Analiza bioaktivnih tvari i razlike u podrijetlu Cistanche Tuberosa u Xinjiangu

Sažetak: Šest proizvodnih područjaCistanche tubulosau pustinji Taklamakan odabrani su kao objekt istraživanja, te su određene bioaktivne tvari i antioksidativna aktivnost različitih dijelova (korijena, sredine i vrha) te je provedena multivarijatna statistička analiza. Rezultati su pokazali da razlike u proizvodnim područjima imaju značajan učinak na bioaktivne tvari Cistanche tubulosa (ukupni polifenoli,

Sadržaj ukupnih flavonoida, ukupnih triterpena, ukupnih polisaharida, ukupnih proantocijanidina, ehinakozida i verbaskozida) iantioksidativno djelovanjesvi su imali značajan utjecaj, a postojale su značajne razlike ubioaktivne tvariu različitim dijelovima.Cistanche tubulosaiz različitih podrijetla ima snažnuantioksidativno djelovanjein vitro, IC50 DPPH brzine hvatanja slobodnih radikala (IC50 DPPH ) manji je od 7 mg/mL, a IC50 ABTS brzine hvatanja slobodnih radikala (IC50 ABTS) je manji od 3 mg/mL mL. Korelacijska analiza pokazala je da je IC50 DPPH Cistanche tubulosa u značajnoj negativnoj korelaciji s ukupnim polifenolima iehinakozidsadržaj; IC50 ABTS bio je u izrazito značajnoj negativnoj korelaciji s ukupnim polifenolima, ukupnim polisaharidima, ehinakozidom iverbaskozidsadržaj. Analiza glavnih komponenti izdvojila je 3 glavne komponente čija je kumulativna stopa doprinosa varijance bila 80. 57 posto ; klaster analiza podijelila je uzorke u 3 skupine. Redoslijed sveobuhvatnog ocjenjivanja Cistanche tubulosa iz različitih proizvodnih područja je okrug Kashi Jiashi (0. 445), grad Alar (0. 313), okrug Hotan Moyu (0.051), okrug Turpan Shanshan (-0. 057), Okrug Hotan Yutian (-0. 071), Okrug Bayingolengolengqiemo (-0. 680).

Ključne riječi: Cistanche tubulosa; bioaktivne tvari; razlike u proizvodnim područjima; sveobuhvatna evaluacija

Kliknite da saznate više Cistanche Tubulosa Extract Uvod

Uvod

Cistanche tubulosa(Schrenk) Wight, također poznata kao Red Willow Dayun[1], zajedno s Cistanche deserticola, uvrštena je u Farmakopeju Narodne Republike Kine kao izvorna biljka Cistanche deserticola, te je uvrštena u katalog "Hrana i medicina". Homologous" Nacionalne zdravstvene komisije 2018. [2].Cistanche tubulosaSadrži niz biološki aktivnih tvari, kao što su polifenoli, polisaharidi, feniletanol glikozidi, iridoidi i njihovi glikozidi itd. Smanjenje masnoće u krvi [6], imunološka regulacija [7], zaštita živaca [8], prevencija osteoporoze [{{3 }}], laksativ [11-12], poboljšanje pamćenja [13] i druge funkcionalne aktivnosti, ima reputaciju "pustinjskog ginsenga".

