Akteozid, komponenta Stachys Sieboldii MIQ, može biti obećavajući antinefritik: Učinak akteozida na anti-GBM nefritis polumjesecastog tipa kod štakora

Za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Kazumi Hayashi, Tadashi Nagamatsu, Mikio Ito, Tomohisa Hattori i Yoshio Suzuki

Zavod za farmakologiju, Farmaceutski fakultet, Sveučilište Meijo, 150 Yagotoyama, Tenpaku-Ku, Nagoya 468, Japan

SAŽETAK

Učinci odakteozid(ACT) na anti-GBM tipa polumjesecanefritisu štakora su istraživani. Kada su štakori tretirani sAkteozidod 1. dana nakon iv injekcije anti-GBM seruma,Akteozidinhibira povećanje izlučivanja proteina u urin. uAkteozid-liječenih štakora, sadržaj kolesterola i kreatinina i proizvodnja antitijela protiv r-globulina kunića u plazmi bili su niži od onih u kontrolnih štakora s nefritom. Histološko promatranje pokazalo je da ovaj agens potiskuje hipercelularnost i incidenciju stvaranja polumjeseca, adheziju kapilarne stijenke na Bowmanovu kapsulu i fibrinoidnu nekrozu u glomerulima. Nadalje, naslage IgG štakora i C3 na GBM bile su značajno manje uAkteozidliječenoj skupini nego u kontrolnoj nefritičnoj skupini. Kada je liječenje započeto od 20. dana nakon iv injekcije anti-GBM seruma, kojom je utvrđena bolest,Akteozidrezultiralo je sličnim učinkom nabubrežništakori kako je gore navedeno. Ovi rezultati sugeriraju da Acteoside može biti koristan lijek protiv brzo progresivnog glomerulonefritisa, koji je karakteriziran teškim glomerularnim lezijama s difuznim polumjesecima.

Ključne riječi: anti-GBM tipa polumjesecanefritis,Akteozid, štakorski IgG, štakorski-C3

Click to Cistanche koristi s Acteoside

Chyorogi Stachys sieboldii MIQ (Labiatae) prepisuje se za mnoge bolesti, a ovaj gomolj kao hranu koriste Kinezi, Rusi i Japanci. Nedavna istraživanja su pokazala da chyrogi ima djelovanje protiv anoksije (1), inhibitorno djelovanje na aktivnost hijaluronidaze (2) i imunosupresivno djelovanje (3).

S druge strane, spomenuto je da imunološki odgovor sudjeluje u razvoju nefritisa. Konkretnije rečeno, oštećenje glomerula je posredovano taloženjem imunološkog kompleksa u glomerulima, nakon čega slijedi imunološko-upalna reakcija, uključujući aktivaciju komplementa i otpuštanje drugih upalnih medijatora. U novijim istraživanjima velika se pozornost posvećuje doprinosu stanično posredovanog imunološkog odgovora u razvoju glomerulonefritisa (4, 5). Štoviše, Neild et al. (6) izvijestili su da supresija funkcije T stanica ciklosporinom A (CyA) blokira kasniji razvoj glomerularnih lezija kod akutnog nefritisa. Izvijestili smo da mizoribin (7), azatioprin (7), CyA (8), metilprednizolon (9) i neke biljne komponente (10) imaju imunosupresivno djelovanje koje je pokazalo blagotvoran učinak na anti-GBM nefritis. Iako ovi imunosupresivi imaju antinefritičko djelovanje, teško ih je koristiti u kliničkim ispitivanjima zbog njihovih nuspojava (11). Stoga se očekuje razvoj novog imunosupresivnog sredstva za liječenje nefritisa u kliničkom stadiju.

Svrha ove studije bila je razjasnitiantinefritski učinak akteozida, komponenta chyorogija, na anti-GBM nefritis tipa polumjesec u štakora.

