Feniletanoidni glikozidi Cistanche Tubulosa induciraju apoptozu u stanicama H22 hepatocelularnog karcinoma kroz ekstrinzične i intrinzične signalne puteve
Mar 15, 2022
Za više informacija:ali.ma@wecistanche.com
Pengfei Yuan1 et al
Sažetak
Pozadina: Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight je tradicionalni kineski lijek koji parazitira na korijenu biljke Tamarix i koristi se za liječenje muške impotencije, steriliteta, tjelesne slabosti i kao tonik. Međutim, njegov antitumorski učinak na hepatocelularni karcinom još je nedostižan. Ovdje smo istraživali antitumorski učinakCistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi(CTPG) na stanicama H22 hepatocelularnog karcinoma i in vitro i in vivo i njegovi mehanizmi.
Metode:Morfologija, održivost,apoptoza, stanični ciklus i potencijal mitohondrijske membrane (Δψm) H22 stanica analizirani su invertnom mikroskopijom, MTT testom i protočnom citometrijom. Ekspresija i aktivacija proteina uapoptozaput su otkriveni Western blotom. Antitumorski učinak in vivo procijenjen je na tumorskom modelu miša koji je uspostavljen korištenjem mužjaka Kunming miševa.
Rezultati:Liječenje CTPG značajno je potisnulo rast H22 stanica na način ovisan o dozi i vremenu, što je bilo u korelaciji s povećanimapoptozai zaustavljanje staničnog ciklusa u fazama G0/G1 i G2/M. Štoviše, uočena je kromosomska kondenzacija u H22 stanicama tretiranim CTPG-om. Liječenje CTPG-om značajno je povećalo omjer Bax/Bcl-2, smanjilo Δψm i pojačalo otpuštanje citokroma c. Razine pocijepane kaspaze-8 i kaspaze-9 u vanjskim i unutarnjim signalnim putovima bile su značajno povećane što je sekvencijalno aktiviralo kaspaze-7 i-3 za cijepanje PARP-a. Konačno, CTPG je inhibirao rast H22 stanica kod miševa i poboljšao stopu preživljavanja tumorskih miševa.
Zaključci: Ovi rezultati upućuju na to da CTPG suzbija rast H22 stanica putem ekstrinzičkih i intrinzičkihapoptozaputovi.
Ključne riječi: Cistanche tubulosa, Feniletanoidni glikozidi, Apoptoza, Signalni put, model miša tumora
Kliknite za organske feniletanoidne glikozide Cistanche tubulosa
Pozadina
Rak jetre zauzeo je šesto mjesto po učestalosti raka i četvrto mjesto po smrti od raka u svijetu. Štoviše, zauzeo je četvrto mjesto po učestalosti raka i prvo mjesto po smrtnosti od raka u zemljama s niskim sociodemografskim indeksom [1]. U Kini je rak jetre treći vodeći uzrok smrti od raka u 2015. [2]. Više od 90 posto primarnih karcinoma jetre u svijetu je hepatocelularni karcinom (HCC) [3]. Trenutačno je resekcija jetre glavna opcija za terapiju HCC-a. Međutim, manje od 30 posto bolesnika s HCC-om ispunilo je kriterije kurativne resekcije jetre, a ukupna 5--godišnja stopa preživljenja još uvijek je samo 35-50 posto zbog visoke stope recidiva [4, 5] . Dostupnost mogućnosti liječenja za bolesnike sa srednjim do uznapredovalim HCC-om vrlo je ograničena. Sorafenib, molekularno ciljani lijek, odobrila je FDA kao lijek prve linije za uznapredovali HCC. Međutim, sorafenib samo produljuje oko 3 mjeseca preživljenja, a stopa odgovora je manja od 4 posto [6, 7]. Hitno je potrebno razviti nove lijekove ili strategije protiv HCC-a.
