Dihotomni odgovori na kroničnu fetalnu hipoksiju dovode do unaprijed određenog fenotipa starenja Ⅰ
Nov 29, 2023
Ukratko
Koristeći proteomiku odozdo prema gore i bubreg kao paradigmu, prikazujemo integrativnu perspektivu staničnih odgovora na kroničnu fetalnu hipoksiju, otkrivajući temeljne mehanizme teorije fetalnog programiranja bolesti odraslih koji su načelno primjenjivi na sve druge organe u tijelu. Karakteristični tkivni i serumski biomarker proFiLe će promicati razvoj novih terapijskih pristupa za suzbijanje fenotipa preranog starenja koji je izgleda povezan s fetalnim programiranjemkronična bolest.
Naglasci
• Kronična fetalna hipoksija izaziva široke promjene u ekspresiji proteina.
• Potisnuta replikacija i translacija ograničavaju stvaranje novih nefrona.
• Višestruki putoviunaprijed određuju fenotip starenjaveć tijekom razvoja.
• Sinergija inspoštećenje upalnog sustava, neučinkovito obnavljanje i izmijenjeni metabolizam.
• Smanjeno obilje proteina protiv starenjakloto i sirtuin 6 kod miševa i ljudi.
Intrauterino ograničenje rasta uzrokovano hipoksijom povećava rizik zakardio-vaskularni, bubrežni, i drugekronične bolesti kod odraslih, što predstavlja veliki javnozdravstveni problem. Ipak, ne zna se mnogo o fetalnim mehanizmima koji te osobe predisponiraju za bolest. Koristeći prethodno validirani mišji model hipoksije fetusa i proteomiku odozdo prema gore, karakteriziramo odgovor fetalnog bubrega na kronični hipoksični stres. Fetalni bubrezi pokazuju dihotomni odgovor na kroničnu hipoksiju, uključujući s jedne strane stanične prilagodbe koje potiču preživljavanje (glikoliza, autofagija i smanjena sinteza DNA i proteina), ali s druge strane procese koji induciraju fenotip sličan starenju (infiltracija upalnih stanica , oštećenje DNK i smanjena proliferacija). Važno je da kronična hipoksija također smanjuje ekspresiju proteina protiv starenja klotho i Sirt6, mehanizam koji je evolucijski očuvan između miševa i ljudi. Uzeti zajedno, otkrivamo da je unaprijed određeno starenje tijekom fetalnog razvoja ključni događaj ukronična hipoksija, postavljajući čvrst temelj za Barkerovu hipotezu o fetalnom programiranju bolesti odraslih. Ovaj je fenotip povezan s karakterističnim profilom biomarkera u uzorcima tkiva i seruma, koji se može iskoristiti za otkrivanje i ciljanje ubrzanog starenja ukronične hipoksične ljudske bolesti.
