4. Materijali i metode

4.1. Biljni materijal

Sjeme afričke S. aurea korišteno za ovu studiju nabavljeno je iz specijalizirane trgovine u Italiji. Sadnice su uzgojene u Laboratoriju za biljnu biologiju i farmaceutsku botaniku Sveučilišta u Cagliariju (UNICA). Nakon 5 tjedana smještene su u staklenik "Planta Medica", prema ekofiziološkim potrebama vrste. Biljke su zatim sakupljene nakon dvije godine rasta u razdoblju cvatnje. Nadzemni dijelovi su odmah stavljeni u pećnicu s prisilnom ventilacijom (FD 115, BINDER) do potpunog sušenja (kada su postigli konstantnu težinu). Uzorak vaučera pohranjen je u Herbarium Karalitanum (CAG) Sveučilišta u Cagliariju, Italija, s brojem vaučera (6/23.8/V1).

Glikozid cistanhe također može povećati aktivnost SOD-a u tkivima srca i jetre, te značajno smanjiti sadržaj lipofuscina i MDA u svakom tkivu, učinkovito čisteći različite reaktivne kisikove radikale (OH-, H₂O₂, itd.) i štiteći od oštećenja DNA uzrokovanog pomoću OH-radikala. Cistanche feniletanoidni glikozidi imaju jaku sposobnost hvatanja slobodnih radikala, veću reducirajuću sposobnost od vitamina C, poboljšavaju aktivnost SOD u suspenziji spermija, smanjuju sadržaj MDA i imaju određeni zaštitni učinak na funkciju membrane spermija. Cistanche polisaharidi mogu pojačati aktivnost SOD i GSH-Px u eritrocitima i tkivu pluća eksperimentalno starih miševa uzrokovanih D-galaktozom, kao i smanjiti sadržaj MDA i kolagena u plućima i plazmi, te povećati sadržaj elastina, imaju dobar učinak čišćenja na DPPH, produžiti vrijeme hipoksije u starim miševima, poboljšati aktivnost SOD u serumu i odgoditi fiziološku degeneraciju pluća u eksperimentalno starim miševima Uz stančnu morfološke degeneraciju, pokusi su pokazali da Cistanche ima dobru antioksidacijsku sposobnost i ima potencijal da bude lijek za prevenciju i liječenje bolesti starenja kože. U isto vrijeme, ehinakozid u Cistancheu ima značajnu sposobnost hvatanja slobodnih radikala DPPH i ima sposobnost hvatanja reaktivnih vrsta kisika i sprječavanja degradacije kolagena izazvane slobodnim radikalima, a također ima dobar učinak popravka na oštećenje aniona slobodnih radikala timina.

Kliknite na dodatak Cistanche Tubulosa

【Za više informacija: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

4.2. Analiza eteričnih ulja

Eterično ulje dobiveno je 3 h hidrodestilacijom na aparaturi tipa Clevenger, prema smjernicama Europske farmakopeje [89]. Naknadna analiza plinskom kromatografijom s detekcijom plamenom ionizacijom (GC-FID) i plinskom kromatografijom/masenom spektrometrijom (GC-MS) provedena je u skladu s [13]. Ukratko, za GC analizu korištena je kapilarna kolona HP 5, s eksperimentalnim postupkom od 82 minute na različitim temperaturama, odnosno od 60 ◦C do 246 ◦C brzinom od 3 ◦C/min, koja je zatim održavana na 246 ◦C 20 min. Helij (čistoća veća ili jednaka 99,9999 posto) korišten je kao plin nosač pri brzini protoka od 1 mL/min. Ukupno 1 µL razrijeđenog uzorka (1:100 u n-heksanu, w/w) ubrizgan je automatskim uzorkivačem s omjerom dijeljenja 1:20. Što se tiče MS uvjeta, korištena je prijenosna linija od 240 ◦C, 200 ◦C EI ionski izvor i 150 ◦C kvadrupolna temperatura, s energijom ionizacije od 70 eV i 3,2 skeniranja s-1 pri m/z skeniranja raspon (od 30 do 480). Softver MSD ChemStation (Agilent, rev. E.01.00.237, Santa Clara, CA, SAD) korišten je za upravljanje i razradu kromatograma i masenih spektara. Konačno, dobiveni spojevi identificirani su usporedbom NIST02 i Adamsovih biblioteka [37,38]. Rezultati su dodatno provjereni usporedbom eksperimentalnog retencionog indeksa (RI) spojeva sa semipolarnim fazama koje je RI objavio u literaturi. Eksperimentalni RI određeni su pomoću dvije standardne mješavine n-alkana kao referentnih (C8–C20 odnosno C21–C40) s linearnom interpolacijom [90]. Postoci prijavljenih komponenti izračunati su na GC područjima vrhova bez korekcije FID faktora odziva.

4.3. Antifungalna aktivnost

Sedam sojeva dermatofita testirano je na antifungalno djelovanje S. aurea EO. Odnosno, tri klinička soja dobivena su iz izolacije noktiju i kože: Epidermophyton floccosum FF9, Trichophyton mentagrophytes FF7 i Microsporum canis FF1. Dok su preostala četiri soja dermatofita pripadala Colección Espanõla de Cultivos Tipo (CECT): T. mentagrophytes var. interdigital CECT 2958, T. rubrum CECT 2794, T. verrucosum CECT 2992 i M. gypseum CECT 2908. Svi sojevi su uzgajani u Sabouraud dekstroznom agaru (SDA) ili krumpirovom dekstroznom agaru (PDA) prije svakog testa kako bi se osigurala čistoća i održivost.