Tradicionalna kineska medicina (TCM) sama ili u kombinaciji s drugim strategijama korištena je za liječenje HCC-a i pokazala je kliničke prednosti uključujući produljeno vrijeme preživljavanja, poboljšanu kvalitetu života, smanjene nuspojave i tako dalje [8, 9]. Cistanche, vrsta TCM-a, ima različite biološke funkcije, kao što su antioksidacijska, protuupalna, protiv starenja i neuroprotekcija [10, 11].Feniletanoidni glikozidismatraju se glavnim aktivnim komponentama Cistanche, koje imaju različite aktivnosti uključujući antioksidaciju, protuupalno, hepatoprotekciju i neuroprotekciju [12-15]. Naša grupa je to prijavilaCistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi(CTPG) mogao izazvatiapoptozau stanicama melanoma B16-F10 i inhibiraju rast tumora u miševa [16]. U ovoj studiji mjerili smo antitumorski učinak CTPG na HCC H22 stanice i in vitro i in vivo te istraživali njegove mehanizme. Našli smo taj CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)induciranapoptozau H22 stanicama kroz ekstrinzične i intrinzičke signalne putove i potisnuo je rast H22 tumora kod miševa.
metode
Stanična linija
Stanice mišjeg H22 hepatocelularnog karcinoma dobivene su iz Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, Xinjiang University (Urumqi, Xinjiang, Kina) i uzgojene u RPMI 1640 mediju (Gibco) s dodatkom 100 U/ml penicilina i 100 ug/ml streptomicin i 10 posto toplinski inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma (Gibco) na 37 stupnjeva u vlažnoj atmosferi od 5 posto CO2.
MTT test
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)je kupljen od Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, Kina), a glavni spojevi CTPG-a(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)kvalificirani su i kvantificirani tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti [16]. Vijabilnost stanica procijenjena je 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolij bromidom (MTT) (Sigma, St. Louis, MO , SAD). H22 stanice su inokulirane u 96-pločice s jažicama u gustoći od 2 × 104 stanice u 100 ul medija po jažici i uzgajane na 37 stupnjeva. Nakon 24 sata, stanice su tretirane različitim koncentracijama CTPG-a (0,100, 200, 300 i 400 ug/ml) ili 0,3 posto DMSO (jednako onom u 400 ug/ml CTPG-a) tijekom 24, 48 i 72 sata, redom. Nakon centrifugiranja na 1000 okretaja u minuti tijekom 7 minuta, supernatant je odbačen i 100 ul MTT otopine (5 mg/ml u PBS) je dodano u svaku jažicu. Ploče su inkubirane na 37 stupnjeva 4 h i dodano je 100 ul DMSO da se otope formirani kristali formazana. Vrijednosti OD490 detektirane su 96-čitačem mikropločica (Bio-Rad Laboratories, CA, SAD). Vijabilnost stanica izračunata je prema formuli: Vijabilnost stanica (postotak)=(ODtretirane/ODnetretirane) x 100 posto.
Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi
Detekcija apoptoze
H22 stanice su tretirane različitim koncentracijama CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)({{0}}, 100, 200, 300 i 400 ug/ml) ili 0,3 posto DMSO tijekom 24 sata, a zatim obojen Annexin VFITC/Propidium jodidom (PI)ApoptozaKomplet za detekciju (YEASEN, Kina) prema uputama proizvođača. Uzorci su analizirani protočnom citometrijom (BD FACSCalibur, SAD).
Detekcija potencijala mitohondrijske membrane
H22 stanice su tretirane različitim koncentracijama CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)(0, 200 i 400 ug/ml) tijekom 24 h, a zatim obojeni bojom propusnom za membranu JC-1 (Beyotime, Kina) 20 minuta na 37 stupnjeva. Nakon dva puta ispiranja s JC-1 puferom, uzorci su resuspendirani s 300 ul JC-1 pufera i analizirani protočnom citometrijom (BD FACSCalibur, SAD).
