Kurkumin ublažava starenje mezenhimskih matičnih stanica pseće koštane srži tijekom ekspanzije in vitro 2. dio

Molimo kontaktirajteoscar.xiao@wecistanche.comza više informacija

2.5. Autofagija Inovoloes u ispoljavanju zaštitnog učinka Cur u cBMSC starenju

Kako bi se istražio učinak autofagije izazvane Curom na starenje cBMSC-a, razina autofagije modulirana je upotrebom RAP-a (200 nM) ili 3-MA (5 mM).3-MA vrši značajno inhibitorno djelovanje na autofagičnu aktivnost, koja se očituje značajnim smanjenjem ekspresije mRNA lakog lanca 3 (LC3) proteina 1 povezanog s mikrotubulama, gena povezanog s autofagijom (ATG)7, ATG12 i unc51-kinaze koja aktivira autofagiju{ {14}}(ULK1); smanjeni omjer ekspresije proteina 1 lakog lanca 3 tipa Ⅱ/I (LC3-I/I) povezanog s mikrotubulama; i povećanu ekspresiju p62 u usporedbi s kontrolnom skupinom (Slika 5A, B). U skladu s tim, u usporedbi sa skupinom Cur, uočeno je smanjenje autofagne aktivnosti u skupini 3-MA plus Cur (Slika 5A, B). Nasuprot tome, uočeno je povećanje autofagne aktivnosti u RAP skupini, što je dokazano pojačanom ekspresijom mRNA LC3, ATG12 i ATG7; povećana konverzija LC3-I u LC3-II; i razgradnju p62 (Slika 5A, B).

Najprije je sustavno istražena autofagna aktivnost. Formiranje autofagnih vakuola (također nazvanih autofagosomi) procijenjeno je morfološkim promatranjem, a rezultati su pokazali da je bilo više autofagnih vakuola i LC3 točaka u Cur skupini i RAP skupini u usporedbi s kontrolnom skupinom, dok je smanjen broj autofagnih vakuola i manje LC3 točaka uočeno je u skupinama 3-MA i 3-MA plus Cur (Slika 5C, E). Osim toga, bojanje LysoTrackerom pokazalo je da je lizosomska acidifikacija pojačana RAP-om i Cur u cBMSC-ima i smanjena u grupe 3-MA i 3-MA plus Cur (Slika 5D). Rezultati pokazuju da Cur i RAP imaju sličan pozitivan učinak na aktivaciju autofagije i da je autofagijska aktivnost potisnuta 3-MA.veličina penisa cistanche,Međutim, učinci inhibicije 3-MA na autofagiju mogu se djelomično spasiti upotrebom Cur.

Kliknite ovdje da saznate više

Kako bismo potvrdili sudjeluje li autofagija u regulaciji starenja CB MSc, dodatno smo ispitali fenotipove povezane sa starenjem nakon promicanja ili suzbijanja autofagije farmakološkim tretmanom. Rezultati su pokazali da je smanjen broj SA- -gal-pozitivnih stanica bio prisutan u Cur i RAP skupinama, dok je povećan broj SA- -gal-pozitivnih stanica primijećen u {{5} }MA skupina u usporedbi s kontrolnom skupinom. Važno je napomenuti da je broj SA- -gal-pozitivnih stanica značajno povećan u skupini 3-MA plus Cur u usporedbi sa skupinom Cur (slika). Rezultati RT-qPCR analize pokazali su da je liječenje RAP-om i Curom povećalo razinu ekspresije SOX-2 i Nanog i smanjilo razinu ekspresije IL-6, TNF-a, p21 i p16 u usporedbi s kontrolnom grupom. Međutim, inhibicija autofagije 3-MA povećala je ekspresiju p16, p21, TNF- i IL-6 (Slika 6C-E). Nadalje, u usporedbi s kontrolnom skupinom, učinkovitost cBMSC-a u stvaranju kolonija bila je povećana u Cur i RAP skupinama, dok su broj i veličina CFU-F značajno smanjeni u 3-MA skupini. Dodatno, pokazalo se da se pojačani učinak Cura na broj cBMSC-a koji stvaraju kolonije može ukinuti predkondicioniranjem s 3-MA (Slika 6B).cistanche prahOvi dokazi pokazuju da RAP i Cur mogu poboljšati starenje cBMSC-a, dok 3-MA pogoršava starenje cBMSC-a i umanjuje blagotvorne učinke koje ima Cur.