Minimalne inhibicijske koncentracije (MIC) i minimalne letalne koncentracije (MLC) EO izvedene su prema modifikacijama koje sugerira CLSI protokol za mikrodiluciju [91]. Ukratko, EO je razrijeđen u DMSO (5–0.32 µL/mL) i zatim dodan u sterilne epruvete. Inokulum je pripremljen podešavanjem zamućenja na 0.5 McFarland i zatim razrijeđen u RPMI-1640 bez glutamina i sa 3-(N-morfolino) propan sulfonskom kiselinom (MOPS) pH 7.{ {10}} do koncentracije od 1–2 × 104 CFU/mL, koji je zatim dodan u epruvete koje sadrže EO. Epruvete su zatim inkubirane 7 dana na 30 ºC. Nakon toga, epruvete su procijenjene na rast gljivica, a najniža koncentracija u kojoj nije primijećen rast smatrana je minimalnom inhibitornom koncentracijom (MIC). Najniža koncentracija kod koje nije uočen rast nakon postavljanja negativnih epruveta u SDA tijekom 7 dana na 30 ºC smatrala se minimalnom letalnom koncentracijom (MLC). Za kontrolu osjetljivosti ispitivanih mikroorganizama korišten je referentni antifungalni spoj, flukonazol (Pfizer). Rezultati su dobiveni iz tri neovisna eksperimenta izvedena u duplikatu, a rezultati su izraženi kao srednja vrijednost. Također su uključene negativna i pozitivna kontrola, predstavljena neinokuliranim medijem i inokuliranim medijem s maksimalnom koncentracijom DMSO (1 posto).

4.4. Protuupalno djelovanje

4.4.1. Kultura stanica

Stanična linija mišjeg leukemijskog makrofaga RAW 264.7, koja je pripadala američkoj zbirci tipskih kultura (ATCC TIB-71), uzgojena je kao što je prethodno izvijestila naša grupa [92].

4.4.2. Proizvodnja dušikovog oksida

Proizvodnja NO procijenjena je procjenom koncentracije nitrata u supernatantima kulture pomoću Griessovog reagensa [93]. Stanice (0.6 × 106 stanica/jažici) su uzgajane u 48-pločama s kulturom jažica. Makrofagi su stabilizirani preko noći, zatim prethodno tretirani 1 sat s EO (0.08–1.25 µL/mL) razrijeđenim u DMSO i nakon toga aktivirani s 50 ng/mL LPS-a tijekom 24 sata. LPS-stimulirani makrofagi i netretirani makrofagi korišteni su kao pozitivna, odnosno negativna kontrola. Griessova reakcija je provedena kako je prethodno opisano u našoj skupini [92]. Naša je skupina već pokazala da DMSO u najvišoj korištenoj koncentraciji (0,4 posto) nema protuupalno ili citotoksično djelovanje (podaci nisu prikazani).

4.4.3. Ekspresija proupalnih proteina, iNOS i COX-2 

Stanice RAW 264.7 (1,2 × 106 stanica/jažici) uzgajane su u 6-pločama s jažicama i stabilizirane preko noći. Zatim su te stanice podvrgnute 1 h inkubacije s EO u koncentraciji od 1,25 µL/mL, nakon čega je uslijedilo 24 h LPS aktivacije (50 ng/mL). Negativna kontrola se sastojala od netretiranih stanica, a pozitivna kontrola je bila sastavljena samo od stanica tretiranih LPS-om. Priprema staničnih lizata slijedila je protokol koji su prethodno proveli Zuzarte i sur. [92]

Sadržaj inducibilne sintaze dušikovog oksida (iNOS) i ciklooksigenaze{{0}} (COX-2) procijenjen je Western blot analizom kao što je prethodno opisano [13]. Za odvajanje proteina, proveden je elektroforetski rad s 10 posto (v/v) SDS-poliakrilamidnim gelovima na 130 V tijekom 1,5 h. Proteinske linije su zatim blotirane na poliviniliden fluorid membrane (prethodno aktivirane metanolom) na 400 mA tijekom 3 sata. Membrane su zatim inkubirane 1 sat na sobnoj temperaturi s nespecifičnim IgG s 5 posto (w/v) obranog mlijeka u TBS-T. Dalje su inkubirani preko noći na 4 ◦C sa specifičnim anti-iNOS (1:500; R & D Systems) ili anti-COX-2 (1:5000; Abcam, Cambridge, UK) antitijelima . Na kraju su isprani 30 minuta s TBS-T (10 minuta, 3 puta) i inkubirani 1 sat na sobnoj temperaturi sa sekundarnim antitijelima (1:40,000; Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, SAD ) konjugiran s peroksidazom hrena. Detekcija imunokompleksa provedena je kemiluminiscencijskim skenerom (Image Quant LAS 500, GE, Boston, MA, SAD). Protutijela protiv tubulina (1:20 000; Sigma, St. Louis, MO, SAD) korištena su kao kontrola punjenja. ImageLab softverska verzija 6.1.0 (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, SAD) korištena je za kvantifikaciju proteina.

4.5. Migracija stanica

Stanična linija mišjih embrionalnih fibroblasta NIH 3T3 (ATCC CRL-1658) uzgajana je kako je prethodno opisano u [6].

4.5.2. Ispitivanje migracije stanica

Migracija stanica je provedena korištenjem testa ogrebotine na ranama prema Martinotti et al. [94] s malim izmjenama, kao što je ranije objavljeno [13]. Ukratko, fibroblasti NIH 3T3 zasijani su pri 2,5 × 105 stanica/mL i ostavljeni da postignu konfluentnost. Nakon toga, rana je nanesena vrhom pipete od 200 µL, a neprirasle stanice su uklonjene ispiranjem s PBS pH 7,4. DMEM s 2 posto FBS sa ili bez dodavanja EO (1,25 µL/mL). Slike su dobivene 0, 12 i 18 sati nakon ogrebotine pomoću mikroskopa s faznim kontrastom, a područje rane izmjereno je pomoću softvera ImageJ/Fiji. Prikazani rezultati dobiveni su pomoću sljedeće jednadžbe:

4.6. Preživljavanje stanica

Učinak različitih koncentracija EO na vitalnost makrofaga i fibroblasta procijenjen je pomoću testa redukcije resazurina, kao što je ranije objavljeno [6].

