Cistanche polisaharidi inhibiraju proliferaciju stanica raka prostate i induciraju apoptozu stvaranjem ROS-a i supresijom gena antioksidansa

Sažetak:
Cilj:Istražiti učinke i temeljne mehanizmeCistanche polisaharidina proliferaciju i apoptozustanice raka prostate.

Metode:
Ljudske stanice raka prostate DU145 tretirane su niskim, srednjim i visokim koncentracijamaCistanche polisaharidi(20, 40, odnosno 80 mg/mL). Proliferacija stanica procijenjena je korištenjemMTT test, a apoptozu je procijenioprotočna citometrija. Unutarstaničnireaktivne vrste kisika (ROS)razine su mjerene protočnom citometrijom, dokglutation (GSH)razine su određene pomoćuELISA. Razina ekspresije mRNA i proteinakatalitička podjedinica glutamat-cistein ligaze (GCLC), podjedinica modifikatora glutamat-cistein ligaze (GCLM), itioredoksin reduktaza 1 (TXNRD1)analizirali suRT-PCRiWestern blot, odnosno.

Rezultati:
Polumaksimalna inhibitorna koncentracija (IC50) odCistanche polisaharidina DU145 stanicama bio je 40,35 mg/mL, stoga je 40 mg/mL odabrano kao srednja doza za sljedeće eksperimente. Niska, srednja i visoka doza definirane su kao 50%, 100%, odnosno 200% IC50.

Sve liječene skupine pokazale su značajno povećane stope apoptoze u usporedbi s kontrolnom skupinom. Thevisoka doza skupine Cistanchepokazali su najveću inhibiciju stanične proliferacije i najveću stopu apoptoze, a slijede ih skupine srednje i niske doze (P< 0,01). Razine ROS bile su značajno povišene, a razine GSH bile su značajno smanjene kod svihSkupine tretirane cistankomnaspram kontrole. Naime,skupinu visoke dozeimale su znatno više ROS i niže razine GSH nego skupine sa srednjom i niskom dozom (P< 0,05); skupina sa srednjom dozom pokazala je slične razlike u usporedbi sa skupinom s niskom dozom (P< 0,05).

Razine izražavanjaGCLC, GCLM, iTXNRD1(i mRNA i protein) bili su značajno smanjeni u svim skupinama liječenim Cistancheom u usporedbi s kontrolom (P< 0,05). Theskupinu visoke dozepokazala je najznačajniju supresiju ovih gena i proteina povezanih s antioksidansima, nakon čega slijede skupine sa srednjim i niskim dozama (P< 0,05).

Zaključak:
Cistanche polisaharidiinhibiraju ekspresiju antioksidativnih faktoraGCLC, GCLM, iTXNRD1, čime se smanjujeGSH sinteza, promicanjeAkumulacija ROS-a, te u konačnici induciranjeapoptoza u stanicama raka prostate. Ovi nalazi sugeriraju daCistanchemože poslužiti kao aprirodno terapeutsko sredstvoza rak prostate putemmehanizmi posredovani oksidativnim stresom.

Cistanche tubulosa-

Ekstrakt Cistanche s visokim sadržajem polisaharida

Kupi sada

Usluga podrške tvrtke Wecistanche-Kontaktirajte nas da biste dobili veleprodajnu cijenu
E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/telefon:+86 15292862950

Pozadina i metode

Rak prostateiznosi otprilike7,1% svih muških zloćudnih bolesti, s vršnom incidencijom nakon 60. godine života. Kako stanovništvo Kine i dalje stari, očekuje se da će učestalost ove bolesti dodatno rasti [1]. Studije pokazuju da bi visoka prevalencija raka prostate kod starijih muškaraca mogla biti povezana sdegenerativne promjene u prostati, genetska predispozicija, prehrambene navike, ičimbenici načina života [2].

Kirurška resekcijaostaje glavno uporište u liječenju raka prostate, s ciljem uklanjanja većine tumorske mase. Međutim, to je povezano sa značajnim komplikacijama, kao što jeurinarna inkontinencija, seksualna disfunkcija, i najkritičnije,recidiv tumora i metastaze, koji su glavni uzroci loše prognoze [3].

Posljednjih godina,Tradicionalna kineska medicina (TCM)privukao je sve veću pozornost zbog svoje uloge u terapiji raka. TCM može pomoćiojačati imunitet, spriječiti nuspojave kemoterapije/radioterapije, ipojačati detoksikaciju. Izloženo je i nešto ljekovitog biljaizravna antitumorska svojstva, uključujući inhibiciju rasta tumora iindukcija apoptoze u stanicama raka [4].

