Kineska medicina Cistanche Kemijski sastav i analiza komponenti u tijelu Ⅲ

Poglavlje 3. Kvantitativna analiza višekomponentnih komponenti Cistanche deserticola na temelju RPLC-HILIC-MS/MS

Kemijski sastav tradicionalne kineske medicine složen je i sadrži niz spojeva kao što su primarni i sekundarni metaboliti [55-561. Postizanje sveobuhvatne i pouzdane analize kemijskih komponenti tradicionalne kineske medicine (uključujući hidrofilne i hidrofobne komponente) još uvijek je veliki tehnički problem. Štoviše, sadržaj svake komponente u tradicionalnoj kineskoj medicini uvelike varira, a konvencionalnim metodama spektrometrije tekućih masa teško je točno kvantificirati i glavne komponente i komponente u tragovima u isto vrijeme. 1571 Tradicionalno odvajanje u jedan stupac nije dovoljno, a analiza spojeva u tragovima u tradicionalnoj kineskoj medicini bit će ograničena konstantama. Zbog interferencije spojeva, fenomen preklapanja vrhova je ozbiljan. Iako su različite napredne kromatografske tehnike korištene za poboljšanje odvajanja složenih matrica, kao što su kolone za kromatografiju jezgre i ljuske i submikronskih čestica, kromatografske kolone za hidrofilne interakcije itd., još uvijek je izazovno postići sveobuhvatno odvajanje različitih spojeva pomoću jedan stupac [58 -59. Kromatografija s više kolona koja kombinira najmanje dva ortogonalna kromatografska mehanizma, kao što su dvodimenzionalni LC, LC s promjenom stupaca i tandemski LC s dva stupca, smatra se izvedivim alatom koji može značajno proširiti pokrivenost metabolita. Nema sumnje da i dvodimenzionalni LC i LC sa promjenom stupaca mogu značajno povećati vršni kapacitet 160). Međutim, obje metode ovise o ventilu, instrumentacija je složena i dugotrajna, a spojne cijevi i regulatori lako se postavljaju. Ostaci postoje, a ove dvije metode sklone su uvođenju niza faktora nesigurnosti koji dovode do kvantitativne neponovljivosti1571. Iako reverzno-fazna hidrofilna interakcijska kromatografija-tandem (RPLC-HILIC) ne može značajno povećati vršni kapacitet, oprema instrumenta je jednostavna, nema ostataka u spojnim cijevima i regulatorima, a još uvijek može ostvariti promjenu iz hidrofilnog u hidrofobni. Sveobuhvatno zadržavanje velikog broja široko polarnih spojeva [61-66. Osim toga, način praćenja višestruke reakcije (MRM) jedinstven za trostruki kvadrupolni (QgQ) maseni spektrometar može se koristiti kao druga dimenzija odvajanja za daljnje poboljšanje sposobnosti odvajanja RPLC-HILIC-a. Ukratko, RPLC-HILIC-MRM objedinjuje inherentne prednosti RPLC-a, HILIC-a i MRM-a i očekuje se da postane pouzdana analitička metoda.

KOLIKO JE POTREBNO DA CISTANCHE DJELUJE?

Sadržaj svake komponente tradicionalne kineske medicine uvelike varira. U usporedbi s glavnim komponentama, ljudi posvećuju više pozornosti razvoju osjetljivijih metoda za dovršetak otkrivanja ovih spojeva u tragovima ili čak ultra-tragovima. MRM način se često preporučuje zbog njegove izvrsne osjetljivosti i dobrog linearnog dinamičkog raspona167. Međutim, i zbog zasićenja umnažanja terminalnog elektrona Q3 komore QqQ masenog spektrometra, linearni raspon obično je sužen, a gornja granica kvantifikacije (ULOQ) ne može u potpunosti pokriti sadržaj nekih glavnih spojeva bez pouzdanog praćenja ove komponente u tragovima. Stoga, potiskivanje proizvodnje produktnih iona može proširiti ULOO. Upotrebom oslabljenih parametara spoja kao što su ionski parovi,depotencijal(DP) ienergija sudara(CE) može smanjiti broj iona ciljnog proizvoda i time proširiti ULOQ[68-69]

Tradicionalna kineska medicinaCistanches Herbaje osušena mesnata stabljika s ljuskastim listovimaCistanches biljka. To je jedan od često korištenih tradicionalnih kineskih lijekova i poznat je kao "pustinjski ginseng". Feniletanoidni glikozidi su oduvijek bili vruća tema istraživanja u Cistanche deserticola, ali posljednjih godina, farmakološki učinci drugih hidrofilnih komponenti kao što je manitol također su dobro prepoznati! 70-721. Međutim, u našoj rutinskoj kvantitativnoj analizi CH, sadržaji glavnih komponenti kao što suechinaceaside,verbaskozid, i manitola ponekad su bile previsoke da bi premašile mjerni raspon UV detektora ili detektora raspršenja svjetlosti isparavanjem (ELSD). Stoga je, iz perspektive ukupne evaluacije kvalitete, važno uspostaviti analitičku metodu koja može istovremeno pratiti hidrofilne i hidrofobne komponente i točno kvantificirati glavne komponente i komponente u tragovima.