4.7. Starenje izazvano etopozidom

Starenje je procijenjeno korištenjem etopozida kao induktora starenja, kao što je objavljeno drugdje [95], uz neke modifikacije. Ukratko, nakon 24 sata etopozida, stanice su dalje inkubirane 72 sata u prisutnosti ili odsutnosti (CT) S. aurea EO. Beta-galaktozidaza je procijenjena korištenjem komercijalno dostupnog pribora prema protokolu proizvođača (#9860, Cell Signaling Technology Inc., Danvers, MA, SAD). Jasno plavo obojenje ukazuje na aktivnost beta-galaktozidaze. Nakon razvoja boja, jažice su fotografirane za naknadnu analizu slike. Program ImageJ korišten je za kvantitativnu analizu procjenom postotka senescentnih stanica.

4.8. Statistička analiza 

Eksperimenti su izvedeni najmanje u duplikatu za tri neovisna eksperimenta. Srednje vrijednosti ± SEM (standardna pogreška srednje vrijednosti) prikazane su u rezultatima. Statistička značajnost za testove protuupalnog djelovanja, stanične održivosti i starenja procijenjena je jednosmjernom analizom varijance (ANOVA) i Dunnettovim post hoc testom pomoću GraphPad Prism verzije 9.3.0 (GraphPad Software, San Diego, CA , SAD). Dok je statistički značaj za testove stanične migracije procijenjen pomoću dvosmjerne ANOVA praćene Sydákovim višestrukim usporednim testovima, p vrijednosti < 0.05 prihvaćene su kao statistički značajne.

5. Zaključci

Ovaj rad pojačava korisne učinke koji se obično pripisuju Salvia spp. potvrđujući neke od tradicionalnih upotreba koje se pripisuju S. aurea. Osim toga, otkriven je jedinstveni kemijski sastav s 1,8-cineolom, -pinenom, cis-tujonom, kamforom, (E)-kariofilenom, trans-tujonom, -pinenom, kamfenom i -humulenom kao glavnim spojevima. Ovdje izvješćujemo da EO ispoljava protugljivične, protuupalne učinke i učinke zacjeljivanja rana, čime potvrđujemo tradicionalne upotrebe povezane s ovom vrstom za liječenje kožnih infekcija, bolesti povezanih s upalama i rana.

Osim toga, ova studija po prvi put izvješćuje da je ova vrsta bila u stanju ispoljiti antisenescencijski učinak, čime je dodatno potaknula interes za ovu vrstu. Stoga ovi rezultati naglašavaju ulogu S. auree u ublažavanju upala i infekcija povezanih s kožom, čime se jača interes za dermokozmetiku. Dok je ova studija pokazala da se proizvodnja visokovrijednih metabolita s relevantnim biološkim aktivnostima može pospješiti uzgojem, točna kemijska analiza kultivirane biljke je ključna, s obzirom na ekstremnu varijabilnost kemijskog profila kao rezultat genetskih i okolišnih čimbenika. (stres, svojstva tla, sezona berbe).

Doprinosi autora:LS i AM; validacija, DM, EC, MJG, MTC i SP; formalna analiza, JMA-S., MJG i AP; istraga, JMA-S., AM i AP; resursi, AM, MTC i LS; čuvanje podataka, AP; pisanje—priprema izvornog nacrta, EC, DM, JMA-S., AP i AM; pisanje— pregled i uređivanje, EC, DM, MTC, LS i AM; vizualizacija, JMA-S.; nadzor, LS i AM; administracija projekta, LS; nabava sredstava, LS i MTC Svi su autori pročitali i složili se s objavljenom verzijom rukopisa.

Financiranje: Ovaj rad je financiran od strane COMPETE 2020—Operativni program za konkurentnost i internacionalizaciju i portugalski nacionalni fondovi putem FCT—Fundação para a Ciência ea Tecnologia, u okviru projekata UIDB/04539/2020, UIDP/04539/2020 i LA/P/0058/ 2020.

Priznanja: Autori sa zahvalnošću zahvaljuju na dragocjenom doprinosu Daniele Standen, Međunarodnog instituta za studije i jezik (Sveučilište Reading, UK, d.standen@reading.ac.uk) za tehničku podršku.

Reference

1. Kaur, N.; Ahmed, T. Bioaktivni sekundarni metaboliti ljekovitog i aromatičnog bilja i njihova svojstva u borbi protiv bolesti. U Ljekovito i aromatično bilje; Springer Nature: Basingstoke, UK, 2021.; str 113–142. ISBN 978-3-030-58974-5.

2. Pinto, E.; Pina-Vaz, C.; Salgueiro, L.; Gonçalves, MJ; Costa-De-Oliveira, S.; Cavaleiro, C.; Palmeira, A.; Rodrigues, A.; Martinez-De-Oliveira, J. Antifungalna aktivnost eteričnog ulja Thymus pulegioides na Candida, Aspergillus i dermatophyte vrste. J. Med. Microbiol. 2006, 55, 1367–1373. [CrossRef]

3. Santos, EL; Freitas, PR; Araújo, ACJ; Almeida, RS; Tintino, SR; Paulo, CLR; Silva, ACA; Silva, LE; napraviti Amaral, W.; Deschamps, C.; et al. Pojačano antibakterijsko djelovanje antibiotika eteričnim uljem Aloysia gratissima (Gillies & Hook.) Tronc. i njegov glavni sastojak beta-kariofilen. Phytomedicine Plus 2021, 1, 100100. [CrossRef]

4. Edris, AE Farmaceutski i terapeutski potencijali eteričnih ulja i njihovih hlapljivih sastojaka: pregled. fitoter. Res. 2007., 21, 308–323. [CrossRef]

5. Ghorbani, A.; Esmaeilizadeh, M. Farmakološka svojstva Salvia Officinalis i njenih komponenti. J. Tradit. Upotpuniti, dopuna. Med. 2017, 7, 433–440. [CrossRef]

