Antioksidativne aktivnosti i aktivnosti protiv starenja proizvedenih hidrolizata svinjskog kolagena, dio 2

Molimo kontaktirajteoscar.xiao@wecistanche.comza više informacija

2.2. Učinak ultrafiltracije na svojstva hidrolizata kolagena

Proces ultrafiltracije može biti korisna, industrijski povoljna metoda za proizvodnju malih frakcija peptida željene veličine molekule i visoke bioaktivnosti, ovisno o sastavu početnog hidrolizata i aktivnosti koja se proučava [19]. Topljivost, sadržaj slobodnih amino skupina i prinos CH nakon liofilizacije prikazani su (Tablica 1). Topljivost i sadržaj slobodnih amino skupina kontrole bili su 11,95 posto odnosno 0.79 posto. Nakon enzimatske hidrolize i ultrafiltracije s 3 kDa molekularne težine cut-off, najveća topljivost (21,17 posto) i sadržaj slobodnih amino skupina (14,17 posto) primijećeni su u CH-alkalazi<3 kda.="" however,=""><3 kda="" was="" the="" lowest="" yield="" (12.42%)observed.="" therefore,="" although="" ultrafiltration="" is="" useful="" in="" separating="" chs="" with="" a="" low="" molecular="" weight="" it="" may="" cause="" a="" reduction="" in="">

Prosječna molekularna težina proteinskih hidrolizata važan je čimbenik koji određuje njihova biološka svojstva [19]. Općenito, prosječni udio s MW<3 kda="" represents="" a="" collagen="" hydrolysate;="" an="" average="" fraction="" with="" mw="">50 kDa represents gelatin, and an average fraction with MW>300 kDa predstavlja kolagen [20,21]. Relativna distribucija molekularne težine kontrole (uzorak predtretmana), CH-Alkalase i CH-Alkalaze<3 kda="" is="" depicted="" in="" figure="" 4.="" the="" molecular="" weight="" distribution="" was="" over="" 20,100="" da="" for="" the="" control,="" which="" did="" not="" include="" the="" collagen="" hydrolysate=""><3 kda).="" this="" could="" not="" be="" numerically="" provided="" in="" this="" study,="" as="" the="" detection="" limit="" of="" the="" index="" detector="" system="" only="" ranged="" from="" 106="" to="" 20,100="" da.="" however,="" ch-alcalase="" showed="" detectable="" values="" in="" a="" higher="" range="" of="" relative="" molecular="" weight="" distribution,="" which="" ranged="" from="" 20,100="" da="" to="" 4270="" da="" (maximum="" peak:12,600="" da).="" in=""><3 kda,="" the="" molecular="" weight="" distribution="" mainly="" showed="" three="" peaks:="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 4270="" da="" (maximum="" peak),="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 424="" da,="" and="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 222="" da="" and="" 102="" da.="" ultrafiltration="" is="" an="" effective="" purification="" method="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight="" peptides="" from="" crude="" hydrolysates.="" results="" indicated="" that="" enzymatic="" hydrolysis="" by="" alcalase="" clearly="" reduced="" the="" high="" mw="" of="" the="" control="" (either="" collagen="" or="" gelatin),="" and="" that="" ultrafiltration="" was="" an="" effective="" purification="" method="" that="" can="" be="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight=""><3 kda)="" from="" crude="" collagen="" hydrolysates.="" reportedly,="" low="" molecular="" weight="" peptides="" (2-20="" amino="" acids)="" are="" more="" biologically="" active="" compared="" to="" their="" parent="" polypeptide/proteins,="" which="" are="" larger="">

Kliknite ovdje da saznate više

Prikazan je sastav aminokiselina u CHs (Tablica 2). CHS različitih proteaza imao je različite sastave aminokiselina i antioksidativna svojstva [23]. Aminokiselinski sastav kolagena bio je bogat glicinom (Gly), prolinom (Pro) i glutaminskom kiselinom (Glu). Sadržaj aminokiselina u CHs(CH-alkalazi i CH-alkalazi<3 kda)="" increased="" more="" than="" that="" of="" the="" control,="" following="" enzymatic="" hydrolysis="" with="" or="" without="" ultrafiltration.="" in="" particular,="" the="" content="" of="" gly,="" pro,="" and="" glu="" was="" much="" higher="" in=""><3 kda(gly="" 218="" mg/g,="" pro="" 152="" mg/g,="" and="" glu="" 120="" mg/g)="" than="" ch-alcalase(gly149="" mg/g,="" pro="" 95="" mg/g,="" and="" glu78="" mg/g).="" an="" increase="" in="" the="" content="" of="" these="" amino="" acids="" is="" strongly="" related="" to="" enhanced="" antioxidant="" capabilities="" [16,20].="" gly="" and="" pro="" contain="" hydrophobic="" amino="" acid="" groups,="" and="" glu="" contains="" negatively="" charged="" amino="" acid="" groups.="">stabljika cistancheZabilježeno je da ove aminokiseline pojačavaju antioksidacijsku aktivnost zbog njihove povećane topivosti u lipidima ili putem reakcija slobodnih radikala [1,24].