Analiza staničnog ciklusa
H22 stanice su inokulirane u 60 mm zdjelice za kulturu i tretirane različitim koncentracijama CTPG (0, 100,200, 300 i 400 ug/ml) ili 0,3 posto DMSO tijekom 24 sata . Sve stanice su sakupljene i isprane dva puta s PBS. Stanice su fiksirane u 70-postotnom ledeno hladnom etanolu na -20 stupnjeva tijekom 2 h i isprane dva puta s PBS-om, zatim ponovno suspendirane u 300 ul pufera za bojenje Propidium jodid/RNase (BD Biosciences). Nakon 10 minuta na sobnoj temperaturi uzorci su prikupljeni protočnom citometrijom (BD FACSCalibur, SAD), a distribucija staničnog ciklusa analizirana je programom ModFit LT 3.0.
feniletanoidni glikozidiuCistanche tubulosa
Hoechst 33,258 bojenje
Morfološke promjene H22 staničnih jezgri analizirane su membranski permeabilnom DNA-vezujućom bojom Hoechst 33,258. H22 stanice su nasađene u 6-pločicu s jažicom u koncentraciji od 1 × 105 stanica/jažici u mediju od 2 ml. Nakon 60-70 posto konfluencije, stanice su tretirane s CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)(0, 100, 200, 300 i 400 ug/ml) tijekom 24 h. Stanice su sakupljene i fiksirane s 4 posto ledeno hladnim paraformaldehidom na 4 stupnja tijekom 10 minuta. Nakon ispiranja s PBS-om, stanice su obojene s Hoechst 33,258 (Beyotime, Kina) na 4 stupnja tijekom 10 minuta. Uzorci su promatrani invertnim fluorescentnim mikroskopom (Nikon Eclipse Ti-E, Japan).
Western blot
Anti-kaspaza-3, anti-cijepana kaspaza-3, anti-Bcl-2 i anti-Bax kupljeni su od Beyotime Biotech Co., Ltd. (Šangaj, Kina). Anti-kaspaza-7, anti-cijepana-kaspaza-7,anti-kaspaza-8, anti-cijepana-kaspaza-8, anti-kaspaza-9, anti cijepana kaspaza-9, anti-PARP, anti-cijepani PARP, antimišji IgG-HRP i anti-zečji IgG-HRP kupljeni su od Cell Signaling Technology. Anti- -aktin je kupljen od Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (Peking, Kina).
H22 stanice su tretirane različitim koncentracijama CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)({{0}}, 100, 200, 300 i 400 ug/ml) ili 0,3 posto DMSO tijekom 24 sata. Stanice su sakupljene i lizirane otopinom za lizu stanica RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) 30 minuta na ledu. Uzorci su centrifugirani (12,000 g tijekom 15 minuta na 4 stupnja) kako bi se prikupili supernatanti, a koncentracije proteina izmjerene su BCA priborom (Thermo Fisher Scientific, SAD). Jednaka količina proteina u svakom uzorku izolirana je pomoću 12 posto SDS-PAGE i prenesena na PVDF membrane (Biosharp, Kina). Nakon blokiranja puferom TBST koji je sadržavao 5 posto nemasnog mlijeka, membrane su inkubirane s odgovarajućim primarnim antitijelima i sekundarnim antitijelima konjugiranim na peroksidazu hrena (HRP). Nakon ispiranja s TBST-om, ciljni proteini su detektirani ECL kompletom za ispitivanje (Beyotime, Kina).
Životinje i etička izjava
Muški Kunming miševi stari 6-8 tjedana kupljeni su od Animal Laboratory Center, Xinjiang Medical University (Urumqi, Xinjiang, Kina). Miševi su držani u standardnoj ustanovi za životinje sa kontroliranom temperaturom i svjetlosnim ciklusima Sveučilišta Xinjiang. Sve studije na životinjama provedene su u skladu sa smjernicama Odbora za brigu i korištenje životinja Sveučilišta Xinjiang. Protokol je odobrio Odbor za etiku pokusa na životinjama Ključnog laboratorija za biološke resurse i genetski inženjering u Xinjiangu (BRGE-AE001) Sveučilišta Xinjiang.
Studija tumora na mišu
Za indukciju tumorskog mišjeg modela, mužjacima Kunming miševa supkutano je ubrizgano 1 × 106 H22 stanica u 100 ul PBS-a u desni bok. Nakon 3 dana, miševi su nasumično podijeljeni u 3 skupine (7 miševa po skupini). Kontrolnoj skupini ubrizgano je 0,1 ml DMSO supkutano oko tumora. Skupinama CTPG-200 i CTPG-400 supkutano je ubrizgano 200 ili 400 mg/kg CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)u 0.1 ml DMSO oko tumora. Miševi su tretirani svaka 2 dana do 21 dan. Veličine tumora mjerene su kaliperima do 25 dana, a volumen tumora izračunat je prema formuli: volumen tumora (mm3)=(duljinaךirina2)/2. Nakon 25 dana, preživljenje tumorskih miševa praćeno je svaki dan do kraja ove studije.
