Cistanche Deserticola Polisaharidi prigušuju dijabetičku nefropatiju kod miševa utječući na crijevnu floru i inhibirajući signalni put receptora 4/nuklearni faktor-faktor κB ⅱ

2.5 Učinak CDP -a na patologiju debelog crijeva kod C57BL/6J miševa

Cistanche Deserticola ekstrakt praha iz visokokvalitetnih sirovina

Kliknite da biste dobili više detalja

Kao što je prikazano na slici 2, H&E bojenje otkrilo je da je struktura tkiva debelog crijeva normalnih miševa bila normalna, kripte su bile uredno i čvrsto raspoređene, broj je bio velik, a epitelne stanice nisu imale očitu degeneraciju i prolijevanje. Suprotno tome, DN miševi pokazali su očigledno prolijevanje epitelnih stanica debelog crijeva, infiltracije upalnih stanica, oštećenja kriptova stanica, nestanka crijevne žlijezde i povećane propusnosti. Nakon 4 tjedna intervencije CDPS -a, gornji patološki uvjeti oporavili su se u različitim stupnjevima.

Rezultati obojenja AB-PAS pokazali su da je u usporedbi s kontrolnom skupinom broj nečuvenih peharnih stanica u debelom crijevu miševa modela u grupi značajno smanjen, a izlučivanje kiselog proteina sluzi značajno je povećano; Broj nezabilježenih pehara u debelom crijevu kontrolne skupine bio je najveći; U usporedbi s skupinom modela, smanjena je izlučivanje proteina sluznice u kolonijskoj kiselini u grupi CDPS-H.

Slika 2 Učinak CDP-a na histopatološke promjene debelog crijeva kod DN miševa kako su ispitali H&E i AB-PAS bojenje

2.6 Učinak CDP -a na crijevnu floru C57BL/6J miševa

Učinci CDP-a na biokemijske pokazatelje i patološke rezultate DN miševa sve je sveobuhvatno analizirani, a sadržaj miševa u debelom crijevu u grupi CDPS-H s najboljom ukupnom učinkovitošću odabran je za istraživanje crijevne flore.

2.6.1 Varijanta sekvence AMPLICON (ASV) Distributivni Venn dijagram kao što je prikazano na slici 3, u usporedbi s kontrolnom skupinom, relativno obilje crijevne flore u miševima u grupi modela smanjilo se, a relativno obilje se poboljšalo nakon tretmana CDPS -om.

Ciganche

2.6.2 Analiza alfa raznolikosti kao što je prikazano u tablici 6, u usporedbi s kontrolnom skupinom, indeks chao1 crijevne flore miševa u grupi modela smanjio se. Nakon intervencije CDPS -a, indeks ChaO1 povećao se, ali nije bilo statističke značajnosti, što ukazuje da CDP -ovi mogu promijeniti strukturu crijevne flore povećavajući ukupni broj vrsta. Indeks pokrivanja je blizu 1, što ukazuje da rezultati sekvenciranja u osnovi mogu odražavati pravu situaciju uzorka. Nije bilo statistički značajne razlike u Shannonu, Simpsonu, pokrivenosti i Pielou _ E Index među skupinama, što ukazuje da su bogatstvo vrsta i raznolikost okolišnih zajednica u svakoj skupini bili dobri, a pokrivenost kolonije bila je dosljedna i ravnomjerno raspoređena.

Sl. 3 Venn Diagram distribucije ASV -a

Tablica 6. Indeksi alfa-raznolikosti crijevne mikrobiote kod miševa u kontrolnim, modelima i CDPS grupama (n=6)

2.6.3 Analiza beta raznolikosti

Kao što je prikazano na slici 4, analizom beta raznolikosti, analiza glavnih komponenti (PCA) može razlikovati tri skupine uzoraka u trodimenzionalnom prostoru, što ukazuje da postoje značajne razlike u crijevnoj flori ove tri skupine uzoraka. Grupa modela i kontrolna skupina odvojena su duž osi PC2, a CDPS-H grupa je između grupe modela i kontrolne skupine, blizu kontrolne skupine.