MATERIJALI I METODE

Životinje

Muški štakori Sprague-Dawley soja, težine cca. Za sve eksperimente korišteno je 160 g (Nihon SLC, Hamamatsu). Ove su životinje bile smještene u klimatiziranoj prostoriji na 23 ± 1 C tijekom eksperimentalnog razdoblja.

Droge

Kemijska struktura akteozida (ACT) (Tsumura Co., Ltd., Tokyo) prikazana je na slici 1. Ova je komponenta ekstrahirana iz nadzemnog dijela biljke chyorogi (Stachys sieboldii MIQ). Čistoća ACT-a potvrđena je HPLC-om (kolona: TSK gel ODS-80TM (4.0 id x 250 mm); Mobilna faza: 20 posto CH3CN/H2O, koja sadrži 10 AcOH; Brzina protoka: 0,7 ml/min; Temp.: sobna temperatura; Detekcija: UV 254 nm) u Tsumura Co., Ltd. ACT korišten u ovim eksperimentima imao je čistoću veću od 9970. ACT je otopljen u destiliranoj vodi. Korišteni su i dipiridamol (Dip) (Boehringer Ingelheim, Njemačka) i azatioprin (Aza) (Sigma, St. Louis, MO, SAD); Ovi lijekovi su suspendirani u 1070 gumi arabike.

Indukcija anti-GBM nefritisa tipa polumjeseca

Anti-GBM nefritis tipa polumjeseca induciran je imunizacijom štakora koji su primili nefritogenu dozu zečjeg anti-štakorskog GBM (anti-GBM) seruma sa zečjim r-globulinom (rG) u skladu s blagom modifikacijom prethodno objavljene metode ( 12). U ovom eksperimentu štakori su težili cca. 160 g dano je 0,6 ml/životinji anti-GBM seruma u repnu venu.

Učinak ispitivanih lijekova procijenjen je primjenom od 1. dana nakon injekcije anti-GBM seruma (heterološka faza) ili 20. dana nakon injekcije antiGBM seruma (autologne faze). U pokusima su prikupljeni 24--satni uzorci urina, a štakori su potom podijeljeni u 5 ili 6 skupina od po 8 štakora tako da je prosječni sadržaj proteina u 24--satnom urinu u svakoj skupini bio na sličnu razinu.

Procjena antinefritičkog učinka ispitivanih lijekova

U eksperimentu medikamentoznog liječenja iz heterologne faze, četiri skupine dobile su oralno 3, 10 ili 30 mg/kg/dan ACT-a odnosno 100 mg/kg/dan Dip-a, u volumenu od 1 ml na 100 g. tjelesne težine, dnevno od 1. dana ili dan nakon iv injekcije anti-GBM seruma do 40. dana. U pokusima medikamentoznog liječenja iz autologne faze tri ili četiri skupine oralno su dobivale 3, 10 ili 30 mg/kg/dan ACT-a (A) ili 30 mg/kg/dan ACT-a, 100 mg/kg/dan Dip ili 50 mg/kg/dan Aza (B), redom, u volumenu od 1 ml na 100 g tjelesne težine, dnevno od 20. dana nakon iv injekcije anti-GBM seruma do 40. (A) ili 45. (B) dan. Preostaloj skupini oralno je dan vehikulum (destilirana voda) umjesto ispitivanih lijekova i služila je kao nefritička kontrola. Osim toga, neliječena (normalna) skupina korištena je za usporedbu s nefritičnim skupinama.

Prikupljanje urina i krvi

Uzorci urina od {{0}} sati dobiveni su držanjem svake životinje u pojedinačnom metaboličkom kavezu 24 sata. Na početku skupljanja urina svaka je životinja primila 8 ml destilirane vode oralno bez hranjenja. Urin je potom centrifugiran na 3,000 okretaja u minuti 15 minuta na 41°C, a supernatant je korišten za određivanje proteina. Posljednjeg dana eksperimenta, 20 ml krvi izvučeno je iz bubrežne vene svakog anesteziranog štakora jednokratnom štrcaljkom i stavljeno u epruvetu koja je sadržavala 0,125 ml heparina. Krv je centrifugirana na 5,000 okretaja u minuti kako bi se dobila plazma za određivanje nekih parametara.