Statistička analiza
Statistička značajnost izračunata je jednosmjernom analizom varijance između liječenih i kontrolnih skupina. Svi podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). p < 0.05="" smatra="" se="" statistički="">
Rezultati
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)smanjio održivost H22 stanica in vitro
Kako bi se istražio antitumorski učinak CTPG-a(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)na HCC, H22 stanice su tretirane različitim koncentracijama CTPG (0, 100, 200, 300 i 400 ug/ml) in vitro. Nakon 24 sata, morfologija H22 stanica promatrana je pomoću invertnog mikroskopa. Otkrili smo da je morfologija H22 stanica dramatično promijenjena tretmanom CTPG-om. S povećanjem koncentracije CTPG-a, stanice su postale male i okrugle, a broj stanica također se znatno smanjio (slika 1a). MTT test korišten je za analizu održivosti H22 stanica nakon tretmana CTPG-om tijekom 24, 48, odnosno 72 sata. CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)značajno smanjena vitalnost stanica H22 na način ovisan o dozi i vremenu (slika 1b). CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)pri 300 ug/ml postigao je najbolju stopu inhibicije (slika 1c). Vrijednosti IC50 CTPG za H22 stanice su 236 ug/ml nakon 24 sata i 169,8 ug/ml nakon 48 sati.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)induciranu apoptozu u H22 stanicama
Kako bi se istražilo je li smanjena vitalnost H22 stanica posredovana indukcijomapoptoza, stanice H22 tretirane su različitim koncentracijama CTPG (0, 100, 200, 300 i 400 ug/ml) tijekom 24 sata i obojene PI i aneksinom V. Rezultati protočne citometrije pokazali su da CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)značajno induciranapoptozaH22 stanica (uključujući rane i kasneapoptoza) na način ovisan o dozi (slika 2a). Iako visoka doza CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)također značajno povećana nekroza H22 stanica, nekroza igra manju ulogu u inhibiciji rasta H22 stanica zbog nižeg udjela (8,3 posto) u usporedbi s onimapoptoza(52,6 posto). Nadalje, ukupni proteini H22 stanica izolirani su nakon CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)obrade i ekspresije anti-apoptotskog B-staničnog limfoma 2 (Bcl-2) i proapoptotskog BCL-2-povezanog X proteina (Bax) detektirane su Western blotom. Podaci skeniranja u sivim tonovima pokazali su da su razine ekspresije Bax i Bcl-2 povećane odnosno smanjene. Omjer Bax/Bcl-2 značajno je povećan (slika 2b). Ovi rezultati sugeriraju da CTPG induciraapoptozau H22 stanicama.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)inducira kromosomsku kondenzaciju i zaustavljanje staničnog ciklusa u H22 stanicama
Zabilježeno je da oštećenje DNK i zaustavljanje staničnog ciklusa izazvano lijekovima može inhibirati rast tumorskih stanica i uzrokovatiapoptozau tumorskim stanicama [17, 18]. Za otkrivanje morfologije jezgri u H22 stanicama nakon CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)tretmana tijekom 24 sata, H22 stanice su obojene Hoechstom 33,342 i promatrane pomoću invertne fluorescentne mikroskopije. CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)tretirane stanice pokazale su o dozi ovisan porast jarko kondenziranog kromatina jezgri, dok su netretirane stanice pokazale homogeno obojene jezgre (slika 3a). Distribucija staničnog ciklusa u H22 stanicama dalje je analizirana PI bojenjem nakon tretmana CTPG-om tijekom 24 sata. Kao što je prikazano na slici 3b, CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)liječenje je značajno povećalo udio stanica G0/G1- i G2/M-faze i značajno smanjilo udio stanica S-faze, što sugerira da CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)inducira G0/G1 i G2/M fazni zastoj u H22 stanicama. Visoka doza CTPG također je značajno povećala udio sub G1 stanica.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)smanjen potencijal mitohondrijske membrane i povećano otpuštanje citokroma c