2.3. Antioksidativna i anti-age aktivnost hidrolizata kolagena

Antioksidativna aktivnost CHs mjerena je pomoću 2,2'-i-bis-(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonske kiseline)(ABTS) analize aktivnosti hvatanja radikala i analize reducirajuće snage. ABTS aktivnost hvatanja radikala kontrole (suspenzija kolagena), CH-Alkalaza i CH-Alkalaza<3 kda="" at="" different="" concentrations="" is="" shown="" (figure="" 5a).abts="" radical="" scavenging="" activity="" of="" peptides="" assay="" is="" important="" to="" exclusively="" measure="" the="" ability="" of="" an="" antioxidant="" peptide="" to="" induce="" a="" hydrogen="" atom="" transfer="" [25].="" abts="" radical-scavenging="" effects="" of="" all="" treatments="" increased="" in="" a="" concentration-dependent="" manner=""><0.05). ch-alcalase="" and=""><3 kda="" showed="" much="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" values,="" with="" 41.4%-88.2%="" compared="" to="" the=""><8.5%. both="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" had="" high="" abtsradical-scavenging="" abilities="" of="" ~60%="" when="" concentrations="" were="" greater="" than="" 2.5="" mg/ml.=""><3 kda="" showed="" a="" significantly="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" value="" than="" ch-alcalase.="">ekstrakt cistanche salsaOpćenito, na antioksidacijsku aktivnost peptida mogu utjecati njihove aminokiselinske sekvence, broj prisutnih slobodnih aminokiselina, stupanj hidrolize i molekularna težina peptida [26,27]. Konkretno, hidrolizati niske molekulske mase posjeduju jača antioksidativna svojstva u usporedbi s hidrolizatima visoke molekularne težine [2,26].

Slika 5. Antioksidativna aktivnost hidrolizata kolagena (CH) u 2,2'-i-bis-(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonskoj kiselini) (ABTS) hvatanju radikala (A) i redukcijskoj moći (B) testovi. Podaci označeni različitim slovima (ac) pokazuju statistički značajne razlike ovisno o različitim tretmanima (str<0.05).>cistanche tubulosa koristi i nuspojavePodaci označeni različitim slovima (AD) pokazuju statistički značajne razlike ovisno o koncentraciji (p < 0,05).

Cistanche može spriječiti starenje

Smanjujuće moći kontrole, CH-Alkalase i CH-Alkalase<3 kda="" are="" shown="" (figure="" 5b).="" the="" reducing="" power="" of="" peptides="" may="" also="" serve="" as="" a="" significant="" indicator="" of="" their="" antioxidant="" potential="" [28,29].="" the="" reducing="" power="" of="" chs="" ranged="" from="" 0.074="" to="" 0.424="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05). the="" control="" group="" had="" the="" lowest="" reducing="" power,="" which="" did="" not="" change="" significantly="" with="" increasing="" concentrations="" of="" the="" control.="" in="" contrast="" to="" abts="" radical-scavenging="" activity,="" the="" reducing="" power="" of="" ch-alcalase="" was="" higher="" than="" that="" of=""><3 kda.="">ekstrakt cistanche tubulosaSlična opažanja sugeriraju da sirovi hidrolizat kolagena može biti učinkovitiji u smanjenju snage od ultrafiltriranih kolagenskih peptida [30].