Cistanche tubulosaparazitira isključivo na korijenima biljaka Tamarix, a rasprostranjen je u Hetianu, Kashgaru, Aksu i drugim područjima oko pustinje Taklamakan u Xinjiangu, mojoj zemlji. Istraživanje [14] pokazalo je da različiti zemljopisni položaji imaju različitu svjetlost, količinu oborina, temperaturu i uvjete tla, što će imati različite stupnjeve utjecaja na rast, razvoj i unutarnju kvalitetu biljaka."Farmakopeja Narodne Republike Kine" uglavnom koristi sadržaj ehinakozida i verbaskozida kao indeksa za procjenu kvalitete Cistanche tubuloside[2], ali bioaktivne tvari u Cistanche tubatus su kompliciranije. , ukupni flavonoidi, ukupni polisaharidi, ukupni triterpeni, ukupni proantocijanidini itd. imaju širok raspon farmakoloških učinaka. Stoga se metodom ocjenjivanja kvalitete s više indeksa može sveobuhvatnije ocijeniti kakvoća ljekovitog materijala Cistanche tubulosa [1]. Na temelju toga, ovaj se rad namjerava usredotočiti na pustinju Taklamakan u Xinjiang TakinguCistanche tubulosakao predmet istraživanja vrste, sadržaj i antioksidativno djelovanje bioaktivnih tvari uCistanche tubulosaiz različitih proizvodnih područja su istraženi, a analiza korelacije, analiza glavnih komponenti i sustavna analiza grupiranja korištene su za sveobuhvatnu procjenu, kako bi se razjasnila različita proizvodna područja u Xinjiangu. Razlike u kvaliteti Cistanche tubulosa pružaju teoretsku podršku i referencu za jačanje kontrole kvalitete Cistanche tubulosa i njenih proizvoda, kao i promicanje duboke prerade i sveobuhvatnog razvoja i korištenja Cistanche tubulosa.

1. 1. 3 Glavni instrumenti i oprema Pilot3-6 m tip sušenja zamrzavanjem

Centrifuga, koju proizvodi Beijing Boyikang Experimental Instrument Co., Ltd.; TGL-20B centrifuga, koju proizvodi Shanghai Anting Scientific Instrument Co., Ltd.; UV-vidljivi spektrofotometar tipa 756, proizvodi Shanghai Qinghua Technology Instrument Co., Ltd.; LC-20AB visokoučinkovitu tekućinsku kromatografiju proizvela je Shimadzu Corporation iz Japana; Multifunkcionalni čitač mikropločica Synergy H1 proizveo je Porton Instruments Co., Ltd.

1.2 Određivanje biološki aktivnih tvari

1. 2. 1 Određivanje ukupnog sadržaja polifenola Pogledajte metodu FH Li et al. [17]. Priprema otopine uzorka: Izvažite 0.50 g uzorka, upotrijebite 70 posto (ako nije navedeno, postoci u tekstu odnose se na volumni udio) otopine etanola kao ekstrakcijsko otapalo, a omjer krutine i tekućine je 1 :40 (g/mL, isto dolje. ), ekstrahiran u ultrazvučnom uređaju od 60 stupnjeva, 250 W tijekom 40 minuta, ohlađen i centrifugiran na 4000 o/min tijekom 10 minuta, sakupljen supernatant i razrijeđen do 50 mL, ostavljen sa strane. Uzeti 1 mL otopine uzorka, dodati 5 mL 10 postotne otopine folinola, promućkati i dobro protresti, nakon 15 min stajati dodati 4 mL 7,5 postotne otopine Na2CO3, promućkati i dobro promućkati te ostaviti da odstoji na tamnom mjestu. 20 minuta. Nakon 1 minute izmjerite njegovu apsorbanciju (A765), a rezultat se izrazi u ekvivalentu galne kiseline (mg GAE/g DW).

1. 2. 2 Određivanje sadržaja ukupnih flavonoida

Pogledajte metodu Zhang Wenye i sur. [18]. Uzmite 1 mL otopine uzorka (isto kao 1.2.1.) u smeđu odmjernu tikvicu od 10 mL, dodajte 0.3 mL otopine NaNO2 s masenim udjelom od 5 posto, oscilirajte i protresite dobro, ostavite stajati 15 minuta, zatim dodajte 0,3 mL Napravite mL 10 postotne otopine Al(NO3)3 i 4 mL 4 postotne otopine NaOH, razrijedite do 10 mL s 50 postotnom otopinom etanola, protresite

Dobro protresite i nakon stajanja u mraku 20 minuta izmjerite njegovu apsorbanciju (A510), rezultat

Voće se izražava u rutinskim ekvivalentima (mg RE/g DW).