6. Piras, A.; Maccioni, A.; Falconieri, D.; Porcedda, S.; Gonçalves, MJ; Alves-Silva, JM; Silva, A.; Cruz, MT; Salgueiro, L.; Maxia, A. Kemijski sastav i biološka aktivnost eteričnog ulja Teucrium sodium L. subsp. kardioide (Schreb.) Arcang. (Lamiaceae) s otoka Sardinije (Italija). Nat. proizvod Res. 2022, 36, 5828-5835. [CrossRef]

7. Maccioni, A.; Falconieri, D.; Porcedda, S.; Piras, A.; Gonçalves, MJ; Alves-Silva, JM; Salgueiro, L.; Maxia, A. Antifungalna aktivnost i kemijski sastav eteričnog ulja iz nadzemnih dijelova dva nova kemotipa Teucrium capitatum L. s otoka Sardinije, Italija. Nat. proizvod Res. 2020, 35, 6007–6013. [CrossRef]

8. Piras, A.; Porcedda, S.; Falconieri, D.; Maxia, A.; Gonçalves, M.; Cavaleiro, C.; Gonc¸alves, MJ; Salgueiro, L. Antifungalna aktivnost eteričnog ulja iz Mentha spicata L. i Mentha pulegium L. koji rastu divlje na otoku Sardiniji (Italija). Nat. proizvod Res. 2021, 35, 993–999. [CrossRef]

9. Walker, JB; Sytsma, KJ Staminalna evolucija u rodu Salvia (Lamiaceae): Molekularni filogenetski dokazi za višestruko porijeklo staminalne poluge. Ann. Bot. 2007., 100, 375–391. [CrossRef]

10. Waller, SB; Cleff, MB; Serra, EF; Silva, AL; dos Reis Gomes, A.; de Mello, JRB; de Faria, RO; Meireles, MCA Biljke iz obitelji Lamiaceae kao izvor antifungalnih molekula u humanoj i veterinarskoj medicini. Microb. Pathog. 2017., 104, 232–237. [CrossRef]

11. Cocco, E.; Maccioni, D.; Sanjust, E.; Falconieri, D.; Farris, E.; Maxia, A. Etnofarmakobotanika i raznolikost mediteranskih endemičnih biljaka u subregiji Marmilla, Sardinija, Italija. Biljke 2022, 11, 3165. [CrossRef]

12. Afonso, AF; Pereira, OR; Fernandes, Â.; Calhelha, RC; Silva, AMS; Ferreira, RCF; Cardoso, SM Fitokemijski sastav i bioaktivni učinci vodenih ekstrakata Salvia africana, Salvia Officinalis "Icterina" i Salvia mexicana. Molecules 2019, 24, 4327. [CrossRef]

13. Alves-Silva, JM; Cocco, E.; Piras, A.; Gonçalves, MJ; Silva, A.; Falconieri, D.; Porcedda, S.; Cruz, MT; Maxia, A.; Salgueiro, L. Otkrivanje kemijskog sastava i bioloških svojstava Salvia cacaliifolia Benth. esencijalno ulje. Biljke 2023, 12, 359. [CrossRef]

14. Nkomo, MM; Katerere, DD; Vismer, HH; Cruz, TT; Balayssac, SS; Malet-Martino, MM; Makunga, NN Fusarium inhibicija divljih populacija ljekovite biljke Salvia africana-lutea L. povezana s metabolomičkim profiliranjem. BMC komplement. Alternativa. Med. 2014, 14, 99. [Usprkos Ref]

15. Codd, LE Flora južne Afrike: dio. 4 Lamiaceae; Botanički istraživački institut: Pretoria, Južna Afrika, 1985.; Svezak 28, ISBN 0621082686.

16. Makunga, NP; Van Staden, J. Učinkovit sustav za proizvodnju klonskih sadnica ljekovito važne aromatične biljke: Salvia africana-lutea L. Plant Cell Tissue Organ Cult. 2007., 92, 63–72. [CrossRef]

17. Aston Philander, L. Etnobotanika medicine rasta grmlja Western Cape. J. Ethnopharmacol. 2011., 138, 578–594. [CrossRef]

18. Watt, JM; Breyer-Brandwijk, MG Ljekovite i otrovne biljke južne i istočne Afrike: prikaz njihove medicinske i druge upotrebe, kemijskog sastava, farmakoloških učinaka i toksikologije kod ljudi i životinja; E. & S. Livingstone: Edinburgh, UK, 1962.

19. Gupta, AK; Cooper, EA Ažuriranje antifungalne terapije dermatofitoze. Mycopathologia 2008, 166, 353–367. [CrossRef]

20. Matiz, C.; Friedlander, SF Infekcije potkožnog tkiva i apscesi. U Načela i praksa pedijatrijskih zaraznih bolesti; Elsevier: Amsterdam, Nizozemska, 2012.; str. 454–462.e2. [CrossRef]

21. De Oliveira, CB; Vasconcellos, C.; Sakai-Valente, NY; Sotto, MN; Luiz, FG; Belda Júnior, W.; Sousa, M. da GT de; Benard, G.; Criado, PR Toll-like receptori (TLR) 2 i 4 ekspresije keratinocita pacijenata s lokaliziranom i diseminiranom dermatofitozom. Rev. Inst. Med. Trop. Sao Paulo 2015, 57, 57–61. [CrossRef]

22. Celestrino, GA; Reis, oklopni transporter; Criado, PR; Benard, G.; Sousa, MGT Trichophyton rubrum izaziva fagocitne i proupalne odgovore u ljudskim monocitima preko Toll-Like Receptor 2. Prednja strana. Microbiol. 2019, 10, 2589. [CrossRef]

23. Sunce, S.-C. Nekanonski put NF-B u imunitetu i upali. Nat. Rev. Immunol. 2017, 17, 545–558. [CrossRef]

24. Rao, KMK Molekularni mehanizmi koji reguliraju ekspresiju inos u različitim tipovima stanica. J. Toxicol. Okolina. Health Part B 2000, 3, 27–58. [CrossRef]