Inhibicija aktivnosti tirozinaze, kolagenaze i elastaze korištena je za provjeru njihovih in vitro učinaka protiv starenja [20]. Rezultati inhibicije aktivnosti tirozinaze, kolagenaze i elastaze kontrole, CH-alkalaze i CH-alkalaze<3 kda="" are="" summarized="" (table="" 3).="" tyrosinase,="" collagenase,="" and="" elastase="" inhibitors="" have="" been="" used="" as="" important="" ingredients="" of="" cosmetics="" for="" skin="" whitening,="" anti-aging,="" and="" anti-wrinkling,="" respectively.="" collagenase="" and="" elastase,="" especially,="" are="" known="" to="" be="" major="" enzymes="" responsible="" for="" dehydration="" and="" wrinkle="" formation="" on="" the="" skin="" surface[31].="" the="" results="" indicated="" that="" the="" tyrosinase="" inhibition="" effect="" of="" vitamin="" c(95.50%,1="" mg/ml,="" positive="" control)="" was="" higher="" than="" that="" of="" the="" other="" treatments(table="" 4).="" tyrosinase="" inhibition="" effects="" of="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 28.21%,="" 15.44%,="" and="" 30.20%,="" respectively.="" thus,="" the="" chs="" did="" not="" show="" a="" better="" skin="" whitening="" effect="" compared="" to="" the="" control.="" collagenase="" inhibition="" by="" the="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 6.45%,54.37%,="" and="" 61.90%,="" respectively.="" in="" addition,="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" inhibition="" of="" collagenase="" corresponded="" to="" that="" of="" vitamin="" cat="" 1="" mg/ml.="" thus,="" chs="" obtained="" from="" this="" study="" may="" be="" effective="" collagenase="" inhibitors="" that="" may="" possibly="" play="" an="" important="" role="" in="" anti-aging="" activities.="" however,="" all="" collagen="" samples="" did="" not="" display="" elastase="" inhibition="" effects,="" which="" may="" result="" from="" a="" lack="" of="" skin="" elasticity.="" overall,="" vitamin="" c(1="" mg/ml)="" inhibited="" various="" activities="" of="" the="" enzymes="" in="" the="" following="" order:="" tyrosinase(95.50%)="">collagenase(48.09)> elastase(2/.00%o).CH-Alcalase(5 mg/mL)inhibited various activities of the enzymes in the following order: collagenase (54.37%)> tyrosinase (15.44%)>elastaza (nema aktivnosti). CH-Alkalaza<3 kda="" (5="" mg/ml)="" inhibited="" these="" activities="" in="" the="" following="" order:="" collagenase="" (61.90%)="">tyrosinase (30.20%)>elastaza (nema aktivnosti). Slični trendovi zabilježeni u drugoj studiji pokazali su da hidrolizati kolagena pokazuju potencijal da djeluju kao sredstva protiv starenja i kao inhibitori kolagenaze [20].

3. Materijali i metode

3.1. Predtretman svinjske kože

Svinjska koža kupljena je od lokalnog dobavljača (Seul, Koreja), a sva vidljiva masnoća i vezivno tkivo svinjske kože uklonjeno je oštricom za brijanje. Svinjska koža korištena u ovoj studiji dobivena je od jedne svinje kako bi se biološke varijacije svele na minimum. Podrezana svinjska koža je prana u vodi na 90 stupnjeva 1 minutu četiri puta kako bi se uklonila masnoća i ostaci materijala. Koža je zatim izrezana na kvadratne dijelove od 1 cm i usitnjena u destiliranoj vodi 3 minute pomoću miješalice s četiri oštrice (CNHR-26, Bosch, Hong Kong, Kina). Usitnjena svinjska koža homogenizirana je velikom brzinom (25,000rpm) tijekom 5 minuta pomoću Ultra Turrax-a (T25, IKA Labotechnik, Staufen, Njemačka). Približno 100 g mješavine svinjske kože (50 posto konačnog krutog sadržaja) vakuumirano je zapakirano i zamrznuto na -20 stupnjeva te pohranjeno za upotrebu unutar 1 mjeseca.

3.2. Komercijalne proteaze i reagensi

Alcalase, Flavorzyme, Neutrase i Protamex kupljeni su od Novozymes (Bagsvaerd, Danska). Bromelain i Papain su kupljeni od Daesong Sangsa (Seul, Koreja). Sve kemikalije za antioksidativne testove i testove protiv starenja kupljene su od tvrtke Sigma-Aldrich Chemical Company (St. Louis, MS, SAD). Svi ostali reagensi i otapala korišteni u ovoj studiji bili su analitičkog stupnja.