Određivanje sadržaja proteina u mokraći i kolesterola i kreatinina u plazmi

Izlučivanje proteina mokraćom određeno je metodom Kingsbury i sur. (13) i izraženo kao mg/24 sata urina. Sadržaj kolesterola određen je komercijalnim priborom za ispitivanje (Determine TC-5; Kyouwa Medix Co., Ltd, Tokyo) (14) i izražen kao mg/dl plazme. Sadržaj kreatinina određen je korištenjem pribora za određivanje kreatinina (CRE-EN; Kainos, Inc., Tokyo) i izražen kao mg/dl plazme/100 g tjelesne težine.

Mjerenje titra antitijela u plazmi protiv -G

Titar antitijela u plazmi protiv rG određen je neizravnom hemaglutinacijom pomoću senzibiliziranih crvenih krvnih stanica ovaca (15).

Mjerenje razine CH50 komplementa u plazmi

Razina komplementa CH50 u plazmi određena je metodom po Mayeru (16).

Procjena histopatoloških parametara

Za svjetlosnu mikroskopsku studiju, bubrezi su izolirani iz štakora anesteziranih pentobarbitalom, zatim su dehidrirani i fiksirani uranjajući tkiva u korak po korak u različite zabrinjavajuće tradicije etilnog alkohola od niske do visoke. Tkiva su zatim uklopljena u parafin i izrezana na kriške debljine 2 do 3 em. U studijama anti-GBM nefritisa polumjesecastog tipa, rezovi su obojeni hematoksilinom i eozinom i Massonovim trikromom. Pod svjetlosnim mikroskopom promatran je broj jezgri (hipercelularnost), formiranje polumjeseca, prianjanje Bowmanove čahure na stijenku kapilare (adhezija) i fibrinoidna nekroza u glomerulima. Za procjenu ovih parametara metodom slučajnog uzorkovanja odabran je ekvatorijalni presjek. Promatrano je pedeset glomerula/poprečnih presjeka, a stopa pojavljivanja srpaste formacije, adhezije i fibrinoidne nekroze izražena je kao postotak glomerula (incidencija) koji imaju te morfološke promjene kao što je prethodno opisano (17). Ocjenjivanje je izvršila druga osoba koja nije znala identitet svakog uzorka. Za procjenu hipercelularnosti odabran je ekvatorijalni presjek metodom slučajnog uzorkovanja. Broj jezgri (uključujući jezgre glomerularnih stanica i eksudativne leukocite) izbrojan je i izražen kao srednji broj po glomerularnom presjeku u 10 glomerula/presjeku.

Imunohistokemija

U tkivima za imunoenzimsko bojenje štakorskog IgG, parafinski rezovi su izrezani kako je gore opisano, a rezovi su tretirani s 0.1 posto proteaze u 0.05 M Tris- HCl puferirati 7 minuta i zatim isprati u ohlađenoj 0.01 M fiziološkoj otopini puferiranoj fosfatom (PBS), pH 7,4. Sekcije su zatim inkubirane s anti-štakorskim IgG mišjim monoklonskim protutijelom (mAb) (Cappel, West Clester, PA, SAD) u razrjeđenju od 1:100 tijekom 90 minuta. Sekcije su ponovno isprane s PBS-om, tretirane s 0,3 posto vodikovim peroksidom u metanolu tijekom 20 minuta kako bi se blokirala endogena peroksidaza, i inkubirane s biotiniliranim afinitetom pročišćenim anti-mišjim IgG i avidiniranom peroksidazom hrena s 3,3'-diaminobenzidin tetrahidrokloridom (DAB) (Vecta stain ABC Kit; Vector institution, Burlingame, CA, SAD). Svi koraci su provedeni na sobnoj temperaturi.