1. 2. 3 Određivanje sadržaja ukupnih triterpena

Pogledajte metodu He Ce i sur. [19]. Uzmite 0.4 mL otopine uzorka (isto kao 1.2.1), isparite je do suhog u vodenoj kupelji, zatim dodajte 0.4 mL 1,5 postotne otopine vanilin-ledene octene kiseline i 1,6 mL perklorne kiseline, vodena kupelj na 70 stupnjeva 15 minuta, nakon hlađenja dodajte 5 mL etil acetata, nakon stajanja 10 minuta izmjerite njegovu apsorbanciju (A560), a rezultat se izražava u ekvivalentu oleanolne kiseline (mg OAE /g DW).

1. 2. 4 Određivanje sadržaja ukupnih polisaharida

Pogledajte metodu Zhang Yadana i sur. [20]. Priprema tekućine uzorka: 1.00 g uzorak je izvagan, deionizirana voda korištena je kao ekstrakcijsko otapalo, omjer krutine i tekućine bio je 1:30, ekstrahiran na 60 stupnjeva, ultrazvučni uređaj od 250 W 50 minuta, ohlađen i zatim ekstrahiran pod uvjetima od 4000 o/min. Centrifugirajte 10 minuta, sakupite supernatant, dodajte 4 puta veći volumen 95 postotne otopine etanola, ostavite da stoji na 4 stupnja 12 h, zatim centrifugirajte na 5000 o/min, sakupite precipitat, i isperite acetonom, eterom i ne isperite vodom i etanolom dvaput, dodajte odgovarajuću količinu deionizirane vode da se ponovno otopi, zatim izvršite deproteinizaciju (metoda Sevage) i depigmentaciju (metoda aktivnog ugljena) i razrijedite do 10 mL za testiranje. Uzmite 1 mL otopine uzorka, redom dodajte 0,6 mL 6 postotne otopine fenola i 3 mL koncentrirane H2SO4, oscilirajte i dobro protresite, stavite u kipuću vodenu kupelj 10 minuta i nakon hlađenja izmjerite njegovu apsorbanciju (A490). , a rezultat se izražava kao ekvivalent glukoze (mg DE / g DW).

1.2.5 Određivanje sadržaja proantocijanidina

Pogledajte metodu Lu Xiao i sur. [21]. Priprema otopine uzorka: Izvažite 0.50 g uzorka, dodajte 80 posto etanola

Otopina je korištena kao ekstrakcijsko otapalo s omjerom krutina-tekućina od 1:30. Ekstrahiran je u ultrazvučnom uređaju na 50 stupnjeva i 250 W tijekom 40 minuta. Nakon hlađenja, centrifugiran je na 4000 o/min 10 minuta. Supernatant je sakupljen i volumen je podešen na 50 mL. ,rezervni.

Uzmite 0.5 mL otopine uzorka, redom dodajte 3 mL 4 postotne otopine vanilin-metanola i 1,5 mL koncentrirane HCl i reagirajte 15 minuta, zatim izmjerite njegovu apsorbanciju (A500), a rezultati izraženi su kao proantocijanidinski ekvivalent (mg PCE / g DW) ekspres.

1. 2. 6 Određivanje sadržaja ehinakozida i verbaskozida

Pogledajte metodu Xu Mingjun et al. [22]. Priprema tekućine uzorka: Izvažite 1.00 g uzorka, koristite 80 postotnu otopinu etanola kao otapalo za ekstrakciju, omjer krutine i tekućine je 1:30, ekstrahirajte na 60 stupnjeva, 250 W ultrazvuk uređaj 40 minuta, nakon hlađenja, ekstrahirajte na 4000 r. Centrifugirajte 10 minuta pod uvjetima 1/min, prikupite supernatant, razrijedite do 50 mL i ostavite sa strane. Kromatografska kolona bila je kolona Alltima C18 (4,6 mm × 250 mm × 5 μm), mobilna faza bila je 0,4 postotna vodena otopina mravlje kiseline (A)-acetonitril (B), temperatura kolone bila je 25 stupnjeva, a brzina protoka bila je 1,00 mL/min, volumen injekcije bio je 10 μL, a valna duljina detekcije bila je 330 nm. Kvantitativna analiza provedena je metodom vanjskog standarda.