Barkerova teorija o fetalnom programiranju bolesti odraslih (1, 2) navodi da štetni događaji tijekom razvoja povećavaju rizik od višestrukih kroničnih bolesti u odrasloj dobi, uključujućihipertenzija,šećerna bolest,opstruktivna plućna bolest, ilikronična bolest bubrega(CKD). U našem društvu koje stalno stari, ovi poremećaji nameću ogroman ekonomski teret koji progresivno raste zbog sve većeg broja pacijenata koji pate od jednog ili više ovih poremećaja. Između ovih,CKDizavršni stadij bubrežne bolesti(ESRD) ne samo da predstavljaju neovisne čimbenike rizika za kardiovaskularni morbiditet i mortalitet, već također stvaraju sve veće troškove za bubrežne nadomjesne terapije, čineći ih velikim javnozdravstvenim problemom. Među strategijama za suočavanje s ovim trendom ključnu ulogu ima pojašnjenje mehanizama koji povezuju Barkerovu teoriju i razvoj KBB-a. Vjerojatno objašnjenje za postupni gubitak bubrežne funkcije kod potomaka niske porođajne težine pretpostavlja uspostavljanje začaranog kruga koji se vrti između smanjene površine bubrežne filtracije, povećanog opterećenja preostalih nefrona i daljnjeg oštećenjasmanjuje kapacitet filtracije(Brenner's hypothesis) (3). A common finding in intrauterine growth restriction (IUGR) babies is the reduced number of nephrons formed at the end of kidney development (4). Thus, a low nephron number at birth increases the risk for accelerated functional decline and irreversible renal tissue damage (5, 6). Among all possible intrauterine stress factors, chronic hypoxia due to placental insufficiency or pregnancy at high altitude (>2500 m nadmorske visine—pogađa više od 2% svjetske populacije (7, 8)) spada u najkritičnije i klinički najrelevantnije čimbenike koji remete razvojni program embrija (9). Međutim, molekularni mehanizmi kojima hipoksija dovodi do IUGR i poremećenog razvoja bubrega ostaju nepotpuno shvaćeni i zahtijevaju daljnje istraživanje. U ovoj studiji procijenili smo na razini proteoma molekularne promjene u fetalnom bubregu nakon izlaganja mišjeg embrija u razvoju kroničnom hipoksičkom stresu i potvrdili neke ključne nalaze u uzorcima ljudskog hipoksičnog seruma. Pružamo značajne dokaze za niz mehanizama interakcije koji s jedne strane omogućuju preživljavanje stanica u nepovoljnim uvjetima, ali s druge strane potiču smanjeni broj nefrona i fenotip nalik preranom starenju. To dalje pokazujemogenski specifična DNAhipermetilacija, ali i hipometilacija DNA doprinose ovom dihotomnom odgovoru na kroničnu hipoksiju. Dakle, naša otkrića postavljaju čvrst temelj za Barkerovu hipotezu, otkrivajući niz putova koji unaprijed određujufenotip starenjaveć tijekom razvoja.
EKSPERIMENTALNE PROCEDURE
Dizajn eksperimenta i statističko obrazloženje Cilj ove eksplorativne studije bio je otkriti promjene u proteomu cijelih fetalnih bubrega izvedenih iz IUGR fetusa kako bi se produbilo znanje o fetalnim mehanizmima koji predisponiraju male osobe u gestacijskoj dobi za kronične bolesti u odrasloj dobi. Studija se temeljila na proteomskom profiliranju odozdo prema gore korištenjem nano-LC sustava spojenog na orbitrap maseni spektrometar visoke rezolucije. U tu svrhu, šest E18.5 hipoksičnih bubrega i šest E18.5 normoksičnih bubrega muškaraca korišteno je i analizirano u duplikatu u kontroliranom eksperimentu na slijepi način. Sve su replikacije bile uspješne, nijedan eksperimentalni nalaz nije mogao biti repliciran. Podaci o proteomici analizirani su pomoću softvera MaxQuant 1.5.2.8 (uključujući tražilicu Andromeda i paket za statističku analizu Perseus) i grupiranja funkcionalnih zabilješki. Za dugoročne posljedice kronične fetalne hipoksije na bubrežnu funkciju pet hipoksičnih i pet normoksičnih muških potomaka odabrano je nasumično i analizirano nakon 8 mjeseci (pet životinja je potrebno za otkrivanje 30% smanjenja GFR kod fetalnih hipoksičnih životinja, na temelju varijance od 15%, Alfa=0.05, Snaga=0.9). In vivo eksperiment je zaključen procjenom bubrežne fibroze i serumskih markera nakon 15 mjeseci. Kako bi se potvrdili neki od ključnih nalaza pokusa na životinjama, analizirani su uzorci ljudskog seruma koji su prikupljeni u prethodnim kontroliranim studijama na zdravim dobrovoljcima (10). Svi in vitro eksperimenti su testirani i slijepi s odgovarajućim kontrolama. Statistički test i detalji eksperimenta navedeni su u legendi svake slike. Prikazani su svi podaci i uključuju sve izvanredne vrijednosti.