Tkiva za imunoenzimsko bojenje nuklearnog antigena proliferirajućih stanica (PCNA), koji je marker za staničnu proliferaciju, fiksirana su u 10-postotnom formalinu u PBS-u, a tkiva uklopljena u parafin obojena su istim postupkom kao i za štakorski IgG osim korištenje mAb (19A2; Coulter Immunology, Hialeah, FL, SAD) na PCNA.

Kvantifikacija štakorskog IgG, C3 i PCNA na presjecima tkiva

Ukupna površina imunoreaktivnog štakorskog IgG i C3 u glomerulu izmjerena je u 30 glomerula po presjeku pomoću analizatora slike (Toyobo Image analyser V1; Toyobo Co., Ltd., Tokyo) i prikazana kao mm2/glomerularni presjek (GCS ). PCNA-pozitivne stanice u glomerulu prebrojane su analizatorom slike, a rezultati su izraženi kao broj stanica/GCS

Statističke analize

Podaci predstavljaju srednju vrijednost ± SD, a rezultati su statistički procijenjeni ANOVA-om. Kada su ti rezultati bili parametarski, statistički su procijenjeni Duncanovim testom. Kada su rezultati bili neparametarski, statistički su vrednovani Kruskal-Wallisovim testom. Inhibicijski postotak izračunat je na sljedeći način:

Inhibicijski postotak ( postotak )=(Kontrola - Testirani lijek) x 100 / (Kontrola - Normalno)

REZULTATI

Učinak Acteozida kod anti-GBM nefritisa tipa polumjeseca

Izlučivanje proteina u urinu (slike 2 i 3): Kad je liječenje ACT-om započelo dan nakon injekcije anti-GBM seruma (heterologna faza), prva značajna supresija proteina u urinu primijećena je 5. dana pri dozi od 30 mg. /kg, po; 20. dan 3 i 10 mg/kg, po; i 40. dan s Dip na 100 mg/kg, po

Kada je ACT davan od 20. dana nakon injekcije antiGBM seruma (autologna faza), ACT od 10 i 30 mg/dan inhibirao je povećanje izlučivanja proteina u mokraću do 30. dana. S druge strane, Aza u dozi od 50 mg/kg bila je slabija od ACT u dozi od 30 mg/kg, iako ne značajno, a Dip nije imao učinka.

Sadržaj kolesterola i kreatinina u plazmi (Tablica 1): Sadržaj kolesterola i kreatinina u plazmi određen je 40. ili 45. dana. Sadržaj kolesterola u plazmi kod nefritičnih kontrolnih štakora bio je izrazito povišen. Nasuprot tome, povišenje sadržaja kolesterola smanjeno je s ACT (30 mg/kg) iz heterologne faze za 60 posto kontrolne razine i s ACT (30 mg/kg) iz autologne faze za 62'o u odnosu na kontrolu. razini. Sadržaj kreatinina u plazmi u nefritičnih štakora također je bio povišen. S druge strane, u ACT (30 mg/kg) kod oba štakora tretirana fazom, sadržaj kreatinina u plazmi bio je sličan onom kod normalnih štakora.

Titar antitijela u plazmi protiv rG: Nefritični štakori su pokazali izrazito ubrzanu proizvodnju antitijela. Ubrzana proizvodnja protutijela potisnuta je na 72 posto kontrolne razine tretmanom s ACT (10 i 30 mg/kg) iz heterologne faze (Tablica 2), ACT (30 mg/kg) iz autologne faze i Aza do 70 odnosno 51 posto kontrolne razine (podaci nisu prikazani) i na nju nije utjecao Dip.