Uzeti zajedno, ovi rezultati sugeriraju da inhibicija autofagije s 3-MA ubrzava starenje cBMSC-a, dok aktivacija autofagije s Curom i RAP-om ublažava starenje cBMSC-a (Slika 6F). Značajno je da su zaštitni učinci koje ima Cur oslabljeni prethodnim tretmanom s 3-MA (Slika 6F), što sugerira da je autofagija izazvana Curom potencijalni molekularni mehanizam za poboljšanje starenja cBMSC.

3. Rasprava

Organizmi kontinuirano popravljaju ozlijeđena tkiva i usporavaju procese povezane sa starenjem zahvaljujući izrazito funkcionalnim karakteristikama MSC-a koji se nalaze u raznim tkivima i organima [15]. Nažalost, dob i bolest ključni su čimbenici za starenje MSC-a in vivo, a unutarnje i vanjske razlike u staničnom okruženju ubrzavaju starenje MSC-a in vitro kulture, a oba negativno utječu na njihovu sposobnost imunosupresije, diferencijacije i migracije, u konačnici smanjujući učinkovitost vlastitog -popravak i transplantacija u MSC [7,14,49-51].ekstrakt cistanche salsaOja i kolege ukazali su da su ljudski BMSC-i prestali s proliferacijom od petog do devetog prolaza kliničkih kultura i pokazali tipične fenotipove starenja, kao što su hipertrofična i ravna morfologija, aktivacija inhibitora kinaze staničnog ciklusa p16 i p21, smanjena stopa proliferacije i pojačanu aktivnost SA- -gal [52]. Očito, ekspanzija in vitro neizbježno uzrokuje preuranjenu pojavu starenja u MSC-ima, koji se smatraju važnim modelnim sustavom za in vitro istraživanje staničnog starenja [42, A4, A5]. Naša sadašnja studija otkrila je da su cBMSC prije trećeg prolaza pokazivali ujednačenu morfologiju, ali je primijećeno da su podvrgnuti nizu promjena u smislu stanične morfologije, fiziologije i ekspresije gena nakon šestog prolaza (slike 2 i 7), što je u skladu s preuranjenim starenjem. .

Cistanche može spriječiti starenje

Sve veći broj dokaza pokazuje da je farmakološka stimulacija obećavajući pristup za spašavanje MSC-a od starenja [53,54]. Imajući to na umu, brojni prirodni i sintetski spojevi opsežno su istraženi kako bi se odredio njihov protuupalni, antioksidativni i potencijal protiv starenja in vivo i in vitro [15,55]. Kao prirodni fenolni spoj, Cur je izazvao veliku pozornost zbog svojih blagotvornih učinaka na biologiju MSC [36,37,56,57]. Međutim, složene učinke izloženosti Curu na MSC treba pažljivo razmotriti prije provedbe različitih biomedicinskih istraživanja. Yang i kolege izvijestili su da visoke koncentracije Cur (50 i 100 uM) mogu izazvati akutne toksične učinke u ljudskim BMSC in vitro, dok kontinuirana izloženost (7 d) 10 uM Cura inhibira proliferaciju ljudskih BMSC i inducira apoptozu stanica [58]. Zanimljivo je da je druga studija pokazala da liječenje Curom (<20 um)for="" 5="" days="" ameliorates="" h,="" o,-induced="" oxidative="" stress="" in="" human="" adscs[56].="" additionally,="" cur="" preconditioning="" （1="" μm="" and5um）="" for="" 24="" or="" 48h="" can="" help="" to="" maintain="" cellular="" viability="" and="" improve="" the="" lifespan="" of="" rat="" adscs[36,57.="" our="" results="" demonstrated="" that="" cur(1="" um="" and="" 10="" μm）="" was="" able="" to="" maintain="" the="" viability="" of="" cbmscs="" and="" alleviate="" cbmsc="" senescence="" after="" exposure="" for="" 24="" h,="" while="" the="" colony-forming="" efficiency="" of="" cbmscs="" was="" significantly="" decreased="" at="" a="" dose="" of="" 10="" μm（figure="" 3）.="" therefore,="" the="" beneficial="" effects="" of="" cur="" （10="" umd="" may="" be="" attributed="" to="" short-term="" stimulation,="" and="" it="" can="" impair="" the="" proliferation="" potential="" of="" cbmscs="" in="" the="" long="">