Životinje
C57BL/6N miševi kupljeni su od Janvier labs, Francuska, i smješteni na 23 ◦C i 50 do 60% vlažnosti u IVC kavezima sa slobodnim pristupom hrani i vodi i ciklusom dan/noć od 12 sati. Svi pokusi na životinjama provedeni su u skladu sa švicarskim zakonom o dobrobiti životinja i odobreni od strane lokalnih vlasti (Kanton Bern BE96/11, BE105/14 i BE105/17). Za vremensko ograničeno parenje, ženke u uzgoju provjeravane su na vaginalne čepove svakog jutra, a ako su prisutni, vremenska točka je postavljena na gestacijski dan (E) 0,5. Gravidne majke nasumično su dodijeljene ili normoksičnoj kontrolnoj skupini (N=11) ili izložene stalnoj hipoksiji (N=11) tijekom 7 dana. Za indukciju hipoksije, majke na gestacijski dan E11.5 prebačene su u hipoksičnu pregradu s rukavicama (Coy Laboratory Products), a sadržaj kisika postupno je snižen na 10% unutar 3 do 4 sata. Električni ventilator unutar komore održavao je odgovarajuću cirkulaciju zraka. Razina CO2 održavana je niskom keliranjem viška CO2 u patronama punjenim natrijum-vapnom (Sigma, 72073) spojenim na sustav cirkulacije zraka. Višak vlage apsorbirao je silika gel narančasti granulat (Sigma, 1.01969), mijenjan svaki dan. Devet majki iz svake skupine eutanazirano je na E18.5, a fetusi i placente su sakupljeni, izvagani i pripremljeni za daljnju analizu. Fetalna krv je sakupljena iz trupa dekapitiranih E18.5 fetusa. Fetalni bubrezi su secirani u PBS pomoću stereoskopa Leica M80. Za dugotrajne analize, dvije su majke uklonjene iz hipoksije nekoliko sati prije poroda, a muški potomci korišteni su za procjenu funkcije bubrega (brzina glomerularne filtracije - GFR) nakon 8 mjeseci kako je opisano (11) i za procjenu bubrežne fibroze i razine klotha i sirtuina u serumu 6 nakon 15 mjeseci.
Broj glomerula
Za potpuno imunofluorescentno bojenje bubrega E18.5 primijenjen je iDisco protokol bojenja (12) (https://idisco.info/idisco-protocol/) s predtretmanom metanolom pomoću antinefrinskog protutijela (R&D AF3159). Za relevantne korake korišteno je vrijeme inkubacije n=1 dan i volumen otopine od 1,6 ml. Bubrezi su postavljeni u 8-stakalce staklene komore (Thermo Fisher, 154534) i odmah snimljeni pomoću IMIC digitalnog mikroskopa (FEI, tip 4001) s Polychrome V svjetlom izvor, kontroler kamere Orca-R2 tvrtke Hamamatsu (C10600) i softver Live Acquisition (FEI, verzija 2.6.0.14). Z-stack slike od stotinu mikrometara obojenih cijelih bubrega E18.5 analizirane su softverom za obradu slika otvorenog koda Fiji (ImageJ, verzija 2.0.0-rc69/1.52i, https:// imagej.net/ Fidži). U dodatku TrackMate v3.8.0, detektor Downsample LoG postavljen je na 80,0 piksela za procijenjeni promjer mrlje s 16-pikselnim pragom i faktorom smanjenja uzorkovanja 2. Broj točaka po okviru dodan je za izračun broja glomerula po bubregu. Odabrana je udaljenost od 100 μm između okvira kako bi se izbjeglo dvostruko brojanje identičnih glomerula u uzastopnim slikama, s obzirom na prosječni promjer glomerula od 80 μm.
Transkutana procjena glomerularne filtracije GFR je određen kod svjesnih životinja kako je prethodno opisano (11). Ukratko, klirens plazme FITC-sinistrina (Fresenius-Kabi, LI9830076) mjeri se preko kože pomoću dioda koje emitiraju svjetlost s maksimumom emisije za FITC na 470 nm i fotodiodom koja detektira fluorescentno svjetlo s maksimalnom osjetljivošću na 525 nm. Smanjenje intenziteta fluorescencije tijekom vremena zatim se pretvara u GFR.
