.096 2 | 99.84 | 1.15 |