Nedavno su opsežno objavljene biološke aktivnosti Cura na različitim in vitro ili in vivo modelima, posebno u vezi s modulacijom bioloških karakteristika MSC-a. O djelovanju Cura protiv starenja često se raspravljalo, a utvrđeno je da Cur pokazuje blagotvorne učinke na starenje i bolesti povezane sa starenjem na razini organizma i stanica. Međutim, mehanizam na kojem se temelji njegova regulacija kompliciran je zbog različitih doza i oblika Cura, kao i mehanizma starenja [19]. Kao glavni intracelularni mehanizam razgradnje molekula i izmjene organela, autofagija igra glavnu ulogu u zaštiti MSC-a od stresnih uvjeta i održavanju stanične homeostaze. Modulacija autofagije smatra se novom strategijom za poboljšanje funkcija MSC [59]. Prema podacima prikupljenim iz značajnih studija, poticanje ili suzbijanje autofagije pomoću Cura u različitim staničnim modelima ima zadovoljavajuće citoprotektivne učinke [38-40].stabljika cistancheNaši su podaci pokazali da je povećana autofagijska aktivnost primijećena nakon izlaganja Curu, što je identificirano pojačanom regulacijom gena povezanih s autofagijom (LC3, ULK1, Atg7 i Atg12), stvaranjem LC3-II, povećanjem broja autofagičnim vakuolama i kiselim vezikularnim organelama te značajno smanjenje razine proteina p62 (Slika 4). Osim toga, lizosom se smatra nezamjenjivom organelom za autofagiju, dok su disregulacija lizosomalnog pH i promjena aktivnosti vakuolarne H plus -ATPaze (v-ATPaze) primijećeni u procesu starenja MSC-a, čime se potiče zakiseljavanje i autofagija lizosoma i pridonosi do odgađanja starenja MSC [60]. Yan i kolege ukazali su da Cur može aktivirati funkciju lizosoma mišjih embrionalnih fibroblasta (MEF) i inducirati autofagiju, koja služi kao ključni signal za preživljavanje [38]. Slično tome, primijetili smo da liječenje Curom pojačava lizosomsko zakiseljavanje u cBMSC-ima (Slika 4), sugerirajući da bi Cur mogao biti uključen u aktiviranje funkcije lizosoma, što je neophodno za poboljšanje autofagne aktivnosti.