put ovisan o mitohondrijima igra važnu ulogu u indukcijiapoptoza[19, 20]. Promjene potencijala mitohondrijske membrane (Δψm) mogu biti
praćeno JC-1 bojenjem zbog JC-1 agregata (crvena fluorescencija) može se raspasti u monomer (zelena fluorescencija) uz smanjenje Δψm [21]. Nakon CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)tretmana tijekom 24 sata, H22 stanice su obojene JC-1 bojom. Podaci protočne citometrije pokazali su da su crvena fluorescencija u FL-2 kanalu i zelena fluorescencija u FL-1 kanalu značajno smanjene i povećane nakon CTPG-a(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)liječenje. Udio PE−FITC plus stanica bio je značajno povećan (Sl. 4a), što sugerira da CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)smanjio Δψm u H22 stanicama. To je u skladu s povećanim omjerom Bax/Bcl-2. Posljedično, primijetili smo da je oslobađanje citokroma c značajno povećano nakon CTPG-a(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)tretman (slika 4b). Ovi rezultati pokazuju da bi CTPG mogao djelomično induciratiapoptozau H22 stanicama mitohondrijskim (intrinzičnim) putem.
CTPG je aktivirao put kaspaze i spriječio popravak DNK
Zatim, aktivacija kaspaze inducirana CTPG-om(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)analiziran je i preko vanjskih i unutarnjih signalnih putova. Nakon CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)tretmana tijekom 24 h, ukupni proteini su izolirani iz H22 stanica i razine pro- i cijepanih kaspaza su detektirane Western blotom. U usporedbi s netretiranom ili DMSO kontrolom, CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)liječenje je značajno povećalo ne samo razinu pocijepane kaspaze-8 (vanjski put), već i razinu pocijepane kaspaze-9 (unutarnji put) (slika 5). Sekvencijalno, aktivirane kaspaze-8 i -9 cijepaju nizvodnu pro-kaspazu-3 i -7 koje su opažene na slici 5. Aktivirana kaspaza-3 cijepa DNK popravak enzima poli (ADP-riboza) polimeraze (PARP) kako bi se spriječio popravak DNA i akumulacija oštećenja DNA kao što je prikazano na slici 3a. Ovi rezultati su pokazali da CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)induciranapoptozau H22 stanicama kroz ekstrinzične i intrinzične signalne putove.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)suzbija rast H22 HCC in vivo i poboljšava stopu preživljavanja tumorskih miševa
Konačno, antitumorski učinak CTPG-a(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)na HCC procijenjen je u tumorskom mišjem modelu, koji je ustanovljen supkutanom injekcijom H22 stanica. Nakon 3 dana injekcije H22 stanica, tumorski miševi su tretirani s CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)8 puta. Tjelesna težina miševa i veličina tumora praćeni su u naznačenim vremenskim točkama. Kao što je prikazano na slici 6a, tjelesna težina miševa u svakoj skupini nema značajne razlike, što sugerira da odabrane doze CTPG-a(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)nema očitih nuspojava. Zanimljivo je da je rast tumora kod miševa tretiranih i s 200 mg/kg i s 400 mg/kg CTPG-a bio značajno inhibiran (slika 6b). Štoviše, dvije doze CTPG-a(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)liječenje je uvelike poboljšalo preživljavanje tumorskih miševa (3/7, 3/7) u usporedbi s kontrolnom skupinom (0/7) na kraju eksperimenta (slika 6b). Također smo otkrili da CTPG značajno pojačava proliferaciju splenocita izoliranih iz mužjaka Kunming miševa na način ovisan o dozi (slika 6c), što sugerira da CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)ima imunostimulirajući učinak.