25. Minghetti, L. Ciklooksigenaza-2 (COX-2) u upalnim i degenerativnim bolestima mozga. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 2004, 63, 901–910. [CrossRef]

26. Sharma, A.; Gupta, S. Zaštitna manifestacija herbonanoceutika kao antimikotika: mogući lijek kandidat za dermatofitnu infekciju. Health Sci. Rep. 2022, 5, e775. [CrossRef]

27. Guo, S.; DiPietro, LA Čimbenici koji utječu na zacjeljivanje rana. J. Dent. Res. 2010., 89, 219–229. [CrossRef]

29. Zuzarte, M.; Gonçalves, MJ; Cavaleiro, C.; Canhoto, J.; Vale-Silva, L.; Silva, MJ; Pinto, E.; Salgueiro, L. Kemijski sastav i antifungalna aktivnost eteričnih ulja Lavandula viridis LHér. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 612–618. [CrossRef]

29. Martinez-Rossi, NM; Bitencourt, TA; Peres, NTA; Lang, EAS; Gomes, EV; Quaresemin, NR; Martins, MP; Lopes, L.; Rossi, A. Otpornost dermatofita na antifungalne lijekove: Mehanizmi i prospekt. Ispred. Microbiol. 2018, 9, 1108. [CrossRef]

30. Mourad, A.; Perfect, JR Rat protiv kriptokokoze: Pregled antifungalnog arsenala. mem. Inst. Oswaldo Cruz 2018, 113, 7. [CrossRef]

31. Vonkeman, HE; van de Laar, MAFJ Nesteroidni protuupalni lijekovi: nuspojave i njihova prevencija. Semin. Arthritis Rheum. 2010, 39, 294–312. [CrossRef]

32. Kamatou, GPP; van Zyl, RL; van Vuuren, SF; Figueiredo, AC; Barroso, JG; Pedro, LG; Viljoen, AM Sezonske varijacije u sastavu eteričnog ulja, toksičnosti ulja i biološkoj aktivnosti ekstrakata otapala tri južnoafričke vrste Salvia. S. Afr. J. Bot. 2008, 74, 230–237. [CrossRef]

33. Kamatou, GPP; van Zyl, RL; van Vuuren, SF; Viljoen, AM; Figueiredo, AC; Barroso, JG; Pedro, LG; Tilney, PM; Barroso, JG Kemijski sastav, vrste lisnog trihoma i biološke aktivnosti eteričnih ulja četiri srodne vrste Salvia autohtone u južnoj Africi. J. Essent. Oil Res. 2006, 18, 72–79. [CrossRef]

35. Najar, B.; Mecacci, G.; Nardi, V.; Cervelli, C.; Nardoni, S.; Mancini, F.; Ebani, VV; Giannecchini, S.; Pistelli, L. Hlapljive tvari i antifungalno-antibakterijsko-antivirusno djelovanje južnoafričke Salvie spp. eteričnih ulja uzgojenih u jedinstvenim uvjetima. Molecules 2021, 26, 2826. [CrossRef]

35. Cowling, RM; Rundel, PW; Lamont, BB; Arroyo, MK; Arianoutsou, M. Biljna raznolikost u mediteransko-klimatskim regijama. Trendovi Ecol. Evol. 1996, 11, 362–366. [CrossRef]

36. Médail, F. Ekosustavi: Mediteran. U Encyclopedia of Ecology, Volume 3; Elservier Inc.: Oxford, UK, 2008.; Svezak 5, str. 2296–2308.

37. Adams, RP Identifikacija komponenti eteričnog ulja plinskom kromatografijom/kvadrupolnom spektrometrijom mase, 4. izdanje; Allured Publishing Corporation: Carol Stream, IL, SAD, 2007.

38. Knjižnica spektra mase Nacionalnog instituta za standarde i tehnologiju (NIST/EPA/NIH).

39. Guijarro-Muñoz, I.; Compte, M.; Álvarez-Cienfuegos, A.; Álvarez-Vallina, L.; Sanz, L. Lipopolisaharid aktivira Toll-like Receptor 4 (TLR4)-posredovan NF-κB signalni put i proupalni odgovor u ljudskim pericitima. J. Biol. Chem. 2014., 289, 2457–2468. [CrossRef]

40. Manning, J.; Goldblatt, P. Biljke florističke regije Greater Cape. 1: Core Cape Flora; Južnoafrički nacionalni institut za biološku raznolikost: Pretoria, Južnoafrička Republika, 2012.; ISBN 1919976744.

41. Lim Ah Tock, MJ; Kamatou, GPP; Combrinck, S.; Sandaši, M.; Viljoen, AM Kemometrijska procjena varijacije eteričnog ulja triju vrsta Salvije autohtonih u Južnoj Africi. Phytochemistry 2020, 172, 112249. [CrossRef]

42. Fokou, JBH; Dongmo, PMJ; Boyom, FF; Fokou, JBH; Dongmo, PMJ; Boyom, FF Kemijski sastav i farmakološka svojstva eteričnog ulja. U eteričnim uljima – prirodna ulja; El-Shemy, H., ur.; IntechOpen: London, UK, 2020.; str. 13–36. ISBN 978-1-78984-641-6.