RT-qPCR Ukupna RNA izolirana je pomoću TRIzol reagensa (Invitrogen 15596026) prema protokolu proizvođača. Koncentracija i kvaliteta RNA određene su spektrofotometrom Nanodrop 1000 (Thermo Fisher Scientific), a 1000 ng je transkribirano u cDNA pomoću PrimeScript RT Reagent Kit (Takara, RR037A). cDNA je razrijeđena na 2 ng/ul, a qPCR je izveden s FAM-obilježenom UPL sondom (Roche) plus odgovarajućim početnicama specifičnim za gen i TaqMan Fast Universal PCR Master mix (Applied Biosystems, 4352042) na 7500 Fast Real-Time PCR sustavu (Primijenjeni biosustavi). Analiza podataka obavljena je programom Microsoft Excel. Metoda 2(-ΔCt) korištena je za izračunavanje relativnih razina ekspresije za RT-qPCR. Sekvence sonde i primera navedene su u Dodatnoj tablici S1.
Priprema uzorka za LC-MS/MS analizu Izolirani bubrezi muškog fetusa (n=3 za svaku skupinu) homogenizirani su u puferu uzorka (7,5 M urea, 1,5 M tiourea, 4% CHAPS, 0.{{ 18}}5% SDS, 100 mM ditiotreitola (DTT)) pomoću ultrazvučnog štapića. Koncentracije proteina određene su pomoću Bradfordovog testa (Bio Rad-Laboratories). Protokol probave u gelu primijenjen je kao što je prethodno opisano (13, 14). Ukratko, 80 ug svakog uzorka stavljeno je na SDS-PAGE, što nam je omogućilo predfrakcioniranje uzorka kako bismo smanjili njegovu složenost. Nakon fiksacije s 50% metanolom/10% octenom kiselinom, gelovi su isprani i senzibilizirani s 0,02% Na2S2O3. Gelovi su zatim obojeni s 0,1% AgNO3 10 minuta, isprani i razvijeni s 3% Na2CO3/0,05% formaldehida. Svaka proteinska vrpca je zatim izrezana na četiri kriške i očišćena. Nakon redukcije s DTT i alkilacije s jodoacetamidom (IAA), proteini su razgrađeni enzimatski koristeći Tripsin/Lys-C (MS stupanj; Promega Corporation). Nakon digestije, peptidi su eluirani, osušeni i pohranjeni na -20 ◦C do LC-MS/MS analize.
LC-MS/MS analiza
Kao što je prethodno opisano (13), uzorci peptida rekonstituirani su u 5 ul 30% mravlje kiseline (FA) koja je sadržavala 10 fmol svakog od četiri sintetička standardna peptida i razrijeđena s 40 ul mobilna faza A (97,9% H2O, 2% ACN, 0,1% FA). Sintetski peptidi [Glu1-Fribrinopeptid B – EGVNDNEEGFFSAR; M28 – TTPAVLDSDGSYFLYSK; HK0 – VLETKSLYVR; HK1 – VLETK(ε-AC)SLYVR] dodani su u svaki uzorak kao interna kontrola kvalitete za praćenje stabilnosti LC-MS sustava. Deset mikrolitara ove otopine zatim je ubrizgano u Dionex Ultimate 3000 nano LC-sustav povezan s QExactive orbitrap masenim spektrometrom opremljenim ionskim izvorom nanospreja (Thermo Fisher Scientific). Kao korak predkoncentriranja, peptidi su naneseni na predkolonu 2 cm × 75 μm C18 Pepmap100 (Thermo Fisher Scientific) pri brzini protoka od 10 ul/min koristeći mobilnu fazu A. Eluacija peptida iz predkolone do 50 cm × 75 μm Pepmap100 analitičkoj koloni (Thermo Fisher Scientific) i naknadno odvajanje postignuto je pri brzini protoka od 300 nl/min koristeći gradijent od 8% do 40% mobilne faze B (80% ACN, 19,9% H2O, 0,1% FA) tijekom 235 min. Masena spektrometrijska detekcija je postignuta izvođenjem MS skeniranja u rasponu od m/z 400 do 1400 pri razlučivosti od 70 000 (pri m/z =200). MS/MS skeniranje 12 najzastupljenijih iona postignuto je HCD fragmentacijom pri 30% normalizirane energije sudara i analizirano u orbitrapu pri rezoluciji od 17 500 (pri m/z =200). Svi su uzorci analizirani u duplikatu. Proteomički podaci masene spektrometrije pohranjeni su u ProteomeXchange Consortium (http:// proteomecentral.proteomexchange.org) putem PRIDE partnerskog repozitorija (15) s identifikatorom skupa podataka PXD018999 i 10.6019/ PXD018999.