3.3. Enzimska hidroliza

Enzimska hidroliza razvijena je za odgovarajuće korištene komercijalne enzime za hranu (na temelju preporuka proizvođača; Tablica 4). Pripremljena smjesa svinjske kože razrijeđena je destiliranom vodom do konačnog udjela krutine od 5 posto. Ova koncentracija je odabrana kako bi se osiguralo ponašanje protoka zbog niske viskoznosti. Mješavina od 5 posto svinjske kože nazvana je suspenzija kolagena (ili kontrola). Suspenzija kolagena hidrolizirana je u reaktorima pomoću šest komercijalnih enzima za hranu pri omjeru enzim: supstrat od 1:100. Alikvoti uzorka (5 mL) su izvučeni nakon 1, 3, 6, 12 i 24 sata hidrolize i odmah zagrijavani na 100 stupnjeva tijekom 10 minuta da se inaktivira enzim, nakon čega je uslijedilo hlađenje na 0 stupnjeva upotrebom ledene vode. Tijekom vremena uzorkovanja, pH je kontroliran korištenjem 1 M NaOH prema potrebi. Nakon hlađenja, uzorci su centrifugirani na 4000 x g 15 minuta, a supernatant (hidrolizat kolagena; CH) je sakupljen. CH je dalje koncentriran ultrafiltracijom, upotrebom sustava AmiconStirred Cells (kataloški br. UFSC 20001, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, SAD) s graničnom vrijednosti molekularne težine 3 kDa (MWCO) (UltracelMembrane, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, SAD) na 60 psi dušikov plin, na 20 stupnjeva.cistanche tubulosa recenzijePripremljeni CH je osušen smrzavanjem i držan u hermetički zatvorenim spremnicima na 20 stupnjeva do analize.

3.4. Određivanje pH, obnavljanja proteina, sadržaja slobodnih amino skupina topivosti i proizvodnog prinosa pH uzoraka (kontrola i CHs) određen je pomoću pH metra (Model S220, Mettler Toledo GmbH, Columbus, OH, SAD). Oporavak ili topivost proteina određena je procjenom sadržaja proteina pomoću testa proteina bicinhoninske kiseline (BCA), prema uputama proizvođača (Sigma-Aldrich, St. Louis, MS, SAD) sa serumskim albuminom kao standardom. Sadržaj slobodnih amino skupina određen je pomoću 2,4,6-trinitrobenzen sulfonske kiseline (TNBSA) testa prema uputama proizvođača (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SAD) koristeći L-leucin kao standard. I mokra i suha težina su izmjerene kako bi se izračunalo polje proizvodnje.

3.5. Raspodjela molekularne težine

3.5.1. Elektroforeza natrijevog dodecil sulfata i poliakrilamidnog gela (SDS-PAGE)

SDS-PAGE obrasci uzoraka (kontrola i CHs) mjereni su u skladu s prethodno objavljenom metodom [10]. Uzorci su razrijeđeni s 8 M ureom (konačna koncentracija proteina, 4 mg/mL). Svaki uzorak je pomiješan s jednim dijelom pufera za uzorke KTG 020 (10 posto glicerola, 2 posto SDS-a, 0,003 posto bromofenol plavog, 5 posto -merkaptoetanola i 63 mM Tris-HCl, pH 6,8) tvrtke KOMA Biotech Inc. ., （Seul, Koreja）, i kuhati 2 min. Mješavina uzorka （20 μL） je napunjena u EzWayTM PAG 6 postotne akrilamidne gelove (KOMA Biotech Inc., Seul, Koreja). Nakon elektroforeze, gel je fiksiran, obojen i uklonjena boja. Molekularne težine određene su uporabom standarda molekularne težine širokog raspona između 10 i 210 kDa.

3.5.2. Gel permeacijska kromatografija (GPC)

Distribucija molekulske mase uzoraka određena je prema prethodno objavljenoj metodi [3]. Gel permeacijska kromatografija (GPC) provedena je korištenjem YL9100 sustava tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti (HPLC) (YL9100, Youngling Instrument Co., Ltd, Gyeonggi-do, Koreja) opremljenog s tri Ultrahydrogel TM 120 kolone ( 7,8×3000 mm) iz Watersa (Milford, MA, SAD). Mobilna faza bila je destilirana/deionizirana voda pri brzini protoka od 1,0 mL/min, a distribucija molekularne težine kolagenskih peptida praćena je pomoću YL 9100 detektora indeksa loma na 40 stupnjeva. Komplet standarda molekularne težine (106-67,500 Da, Polymer Standards Service, Mainz, Njemačka) poslužio je kao standard.