43. Figueiredo, AC; Barroso, JG; Pedro, LG; Scheffer, JJC Čimbenici koji utječu na proizvodnju sekundarnog metabolita u biljkama: hlapljive komponente i eterična ulja. Okus. Fragr. J. 2008, 23, 213–226. [CrossRef]

44. van Vuuren, S.; Ramburrun, S.; Kamatou, G.; Viljoen, A. Autohtona južnoafrička eterična ulja kao potencijalna antimikrobna sredstva za liječenje neugodnog mirisa stopala (bromodoza). S. Afr. J. Bot. 2019, 126, 354–361. [CrossRef]

45. Scott, G.; Springfield, EP; Coldrey, N. Farmakognostička studija 26 južnoafričkih biljnih vrsta koje se koriste kao tradicionalni lijekovi. Pharm Biol. 2004., 42, 186–213. [CrossRef]

46. ​​Oosthuizen, CB; Gaša, N.; Hamilton, CJ; Lall, N. Inhibicija mikotiol disulfid reduktaze i mikobakterijskog biofilma odabranim južnoafričkim biljkama. S. Afr. J. Bot. 2019, 120, 291–297. [CrossRef]

48. Alves, M.; Gonçalves, MJ; Zuzarte, M.; Alves-Silva, JM; Cavaleiro, C.; Cruz, MT; Salgueiro, L. Otkrivanje antifungalnog potencijala dvaju eteričnih ulja iberijskog timijana: Učinak na C. albicans klicinu cijev i izvedene biofilmove. Ispred. Pharmacol. 2019, 10, 446. [CrossRef]

49. Šukla, R.; Singh, P.; Prakash, B.; Dubey, NK Antifungalno, inhibicijsko djelovanje aflatoksina i antioksidativno djelovanje slatkog eteričnog ulja Callistemon lanceolatus (Sm.) i njegove glavne komponente 1,8-cineola protiv gljivičnih izolata iz sjemenki slanutka. Kontrola hrane 2012, 25, 27–33. [CrossRef]

49. Yu, D.; Wang, J.; Shao, X.; Xu, F.; Wang, H. Antifungalni načini djelovanja ulja čajevca i njegove dvije karakteristične komponente protiv Botrytis cinerea. J. Appl. Microbiol. 2015., 119, 1253–1262. [CrossRef]

50. Morcia, C.; Malnati, M.; Terzi, V. In vitro antifungalna aktivnost terpinen{1}}ola, eugenola, karvona, 1,8-cineola (eukaliptola) i timola protiv mikotoksigenih biljnih patogena. Dodatak hrani. Contam. Dio A 2011, 29, 415–422. [CrossRef]

51. Kim, H.-M.; Kwon, H.; Kim, K.; Lee, S.-E. Antifungalna i antiaflatoksigena djelovanja 1,8-cineola i t-cinamaldehida na Aspergillus afflatus. Appl. Sci. 2018, 8, 1655. [CrossRef]

52. da Silva, ACR; Lopes, PM; de Azevedo, MMB; Costa, DCM; Alviano, CS; Alviano, DS Biološke aktivnosti enantiomera a-pinena i -pinena. Molecules 2012, 17, 6305–6316. [CrossRef]

53. Jang, S.-K.; Lee, S.-Y.; Kim, S.-H.; Hong, C.-Y.; Park, M.-J.; Choi, I.-G. Antifungalna djelovanja eteričnih ulja šest četinjača protiv Aspergillus fumigatus. J. Korean Wood Sci. Technol. 2012, 40, 133–140. [CrossRef]

54. de Macêdo Andrade, AC; Rosalen, PL; Freires, IA; Scotti, L.; Scotti, MT; Aquino, SG; de Castro, RD Antifungalna aktivnost, način djelovanja, predviđanje spajanja i antibiofilmski učinci ( plus )- -pinen enantiomera protiv Candida spp. Curr. Vrh. Med. Chem. 2018, 18, 2481–2490. [CrossRef]

55. Shin, S. Antifungalna djelovanja eteričnih ulja iz Glehnia littoralis sama i u kombinaciji s ketokonazolom. Nat. proizvod Sci. 2005., 11, 92–96.

57. Iraji, A.; Yazdanpanah, S.; Alizadeh, F.; Mirzamohammadi, S.; Ghasemi, Y.; Pakshir, K.; Yang, Y.; Zomorodian, K. Provjera antifungalnih aktivnosti monoterpena i njihovih izomera protiv vrsta Candida. J. Appl. Microbiol. 2020, 129, 1541–1551. [CrossRef]

58. Jaafar, M.; Mitri, S.; Na'was, T. Inhibicija rasta gram-negativnih bakterija i stvaranja biofilma alfa tujonom. IOSR J. Pharm. Biol. Sci. 2018, 13, 2. [CrossRef]

59. Teker, T.; Sefer, Ö.; Gazda ˘glı, A.; Yörük, E.; Varol, G.˙I.; Albayrak, G. -tujon pokazuje antifungalno djelovanje protiv F. graminearum inducirajući oksidativni stres, apoptozu, epigenetske promjene i smanjenu sintezu toksina. Eur. J. Plant Pathol. 2021, 160, 611–622. [CrossRef]

59. Huo, H.; Momak.; Cao, Y.; Liu, N.; Jia, P.; Kong, W. Antifungalna aktivnost kamfora protiv četiri fitopatogena Fusariuma. S. Afr. J. Bot. 2022., 148, 437–445. [CrossRef]

60. Wu, K.; Lin, Y.; Chai, X.; Duan, X.; Zhao, X.; Chun, C. Mehanizmi antibakterijskog djelovanja eteričnog ulja Cinnamomum camphora var. linaloofera Fujita protiv Escherichia coli. Food Sci. Nutr. 2019, 7, 2546–2555. [CrossRef]

62. Magiatis, P.; Skaltsounis, A.-L.; Chinou, I.; Haroutounian, SA Kemijski sastav i in-vitro antimikrobna aktivnost eteričnih ulja tri grčke vrste Achillea. Z. Für Nat. C 2002, 57, 287–290. [CrossRef] [PubMed]

62. Dahham, S.; Tabana, Y.; Iqbal, M.; Ahamed, M.; Ezzat, M.; Majid, A.; Majid, A. Antikancerogena, antioksidativna i antimikrobna svojstva seskviterpena-kariofilena iz eteričnog ulja Aquilaria crassna. Molekule 2015, 20, 11808–11829. [CrossRef]

63. Pieri, FA; de Castro Souza, MC; Vermelho, LLR; Vermelho, MLR; Perciano, PG; Vargas, FS; Borges, APB; da Veiga-Junior, VF; Moreira, MAS Upotreba -kariofilena u borbi protiv stvaranja bakterijskog zubnog plaka kod pasa. BMC Vet. Res. 2016, 12, 216. [CrossRef]