1.2.7 Određivanje antioksidativne aktivnosti in vitro Priprema otopine uzorka: izvagati

1. 20 g uzoraka ekstrahirano je 60-postotnom otopinom etanola kao ekstrakcijskim otapalom, a omjer krutine i tekućine bio je 1:25. Ekstrahirane su u ultrazvučnom uređaju na 60 stupnjeva i 250 W tijekom 40 minuta. Nakon hlađenja centrifugirane su 15 min na 4500 o/min. , prikupiti supernatant; uzmite višestruku odgovarajuću količinu supernatanta, razrijedite 60-postotnom otopinom etanola do koncentracije tekućine uzorka od 1 mg/mL, 3 mg/mL, 5 mg/mL, 10 mg/mL, 20 mg/mL, 30 mg/mL, 40 mg /mL, za testiranje.

1) DPPH sposobnost hvatanja slobodnih radikala. Pogledajte metodu Xu Chunpinga [23]. Uzmite 1{{10}} μL otopine uzorka, dodajte 250 μL otopine DPPH, dobro promiješajte, dodajte na mikrotitarsku ploču, držite dalje od svjetla na sobnoj temperaturi 25 minuta, koristite 60 postotnu otopinu etanola kao slijepe kontrole, izmjerite njegovu apsorbanciju (A517) i izračunajte DPPH prema sljedećoj formuli Stopa hvatanja slobodnih radikala. DPPH stopa hvatanja slobodnih radikala=1-A1-A2A0( ) × 100 posto U formuli: A0 je apsorbancija 60-postotne otopine etanola umjesto otopine uzorka (slijepa kontrola); A1 je apsorbancija otopine uzorka pomiješane s otopinom DPPH; A2 je apsorpcija apsolutnog etanola umjesto otopine DPPH.

2) ABTS sposobnost hvatanja slobodnih radikala. Pogledajte metodu Kong Yutinga i sur. [24]. Matična tekućina ABTS-a bila je miješana otopina kalijevog persulfata (konačna koncentracija: 2,45 mmol/L) i ABTS (konačna koncentracija: 7 mmol/L) pripremljena u deioniziranoj vodi i stajala je na 25 stupnjeva 12 sati u mraku. Prije upotrebe matične otopine ABTS, razrijedite je deioniziranom vodom tako da apsorbancija (A734) bude 0.7{{10}}±0.05, što je radna otopina ABTS. Uzmite 10 μL otopine uzorka (1 ~ 40 mg/mL), dodajte je na mikrotitarsku ploču, zatim dodajte 200 μL ABTS radne otopine, držite u mraku 30 minuta na sobnoj temperaturi, koristite 60-postotnu otopinu etanola kao slijepu probu , i izmjerite njegov A734 prema sljedećoj formuli za izračunavanje ABTS stope hvatanja slobodnih radikala. ABTS stopa hvatanja slobodnih radikala=1-A′1-A′2A0( ) × 100 posto gdje je: A′1 apsorbancija nakon miješanja otopine uzorka i ABTS otopine; A′2 je apsorbancija deionizirane vode umjesto ABTS otopine.

1.3 Analiza podataka

Svi podaci su mjereni paralelno tri puta, a rezultati su izraženi kao (srednja vrijednost ± standardna devijacija). Za analizu glavnih komponenti i sustavnu klaster analizu korišten je Origin 2019, a za analizu varijance SPSS Statistics 26. P<0. 05 indicated a significant difference.