Autofagija je pretežno citoprotektivni mehanizam, a sve više dokaza pokazuje da su svojstva prirodnih i sintetskih spojeva protiv starenja povezana s modulacijom autofagije [29,54,61,62]. Međutim, učinci modulacije autofagije na starenje MSC-a i odgovarajući mehanizmi još nisu u potpunosti procijenjeni i istraženi. Početna izvješća su pokazala da je autofagija pretežno citoprotektivni mehanizam i da povećana razina autofagije može odgoditi stanično starenje smanjenjem nakupljanja toksičnih metabolita i obnavljanjem funkcije organela [63]. Zanimljivo je da su nedavna istraživanja također pokazala da je povećan broj autofagnih vakuola i proteina povezanih s autofagijom (LC3-II, ATG7 i ATG12) primijećen tijekom starenja MSC, dok je inhibicija autofagije bafilomicinom A1 i {{11 }}Dokazano je da MA smanjuje postotak SA- -gal-pozitivnih stanica i ekspresiju p16 i p21 [35]. Kako bi se dodatno razjasnio odnos između autofagije izazvane Curom i njezinih učinaka na senescenciju cBMSC, autofagija je modulirana prethodnim tretmanom rapamicinom ili 3-MA. Očito je utvrđeno da je autofagijska aktivnost oslabljena 3-MA, dok se pokazalo da RAP i Cur (1 uM) značajno pojačavaju autofagiju (Slika 5). U skladu s prethodnim izvješćima [5], naši nalazi također pokazuju da je inhibicija autofagije pomoću 3-MA ubrzala staničnu starenje u cBMSC-ima. Gotovo dosljedne učinke na aktivaciju autofagije imali su Cur(1uMand RAP), dok su analogni citoprotektivni učinci u Prikazani su cBMSC. Prema tome, kada je autofagija bila inhibirana 3-MA, zaštitni učinci koje je vršio Cur su smanjeni (Slika ), što sugerira da je autofagija izazvana Curom potencijalni molekularni mehanizam za poboljšanje starenja cBMSC (Slika 7).

U fiziološkim uvjetima, autofagija se događa na bazalnoj razini u svim eukariotskim stanicama kako bi se održala stanična homeostaza. Međutim, različiti stresni uvjeti mogu dovesti do abnormalne autofagije, koja ima utjecaja na sudbinu stanice osim ako se autofagija ne vrati na optimalnu razinu [41,44,64]. Naši dokazi potvrdili su da autofagija izazvana Curom pokazuje korisne učinke na regulaciju starenja cBMSC. U ovom scenariju, različite podražaje koji stvaraju stres i izvanstanične postavke treba pažljivo razmotriti prije liječenja Curom, a bilo bi zanimljivo istražiti može li Curom inducirana autofagija selektivno poboljšati funkciju MSC-a u unaprijed određenoj dozi i trajanju. Osim toga, sustav za isporuku kurkumina temeljen na nanotehnologiji pokazao je bolju topljivost u vodenoj fazi i razine bioraspoloživosti [65,66]; mogao bi biti obećavajući alat pomoću kojeg bi se odgodilo i spriječilo starenje MSC-a. Odgovor na pitanje je li autofagija primarni temeljni mehanizam u odgađanju starenja MSC još uvijek zahtijeva više detalja koji će biti pruženi budućim istraživanjima.

4. Materijali i metode

4.1.Životinje

Uzorci koštane srži prikupljeni su od 6 zdravih odraslih ženki kineskih ruralnih pasa (starih 12- mjeseci). Sve studije odobrio je Fakultetski odbor za brigu i korištenje životinja Poljoprivrednog sveučilišta Sichuan (br. odobrenja.2020-0608) i provedene su u skladu s etičkim standardima zakona o zaštiti životinja Narodne Republike Kine.

4.2. Priprema otopine kurkumina

Cur (HPLC veći ili jednak 98 posto, CAS broj: 458-37-7; Solar Science& Technology Co., Ltd., Peking, Kina) otopljen je u DMSO do osnovne koncentracije od 20 mmol/ L. filtriran kroz organsku mikroporoznu filtarsku membranu od 0,22 μm i pohranjen na -80 stupnjeva. Različite otopine Cura pripremljene su u mediju za in vitro ispitivanje.

4.3. Kultura i ekspanzija stanica

cBMSC su dobiveni iz koštane srži. Stanice su uzgajane u potpunom mediju koji se sastojao od Dulbecco modificiranog Eagle medija s niskim sadržajem glukoze (LG-DMEM, Gibco Grand Island, NY, SAD), 10 posto fetalnog goveđeg seruma (FBS, TransGen Biotech Co., Ltd., Peking, Kina). ) i 1 posto penicilina/streptomicina. Pri 80-90 postotnoj konfluenciji, adherentne stanice otpuštene su pomoću otopine za probavu tripsina (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Šangaj, Kina) i dalje ekspandirane u omjeru 1:2-1:3 [67 ].