Identifikacija proteina i bez naljepnica
Kvantifikacija (LFQ) Identifikacija proteina, kvantifikacija bez označavanja (LFQ) kao i statističke analize provedene su pomoću softvera MaxQuant 1.5.2.8 uključujući tražilicu Andromeda i paket za statističku analizu Perseus (16, 17), često korišteni tijek rada za obradu i statističku procjenu podataka o proteomici sačmarice. Proteini su identificirani korištenjem UniProt baze podataka za mus musculus proteine (verzija 170428 sa 16,854 unosa, ograničeno samo na pregledane unose), tolerancija mase peptida od 25 ppm, MS/MS tolerancija podudaranja od 2{{21 }} ppm, i najviše dva propuštena cijepanja s tripsinom kao proteazom. Kriteriji pretraživanja nadalje su uključivali karbamidometilaciju cisteina kao fiksnu modifikaciju, oksidaciju metionina kao i acetilaciju N-terminalnog proteina kao varijabilne modifikacije, te najmanje dvije identifikacije peptida po proteinu, od kojih je barem jedna jedinstvena. Nadalje, podudaranje između ciklusa provedeno je pomoću vremenskog prozora podudaranja od 5 minuta i 15-minutnog vremenskog prozora poravnanja. I za peptide i za proteine primijenjena je stopa lažnih otkrića (FDR) manja od 0,01. Za statističku analizu, izvršene su međusobne usporedbe između normoksičnih i hipoksičnih uzoraka bubrega kako bi se odredile skupine proteina, koje su bile značajno povišene ili smanjene nakon hipoksije. U tu su svrhu pomoću paketa za statističku analizu Perseus izračunate razlike LFQ vrijednosti. Promjene u vrijednostima obilja proteina između normoksičnih i hipoksičnih uzoraka bubrega određene su dvostranim t-testom s p < 0,05 i minimalnom dvostrukom razlikom u sadržaju. Svi proteini koji ispunjavaju ove kriterije uzeti su u obzir u ovoj studiji. Osim toga, kako bi se naglasili najjači regulatorni učinci na hipoksiju, značajno regulirani proteini s globalnim FDR-om<0.05 as determined by a permutation-based method were analyzed.
Funkcionalna anotacija i grupiranje
Klasteriranje funkcionalnih napomena provedeno je korištenjem baze podataka resursa genske ontologije (18-20) i platforme DAVID (21) (https://david.ncifcrf.gov). Proteinske mreže generirane su pomoću baze podataka STRING (22). Diferencijalne vrijednosti ekspresije između normaloksičnih i hipoksičnih bubrega kontrolne skupine E18.5 mapirane su Heatmapperom (23) (http://www.heatmapper.ca).