Rasprava
TKM se već dugu povijest koristi za liječenje raznih bolesti uključujući rak. Zabilježeno je da TCM može izazvatiapoptozau različitim tipovima tumorskih stanica kroz ekstrinzične (posredovane receptorima smrti) i unutarnje (ovisne o mitohondrijima) signalne putove za ispoljavanje antitumorskih učinaka [22-25]. Ova dva puta mogu aktivirati kaspazu -8 i -9 [24, 26]. Evo, pronašli smo taj CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)značajno potisnuo rast H22 stanica putem indukcije apoptoze i zaustavljanja staničnog ciklusa. Razine pocijepane kaspaze-8 i -9 značajno su regulirane prema gore pomoću CTPG-a(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)liječenja, što sugerira da su i vanjski i unutarnji signalni putovi bili uključeni u indukcijuapoptoza. Naša prethodna studija pokazala je da CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)inducirao je apoptozu u stanicama melanoma B16-F10 putem ovisnim o mitohondrijima koji je povećao razinu pocijepane kaspaze-9, ali ne i kaspaze-8 [16]. CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)mogu aktivirati različite signalne putove u različitim tipovima tumorskih stanica.
Integritet mitohondrijske membrane strogo reguliraju članovi obitelji proteina BCL-2 uključujući Bax i Bcl-2 [27, 28]. Omjer Bax prema Bcl-2 igra ključnu ulogu u mitohondrijskom ovisnomapoptozaput [29]. U stanicama H22 tretiranim CTPG-om(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi), omjer Bax/Bcl-2 bio je značajno reguliran prema gore, što bi moglo uzrokovati smanjenje Δψm i otpuštanje citokroma c promatrano u ovoj studiji. Posljedično, pro-kaspaza-9 je odcijepljena i aktivirana. Konačno, inicijatori aktivne kaspaze-8 i -9 aktivirali su izvršitelja kaspaze-3 da cijepa PARP kako bi spriječio popravak DNK. Uzeti zajedno, ovi rezultati sugeriraju da je CTPG induciraoapoptozau H22 stanicama kroz ekstrinzične i intrinzične signalne putove. U modelu tumorskog miša, CTPG je značajno potisnuo rast H22 HCC i znatno poboljšao preživljavanje tumorskih miševa. Zanimljivo, CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)ovisno o dozi pospješuje proliferaciju splenocita Kunming miševa, što je u skladu s našom prethodnom studijom [16]. Ovi rezultati sugeriraju da bi CTPG mogao potisnuti rast H22 HCC u miševa kroz izravni antitumorski učinak i posredno jačanje imunološkog sustava.
Cistanche tululosaproizvoda
Zaključci
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)potisnuo je rast H22 stanica i in vitro i in vivo i induciraoapoptozau H22 stanicama kroz ekstrinzične i intrinzične signalne putove. Ovi podaci su pokazali da CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi)mogao biti potencijalni kandidat za liječenje HCC-a.
Kratice
Bax: BCL-2-povezani X protein; Bcl-2: B-stanični limfom 2; CTPG:Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidi; HCC: hepatocelularni karcinom; HRP: peroksidaza hrena; MTT: 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolijev bromid; PARP: enzim za popravak DNA poli (ADP-riboza)polimeraze; TKM: tradicionalna kineska medicina; Δψm: potencijal mitohondrijske membrane
Financiranje
Ovaj rad je podržan od strane Projekta uvođenja talenata na visokoj razini autonomne regije Xinjiang Uygur u JL, donacije Kineske nacionalne zaklade za prirodne znanosti (31460241) u JL i Fonda za osnivanje doktorskih studija Sveučilišta Xinjiang (BS160261 do XW i BS150236 do YL).
Dostupnost podataka i materijala
Neobrađeni podaci za ovu studiju dostupni su na razuman zahtjev odgovarajućem autoru.
Prilozi autora
JL i JL osmislili su eksperimente. PY, JL, AA i YY izveli su eksperimente. LX, XW i YL analizirali su podatke. PY, JL i JL napisali su rukopis. Svi su autori doprinijeli i odobrili konačni rukopis.
Etičko odobrenje
Studiju na životinjama odobrio je Odbor za etiku pokusa na životinjama Ključnog laboratorija za biološke resurse i genetski inženjering u Xinjiangu Sveučilišta Xinjiang
Suprotstavljeni interesi
Autori izjavljuju da nemaju suprotstavljenih interesa.
Napomena izdavača
Springer Nature ostaje neutralan u pogledu tvrdnji o nadležnosti u objavljenim kartama i institucionalnim vezama.