4.4. Curiejev rast stanica

Kako bi se odredila proliferativna sposobnost cBMSC-a u prolazima (P)3, 6 i 9, stanice su nasađene u tri 48-ploče s jažicom (2500 stanica po jažici). Nakon 48 sati inkubacije, stanice su oslobođene s otopinom za probavu tripsina i izbrojane hemocitometrom. Postupak brojanja stanica ponovljen je svakih 48 sati i održavan 14 dana.

4.5. Detekcija imunofenotipa cBMSC-a protočnom citometrijom

U 3. prolazu, cBMSC su isprani s PBS-om i tripsinizirani. Stanice (3×105 stanica/mL) su resuspendirane u puferu za bojenje, a stanične suspenzije (100 µL) su inkubirane s FITC, PE ili APC fluorescentno obilježenim monoklonskim protutijelima protiv površinskih antigena CD45, CD34 i ITGB1 (eBioscience, San Diego, CA, SAD) i nefluorescentno označeni CD31, CD90 i CD105 (Biosynthesis biotechnology Co.Ltd. Peking, Kina) 15 minuta na 4 stupnja. Stanice su isprane s PBS-om i inkubirane s FITC-konjugiranim kozjim anti-zečjim IgG 15 minuta na 4 stupnja. Površinski antigeni detektirani su protočnom citometrijom (FACS Calibur, Becton Dickinson, San Jose, CA, SAD). Analiza podataka provedena je softverom CytExpert.

4.6. In vitro test diferencijacije

cBMSC-i su nasađeni pri gustoći od 5×104 stanica/mL u 6-jažične ploče. Pri 70-80 postotnoj konfluenciji, cijeli medij je zamijenjen osteogenim ili adipogenim medijem za indukciju diferencijacije i mijenjan svaka 3 dana (Cvagen, Suzhou, Kina). Taloženje kalcija otkriveno je bojanjem Alizarin Red S (Solarbio, Peking, Kina) nakon 3 tjedna osteogene indukcije, a nakupljanje kapljica lipida opaženo je bojanjem Oil Red O (Solarbio, Peking, Kina) nakon 2 tjedna adipogene indukcije.

4.7. Učinak Cura na stanični život

Stanična održivost cBMSC određena je pomoću kompleta CCK-8 (Vazyme Biotech Co., Ltd., Nanjing, Kina).cistanche tubulosa koristi i nuspojavecBMSC-i su prethodno uzgajani u 96-ploči s jažicama 24 h. cBMSC-i su tretirani Curom u različitim koncentracijama (0.1, 0.5, 1, 5 i 1{ {14}} umol/L) tijekom 12 h, 24 h, 48 h i 72 h. Stanice su tretirane s 0,1 posto DMSO-a, koji je korišten kao kontrola. Nakon inkubacije s 10 μL otopine CCK-8 po jažici tijekom 2 sata, optička gustoća je izmjerena čitačem mikropločica na 450 nm (Thermo Scientific, Waltham, MA, SAD). Relativna vitalnost stanica izračunata je u skladu s uputama proizvođača.

4.8. Test formiranja kolonija

Učinkovitost samoobnavljanja cBMSC-a otkrivena je pomoću testa fibroblastnih jedinica koje stvaraju kolonije （CFU-F）. cBMSC-i su nasađeni （3 × 10² stanica/jažici） u 6-pločice s jažicama. Nakon dva tjedna kulture, stanice su fiksirane s 4 posto paraformaldehida tijekom 30 minuta i promatrane pod invertnim mikroskopom (LX73, Olympus Corporation, Tokyo, Japan) nakon bojenja s 1 posto kristalno ljubičaste boje tijekom 10 minuta. Za CFU-F izbrojano je više od 50 stanica. Učinkovitost CFU-F izračunata je na sljedeći način:

Učinkovitost CFU-F=broj CFU-F/broj sjemena (300 stanica)[68].