Imunohistokemija
PFA-fiksirani, parafinom ugrađeni isječci tkiva rehidrirani su, a endogena peroksidaza je blokirana inkubacijom stakalca u 1,5% otopini H2O2 (0.02 M limunska kiselina, 0.{ {40}}6 M Na2HPO4) na sobnoj temperaturi 15 minuta u mraku. Uklanjanje antigena provedeno je kuhanjem u Tris-EDTA (pH 9) ili puferu limunske kiseline tijekom 20 minuta nakon čega je uslijedilo polagano hlađenje do sobne temperature. Nakon blokiranja u 2% BSA u PBS-u na sobnoj temperaturi tijekom 1 sata, rezovi su inkubirani s primarnim antitijelima u otopini za blokiranje o/n na 4 °C (MPO, ab208670; CAV1, ab32577; oba Abam). Nakon tri koraka ispiranja u PBS-u, rezovi su inkubirani s HRP konjugiranim sekundarnim anti-zečjim antitijelom (K4003, Dako EnVision+ System od Agilenta) 1 sat na sobnoj temperaturi. Nakon tri koraka ispiranja u PBS-u, signal je razvijen s DAB (Agilent, K3468). Sekcije su kontrastno obojene, dehidrirane i montirane upotrebom Eukitt medija (Sigma, 03989). Za detekciju 8-OHdG (MOG-100P, JaICA) korišten je komplet za imunodetekciju Vector MOM (BMK-2202) prema navodima proizvođača. Slike svijetlog polja snimljene su mikroskopom Nikon E600 (objektiv Plan Fluor ELWD 20×/0,45) s kontrolerom kamere Digital Sight DS-UE i kamerom DS-Ri1 (oba Nikon) pomoću Nikon softvera NIS Elements 4.0.
Enzimski
Kvantifikacija laktata Razine laktata u bubrezima E18.5 određene su nakon deproteinizacije uzorka centrifugalnim kolonama pomoću enzimskog kompleta MAK064- 1KT (Sigma), prema proizvođaču.
Humane studije
Studiju na ljudskim subjektima odobrio je Etički odbor Švicarskog saveznog instituta za tehnologiju (EK 2011-N-51) i provedena je u skladu s Helsinškom deklaracijom. Ukratko, informirani pristanak dobiven je od devet zdravih stanovnika nizine koji ne puše (osam muškaraca i jedna žena). Ti su dobrovoljci sekvencijalno procijenjeni na više fizioloških parametara prije, tijekom i nakon 4-tjednog neprekidnog boravka na velikoj nadmorskoj visini, kao što je ranije objavljeno (10).
Kultura stanica
Primarne proksimalne tubularne stanice (pPTC) izolirane su iz muških bubrega C57BL/6N starih {{0}} do 4- tjedana kako je prethodno opisano (24). Ukratko, proksimalni tubularni fragmenti dobiveni su probavom kortikalnog bubrežnog tkiva kolagenazom i naknadnom filtracijom kroz membranu veličine pora od 250 µm i 80 µm. PTC su uzgajani u DMEM/F12 (Gibco, 21041-025) s dodatkom 15 mM HEPES-a, 0,55 mM NaPyruvate, 1% NEAA i dodacima medija za rast bubrežnih epitelnih stanica (REGM) (Lonza, CC-4127) . Nakon konfluencije, pPTC-ovi su razdvojeni jednom upotrebom otopine Accutase (Sigma, A6964) i ponovno naneseni. Za hipoksiju, kultura stanica je izvedena na 1% kisika tijekom 48 sati; normoksične kontrole uzgajane su na 19% kisika.
ELISA
Razine Klotho ili Sirt6 u serumu određene su pomoću sljedećih kompleta za uzorke miševa (CSB-E14362m, Cusabio tehnologija i OKCD02892, Aviva Systems Biology) i ljudske uzorke (CSB E17018h i CSB-E13235h; oba Cusabio tehnologija) slijedeći navedene protokole. Krv mišjeg fetusa sakupljena je iz debla dekapitiranih E18.5 fetusa. Mišja krv odraslih životinja uzorkovana je iz vene safene. Uzorci ljudskog seruma dobiveni su iz prethodne studije (10).