Sl. 4 Beta raznolikost crijevne flore kod miševa u skupinama kontrole, modela i CDPS (n=6)

2.6.4 Učinci CDP -a na crijevnu floru C57BL/6J miševa

2.6.4.1 razina fila

Kao što je prikazano na slici 5, u usporedbi s kontrolnom skupinom, relativno obilje firmikuta u skupini modela značajno se povećalo, relativno obilje bakteroidote i verrukomikrobije značajno se smanjilo, a omjer relativnog obilja (b/f) bakteroideta s firmicutes smanjenim. U usporedbi s skupinom modela, CDP -ovi su značajno povećali relativno obilje bakteroideta i verrukomikrobije, smanjili relativno obilje firmikuta i povećali vrijednost B/F, što je bilo bliže vrijednosti B/F u kontrolnoj skupini.

Sl. 5 Bar grafikon relativnog obilja crijevne flore na razini phyluma (n=6)

2.6.4.2 Razina roda

Histogram sastava obilja vrsta na prvih 30 nivoa rodova (slika 6) pokazuje da postoje razlike u crijevnoj flori miševa u grupi modela i CDPS-H grupi. Postoji 16 različitih bakterijskih rodova između grupe modela i kontrolne skupine; Postoji 8 različitih bakterijskih rodova između CDPS-H grupe i grupe modela; 5 bakterijskih rodova u području preklapanja mogu biti bakterijski rodovi koji CDP -ovi mogu poboljšati dijabetičku nefropatiju (Slika 7). Kao što se može vidjeti iz tablice 7, na razini roda u crijevnoj crijevnoj flori, u usporedbi s kontrolnom skupinom, relativno obilje alobakuluma u grupi modela značajno je smanjeno, a relativno obilje ružine, romboutsia, ruminococcus _ grupe {{{10}<0.05) was increased. ; Compared with the Model group, the relative abundance of Roseburia, Romboutsia, Ruminococcus_torques_group and RF39 (P＜0.05) decreased in the CDPs-H group; the relative abundance of Allobaculum increased (P＜0.05).

Sl. 6 Bar grafikon relativnog obilja crijevne flore na razini roda (n=6)

Sl. 7 Venn Diagram crijevne flore na razini roda (n=6)

Tablica 7 Učinci CDPS -a na relativno obilje diferencijalnih mikrobnih rodova crijeva između kontrolnih, modela i CDPS grupa (n=6)

2.6.4.3 Utjecaj CDPS -a na izraz koloninog zo -1 i okludina

Kao što je prikazano na slici 8 i tablici 8, u usporedbi s kontrolnom skupinom, relativne razine ekspresije zo -1 i okludina proteina u tkivu debelog crijeva miševa u grupi modela značajno su smanjene (p <0. 01); U usporedbi s skupinom modela, intervencija CDPS -a u svakoj dozi mogla bi relativne razine ekspresije ZO -1, a proteini okludina u tkivu debelog crijeva značajno povećane (P<0.01).

Sl. 8 Izraz Zo -1 i okludin u tkivu debelog crijeva miševa iz svake skupine (n=3)

Tablica 8 Relativne razine ekspresije ZO -1 i okludina u tkivu debelog crijeva miševa iz svake grupe (n=3)

Sirovine Cistanche

2.7 Učinak CDP-a na bubrežni TLR4/NF-κB signalni put ekspresija proteina

Kao što je prikazano na slici 9 i tablici 9, u usporedbi s kontrolnom skupinom, relativna ekspresija TLR4 proteina u bubrežnom tkivu miševa u grupi modela i omjeri P-NF-κBP65/NF-κB p65 i PI κBα/I κBα značajno je povećana. Visoko (str<0.01); compared with the Model group, the relative expression of TLR4 protein and p-NF-κBp65/NF-κB p65 and p-I κBα/I κBα in the kidney tissue of mice in the CDPs-M and CDPs-H groups The ratios were significantly reduced (P＜0.01, P＜0.05).

Slika 9 Western blot analiza ekspresije proteina povezana s TLR4/ NF-κB signalnim putem u bubrežnom tkivu miševa iz svake skupine (n=3)

Tablica 9 Relativne razine ekspresije TLR4/NF-κB signalnog puta povezanih proteina u bubrežnom tkivu miševa iz svake skupine (n=3)