Histološki pregled (tablica 3, slike 4 i 5): Svjetlosni mikroskopski pregled nefritičkih glomerula otkrio je lezije karakterizirane jakim stvaranjem polumjeseca, adhezijom, fibrinoidnom nekrozom i proliferacijom mezangijalnih stanica. Histološko promatranje pokazalo je da je ACT (iz heterologne i autologne faze) inhibirao hipercelularnost i incidenciju stvaranja polumjeseca, adhezije i fibrinoidne nekroze u glomerulima do 40. ili 45. dana. Oštećenja nefritičnih štakora tretiranih Dip i Aza također su bila manja od onih kontrolnih nefritičnih štakora. Međutim, kada su nefritični štakori bili tretirani Dipom iz autologne faze, Dip je malo utjecao na histološke promjene (podaci nisu prikazani).

Proliferacija glomerularnih stanica, odnosno porast PCNA-pozitivnih stanica u glomerulima, primijećena je unefritični štakori. Nasuprot tome, 30. dana, smanjenje od 52 postoUočena je promjena u staničnoj proliferaciji i to je bilo povezano with značajno smanjenje glomerularne cellularnosti u usporedbi s kontrolom (Tablica 3).

Taloženje imunološkog reaktanta (Tablica 2 i Slika 6): Bilo je moguće promatrati naslage štakorskog IgG i C3 na GBM u nefritičkih kontrolnih štakora; međutim, nisu pronađeni u normalnih štakora. ACT (30 mg/kg) iz heterologne faze smanjio je taloženje štakorskog IgG na GBM za 72 posto kontrolne razine. Štoviše, ACT (3, 10 i 30 mg/kg) iz heterologne faze smanjio je taloženje štakorskog C3 na GBM za 60 do 69 posto do 40. dana. Čak i kada je ACT dan iz autologne faze, inhibicija štakorskog IgG i taloženja C3 bila je slična gornjim rezultatima. Dip nije utjecao na taloženje štakorskog IgG i C3. Aza je, međutim, smanjio taloženje štakorskog IgG i C3 na GBM za 67 odnosno 68 posto (podaci nisu prikazani).

Učinak ACT-a na aktivnost komplementa i naslage C3 na GBM kod originalnog tipa anti-GBM nefritisa (slika 7)

Izvorni tip anti-GBM nefritisa izazvan je kod štakora injekcijom 0.6 ml anti-GBM seruma u njihove repne vene, kao što je prethodno opisano (18). Nefritični štakori su prethodno tretirani i naknadno tretirani s ACT u dozi od 30 mg/kg, po i faktorom otrova kobre (CVF) (Sigma) u dozi od 10 ug/štakoru, ip, tri puta, svakih 8 sati. Liječenje ACT-om i CVF-om smanjilo je izlučivanje proteina u urinu s inhibicijskim postotkom od cca. 35 stupnjeva odnosno 71 posto. CH50 u nefritičnih kontrolnih štakora bio je znatno niži od onoga u normalnih štakora 24 sata nakon indukcije nefritisa. ACT je inhibirao smanjeno CH50 i povećano taloženje C3 na GBM u nefritičnih kontrolnih štakora. CVF je ukinuo taloženje CH50 i C3. Nadalje, u eksperimentu in vitro, ACT je inhibirao aktivaciju komplementa za 37 posto. Kada je ACT primijenjen normalnim štakorima, ACT je smanjio aktivaciju komplementa u ex vivo eksperimentu (podaci nisu prikazani).