Bisulfitna PCR
DNK iz E18.5 hipoksije ili normoksije tretiranih životinja ekstrahirana je Qiagen kompletom za krv i tkivo i pretvorena u bisulfit pomoću EpiTect Bisulfite kompleta od Qiagena u skladu s uputama proizvođača. Dvadeset nanograma pretvorene DNA korišteno je kao predložak u PCR reakciji s AmpliTaq Gold (Invitrogen). Sljedeći primeri dizajnirani su pomoću MethPrimera 2.0: Klotho, 248 bp fragment (−234/+14 TSS), Kl_BS_F (TAG TTT TAG GAA GGT AAA GGG AGT G) i Kl_BS_R (AAC AAT AAT TAT CCA AAA CAA AC) (25); Mki67, 497 bp fragment (~1 kb uzvodno od TSS), Mki67_BS_F (TTG GAA GAA TAT TGA TTT AGG AA) i Mki67_BS{{20} }R (ACC TAT AAA CTC CCT CTC CAA AAA T). PCR proizvodi su vezani u pCR4-TOPO-vektor pomoću TOPO TA Cloning Kit za sekvenciranje (Invitrogen) i transformirani u DH10 bakterije. Klonovi su poslani na sekvenciranje (Microsyth Seqlab GmbH). Inspekcija, poravnanje, vizualizacija i statistika provedeni su s QUMA kvantifikacijskim alatom za analizu metilacije (26).
Statistika
Provedena je statistička analiza i napravljeni su grafikoni s GraphPad Prism verzijom 8 (https://www.graphpad.com). Dvije su skupine testirane na značajnost neuparenim dvostranim t-testovima sa ili bez Welchove korekcije (Welchova korekcija bila je za nenormalno distribuirane podatke, F test varijanci bio je statistički značajan, p < 0.05). Više skupina testirano je korištenjem RM jednosmjerne ANOVA s Geisser–Greenhouse korekcijom i Dunnettovim testom višestrukih usporedbi. p vrijednosti<0.05 were assumed significant. Means with standard deviation (SD) are shown.
Izvor podataka
Neobrađeni podaci za sve eksperimente koji nisu rezultat analize masene spektrometrije mogu se pronaći u proračunskoj tablici Source Data File S1 u dopunskom skupu podataka. To uključuje podatke koji se temelje na slikama 1A i D–H, slikama 3E i F, slikama 5B, slikama 7D–I, slikama 8 i dodatnim slikama S1 i S6.
REZULTATI
Kronično
Fetalna hipoksija dovodi do zastoja u rastu embrija i smanjene bubrežne funkcije kod odraslog potomstva. Za izlaganje vremenski parenih majki stalnoj hipoksiji (10% kisika) tijekom 7 dana (slika 1A), korištena je hipoksična komora. Slično našem prethodnom radu (27), brane su se brzo prilagodile hipoksičnom okruženju, a pri rođenju veličina legla i masa posteljice bili su slični normoksičnim kontrolnim gestacijama (dodatna slika S1, A-C). Ipak, hipoksični fetusi E18.5 imali su smanjenu tjelesnu težinu u usporedbi s normoksičnim kontrolama, ispunjavajući IUGR kriterije (28) (Slika 1. Traka i dodatna slika S1D) i 40% smanjen broj nefrona (Slika 1, C i D). Ovo smanjenje nije bilo zbog degeneracije nefrona (nekroza ili apoptoza) tijekom intrauterinog razvoja u hipoksičnim uvjetima kao što je ranije objavljeno (27). Nadalje, usprkos značajnom razdoblju rasta 3 tjedna nakon rođenja, o kojem smo izvijestili prije (27), odrasli hipoksični potomci pokazali su ozbiljno smanjenu bubrežnu funkciju nakon 8 mjeseci (Slika 1E) i povećanu ekspresiju fibrotičkih markera nakon 15 mjeseci (Slika 1, F–H), čime se potvrđuje valjanost našeg pristupa kao robusnog IUGR modela i ilustracije Barkerove teorije o fetalnom programiranju bolesti odraslih.
Usluga podrške Wecistanche-najvećeg izvoznika cistanche u Kini:
E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/telefon:+86 15292862950
Kupite za više pojedinosti o specifikacijama:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