Među ovim,Cistanche (Cistanche deserticola)tradicionalna je tonik biljka poznata po svojimimunomodulatorni, antioksidativni, iantitumorske učinke. Njegove glavne bioaktivne komponente supolisaharidiifeniletanoidni glikozidi. Ova studija istražuje učinke i temeljni mehanizamCistanche polisaharidinaproliferacija i apoptoza DU145 stanica raka prostate.

Buy Cistanche With 25 Echinacoside and 9 Acteoside

1. Materijali i metode

1.1 Glavni materijali i reagensi

DU145 ljudske stanice raka prostatedobiveni su od Tongpai Biotech (Šangaj, Kina).

Cistanche polisaharidi(Broj serije: 0287181) kupljeni su od Weikeqi Bio Co., Ltd. (Sichuan, Kina).

Fetalni goveđi serum, penicilin/streptomicin, iDMEMosigurao je Zeta Life (SAD).

MTT test, Kompleti za apoptozu Annexin V/PI, RIPA pufer za lizu, Kompleti za kvantifikaciju BCA proteinadobiveni su od Elabscience (Šangaj, Kina).

Komplet za detekciju reaktivnih kisikovih vrsta (ROS).iGSH ELISA setovikupljeni su od BioLaba (Šangaj, Kina).

Trizol reagens, kompleti za obrnutu transkripciju, iPCR setovipotječu iz NeuroSyma (Hangzhou, Kina).

Antitijela protivGCLC, GCLM, TXNRD1, -aktin, a odgovarajuća sekundarna antitijela kupljena su od UnivBio (Šangaj, Kina).

cistanche deserticola

1.2 Kultura stanica i analiza proliferacije

Stanice DU145 uzgajane su uDMEM dopunjen s 10% FBS i 1% penicilina/streptomicinau CO₂ inkubatoru. ZaMTT test, stanice DU145 logaritamske faze posađene su u ploče s 96 jažica i tretirane sCistanche otopine polisaharidau koncentracijama od10, 20, 40 i 80 mg/mL. Kontrolna skupina je primila samo DMEM medij.

Nakon 24 sata tretmana,20 uL 5 mg/mL MTTDodana je u svaku jažicu i inkubirana 4 sata. Supernatant je uklonjen i150 uL DMSOje dodan. Nakon mućkanja od 10 minuta, apsorbancija je izmjerena na490 nmpomoću čitača mikropločica. TheIC5₀je izračunat, i20, 40 i 80 mg/mLodabrani su kaoniske, srednje i visoke dozeza naknadne eksperimente. Thestopa inhibicije stanične proliferacijeizračunato je kao:
Stopa inhibicije (%)=(OD_kontrola - OD_tretirano) / OD_kontrola × 100

cistanche coffee

1.3 Test apoptoze

Log-faze DU145 stanice su tretirane različitim koncentracijamaCistanche polisaharidiprema grupiranjima. Nakon fiksiranja i bojanja,Aneksin V-FITCiPIkorišteni su za označavanje apoptotskih stanica.Protočna citometrijaprovedeno je za otkrivanje signala fluorescencije, te je zabilježen postotak apoptotskih stanica.

1.4 Detekcija unutarstaničnih razina ROS i GSH

Razine ROS-a mjerene su pomoću aROS fluorescentna sondai protočna citometrija. Razine GSH su kvantificirane pomoćuELISA. Standardna krivulja je pripremljena koristeći poznate koncentracije GSH standarda, a apsorbancija je izmjerena da se izračunaju koncentracije GSH u uzorcima.

1.5 RT-PCR za mRNA ekspresiju GCLC, GCLM, TXNRD1

Ukupna RNA je ekstrahirana pomoćuTrizol, i cDNA je sintetizirana. PCR je proveden pomoću specifičnih početnica:

GCLC:

Naprijed: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'

Naličje: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'

GCLM:

Naprijed: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'

Naličje: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'

TXNRD1:

Naprijed: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'

Naličje: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'

-aktin (unutarnja kontrola):

Naprijed: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'

Naličje: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'

Uvjeti pojačanja: 95 stupnjeva tijekom 60 s, nakon čega slijedi 30 ciklusa od 95 stupnjeva tijekom 30 s, 60 stupnjeva tijekom 30 s i 72 stupnja tijekom 60 s. PCR produkte analizirali sugel elektroforeza, a relativna ekspresija gena je normalizirana na-aktin.

1.6 Western blotting za ekspresiju proteina

Ukupni protein je ekstrahiran pomoćuRIPA međuspremnik, a koncentracija proteina određena jeBCA test. Proteini su odvojeni pomoćuSDS-STRANICA, preneseno naPVDF membrane, blokiran i inkubiran preko noći na 4 stupnja s primarnim antitijelima protivGCLC, GCLM, TXNRD1, i-aktin. Nakon inkubacije saHRP-konjugirana sekundarna antitijela, bendovi su vizualizirani pomoćukemiluminiscencijai kvantificirano premaImageJ softver.