RASPRAVA

Brzo progresivni glomerulonefritis i bubrežne bolesti u Goodpastureovom sindromu maligne su bolesti koje 2-3 mjeseca nakon razvoja bolesti prelaze u zatajenje bubrega (19). Obilježja ovog nefritisa uključuju hipercelularnost, izraženu infiltraciju neutrofila i monocita i stvaranje polumjeseca u glomerulima. Kod ove bolesti uglavnom se primjenjuje koktel terapija s imunosupresivima, antitrombocitnim lijekovima i steroidima. S druge strane, iako je CyA izvanredan imunosupresiv koji ima povoljan učinak na eksperimentalni nefritis (6, 8), objavljeno je da CyA uzrokuje disfunkciju bubrega i uzrokuje ireverzibilnu histološku promjenu u glomerulima (11). Metilprednizolon ima mnogo nuspojava. Nadalje, fenomen povratne reakcije i sindrom ustezanja nakon dugog liječenja ovim lijekom dva su problema. Stoga se mora razviti novi imunosupresivni agens za liječenje nefritisa koji ima manje nuspojava.

Anti-GBM nefritis tipa polumjeseca eksperimentalni je model koji pokazuje histološke i patološke promjene slične onima kod brzo progresivnog glomerulonefritisa i bolesti bubrega Goodpastureovog sindroma (20). Razvoj i napredovanje ovog nefritisa sastoji se od 2 faze koje su posredovane imunološkim odgovorima. Rana reakcija, tzv. heterologna faza, posljedica je taloženja anti-GBM protutijela, nakon čega slijedi komplementno ovisno nakupljanje polimorfonuklearnih granulocita (21, 22). Kasna faza (autologna faza) razvija se vezanjem autolognih antitijela taloženih duž GBM i priljevom monocita/makrofaga u glomerule nakon ove reakcije (22, 23). Ovaj nefritis karakteriziraju dvofazni urinarni protein i hipercelularnost koja uključuje stvaranje polumjeseca i fibrinoidnu nekrozu. Smatra se da stvaranje polumjeseca posreduju migrirani makrofagi i proliferirane epitelne stanice (22, 24).

Prethodno smo izvijestili da su mizoribin i Aza, imunosupresivno sredstvo (7), inhibirali porast antitijela u plazmi protiv zečjih IgG, a Pachyman, glavna komponenta Poria cocos (18), smanjili su stupanj taloženja C3 na GBM, a oba su bila izrazito učinkovit protiv anti-GBM nefritisa.

Liječenje ACT-om suzbilo je razvoj anti-GBM glomerulonefritisa što je procijenjeno smanjenjem proteinurije i kolesterola u plazmi, prevencijom oštećenja bubrežne funkcije i prevencijom progresivnih histoloških promjena uključujući razvoj glomerularnih polumjeseca i hipercelularnosti. 40. dana, sam ACT u dozi od 30 mg/kg značajno je smanjio količinu taloženja štakorskog IgG na GBM posredovanu supresijom proizvodnje antitijela u ovom nefritičkom modelu. S druge strane, količina naslaga C3 na GBM smanjena je ACT-om na 3, 10 ili 30 mg/kg. Štoviše, ACT je značajno inhibirao aktivaciju komplementa u in vitro i ex vivo eksperimentima. ACT je inhibirao smanjenje CH50 kod nefritičnih kontrolnih štakora. Gore navedeni podaci sugeriraju da ACT inhibira oštećenje bubrega potiskivanjem aktivacije komplementa, jer komplementni membranski napadački kompleks (MAC) je uključen u patogenezu oštećenja glomerula (25), a sublitički MAC ima potencijalne upalne medijatore koji bi mogli biti povezani s oštećenjem glomerula, proliferacija mezangijskih stanica i difuzije izvanstaničnog matriksa, kao što su reaktivne vrste kisika (26), proteaze (27), prostaglandini (28) i citokini poput interleukina-1 (29), kao i kolagen (30).

Vjeruje se da je aktivacija komplementa usko povezana s infiltracijom leukocita. U nedavnim studijama objavljeno je da C5a izaziva adheziju monocita i neutrofila na mezangijske stanice, odnosno endotelne stanice (31, 32). Stoga ćemo u daljnjoj studiji istražiti učinak ACT-a na nakupljanje leukocita u glomerulima.