65. Goren, AC; Piozzi, F.; Akčićek, E.; Kılıç, T.; Çarıkçı, S.; Mozio ˘glu, E.; Setzer, WN Sastav eteričnog ulja dvadeset i dvije vrste Stachys (planinski čaj) i njihove biološke aktivnosti. Phytochem. Lett. 2011., 4, 448–453. [CrossRef]

65. Yadav, N.; Chandra, H. Suzbijanje upalnih i infekcijskih odgovora u plućnim makrofagima uljem eukaliptusa i njegovim sastavnim dijelom 1,8-cineolom: uloga receptora za prepoznavanje uzoraka TREM-1 i NLRP3, regulatora MAP kinaze MKP{{5 }} i NFκB. PLoS ONE 2017, 12, e0188232. [CrossRef]

66. Beer, AM; Zagorčev, P.; Filipova, DM; Lukanov, J. Učinci 1,8-cineola na aktivnost ciklooksigenaze i izoformi ciklooksigenaze 1 i ciklooksigenaze 2. Nat. proizvod Chem. Res. 2017, 5, 1000253. [CrossRef]

68. Bastos, VPD; Gomes, AS; Lima, FJB; Brito, TS; Soares, PMG; Pinho, JPM; Silva, CS; Santos, AA; Souza, MHLP; Magalhães, PJC inhalirani 1,8-cineol smanjuje upalne parametre u dišnim putevima zamoraca izazvanih ovalbuminom. Osnovni, temeljni. Clin. Pharmacol. Toxicol. 2011, 108, 34–39. [CrossRef]

69. Juergens, LJ; Racké, K.; Tuleta, I.; Stoeber, M.; Juergens, UR Protuupalni učinci 1,8-cineola (eukaliptola) poboljšavaju učinke glukokortikoida in vitro: novi pristup dodatnoj terapiji koja štedi steroide za KOPB i astmu? Sinergija 2017, 5, 1–8. [CrossRef]

69. Santos, FA; Rao, VSN Protuupalni i antinociceptivni učinci 1,8-cineola terpenoidnog oksida prisutnog u mnogim biljnim eteričnim uljima. fitoter. Res. 2000, 14, 240–244. [CrossRef]

70. Mohammed, HA; Muhamed, SAA; Khan, O.; Ali, HM Lokalna eukaliptol mast ubrzava zacjeljivanje rana i ima antioksidativne i protuupalne učinke u modelu opeklina kože štakora. J. Oleo Sci. 2022, 71, ess22214. [CrossRef]

72. Juergens, UR; Dethlefsen, U.; Steinkamp, ​​G.; Gillissen, A.; Repges, R.; Vetter, H. Protuupalna aktivnost 18-cineola (eukaliptola) u bronhijalnoj astmi: dvostruko slijepo placebom kontrolirano ispitivanje. Respir. Med. 2003, 97, 250–256. [CrossRef]

73. Lima, PR; de Melo, TS; Carvalho, KMMB; de Oliveira, Í.B.; Arruda, BR; de Castro Brito, GA; Rao, VS; Santos, FA 1,8-cineol (eukaliptol) ublažava akutni pankreatitis izazvan ceruleinom putem modulacije citokina, oksidativnog stresa i aktivnosti NF-κB u miševa. Life Sci. 2013, 92, 1195–1201. [CrossRef]

73. Coté, H.; Boucher, M.-A.; Pichette, A.; Legault, J. Protuupalno, antioksidativno, antibiotsko i citotoksično djelovanje Tanacetum vulgare l. eteričnog ulja i njegovih sastojaka. Medicines 2017, 4, 34. [CrossRef]

74. Rufino, AT; Ribeiro, M.; Juda, F.; Salgueiro, L.; Lopes, MC; Cavaleiro, C.; Mendes, AF Protuupalna i kondroprotektivna aktivnost (plus)- -pinena: strukturna i enantiomerna selektivnost. J. Nat. proizvod 2014, 77, 264–269. [CrossRef]

75. Schepetkin, IA; Kushnarenko, SV; Özek, G.; Kirpotina, LN; Utegenova, GA; Kotukhov, YA; Danilova, AN; Özek, T.; Ba¸ser, KHC; Quinn, MT Inhibicija odgovora ljudskih neutrofila eteričnim uljem Artemisia kotuchovii i njegovim sastojcima. J. Agric. Food Chem. 2015, 63, 4999–5007. [CrossRef]

76. dos Santos, E.; Leitão, MM; Aguero Ito, CN; Silva-Filho, SE; Arena, AC; de Souza Silva-Comar, FM; Nakamura Cuman, RK; Oliveira, RJ; Nazari Formagio, AS; Leite Kassuya, CA Analgetsko i protuupalno djelovanje eteričnog ulja i kamfora na zglobove izoliranih iz lišća Ocimum kilimandscharicum Gürke. J. Ethnopharmacol. 2021, 269, 113697. [CrossRef]

78. Adhikari, A.; Bhandari, S.; Pandey, DP Protuupalni spojevi kamfor i metilsalicilat iz tradicionalno korištene biljke za liječenje boli Equisetum arvense LJ Nepal Chem. Soc. 2019, 40, 1–4. [CrossRef]

79. Silva-Filho, S.; de Souza Silva-Comar, F.; Wiirzler, L.; učiniti Pinho, R.; Greenspan, R.; Bersani-Amado, C.; Cuman, R. Učinak kamfora na ponašanje leukocita in vitro i in vivo u akutnom upalnom odgovoru. Trop. J. Pharm. Res. 2015, 13, 2031. [CrossRef]

79. Cho, JY; Chang, H.-J.; Lee, S.-K.; Kim, H.-J.; Hwang, J.-K.; Chun, HS Ublažavanje kolitisa izazvanog dekstran sulfatom natrijem kod miševa oralnom primjenom -kariofilena, seskviterpena. Life Sci. 2007., 80, 932–939. [CrossRef]