Podaci o autoru
1Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, College of Life Science and Technology, Xinjiang University, 666 Shengli Road, Urumqi, Xinjiang 830046, Kina.2College of Life Science, Xinjiang Normal University, 102 Xinyi Road, Urumqi 830054, Xinjiang, Kina.3Pridružena bolnica za tumore Medicinskog sveučilišta Xinjiang, Urumqi 830011, Kina.
Cistanche tululosaproizvoda
Od: 'Cistanche tubulosa feniletanoidni glikozidiinduciratiapoptozau stanicama H22 hepatocelularnog karcinoma kroz ekstrinzične i intrinzičke signalne putove' Pengfei Yuan1 i sur.
---Yuan et al. BMC komplementarna i alternativna medicina (2018) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1
Reference
1. Global Burden of Disease Cancer Collaboration, Fitzmaurice C, Allen C, Barber RM, Barregard L, Bhutta ZA, Brenner H, Dicker DJ, Chimed-Orchir O, Dandona R, et al. Globalna, regionalna i nacionalna učestalost raka, smrtnost, izgubljene godine života, godine proživljene s invaliditetom i godine života prilagođene invaliditetu za 32 skupine raka, 1990. do 2015.: sustavna analiza za istraživanje globalnog tereta bolesti. JAMA Oncol. 2017;3:524-48.
2. Chen W, Zheng R, Baade PD, Zhang S, Zeng H, Bray F, Jemal A, Yu XQ, He J. Statistika raka u Kini, 2015. CA Cancer J Clin. 2016;66:115–32.3. Europska udruga za proučavanje jetre, Europska organizacija za istraživanje i liječenje raka. Smjernice kliničke prakse EASL-EORTC: liječenje hepatocelularnog karcinoma. JHepatol. 2012;56:908-43.
4. Roayaie S, Obeidat K, Sposito C, Mariani L, Bhoori S, Pellegrinelli A, Labow D, Llovet JM, Schwartz M, Mazzaferro V. Resekcija hepatocelularnog karcinoma Manje od ili jednako 2 cm: rezultati iz dva zapadna centra. Hepatologija. 2013;57:1426-35.
5. Ting CT, Cheng YY, Tsai TH. Interakcija biljaka i lijekova između tradicionalne hepatoprotektivne formulacije i sorafeniba na hepatotoksičnost, histopatologiju i farmakokinetiku u štakora. Molekule. 2017;22:E1034.
6. Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, Santoro A, Raoul JL, Forner A, et al. Sorafenib u uznapredovalom hepatocelularnom karcinomu. N Engl J Med. 2008;359:378-90.
7. Cheng AL, Kang YK, Chen Z, Tsao CJ, Qin S, Kim JS, Luo R, Feng J, Ye S, Yang TS, et al. Učinkovitost i sigurnost sorafeniba u bolesnika u azijsko-pacifičkoj regiji s uznapredovalim hepatocelularnim karcinomom: randomizirano, dvostruko slijepo, placebom kontrolirano ispitivanje faze III. Lancet Oncol. 2009;10:25-34.
8. Shi Z, Song T, Wan Y, Xie J, Yan Y, Shi K, Du Y, Shang L. Sustavni pregled i meta-analiza tradicionalne kineske medicine protiv insekata kombinirane kemoterapije za nekiruršku terapiju hepatocelularnog karcinoma. Sci Rep.2017;7:4355.
9. Yang Z, Liao X, Lu Y, Xu Q, Tang B, Chen X, Yu Y. Dodatna terapija tradicionalnom kineskom medicinom poboljšava ishode i smanjuje nuspojave kod hepatocelularnog karcinoma: meta-analiza randomiziranih kontroliranih ispitivanja. Evid Based Complement Alternat Med. 2017;2017:3428253.
10. Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR. Antinociceptivno i protuupalno djelovanje uzrokovano Cistanche deserticola u glodavaca. J Ethnopharmacol. 2002;83:177–82.
11. Wu CR, Lin HC, Su MH. Poništavanje vodenim ekstraktimaCistanche tubulosaiz poremećaja ponašanja u modelu štakora sličnom Alzheimerovoj bolesti: relevantnost za taloženje amiloida i funkciju središnjeg neurotransmitera. BMC komplement Altern Med. 2014;14:202.