4.9. Test bojenja beta-galaktozidazom

Aktivnost -galaktozidaze povezane sa starenjem (SA- -gal) u cBMSC-ima procijenjena je pomoću kompleta za bojenje SA- -gal (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Šangaj, Kina) prema uputama proizvođača . Nakon bojenja, stanice su pregledane pod invertnim mikroskopom. Pozitivno obojene stanice su prebrojane kako bi se procijenilo stanično starenje.

4.10. Kvantitativni PCR u stvarnom vremenu reverzne transkripcije (RT-qPCR)

Ukupna RNA ekstrahirana je iz staničnih peleta metodom Trizol reagensa. cDNA je sintetizirana korištenjem PrimeScriptTM RT kompleta reagensa s gDNA Eraser (Takara, Shiga, Japan). PCR početnice (Tablica 2) osim GAPDH u odnosu na prethodne studije [67] dizajnirane su pomoću softvera Primer Express (Applied Biosystems, Foster City, CA, SAD) na temelju cDNA sekvenci. qPCR je izveden pomoću TB Green PCR Mix (Takara, Shiga, Japan) na CFX96 Touch sustavu za detekciju PCR u stvarnom vremenu (Bio-Rad, Richmond, CA, SAD). Uvjeti reakcije bili su sljedeći: 95 stupnjeva tijekom 30 s, a zatim 39 ciklusa od 95 stupnjeva tijekom 5 s i 60 stupnjeva tijekom 30 s. Analiza krivulje taljenja je provedena počevši od 95 stupnjeva tijekom 10 sekundi, zatim u rasponu od 65 do 95 stupnjeva, povećavajući se za 0,5 stupnjeva svaki ciklus. GAPDH je korišten kao interna kontrola za normalizaciju svih podataka, a relativna ekspresija je izračunata metodom komparativnog ciklusnog praga (Ct).

4.11. Praćenje luzosomalnog UI pomoću LysoTrackera

Lyso-Tracker Red (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Šangaj, Kina) korišten je za praćenje lizosoma, koji mogu pokazati povećani intenzitet fluorescencije nakon zakiseljavanja lizosoma. Zasijali smo cBMSC u 12-pločice s jažicama i tretirali ih s Curom 24 h, zatim su stanice tretirane s Lyso-Trackerom (60 nM) i Hoechst 33,342 (2 ug/mL) 20 minuta. Fluorescencija je promatrana pomoću invertnog fluorescentnog mikroskopa nakon ispiranja s PBS.

4.12. Imunofluorescencija

cBMSC (2×104 stanice/stakalcu) nasađeni su na stakalce i fiksirani s 4 posto paraformaldehida 30 minuta. Nakon koinkubacije s 0,5 posto Triton X-100 tijekom 5 minuta (Solarbio, Peking, Kina), rezovi su uronjeni u otopinu za blokiranje na 30 minuta. Zatvorena tekućina je uklonjena, a stanice su inkubirane s anti-LC3B antitijelima (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, SAD) preko noći na 4 stupnja, zatim inkubirane sa sekundarnim antitijelima konjugiranim s fluorokromom (Abcam, Cambridge, MA, SAD) 50 minuta na 37 stupnjeva C. Konačno, stanice su obojene DAPI (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Kina) i praćene pod konfokalnim mikroskopom.