3.6.Amin0 Sastav kiseline

Aminokiselinski sastav uzoraka analiziran je derivatizacijom s {{0}}fluorenil etoksi karbonil (FMOC)-kloridom i o-ftalnim dialdehidom (OPA) na Ultimate 3000 HPLC sustavu ( Dionex, Idstein, Njemačka) opremljen s dva detektora (fluorescentni detektor i UV detektor） i VDSpher 100 C18-E （4,6 mm × 150 mm, veličina čestica 3,5 μm, VDS Optilab, Berlin, Njemačka). Volumen injekcije bio je 1,0 L, a mobilna faza se sastojala od dva eluensa: 40 mM dvobazičnog natrijevog fosfata (pH 7) i 45 posto (o/v) acetonitrila/45 posto (v/v) otopine metanola. Spajanjem UV detektora i detektora fluorescencije ultraljubičaste zrake detektirane su na 338 nm, derivat OPA je detektiran na 450 nm valne duljine emisije i 340 nm valne duljine pobude, derivat FMOC je detektiran na 305 nm valne duljine emisije od i 266 nm valne duljine pobude. Za kalibraciju je korištena mješavina aminokiselina (1,0 nmol mL-I za svaku aminokiselinu).

gdje je Atotalamino kiselina bila sadržaj nakon hidrolize korištenjem 6 M HCl (na 130 stupnjeva tijekom 24 sata), a A slobodna aminokiselina bila je sadržaj nakon solubilizacije u destiliranoj vodi.

3.7. Procjena antioksidativnog djelovanja

3.7.1.2,2'-Azino-bis-(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonska kiselina) (ABTS) Aktivnost hvatanja radikala

ABTS aktivnost hvatanja radikala za CH mjerena je u skladu s prethodno objavljenom metodom [20]. ABTSradikalni kation generiran je miješanjem osnovne otopine ABTS (70 mM) s kalijevim persulfatom (2,45 mM) i inkubiranjem dobivene smjese u mraku na sobnoj temperaturi preko noći. Otopina ABTS radikala razrijeđena je u 5.0 mM fosfatno puferirane slane otopine (pH 7,4) do razine apsorbancije od 0.70±0.02 na 734 nm. Jedan mL razrijeđene otopine ABTS radikala pomiješan je s 1 mL svakog uzorka. Deset minuta kasnije, apsorbancije uzorka (A uzorak, s uzorkom) i kontrole (A kontrola bez uzorka) izmjerene su na 734 nm. Aktivnost hvatanja radikala ABTS (postotak) izračunata je kao:

3.7.2.Smanjenje snage

Snaga redukcije CH izmjerena je prema prethodno objavljenoj metodi [20]. Jedan mL svakog uzorka pomiješan je s 1 mL 0.2 M fosfatnog pufera (pH 6,6) i 1 mL 1 postotnog kalijevog fericijanida. Smjesa je inkubirana na 50 stupnjeva 20 minuta, a zatim je dodan 1 mL 10 postotne trikloroctene kiseline. Alikvot od 2 mL iz ove inkubacijske smjese pomiješan je s 2 ml destilirane vode i 0,4 mL 0,1 postotnog željeznog klorida. Nakon 10 minuta, apsorbancija dobivene otopine izmjerena je na 700 nm na spektrofotometru (OPTIZEN, Mecasys Co., Daejeon, Koreja). Smatra se da povećana apsorbancija (na 700 nm) reakcijske smjese ukazuje na povećanu moć redukcije.

3.8. Procjena učinka protiv starenja

3.8.1. Inhibicija aktivnosti tirozinaze

Inhibicija tirozinaze određena je prethodno opisanom metodom [20]. Otopina premiksa koja sadrži 70 μL 0,1 M fosfatnog pufera （pH 6,8）, 30 uL tirozinaze gljiva（167U/mL; Sigma-Aldrich, SAD), a 20 L uzorka je inkubirano 5 minuta na 30 stupnjeva. Približno 100 μL 3,4-dihidroksi fenil-L-alanina （L-DOPA） je zatim dodano kako bi se pokrenula enzimska reakcija. Apsorbancija na 492 nm mjerena je 20 minuta da se prati stvaranje L-DOPA. Askorbinska kiselina (1 mg/mL) poslužila je kao pozitivna kontrola, koja je korištena za usporedbu. Omjer inhibicije izračunat je na sljedeći način:

gdje je A bila smjesa s tirozinazom bez uzorka; B je bila smjesa bez uzorka i tirozinaze; C je bila smjesa s uzorkom i tirozinazom, a D je bila smjesa s uzorkom, ali bez tirozinaze.