80. Gushiken, LFS; Beserra, FP; Hussni, MF; Gonzaga, MT; Ribeiro, VP; de Souza, PF; Campos, JCL; Massaro, TNC; Hussni, CA; Takahira, RK; et al. Beta-kariofilen kao antioksidans, protuupalno i reepitelizacijsko djelovanje u modelu ekscizije rane na koži štakora. Oksid. Med. Cell Longev. 2022., 2022., 1–21. [CrossRef]

82. Brito, LF; Oliveira, HBM; Neves Selis, N.; Souza, CLS; Mlađi, MNS; Souza, EP; da Silva, LSC; Souza Nascimento, F.; Amorim, AT; Campos, GB; et al. Protuupalna aktivnost -kariofilena u kombinaciji s dokozaheksaenskom kiselinom u modelu sepse izazvane Staphylococcus aureus u miševa. J. Sci. Food Agric. 2019, 99, 5870–5880. [CrossRef]

82. Sousa, LFB; Oliveira, HBM; das Neves Selis, N.; Morbeck, LLB; Santos, TC; da Silva, LSC; Viana, JCS; Reis, MM; Sam patio, dipl. Campos, GB; et al. -kariofilen i dokozaheksaenska kiselina, izolirani ili povezani, imaju potencijalne antinociceptivne i protuupalne učinke in vitro i in vivo. Sci. Rep. 2022, 12, 19199. [CrossRef]

83. Scandiffio, R.; Geddo, F.; Cottone, E.; Querio, G.; Antoniotti, S.; Gallo, zastupnik; Maffei, ME; Bovolin, P. Zaštitni učinci (e)- -kariofilena (bcp) kod kronične upale. Hranjive tvari 2020, 12, 3273. [CrossRef]

84. Salas-Oropeza, J.; Jimenez-Estrada, M.; Perez-Torres, A.; Castell-Rodriguez, AE; Becerril-Millan, R.; Rodriguez-Monroy, MA; Jarquin-Yañez, K.; Canales-Martinez, MM Djelovanje -pinena i -felandrena u zacjeljivanju rana. Molecules 2021, 26, 2488. [CrossRef]

85. Rocha Caldas, GF; da Silva Oliveira, AR; Araújo, AV; Lafayette, SSL; Albuquerque, GS; da Costa Silva-Neto, J.; Costa-Silva, JH; Ferreira, F.; da Costa, JGM; Wanderley, AG Gastroprotektivni mehanizmi monoterpena 1,8-cineola (eukaliptola). PLoS ONE 2015, 10, e0134558. [CrossRef]

86. Čabane, S.; Boudjelal, A.; Napoli, E.; Benkhaled, A.; Ruberto, G. Fitokemijski sastav, antioksidans i aktivnosti zacjeljivanja rana Teucrium polium subsp. capitatum (L.) Briq. esencijalno ulje. J. Essent. Oil Res. 2021, 33, 143–151. [CrossRef]

88. Tran, TA; Ho, MT; Pjesma, YW; Cho, M.; Cho, SK Kamfor inducira proliferativne aktivnosti i aktivnosti protiv starenja u ljudskim primarnim dermalnim fibroblastima i inhibira stvaranje bora izazvano UV zračenjem na koži miša. fitoter. Res. 2015, 29, 1917–1925. [CrossRef]

89. Rodenak-Kladniew, B.; Castro, A.; Stärkel, P.; Galle, M.; Crespo, R. 1,8-Cineol potiče zaustavljanje staničnog ciklusa G0/G1 i starenje izazvano oksidativnim stresom u HepG2 stanicama i senzibilizira stanice na lijekove protiv starenja. Life Sci. 2020, 243, 117271. [CrossRef]

89. Uprava za kvalitetu lijekova i zdravstvenu skrb Vijeća Europe. Europska farmakopeja; EDQM: Strasbourg, Francuska, 2010.; ISBN 978-92-871-6700-2.

90. Van den Dool, H.; Kratz, PD Generalizacija sustava indeksa zadržavanja uključujući linearnu temperaturno programiranu razdjelnu kromatografiju plin-tekućina. J. Chromatogr. 1963, 11, 463–471. [CrossRef]

91. CLSI Institut za kliničke i laboratorijske standarde. Referentna metoda za ispitivanje antifungalne osjetljivosti filamentoznih gljivica razrjeđivanjem bujona. CLSI dokument M38-A2, odobreni standard, 2. izdanje; Institut za kliničke i laboratorijske standarde: Wayne, PA, SAD, 2008.; Svezak 28, ISBN 1-56238-668-9.

93. Zuzarte, M.; Alves-Silva, JM; Alves, M.; Cavaleiro, C.; Salgueiro, L.; Cruz, MT Novi uvidi o protuupalnom potencijalu i sigurnosnom profilu eteričnih ulja Thymus carnosus i Thymus camphoratus i njihovih glavnih spojeva. J. Ethnopharmacol. 2018, 225, 10–17. [CrossRef]

93. Green, LC; Wagner, DA; Glogowski, J.; Skipper, PL; Wishnok, JS; Tannenbaum, SR Analiza nitrata, nitrita i [15N] nitrata u biološkim tekućinama. analno Biochem. 1982., 126, 131–138. [CrossRef]

95. Martinotti, S.; Ranzato, E. Ispitivanje zacjeljivanja rana od ogrebotina. U epidermalnim stanicama: metode u molekularnoj biologiji; Turksen, K., ur.; Humana: New York, NY, SAD, 2019.; Svezak 2109, str. 225–229. [CrossRef]

95. Moreira, P.; Sousa, FJ; Matoš, P.; Brites, GS; Gonçalves, MJ; Cavaleiro, C.; Figueirinha, A.; Salgueiro, L.; Batista, MT; Branko, PC; et al. Kemijski sastav i učinak protiv kožnih promjena bioaktivnih ekstrakata dobivenih hidrodestilacijom lišća Eucalyptus globulus. Pharmaceutics 2022, 14, 561. [CrossRef]

【Za više informacija: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】