REFERENCE

1 Yamahara J, Kitani T, Kobayashi H i Kawahara Y: Studije o Stachys sieboldii MIQ. II Djelovanje protiv anoksije i aktivni sastojci. Yakugaku Zasshi 110, 932-935 (1990.) (Abstrin engleski)

2 Takeda Y, Fujita T, Satoh T i Kakegawa H: O glikozidnim sastojcima Stachys sieboldii MIQ. i njihove učinke na aktivnost hijaluronidaze. Yakugaku Zasshi 105, 955-959 (1985) (sažetak na engleskom)

3 Sasaki H, Nishimura H i Morita T: Imunosupresivni principi Rehmannia gluttons var. hueichingensis. Planta Med 55, 458-462 (1989.)

4 Saito T i Atkins RC: Doprinos mononuklearnih leukocita progresiji eksperimentalne žarišne glomerularne skleroze. Kidney Int 37, 1076-1083 (1990.)

5 Tipping PG, Neale TJ i Holdsworth SR: Sudjelovanje T limfocita u eksperimentalnom glomerulonefritisu izazvanom antitijelima. Kidney Int 27, 530-537 (1985.)

6 Neild GH, Ivory K i Williams DG: Ciklosporin A inhibira serumsku bolest saktusa kod kunića. Clin Exp Immunol 52, 586-594 (1983.)

7 Okamoto K, Ito M i Suzuki Y: Studije o antinefritičkom učinku mizoribina (p-INN, Bredinin®), novog imunosupresivnog sredstva, i azatioprina (2): Učinak na anti-GBM nefritis polumjesecastog tipa u štakora. Jpn J Pharmacol 34, 33-41 (1984.)

8 Nagamatsu T, Kojima N, Kondo N, Hattori T, Kojima R, Ito M i Suzuki Y: Supresija anti-GBM nefritisa kod štakora ciklosporinom A. Jpn J Pharmacol 58, 27-36 (1992.)

9 Taniguchi H, Nagamatsu T, Kojima R, Ito M i Suzuki Y: Izrazito antinefritičko djelovanje i manje štetnih učinaka metilprednizolon sultanata povremenom primjenom u štakora. Jpn J Pharmacol 64, 79-88 (1994.)

10 Hattori T, Furuta K, Hayashi K, Nagamatsu T, Ito N i Suzuki Y: Studije antinefritičkih učinaka biljnih komponenti (6): Antinefritički učinci i mehanizmi felogena drina (OB-5) na polumjesec tip anti-GBM nefritisa u štakora (2). Jpn J Pharmacol 60, 187-195 (1992.)

11 Mason J: Učinci Sandimmunea na bubrege. Clin Res Bull 6, 47-51 (1989.)

12 Ito M, Yamada H, Okamoto Y i Suzuki Y: nefritis polumjesecastog tipa izazvan serumom protiv glomerularne bazalne membrane (GBM) u štakora. Jpn J Pharmacol 33, 1145-1154 (1983.)

13 Kingsbury FB, Clark CP, Williams G i Post AL: Brzo određivanje albumina u urinu. J Lab Clin Med 11, 981-989 (1926.)

14 Zurkowski P: Brza metoda za određivanje kolesterola s jednim reagensom. Clin Chem 10, 451-453 (1964.)

15 Mcleish KR, Clark CP, Williams G i Post AL: Supresija sinteze antitijela prostaglandinom E kao mehanizam za prevenciju glomerulonefritisa imunološkog kompleksa miševa. Lab Invest 47, 147-152 (1982.)

16 Mayer MM: Komplement i fiksacija komplementa. U Experimental Immunochemistry, str 133-240, Charles C. Thomas, Springfield (1961.)

17 Hattori T, Ito M, Nagamatsu T i Suzuki Y: Studije o antinefritičkom učinku TJ-8014, novog japanskog biljnog lijeka (3): Učinci na anti-GBM nefritis tipa polumjesec u štakora. Jpn J Pharmacol 52, 131-140 (1990.)