3.8.2. Inhibicija aktivnosti kolagenaze

Inhibicija kolagenaze određena je prethodno opisanom metodom [20]. Ukratko, pripremljen je 50 mM tricin pufer (pH 7,5) koji sadrži 10 mM kalcijevog klorida i 400 mM natrijevog klorida. Zatim, 50 mL 1,0 mM N-[3-(2-furil)akriloil]-Leu-Gly-Pro-Ala otopine i 0,2 mg/ml kolagenaze (iz Clostridium histolyticum, tip IA, 0.{ {19}} FALGPA U/mg krutine; Sigma-Aldrich, SAD) dodani su u prisutnosti i odsutnosti uzoraka. Reakcija je zaustavljena dodatkom limunske kiseline (6 posto). Reakcijska smjesa je odvojena dodavanjem etil acetata. Apsorpcija supernatanta je izmjerena na 345 nm. Askorbinska kiselina (1 mg/mL) služila je kao pozitivna kontrola i korištena je za usporedbu. Postotak inhibicije izračunat je kao:

gdje je A bila smjesa s kolagenazom bez uzorka; B je bila smjesa bez uzorka i kolagenaze; C je bila smjesa s uzorkom i kolagenazom, a D je bila smjesa s uzorkom, ali bez kolagenaze.

3.8.3. Inhibicija aktivnosti elastaze

Inhibicija elastaze određena je prethodno opisanom metodom [20]. N-sukcinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (Suc-Ala-Ala-Ala-pNA) poslužio je kao supstrat, a otpuštanje p-nitroanilina praćeno je 2{{20}} min na 25 stupnjeva. Dio (1 ug) svinjske gušteračne elastaze (PPE) tipa IV otopljen je u 1 mL 0.2 M Tris-HCl pufera (pH 8.0). reakcijska smjesa sadržavala je 0,2 M Tris-HCl pufer (pH 8,0), 1 ppm PPE, 0,8 mM Suc-Ala-Ala-Ala-pNA, uzorak i gore spomenuti supstrat. Izmjerena je apsorpcija na 214 nm. Askorbinska kiselina (1 mg/mL) poslužila je kao pozitivna kontrola korištena za usporedbu. Omjer inhibicije izračunat je na sljedeći način:

gdje je A bila smjesa s elastazom i bez uzorka; B je bila smjesa bez uzorka i elastaze; C je bila mješavina s uzorkom i elastazom, a D je bila mješavina s uzorkom, ali bez elastaze.

3.9. Statistička analiza

Podaci su prikazani kao srednja vrijednost±standardna devijacija (SD). Značajnost razlika između skupina procijenjena je korištenjem višestrukih usporedbi i analize varijance (ANOVA), nakon čega je slijedio Tukeyjev test poštene značajne razlike (HSD). Razlike s p vrijednostima manjim od 0,05 smatrane su statistički značajnim.

4. Zaključci

U ovoj studiji, hidrolizati kolagena, funkcionalni sastojak hrane, uspješno su proizvedeni enzimatskom hidrolizom, praćenom ultrafiltracijom i pročišćavanjem. Različite komercijalne proteaze testirane su na njihovu potencijalnu korisnost u proizvodnji odgovarajućih hidrolizata kolagena. CHS hidroliziran alkalazom bio je najučinkovitije hidroliziran CHs, a ultrafiltracija praćena pročišćavanjem bila je učinkovita u stvaranju aktivnih peptida niske molekularne težine. Rezultati su pokazali da CHs pokazuju izvrsnu antioksidacijsku i inhibicijsku aktivnost kolagenaze. Stoga se CH dobiveni ovom studijom mogu koristiti u prehrambenoj, kozmetičkoj ili farmaceutskoj industriji kao prirodni aditiv, koji posjeduje antioksidativna svojstva i svojstva protiv starenja. Daljnje studije koje uključuju in vivo procjenu aktivnosti starenja aktivnih peptida u ljudskoj koži mogu se pokazati korisnima.

Ovaj je članak izvađen iz Molecules 2019, 24, 1104; doi:10.3390/molecules24061104 www.mdpi.com/journal/molecules