Eksperiment u ovom poglavlju uspostavio je pouzdanu metodu prikladnu za analizu složenih matrica - RPLC-HILIC-MS/MS tekuća masena spektrometrija (serijski spregnuta reverzna fazna hidrofilna interakcijska kromatografija-tandemska masena spektrometrija), koja je postigla detekciju 23 polariteta u Cistanche deserticola . Simultano odvajanje, analiza i određivanje sadržaja širokog spektra spojeva (pokrivajući hidrofilne i hidrofobne komponente); uz korištenje SMRM načina rada kako bi se osigurala ponovljivost ove metode, korištenje odgovarajućih CE vrijednosti i različitih ionskih parova za širenje češera bora. ULOQ glavnih komponenti kao što su inulin i verbaskozid omogućuje istovremenu kvantifikaciju glavnih komponenti i komponenti u tragovima u Cistanche deserticola, pružajući izvediv alat za poboljšanje kontrole kvalitete Cistanche deserticola i pomoć u postizanju široko rasprostranjenog ciljanog metabolizma biljaka. Genomika.

Odjeljak 1 Eksperimentalni materijali

1. Instrument

HPLC-Qtap-MS tekući maseni spektrometar opremljen je Shimadzu HPLC (opremljen s 2 LC-20ADxR pumpe, SIL-20ACxR automatskim uzorkivačem, SPD-M20A UV detektorom, CTO-20AC termostat, DGU-20A3R mrežno otplinjavanje Sastoji se od stroja, CBM-20A kontrolera, Shimadzu Corporation, Japan) i SCIEX5500 Qtrap masenog spektrometra (ESI ionski izvor, SCIEX, Foster City, CA, SAD) . Prikupljanje podataka i izračun izvršeni su softverom Analyst Software1.6.2. Mili-Q sustav za pročišćavanje ultračiste vode (Milipore Company, SAD), elektronska analitička vaga Mettler ME204 (Mettler Toledo Company, Švicarska), ultrazvučni ekstraktor (230V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, SAD).

2. Materijali i reagensi

Waters Acquity UPLC HSS T3 kolona (2,1 x 100 mm, 1,8 μm), Waters XBridge Amide kolona (4,6 mm x 150 mm, 3,5 μm).Polietereterketon(PEEK) cjevovod (Agilent Company, SAD). Metanol, acetonitril i mravlja kiselina čistoće za kromatografiju i spektrometriju mase kupljeni su od ThermoFishera (Pittsburgh, PA, SAD), a voda je bila ultračista voda Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, SAD) proizvedena u laboratoriju. . Niacin (nikotinska kiselina, cLogP, 0.799), jantarna kiselina (cLogP, -0.526) kupljeni su od tvrtke Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAD): uridin (cLogP, -2.219), adenoidni adenozin (cLogP, -2.158), inozin (cLogP, {{10}}.106) i gvanozin (cLogP , -3.326) kupljeni su od Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Salidrozid (cLogP -0.296), 6-deoksikatalpol (cLogP, -3.071), fenilalanin (cLogP, -1.556), 8-epiloganska kiselina (cLogP, -2.366), manitol (cLogP, -2.046), saharoza (cLogP , -3.087), glurozid (cLogP, -1.757), alaschaniozid A (alaschanioside A, cLogP -0.971 ), ehinakozid (echinacoside, cLogP, -1 .811), ferulinska kiselina (cLogP, 1,421), akteozid (cLogP, -0.890), izoakteozid (cLogP, -0.057) i Pinoresinol- -D-glukopiranozid (cLogP, -0.384) osigurao je Ključni laboratorij za prirodne i biomimetičke lijekove Sveučilišta u Pekingu, cistanozid F (cistanozid F, cLogP, -2.211) Kupljen od Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanozid A (cistanozid A, cLogP, -1.365), 2'-acetilakteozid (cLogP, -0.040) i likviritin apiozid (cLogP , -0.267) kupljeni su iz Šangaja Shidande Biotechnology Co., Ltd., a tubulozid A (tubulozidA, cLogP, 0,287) kupljen je od Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd. Čistoća svih referentnih tvari testirana je HPLC-DAD-IT-TOF-MS, a čistoća je bila veća od 98%. Sve cLogP vrijednosti kontrolne tvari izračunate su pomoću softvera ChemBioDraw Ultra14.0 (CambridgeSoftCambridge, MA, SAD).