12. Jiang Y, Tu PF. Analiza kemijskih sastojaka vrsta Cistanche. JChromatogr A. 2009;1216:1970–9.
13. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Acilirani feniletanoidni oligo glikozidi s hepatoprotektivnim djelovanjem iz pustinjske biljkeCistanche tubulosa.Bioorg Med Chem. 2010.; 18:1882–90.
14. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF.Feniletanoidni glikozidis protuupalnim djelovanjem iz stabljika Cistanche deserticola uzgojenih u pustinji Tarim. Fitoterapia.2013;89:167–74.
15. Deng M, Zhao J, Tu P, Jiang Y, Li Z, Wang Y. Echinacoside obnavlja SHSY5Y neuronske stanice iz TNF-induciranihapoptoza. Eur J Pharmacol. 2004;505:11-8.
16. Li J, Li J, Aipire A, Gao L, Huo S, Luo J, Zhang F.Feniletanoidni glikozidiizCistanche tubulosainhibira rast B{0}}F10 stanica i in vitro i in vivo indukcijomapoptozaputem puta koji ovisi o mitohondrijima. J Rak. 2016;7:1877–87.
17. Shang HS, Chang CH, Chou YR, Yeh MY, Au MK, Lu HF, Chu YL, Chou HM, Chou HC, Shih YL, et al. Kurkumin uzrokuje oštećenje DNK i utječe na povezanu ekspresiju proteina u HeLa ljudskim stanicama raka vrata maternice. Oncol Rep. 2016;36:2207-15.
18. Wang R, Zhang Q, Peng X, Zhou C, Zhong Y, Chen X, Qiu Y, Jin M, Gong M, Kong D. Stellettin B inducira G1 zastoj,apoptozai autofagija u ljudskim stanicama karcinoma pluća nemalih stanica A549 putem blokiranja PI3K/Akt/mTOR puta. Sci Rep. 2016;6:27071.
19. Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Oksidativni stres: putevi ovisni i neovisni o mitohondrijimaapoptoza. Arch Toxicol. 2013.; 87: 1157-80.
20. Zhang YS, Shen Q, Li J. Tradicionalna kineska medicina usmjerena na apoptotičke mehanizme za terapiju raka jednjaka. Acta Pharmacol Sin. 2016.; 37: 295-302.
21. Chong ZZ, Lin SH, Li F, Maiese K. Inhibitor sirtuina nikotinamid povećava preživljavanje neuronskih stanica tijekom akutne anoksične ozljede kroz AKT, BAD, PARP i "anti-apoptotičke" puteve povezane s mitohondrijima. Curr Neurovasc Res. 2005;2:271–85.
22. Hu B, Wang SS, Du Q. Tradicionalna kineska medicina za prevenciju i liječenje hepatokarcinoma: od klupe do kreveta. Svijet J Hepatol. 2015;7:1209-32.
23. Hu B, An HM, Wang SS, Chen JJ, Xu L. Preventivni i terapeutski učinci kineskih biljnih spojeva protiv hepatocelularnog karcinoma. Molekule. 2016;21:142.
24. Xu H, Zhao X, Liu X, Xu P, Zhang K, Lin X. Antitumorski učinci tradicionalne kineske medicine usmjereni na stanični apoptotski put. Drug Des Devel Ther. 2015;9:2735-44.
25. Li-Weber M. Ciljanjeapoptozaputova kod raka prema kineskoj medicini. Rak Lett. 2013;332:304–12.
26. Xu G, Shi Y.Apoptozasignalnih putova i homeostaze limfocita. Cell Res. 2007;17:759-71.
27. Tait SW, Green DR. Mitohondriji i stanična smrt: permeabilizacija vanjske membrane i šire. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010;11:621-32.
28. Galluzzi L, Kepp O, Kroemer G. Mitohondriji: glavni regulatori signalizacije opasnosti. Nat Rev Mol Cell Biol. 2012;13:780–8.
29. Martinou JC, Youle RJ. Mitohondriji uapoptoza: Bcl-2 članovi obitelji i mitohondrijska dinamika. Dev Cell. 2011;21:92-101.