18 Hattori T, Hayashi K, Nagao T, Furuta K, Ito M i Suzuki Y: Studije o antinefritičkim učincima biljnih komponenti (3): Učinak pachymana, glavne komponente Poria cocos Wolf na porijeklo nalnog tipa anti-GBM nefritis u štakora i njegovi mehanizmi. JpnJ Pharmacol 59, 89-96 (1992.)

19 Shibata S, Miyakawa Y, Naruse T, Nagasawa T i Takuma T: Glikoprotein koji inducira nefrotoksična protutijela: Njegova izolacija i pročišćavanje iz bazalne membrane glomerula štakora. J Immunol 102, 593 601 (1969.)

20 Falk RJ: Bubrežna bolest povezana s ANCA. Kidney Int 38, 998-1010 (1990) 21 Mulligan MS, Johnson KJ, Todd RF III, Issekutz TB, Miyasaka M, Tamatani T, Smith CW, Anderson DC i Ward PA: Zahtjevi za molekule adhezije leukocita u nefrotoksičnom nefritisu. J Clin Invest 91, 577-587 (1993.)

22 Nahas AME: Faktori rasta i glomerularna skleroza. Kidney Int 41, Supp 36, S15-S20 (1992.)

23 Boyce NW, Holdsworth SR, Dijkstra CD i Atkins RC: Kvantifikacija intraglomerularnih mononuklearnih fagocita u eksperimentalnom glomerulonefritisu kod štakora korištenjem specifičnih monoklonskih antitijela. Patologija 19, 290-293 (1987.)

24 Becker GJ, Hancock WW, Stow JL, Glasgow EF, Atkins RC i Thomson NM: Uključenost makrofaga u eksperimentalni kronični glomerulonefritis imunološkog kompleksa. Nephron 32, 227-233 (1982) 25 Perkinson DT, Baker PT, Couser WG, Johnson BJ i Adler S: Taloženje kompleksa napada membrane kod eksperimentalne ozljede glomerula. Am J Pathol 120, 121-128 (1985.)

26 Alder S, Baker PJ, Johnson RJ, Ochi RF, Pritzl P, i Couser WG: Complement membrane attack complex stimulira proizvodnju reaktivnih metabolita kisika u uzgojenim mezangijskim stanicama štakora. J Clin Invest 77, 762-767 (1986.)

27 Johnson RJ, Couser WG i Alpers CE: Ljudska neutrofilistična proteaza, esteraza i katepsin G mogu posredovati u ozljedi glomerula in vivo. J Exp Med 168, 1169-1174 (1988.)

28 Cybusky AV, Lieberthal W, Quigg RJ, Rennke HG i Salant DJ: Uloga tromboksana u ozljedi glomerula posredovanoj komplementom. Am J Pathol 128, 45-51 (1987.)

29 Lovett D, Hansch G, Resch K i Gemsa D: Aktivacija glomerularnih mezangijalnih stanica komponentama terminalnog komplementa. Stimulacija oslobađanja prostanoida i faktora sličnog interleukinu-l. Imunobiologija 168, 34-35 (1986.)

30 Torbohm I, Schonermark M, Wingen AM, Berger B, Rother K i Hansch GM: C5b_8 i C5b_9 moduliraju otpuštanje kolagena iz ljudskih glomerularnih epitelnih stanica. Kidney Int 37, 1098-1104 (1990.)

31 Lo SK, Detmers PA, Levin SM i Wrigh SD: Prolazna adhezija neutrofila na endotel. J Exp Med 169, 1779 -1793 (1989) 32 Brady HR, Denton MD, Jimenez W, Takata S, Palliser D i Brenner BM: Kemoatraktanti izazivaju adheziju monocita na ljudske mezangijske stanice i ozljedu mezangijalnih stanica. Kidney Int 42, 480-487 (1992.)