4.13.Western blotting analiza

Uzorci stanica lizirani su tkivom i staničnim lizatom (Solarbio, Peking, Kina) koji sadrži inhibitor proteaze nakon ispiranja s ledeno hladnim PBS-om. Stanični lizati koji sadrže 15 ug proteina po uzorku su stavljeni u natrij-dodecil sulfat-poliakrilamid (SDS-PA) (Solarbio, Peking, Kina) gelove i odvojeni elektroforezom. Nakon prijenosa proteina na membranu od poliviniliden fluorida (PVDF), potonja je blokirana nespecifično s 5 posto nemasnog suhog mlijeka (Solarbio, Peking, Kina) tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi. Membrane su inkubirane preko noći s primarnim antitijelima anti-LC3B (1:2000, Abcam, Cambridge, MA, SAD), anti-p62/SQSTM1 (1:4000, Novus Biologicals, Littleton, NH, SAD ), i anti{16}}aktin (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, SAD) na 4 stupnja, a mrlje su isprane s TBST (Solarbio, Peking, Kina) prije inkubacije sa sekundarnim antitijelima (1 :2000, Abcam, Cambridge, MA, SAD) na 37 stupnjeva 1 h. Nakon toga, membrane su razvijene izlaganjem kemiluminiscencijskim reagensima (Millipore, Billerica, MA, SAD) i vizualizirane pomoću ChemiDocTM Imaging Systems (Tanon-5200, Šangaj, Kina). Gustoća trake je kvantificirana pomoću softvera Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Silver Spring, MD, SAD) za svaku skupinu i normalizirana s -aktinom.

4.14. Transmisijska elektronska mikroskopija (TEM)

Stanični talog je digestiran i sakupljen u epruvetu za centrifugiranje od 1,5 mL, zatim fiksiran s 2,5 posto glutaraldehida (Solarbio, Peking, Kina) 2 sata na sobnoj temperaturi. Uzorci su naknadno fiksirani s 1 posto osmij tetroksida tijekom 1 sata nakon ispiranja s PBS-om, zatim smo postupno povećali dehidraciju u otopinama acetona i ugradili ih u 812 epoksidnu smolu (Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd., Bejing, Kina). Nakon toga, 50 nm rezovi su dobiveni iz ultra-mikrotoma (EM UC7, Leica Microsystems Co., Ltd., Heidelberg, Njemačka). Sekcije su obojene uranil acetatom (Zhongjingkevi, Bejing, Kina) 10-15 min i olovnim citratom (Zhongjingkei, Peking, Kina) 2 min. Svi su uzorci pregledani na TEM (EM-1400PLUS, JEOL, Akishima, Tokyo, Japan).

4.15. Statistička analiza

Rezultati su dobiveni iz tri neovisna eksperimenta i svi podaci su prikazani kao srednje vrijednosti ± standardne devijacije (SD). Statističke vrijednosti analizirane su korištenjem IBM SPSs Statistics 25 i ilustrirane korištenjem GraphPad Prism 9.0(GraphPad Software, San Diego, CA, SAD). Statistički značajne razlike utvrđene su korištenjem provedene jednosmjerne analize varijance (ANOVA) i Studentovog t-testa. p vrijednosti<0.05 were="" considered="" to="" be="" significant="">

5. Zaključci

Naša otkrića bacaju svjetlo na odnos između Cura, starenja cBMSC i autofagije. Podaci iz naše studije sugeriraju da Cur može ublažiti stanje starenja cBMSC-a uz aktivaciju autofagije i promicanje lizosomske acidifikacije. Štoviše, daljnji dokazi pokazali su da je autofagija izazvana Curom potencijalni mehanizam za poboljšanje starenja cBMSC. Cur bi mogao biti obećavajući aktivator i konzervator za poboljšanje funkcije MSC-a. Po našem mišljenju, ne mogu se zanemariti pozitivni učinci Cura na starenje. Buduće studije trebale bi se usredotočiti na učinak regulacije Cur na sudbinu MSC-a kako bi se poboljšao terapeutski potencijal MSC-a u raznim bolestima, kao što su oštećenje tkiva te degenerativne i upalne bolesti.

Ovaj je članak izvađen iz Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 11356. https://doi.org/10.3390/ijms222111356 https://www.mdpi.com/journal/ijms